结核分枝杆菌rpoB基因突变检测

耐药结核分枝杆菌耐药相关基因rpoB和katG突变分析研究的开题报告

耐药结核分枝杆菌耐药相关基因rpoB和katG突变
分析研究的开题报告
题目：耐药结核分枝杆菌耐药相关基因rpoB和katG突变分析研究
背景：
结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，全球每年约有
100多万人死于结核病。

耐药结核分枝杆菌是指对治疗结核病常用的药物耐药的分枝杆菌。

目前，耐药结核病已经成为全球公共卫生的重要问题，使得结核病的治疗变得更加困难。

研究目的：
本研究旨在分析耐药结核分枝杆菌中耐药相关基因rpoB和katG的
突变情况，为结核病的诊断和治疗提供理论依据。

研究方法：
采集来自结核病患者的耐药结核分枝杆菌感染样本，通过PCR扩增rpoB和katG基因，并测序分析其序列差异，识别突变位点。

利用统计学方法分析突变位点和耐药性之间的关系。

预期结果：
本研究将分析耐药结核分枝杆菌中rpoB和katG基因的突变情况，
并探讨突变与耐药性之间的关系。

预计可以为结核病的诊断和治疗提供
新的理论依据，有助于制定更有效的治疗方案。

研究意义：
本研究的结果有助于提高对耐药结核分枝杆菌的认识，有利于指导
结核病的早期诊断和有效治疗，对防治结核病具有重要的理论和实践意义。

广东地区临床分离结核分枝杆菌KatG、rpoB、rpsL耐药基因变异研究

１６ＤＮ．Ａ序列测定与分析
ＰＲ物交由上海生工生物工程技术服务有限公司进行测序。Ｃ产２结果２１从５０广州市胸科医院疑似肺结核病患者的痰液中分离得到６例结核分枝杆菌。在本研究结．０例２果中，４药的总体耐药情况：ＩＨ药率为５．％（５６）、ＲＰ药率为４．（７６）、Ｓ耐种Ｎ耐６５３／２Ｆ耐３５２／２Ｍ
在５位点突变１株（．％）；ＣＣｃｌ３５５６５Ａ — ｃＴ（ｉ — Ｌｕ）在５位点突变６ＨＳｅ２６株（．％）；２２２
Ｃ — Ｃ（ｕＰ在５位点突变１ＧＴＧＬ — ｏ）Ｃｅｒ３３株（．％。见表３３７）。
１３引物设计．引物序列见表１。
表１引物序列
１４结核分枝杆菌ＤＮ．Ａ的制备
用接种环从ＬＪ养基斜面上刮取结核分枝杆菌菌落，加入到３０儿ＤＡ解液中，５ ℃ 水浴３ｈ —培０Ｎ裂５，
２２Ｋｔ．ａＧ基因与ＭＴＢ烟肼耐药异
频率最高，且以高度耐药为主。２株发生氨２
３株ＩＨ药株中，低度耐药率为８．％５耐Ｎ８１（／）和高度耐药率为７１（．％），１２８２／５８３３（一２９，得Ｐ＞００．５．，２之间差异无５）组统计学意义。在３株ＩＨ药株中，有２株发５Ｎ耐５生ｋｔ基因突变，ｋｔａＧａ基因突变率为８．％１０。ＡｃＡＣ（ｒＹｒ）在３位点突变２株Ｇ — ＣＳ — ｈｅ５１０

TaqManMGB双探针实时PCR快速检测_省略_核分枝杆菌rpoB基因多位点突

・论　著・TaqMan M G B双探针实时PCR快速检测结核分枝杆菌rpoB基因多位点突变方法的建立王伟华,刘　伟(聊城市人民医院中心实验室,山东聊城252000)摘要:目的　建立快速、灵敏的检测结核分枝杆菌rpoB基因常见突变位点的新方法。

方法　采用TaqMan小沟结合物(M G B)探针技术,检测146例活动性肺结核患者和35例非结核性肺部疾病患者痰标本中结核分枝杆菌rpoB基因突变情况,测序方法为参考方法。

