总蛋白双缩脲法单试剂盒与双试剂盒检测结果的一致性评估

总蛋白双缩脲法单试剂盒与双试剂盒检测结果的一致性评估

目的探讨总蛋白双缩脲法单试剂盒与双试剂盒检测结果的一致性。方法参照美国临床和实验室标准协会（CLSI）EP9-A2文件的要求，以双试剂盒为参比方法、单试剂盒为待评方法，使用患者新鲜血浆标本进行方法比对及偏倚评估。结果回归方程Y=1.0064X+0.2168，相關系数r=0.9984，不同医学决定水平处的偏倚均小于我国卫生行业标准《WS/T 403-2012 临床生物化学检验常规项目分析质量指标》所规定的总允许误差的1/2。结论总蛋白双缩脲法单试剂盒与双试剂盒的检测结果具有良好的一致性，差异临床可接受，其检测报告可使用相同的参考区间，但仍建议临床实验室使用双试剂盒检测患者样本。

Abstract：Objective To investigate the consistency of the results of the total protein biuret method single kit and double kit.Methods According to the requirements of the American Society for Clinical and Laboratory Standards（CLSI）EP9-A2 document，the double kit were used as the reference method，the single kit was used as the method to be evaluated，and the patient’s fresh plasma samples were used for method comparison and bias evaluation.Results The regression equation Y=1.0064X+0.2168，the correlation coefficient r=0.9984，the bias at different medical decision levels is less than the total specified in China’s health industry standard “WS/T 403-2012 Clinical Biochemical Inspection Conventional Project Analysis Quality Index”.Allow 1/2 of the error.Conclusion The results of single kit and double kit of total protein biuret method were in good agreement with each other，the difference was acceptable in clinic.The same reference range could be used for the test report，but it was still recommended that the clinical laboratory should use double kit to detect the patient sample.

Key words：Total protein；Biuret method；Bias assessment；Consistency

总蛋白（total protein，TP）是血清或血浆所含各种蛋白质的总称，临床上常通过双缩脲法（biuret method）检测血清或血浆TP含量及其组分，用以评价患者的营养状态、消化功能及肝脏合成功能等。相关文献表明，该方法对肝脏疾病、肾脏疾病、出血性疾病和免疫性疾病等的诊疗和愈后判断具有重要价值[1-3]。随着技术的不断发展，试剂盒的性能水平不断提高，部分厂家在TP测定单试剂盒的方法基础上开发了双试剂盒，以减小标本质量对检测结果的干扰，保障检测结果的准确性。本文参照美国临床和实验室标准协会（CLSI）颁布的EP9-A2文件[4]要求，使用患者新鲜血浆标本对单试剂盒和双试剂盒进行方法比对和偏倚，探讨了两试剂盒检测结果的一致性，现报道如下。

1 材料与方法

1.1仪器与试剂日立7600全自动分析仪；总蛋白双缩脲法测定单试剂盒与双试剂盒均由四川迈克提供，批号为1117041，仪器检测参数均严格按照试剂说明书设置；配套生化复合校准品由四川迈克提供，批号为0518061，量值严格溯

源至YY/T1195-2011血清总蛋白参考测量方法。低、中、高三水平液体生化多项质控品由美国伯乐提供，批号为45771～45773。

1.2标本随机选择2018年8月1日～10日于遂宁市中心医院就诊的80例门诊患者，并以成都瑞琦公司生产的肝素钠抗凝真空采血管采集患者静脉血 3 ml，充分混匀后以4000 rpm的参数离心5 min，及时分离血浆。所有标本均无溶血、黄疸和脂浊，其检测结果均在线性范围内，且至少50%标本的检测结果处于参考区间之外。

1.3方法

1.3.1标本检测参照EP9-A2文件[4]的要求，以双试剂盒为参比方法、单试剂盒为待评方法，使用患者新鲜血浆标本进行方法比对及偏倚评估。标本检测前对仪器常规保养和校准，且3个浓度水平的室内质控均在控。每天以1～8和8～1的顺序检测8份新鲜标本，连续检测10 d，共检测80份样本。所有标本均于采样后2 h内完成检测。1.3.2离群值检验按照EP9-A2文件进行方法内及方法间离群值检验[5]。

1.3.3两试剂盒检测结果的比较及线性回归分析计算两试剂盒所有标本双份测定的均值，并对其进行配对资料t检验比较分析；然后以双试剂盒每份标本双份测定的均值为X轴、单试剂盒每份标本双份测定的均值为Y轴绘制散点图，从而得到两试剂盒间检测结果的线性回归方程（Y=bX+a）及其相关系数（r）；并以双试剂盒每份标本双份测定的均值为X轴、两试剂盒每份标本双份测定的均值差为Y轴绘制偏倚图。当r≥0.975则表示X取值范围合适，可用直线回归分析来评估斜率（b）和截距（a）；若r<0.975则需扩大X取值范围，增加样本量后再重新分析全部数据[4，5]。

1.3.4偏倚评估根据线性回归方程计算单试剂盒在45 g/L、60 g/L和85 g/L 这3个浓度水平处的预期偏倚（SE%）[5，6]，SE%={（b-1）×X+a}×100/X，然后以卫生行业标准WS/T 403-2012[7]中TP的总允许误差（TEa）的1/2 为临床可接受水平（即SE%≤1/2TEa），表示两试剂盒检测结果具有一致性。TP的TEa 为靶值±5%。

1.4统计学方法使用SPSS 19.0统计软件及Excel2007软件进行数据分析处理。计量资料以（x±s）表示，组间比较采用配对资料t检验，以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1离群值检验经检验，所有标本方法内均未见离群值；而方法间的离群值检验时仅发现1份样本存在离群值，经分析确认为甘油三酯过高所致，删除此标本检测数据后增加标本继续分析。

2.2两试剂盒检测结果的比较及线性回归分析单试剂盒TP检测结果为