特殊染色(结缔组织染色)

【资源】转贴---特染：结缔组织染色

wanliheng丁香园版主

.438

积分473

得票545

粉丝加关注. 2009-04-19 11:38 消息引用收藏分享

分享到哪里？复制网址新浪微博豆瓣社区腾讯微博开心网人人网

只看楼主第一节结缔组织多色染色法

一、Mallory三色染色法

1. 试剂配制

（1）重铬酸钾液重铬酸钾2.5g，醋酸5ml，蒸馏水95ml

（2）苯胺蓝桔黄G液苯胺蓝0.5g，桔黄G2g，磷钨酸1g，蒸馏水100ml

（3）酸性复红液酸性复红0.5g，蒸馏水100ml

2.染色步骤

（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。

（2）重铬酸钾液10min。

（3）蒸馏水冲洗2min，蒸馏水2次。

（4）酸性复红液2min，蒸馏稍洗。

（5）苯胺蓝液20min，95%乙醇快速分化。

（6）直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

3.结果

胶原和网状纤维呈蓝色，软骨、粘液、淀粉样变物质呈淡蓝色，神经胶质纤维、肌纤维和酸性颗粒呈红色，髓鞘和红色呈桔红色。

4.注意事项

（1）酸性复红液易溶解于水，肉眼观察切片上保留一定的红色。

（2）苯胺蓝液染色后，用95%乙醇分化时，须用显微镜观察掌握。

（3）对陈旧的固定标本，其染色效果较差，可增加染色时间。

（4）另张切片，可同时作胶原纤维对照染色而进行鉴别组织成分。

二、Masson三色染色法

1.试剂配制

（1）Masson复合染色液酸性复红1g，丽春红2g，桔黄G2g，0.25%醋酸300ml。

（2）亮绿染色液高绿SF0.1g，0.2%醋酸100ml。

2.染色步骤

中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。

（1）Masson复合染色液5min。

（2）0.2%醋酸水溶液稍洗。

（3）5%磷钨酸5-10min。

（4）0.2%醋酸水溶液浸洗2次。

（5）亮绿染色液5min，0.2%醋酸水洗2次。

（6）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

3.结果

胶原纤维呈绿色，肌纤维呈红色，红细胞呈桔红色。

4.注意事项

（1）Masson复合染色液，经磷钨酸分化时须用显微镜控制肌纤维清晰为止。

（2）亮绿染料可用苯胺蓝替换，可用来作为对比观察染色的效果。

三、显示胶原纤维、网状纤维和弹力纤维的三联染色法（1993年）

1.试剂配制

（1）高锰酸钾硫酸液0.5%高锰酸钾水溶液中加入5ml的硫酸。

（2）维多利亚蓝染色液维多利亚蓝2g，糊精0.5g，间苯二酚4g，蒸馏水200ml。将上述物质混合后加热煮沸，边煮边搅拌，约5min。然后用另一容器取30%三氯化铁水溶液25ml，另行加热煮沸后慢慢倒入上述混合液中继续煮沸3min，不断搅拌溶液呈胶体状。去火冷却过滤，将滤纸上的残渣连同滤纸放在60℃恒温箱中烤干。残渣呈深蓝色细颗粒状粉末，再溶于400ml的70%乙醇液中。然后加浓盐酸4ml和苯酚5g放置至成熟后使用。

（3）丽春红染色S染色液0.5%丽春红S水溶液15ml，苦味酸饱和水溶液85ml。

（4）Gomori氨性银改良液取5%硝酸银水溶液5ml，滴加浓氨水由棕黑色变清为止，再加入3%氢氧化钠水溶液5ml，此时该液突变紫黑色，这时再加入氨水使之变清晰为止。最后用蒸馏水补足至50ml，盛棕色试剂瓶中，置于冰箱中备用较长时间。

2.染色步骤

（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。

（2）高锰酸钾硫酸液氧化3min后，自来水浸洗后，用2%草酸漂白2min。

（3）5%硫酸铁铵1min。

（4）Gomori氨性银改良液染1min。

（5）蒸馏水洗2次，用15%甲醛液还原1min。

（6）蒸馏水洗2次，0.2%氯化金30s，蒸馏水洗1次。

（7）70%乙醇浸一次，再浸入维多利亚蓝液中染30min-1h。

（8）95%乙醇分化1min左右。

（9）浸入蒸馏水中1min后，用丽春红S染色液染色2min。

（10）直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

3.结果

胶原纤维呈红色，网状纤维呈黑色，弹力纤维呈绿色，肌肉和红细胞呈淡黄色。

4.注意事项

氨性银液滴染时，要用干净吸管，防止银液污染而发生沉淀。氨性银液作用后的切片不能倾倒，应将蒸馏水冲洗切片上的银液，这样就不会使银液表面挥发的银颗粒而沉积在组织上。第二节胶原纤维

一、胶原纤维的分布和组成成分

胶原纤维是结缔组织中的三种纤维之一，分布最为广泛，含量最多。主要分布于真皮、键、韧带、骨、透明软骨、动脉、肠壁、子宫和基底膜等，胶麻纤维具有韧性大，抗拉力强的特点。在弱酸或沸水中可慢慢溶化成胶水，称白明胶。胶原纤维和网状纤维的基本构造相似，都以胶原单位(蛋白质为主的大分子)为基本单位。胶原单位接连和融合形成网状纤维;它是粗约1μm左右的分支状纤维，形成全身组织的支架，在HE染色中看不清楚。但其外面裹着的一层类蛋白，凭借镀银法可以清楚地显示出来，故又称为嗜银纤维。

胶原纤维单位主要由纤维母细胞合成。其他如平滑肌细胞等也能产生。胶原单位的形成开始于细胞的粗面内质网，合成比构成胶原单位的α肽链更长的前α肽链，经高尔基体分泌出细胞，在细胞外液的内切肽酶作用下，切去前α肽链的附加肽段而形成胶原单位；再经细胞外液的赖氨酰氧化酶作用使两条肽链通过醛醇或醛胺缩合构成共价交联。这样胶原单位分子之间就形成了稳定的联系，形成胶原微纤维，然后再聚合而成胶原纤维。