结果　146例活动性肺结核患者痰标本中,双探针方法检出阳性118例,其中rpoB基因突变56例,与测序方法比较符合率100.0%;35例非结核性肺部疾病患者痰标本双探针方法检测均为阴性,特异性100.0%;该方法最低检出下限为1×103拷贝/ml。

结论　TaqMan M G B双探针方法能快速、准确地检测结核分枝杆菌rpoB基因位点突变情况,适用于临床对耐药结核分枝杆菌的快速诊断。

关键词:结核分枝杆菌;利福平;rpoB基因;突变中图分类号:R378.91+1 文献标识码:A 文章编号:100524529(2010)0320324203R apid Detection of Rifampin Drug2resistant G ene Mutation of Mycobacterium t uberculosis by T aqMan MGB Dual2probe R eal2time PCRWAN G Wei2hua,L IU Wei(L i aocheng People′s Hos pit al,L i aocheng,S handong252000,Chi na) Abstract:OB JECTIVE To establish a new methed rapid,and sensitive detection of M ycobacteri um tuberculosis rpoB gene mutation.METH ODS M.tuberculosis rpoB gene mutation was detected by TaqMan minor groove binder (M G B)dual2probe real2time PCR with sputum of146active pulmonary tuberculosis patients and35non2 tuberculous pulmonary patients.Sequence analysis was regarded as a reference method.RESU LTS Totally146 sputum samples f rom active pulmonary tuberculosis patients were detected by TaqMan M G B dual probe method from them118were positive,of which rpoB gene mutation were found in56samples.It was competely accordant with the results by sequence analysis.The sensitivity of TaqMan M G B dual2probe was1×103copies/ml.CONC L USIONS The method could detec the mutations of rpoB gene rapidly and accurately and could be used in diagnosis of rifampin drug2resistance in clinic.K ey w ords:M ycobacteri um tuberculosis;Rifampin;rpoB G ene;Mutation 多药耐药结核病(MDR2TB)被W HO认定为全球结核病疫情回升的主要原因之一。

西安市耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因的突变型分析

西安市耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因的突变型分析杜蓬;李峰;董兆麟;陈超【摘要】目的西安市结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因RRDR的基因型分析.方法采用PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析32株结核分枝杆菌耐RFP株和10株RFP敏感株的rpoB基因PCR产物,并对8株具有代表性的菌株rpoB基因片段通过DNA测序进行验证.结果rpoB基因PCR-SSCP分析灵敏度为56.3％(18/32),特异性为80％(8/10).8株结核分枝杆菌rpoB基因经测序,6株耐RFP菌株中有5株的rpoB基因突变均发生在531或526密码子上.其中有两株在526密码子均发生了双碱基突变；1株PCR-SSCP呈现阴性的耐RFP结核分枝杆菌存在513密码子突变；两株RFP敏感株出现PCR-SSCP假阳性,其rpoB基因均涉及2～3个密码子的突变,其中518密码子突变型AAC→GAC为首次报道.结论 531和526密码子除了单点突变之外,亦出现同密码子双碱基突变型；RFP敏感株多密码子突变型值得关注.%Objective To genotype the rifampin (RFP)-resistance-determining region (RRDR) of rpoB gene of clinical Mycobacterium tuberculosis isolates in Xi'an by PCR single-strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) combined with DNA sequencing. Methods The rpoB gene of 32 RFP-resistant and 10 RFP-susceptible Mycobacterium tuberculosis strains was analyzed by PCR-SSCP within the 157 bp (Ala5oo to Val550) region covers RRDR, and the PCR products of rpoB gene of 8 strains, which have representative patterns of PCR-SSCP combined with drug sensitive testing, were sequenced subsequently. Results The sensitivity and specificity of PCR-SSCP in detected rpoB gene were 56. 3% (18/32) and 80% (8/10), respectively. Mutations in codon 531 or 526 wereobserved in 5 of 6 RFP-resistant isolates by DNA sequencing, and double-base mutations in codon 526 were found in 2 of 6 RFP-resistant isolates. One mutation in codon 513 with false-negative PCR-SSCP result was also unfolded. Two false-positive PCR-SSCP results were revealed among the RFP-susceptible strains with mutations covered Leu511 , Asp5i6 andAsn5i8, in which new asparagine 518 mutation type was identified. Conclusion The mutations in codon 531 and codon 526 of rpoB gene are still the "hot spots". Both point mutant and double mutants in one codon were discovered. Moreover, multiple mutations in codons of RFP-susceptible isolates deserve concern.【期刊名称】《西安交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2012(033)001【总页数】5页(P19-23)【关键词】结核分枝杆菌;耐利福平;rpoB基因;突变【作者】杜蓬;李峰;董兆麟;陈超【作者单位】国家微检测系统工程技术研究中心,陕西西安710069;浙江医学高等专科学校基础医学部,浙江杭州310053;西安市结核病医院检验科,陕西西安710061;国家微检测系统工程技术研究中心,陕西西安710069;西北大学生命科学学院,陕西西安 710069;国家微检测系统工程技术研究中心,陕西西安710069;西北大学生命科学学院,陕西西安 710069【正文语种】中文【中图分类】R446.5结核病（tuberculosis，TB）主要是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）引起的一种严重危害人类健康的传染性疾病。

结核分枝杆菌耐利福平株rpoB基因突变的研究

结核分枝杆菌耐利福平株rpoB基因突变的研究发表时间：2013-05-13T09:00:00.797Z 来源：《中外健康文摘》2013年第9期供稿作者：廖小琴刘梅王建华张泓陈玲[导读] 近年来，由于耐药结核病的广泛流行等原因，结核病呈现死灰复燃趋势。

廖小琴刘梅（通讯作者）王建华张泓陈玲（通讯作者）（遵义医学院附属医院呼吸二科呼吸医学研究室贵州遵义 563003）【摘要】目的了解遵义地区结核分枝杆菌耐利福平临床分离株rpoB基因突变特点。

方法采用比例法对肺结核患者痰标本分离的127株结核分枝杆菌进行药物敏感性试验，并对结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因包括耐药决定区81个碱基在内的412bp片段进行PCR扩增及序列测定。

结果 127株结核分枝杆菌临床分离株中49株对利福平耐药，78株对利福平敏感。

49株耐利福平临床分离株中，31株rpoB基因存在突变（63.3%），突变位点为531、526和516等；511位点CTG→CAG（Leu→Pro）为新的突变位点；4株双位点联合突变，其中2例为新的联合突变：GAC516GGC，ATC572CTC和CTG511CAG，CAC526AAC。

结论结核分枝杆菌耐利福平与rpoB基因突变相关，且存在地区差异。

【关键词】结核分枝杆菌 rpoB 利福平耐药突变近年来，由于耐药结核病的广泛流行等原因，结核病呈现死灰复燃趋势。

利福平(rifampin，RFP)是目前抗结核一线药物中主要药物。

RFP与结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis，MTB)RNA聚合酶β亚基结合,抑制转录而发挥杀菌作用。

RNA聚合酶β亚基由rpoB基因编码。

MTB对RFP耐药主要与rpoB基因的突变有关。

目前已发现的耐RFP临床分离株中rpoB基因突变位点超过70个，约96%的RFP突变分布在rpoB基因的利福平耐药决定区(rifampin resistance determing region，RRDR)的81个碱基内，以531、526及516位点突变最常见[1]。

210株结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB突变特征研究

ｉｎ２１０ｃｌｉｎｉｃａｌｉｓｏｌａｔｅｓＯｆＭ．ｆＰ，．ｃＺｏｆ
ＨＵＡＮＧＺｈｅｎ－ｙｕ，ＦＡＮＸｕｅ－ｇｏｎｇ
（ＸｉａｎｇｙａＨｏｓｐｉｔａｌ・ＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１０００８，Ｃｈｉｎａ）
ｌｏｓｉｓ．２８６ｂｐＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｏｆｒｐｏＢｇｅｎｅｉｎｃｌｕｄｉｎｇ８１ｂｐｃｏｄｅｒｅｇｉｏｎ（ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｄｅｔｅｒｅｍｉｎａｔｉｏｎｒｅｇｉｏｎ，ＲＲＤＲ）ｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｗｉｔｈＰＣＲ－ＳＳＣＰ．Ｔｈｅｎｔｈｅ２８６ｂｐＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｏｆｅａｃｈｓｔｒａｉｎｗｈｉｃｈｈａｄｂｅｅｎｐｒｏｖｅｄｔＯｈａｖｅｍｕｔａｔｉｏｎｂｙＰＣＲ— ＳＳＣＰｗａｓｓｅｑｕｅｎｃｅｄ．２１０ｓｔｒａｉｎｓｏｆＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ１１０ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｓｔｒａｉｎｓ，４０ｒｉｆａｒｍｐｉｃｉｎ－ＳＵＳＣｅｐｔｉｂｌｅｄｒｕｇ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｓｔｒａｉｎｓａｎｄ６０ｄｒｕｇ－ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ．７５ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｔＯｈａｖｅｍｕｔａ — ｔｉｏｎｓｂｙＰＣＲ－ＳＳＣＰ．Ｂｙｍｅａｌｉｓｏｆｄｉｒｅｃｔｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇａｎａｌｙｓｉｓ，ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ７７３

rpoB基因不同突变位点结核分枝杆菌利福平体外最小抑菌浓度的变化

rpoB基因不同突变位点结核分枝杆菌利福平体外最小抑菌浓度的变化万智敏;向延根;马小华;石国民;范任华;彭雪峰【摘要】目的探讨rpoB基因不同突变位点结核分枝杆菌利福平体外最小抑菌浓度(MIC)的变化.方法收集人型的结核分枝杆菌菌株103株,利用基因芯片法筛选rpoB耐药突变基因菌株.采用绝对浓度法对所有菌株进行不同浓度的利福平药敏试验,观察不同菌株对利福平的MIC.结果基因芯片共分离出55株rpoB突变株,48株非突变株.突变株MIC值为(459.6±205.8)μg/ml,高于非突变株的(5.0±4.5)μg/ml(P ＜0.05).55株rpoB突变株中突变位点分别为531(C→T)、526(C→G/T)和516(A→G/T),531(C→T)位点突变株的MIC值为(576.0±29.3)μg/ml,均高于516(A→G/T)的(432.9±38.2) μg/ml和526(C→G/T)的(355.5±59.5) μg/ml(P＜0.05),但526(C→G/T)、516(A→G/T)位点突变株的MIC比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论基因芯片检测结核分枝杆菌rpoB基因突变株与其耐药表型相关性较高.不同突变位点的结核杆分枝菌菌株对利福平的耐药程度有差异,可为临床合理用药提供参考.【期刊名称】《广西医学》【年(卷),期】2016(038)006【总页数】4页(P773-775,780)【关键词】结核分枝杆菌;rpoB基因;芯片基因;利福平;最小抑菌浓度【作者】万智敏;向延根;马小华;石国民;范任华;彭雪峰【作者单位】南华大学临床医学院,衡阳市421001;长沙市中心医院检验科,长沙市410004;长沙市中心医院检验科,长沙市410004;长沙市中心医院检验科,长沙市410004;长沙市中心医院检验科,长沙市410004;长沙市中心医院检验科,长沙市410004;长沙市中心医院检验科,长沙市410004【正文语种】中文【中图分类】R378.911我国是结核病高负担国家，也是耐药结核高负担国家[1]。

结核分枝杆菌北京基因型菌株rpoB基因突变特征研究

ＣｌｉｓｌｔｓｏＭｙｃｂｃｅｉｍｕｅｃｌｓｓｗｅｅａａｙｅｙＩ６０ＲＰａｄＳｏｌｏｙｉｇｆｒｇｎｔｐｎ．ｏｅｅｍｕａｉｎｆｉｃｉｏａｅｆｎｏａｔｒｕｔｂｒｕｏｉ＂ｒｎｌｚｄｂＳ１一ＦＬｎｐｉｔｐｎｏｅｏｙｉｇＲｐＢｇｎｔｔｓｏ１ｇｏ
Ｌｉａ，ｕＹｎｇＧｕｏＹａｌｎ，ｉｎｎｉｇＪａｇＧｕａｌ，ｔ１ｎｇｕｅ．ａ
Ｂｉｎｕｅｃｌｓｎｈｒｃｕｒｅｅｒｓｔｔ，ｅｉｇ１１４，ｈｎｅｉｇｂｒｕａｉａｄＴｏａｉＴｍｏｓａｃＩｔｕｅＢｉｎ０９ＣｉａｊＴｓｃＲｈｎｉｊ１
ＡｓｒｃｂｅｔｅＴｎｌｚｈｒｃｅｚｔｎｏｏｔｔｎｉＢｉｎｅｏｙｅｏｃｂｃｒｕｔｂｒｕｏｉｔｏｓｈ０ｂｔａｔｊｅｉｏａａｙｅｃａａｔａｏｆｐＢｍｕａｉｅｉｇｎｔｐｆ０ｖｉｒｉｒｏｎｊｇＭｙｏａｔｉｍｅｃｌｓｓＭｅｈｄｅ１２ｅｕＴ
ｒａｐｎｒｓｔｎｅｉｙｏａｔｒｕｕｅｃｌｓｓｗｅｅｄｔｃｅｙｒｖｒｅｌｅｂｏｙｒｄｚｔｎＲｅｕｔ３５（５１２ｆｉｉｓｌｔｓｉｍｉｅｉａｃｎＭｃｂｃｅｉｍｔｂｒｕｏｉｒｅｅｔｄｂｅｅｓ —ｉｌｔｂｉａｉｆｓｎｈｉｏｓｌ７．％７／０）ｏｎｃｉｏａｅｓＣｌ

PCR-SSCP快速检测结核分支杆菌rPOB基因突变

PCR-SSCP快速检测结核分支杆菌rPOB基因突变胡忠义[1];靳安佳[2];王莉莉[3];王芳[4]【期刊名称】《临床肺科杂志》【年(卷),期】1999(000)001【摘要】结核分支杆菌的耐药性问题仍是人们长期关注的焦点问题。

利福平是当今最主要的抗结核药物之一,如感染菌为利福平耐药,则治疗效果将受到严重影响。

因此,利福平耐药性测定尤为重要。

然而,由于结核分支杆菌生长缓慢,常规药敏试验需4～6周,不能满足临床之急需。

分子生物学技术的不断发展给结核分支杆菌耐药性的快速检测带来了希望。

近年的研究表明结核分支杆菌利福平耐药与rPOB基因突变有关,因此检测rPOB基因突变有助于了解利福平的耐药【总页数】2页(P24-25)【作者】胡忠义[1];靳安佳[2];王莉莉[3];王芳[4]【作者单位】[1]上海市疾病预防控制中心;[2]上海市疾病预防控制中心200031;[3]200031;[4]200031【正文语种】中文【中图分类】R446.5【相关文献】1.聚合酶链反应(PCR)反相斑点杂交方法快速检测耐利福平结核分支杆菌的rpoB 基因突变 [J], 刘洋;王甦民;郭艳玲;姜广路2.PCR-SSCP技术快速检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的研究 [J], 闫国蕊;刘国华;刘传玉3.用PCR-SSCP技术检测结核分支杆菌rpoB, KatG, rpsL基因突变 [J], 黄四邑;邱望龙;潘智灵4.PCR-SSCP技术直接快速检测痰标本中结核分支杆菌rpoB,katG,ahpC基因突变的研究 [J], 董德琼;杨渝浩;彭理年;肖瑜5.单管半套式PCR-SSCP用于结核分支杆菌rpoB基因突变的研究 [J], 张静;李栋梁;卫增秀;吕翠环;余裕炉;;;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

新疆部分地区结核分枝杆菌rpoB基因突变与对利福平耐药相关性检测

１７－１７．０５０７
（稿日期：０００ — ８收２１— ９０）
ＣＨＩＡＭＯＤＥＮＭＥＤＣＩＮＲＩＮＥ中国当代医药１１４
［摘要】目的：了解新疆部分地区结核分枝杆菌ｒｏｐＢ基因的突变与对利福平耐药呈水平的关系。法：用基因芯片方采对耐利福平菌株ｒｏｐＢ基因进行检测。结果：６株结核分枝杆菌利福平初始耐药分离株，３对利福平高度耐药２５株，低度耐药１。因芯片检测显示３１株基３株存在突变，度耐药株突变主要在５６位，低２少数在５１位；度耐药株突变主３高要在５６位、３位，中３株未见突变，为５６和５６位联合突变。结论：地区结核分枝杆菌对ＲＦ２５１其３株２１本Ｐ的低度耐药表现为ｒｏｐＢ基因的点突变。高度耐药则表现为ｒｏ而ｐＢ基因的５６位、３２５１位点突变及联合突变形式。
Байду номын сангаас
的关联性时，内外报道不尽相同，能与地区因素有关。国可因此有必要了解当地的情况，基因芯片快速检测耐药及耐药为程度提供依据，导早期治疗。指依据前期结果显示本地区的耐药相关基因突变位点种
点『ＪＪ中华结核和呼吸杂志，０，（）２１２４．２１４４：３ — ３．０２

PCR-反向点杂交法结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB突变

PCR-反向点杂交法结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB突变发表时间：2016-05-24T14:39:28.370Z 来源：《医师在线》2016年1月第2期作者：黄丽静陈焯彬李崇建[导读] 广西钦州市第一人民医院 PCR-反向点杂交法是一种能直接快速检测结核杆菌基因突变情况的技术，其特异性强，灵敏度高，适合临床快速检测。

（广西钦州市第一人民医院广西钦州535000）【摘要】目的探究对结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB突变以PCR-反向点杂交法检测的效果。

方法设计结核分歧杆菌rpoB基因引物，采用PCR-反向点杂交法对40例结核杆菌临床菌株耐药性进行检测，对照由DNA测序法检测的标准结核分歧杆菌（H37Rv）rpoB基因，确定rpoB基因的变异情况，对PCR-反向点杂交法的灵敏度和准确性作出评价。

结果 40株临床菌株中有11株利福平敏感株的基因序列与对照的H37Rv相同，剩下的29株耐药株中检测到变异基因27株，其特异性为100%，阳性率为93.1%。

结论 rpoB基因本身高度保守,但由于rpoB 基因突变导致结核分枝杆菌对利福平耐药。

本研究使用PCR-反向点杂交法针对rpoB基因高突变区设计引物，此方法快速、简便、准确, 能有效监测临床标本中结核分枝杆菌, 对临床早期诊治结核病有极大帮助。

【关键词】PCR-反向点杂交法；rpoB 基因；利福平；结核分歧杆菌结核病是一种由分歧杆菌导致的常见可致命传染病，它不仅能感染并破坏人体对淋巴系统，还能对人体神经系统、泌尿系统、循环系统、皮肤、骨骼、关节等其他部位造成伤害，表现为发热、盗汗、呼吸障碍、咳嗽、咯血、胸痛等，因此，必须及时对结核病进行诊治，防止其对机体造成更大伤害。

利福平（RFP）是临床上治疗结合病的常用药物，但由于结核杆菌常常对其具有耐药性且各地区耐药情况不同，普通的结核杆菌培养耗时较长、过程繁琐，已经不足以满足及时诊治的需求。

PCR-反向点杂交法是一种能直接快速检测结核杆菌基因突变情况的技术，其特异性强，灵敏度高，适合临床快速检测。

结核分支杆菌rpoB基因突变与耐利福平的研究

结核分支杆菌rpoB基因突变与耐利福平的研究张小刚1,何秀云1,张晓娟2(1.解放军第309医院结核病研究室,北京　100091;2.辽宁省沈阳市胸科医科检验科)【摘要】　目的　研究结核分支杆菌耐利福平(RFP)分离株rpoB基因突变情况并评价其应用价值。

方法　采用聚合酶链反应一单链构象多态性(PCR-SSCP)方法对355株结核分支杆菌临床分离株(其中敏感株109株,耐RFP或含耐RFP株246株)rpoB基因进行检测,并对其中31株耐药株用双脱氧末端终止法进行测序分析。

结果　以结核分支杆菌标准株H37Rv为对照,所有109株药物敏感株rpoB基因均无突变;246株耐药株中,225株rpoB基因SSCP图谱异常,其敏感性为91.5%。

31株耐药株(其中SSCP异常25株,正常6株)PCR扩增产物经测序证实,19株在531位密码子TCG-TTG,7株526位密码子CAC-TAC,3株在516位密码子GAC-GTC,2株未改变。

结论　rpoB基因突变是耐R FP结核分支杆菌耐药性的主要分子机制;其最常见的突变位点是531位色氨酸和526位组氨酸,PCR-SSCP可快速检测结核分支杆菌RFP耐药性。

[关键词] 分支杆菌,结核;药物耐受性;rpoB基因;PCR-SSCP;DNA序列分析[中图分类号]R378.91+1;R52 [文献标识码]A [文章编号]1008-1372(2003)01-0026-03Study of rpoB Mutation in Rifampin Resistants Mycobacterium TuberculosisZHANG Xiao-gang,HE Xiu-yun,ZHANG Xiao-juan.Tuberculosis Research Laboratory,The309th Hospital,PLA,Beijing100091,China 【Abstract】　Objective　To understand the rpoB gene mutation in M.tu berculosis isolates,and to evaluate their clinical value.Metho d　335 clinical isolates of mycobacterium tuberculosis(109is olates drug susceptible,246isolates rifampin-res istance or multidrug resistance including ri-fampin)were detected using polymerase chain reaction-single strand con formation polymorphism(PCR-SSCP).Results　SSCP pattern of reference myco bacterium tuberculosis H37Rv as control,no mutation was found in rifampin-suscepitible109strains.SSCP patterns of225/246rifampin resis-tant clinical isolates were d ifferent from the normal control.The sens itivity was91.5%.31resistant isolates,included25abnormal isolates and6nor-mal is olates of SCCP were identified.Seq uencing showed29isolates had rpoB gene mutations and3is olates were not found rpoB gene mutations.The 3most frequent rpoB gene mutation situs were Leu-531(19isolates.TCG TTG)and His-526(7isolates,CAC TAC)and Asp-516(3isolates, GAC GTC).Conclusions　The results confirm that rpoB gene mutation is the most important mechanis m in rifampin resistant tuberculosis mutation situs are531tryptophan and526histidine;respectively.It is feasible that using PCR-SSCP to detect drug resistance in mycobacteriu m tub erculo sis.【Key words】 Mycobacterium,tuberculosis;Drug resistance;rpoB gene;PCR-SSCP;D NA Sequencing 自利福平问世以来,由于其对结核的良好疗效使其成为结核病短程化疗的核心和基石。

结核分支杆菌两种耐药基因的快速检测

结核分支杆菌两种耐药基因的快速检测近年来，全球结核病呈现死灰复燃的趋势，其主要原因是耐药(DR-TB)和耐多药(MDR-TB)结核病的广泛分布和迅速传播。

作为一线抗结核药物，INH和RFP 结核病的预防、治疗方面起着重要作用。

但由于单药化疗和不规则化疗，其耐药情况越来越严重。

有研究表明结核分杆菌耐异烟肼的产生与过氧化氢酶-过氧化物酶的编码基因KatG基因的缺失和突变有关；而利福平耐药则与RNA聚合酶的p亚基的编码基因rpoB突变有关。

我们在用PCR-SSCP方法单独检测KatG 和rpoB基因突变时，发现在非变性聚丙烯酰胺凝胶中，这两种基因的迁移率不同，且差异很大。

因此，我们在一个反应中同时扩增KatG和rpoB基因。

再根据其SSCP图谱进行分析，这样就可以同时检测异烟肼和利福平耐药性。

我们采用PCR-SSCP银染法直接检测临床分离株和临床痰标本中结核分支杆菌rpoB基因和KatG基因突变，现将结果报告如下。

1 资料与方法1.1 标本来源107株临床分离株和39例肺结核病患者涂阳痰标本均来自吉林市结核病防治研究所。

107株临床分离株按结核病诊断细菌学规程进行菌种鉴定及药敏实验证实为结核分支杆菌，其中63例耐RFP，55例耐INH，49例耐SM。

65例肺结核病患者涂阳痰标本根据临床症状、涂片结果、胸部X线和培养结果确诊，其中33例耐RFP，27例耐INH，28例耐SM。

1.2 引物序列为1.3 方法1.3.1 dNA的提取用传统酚／氯仿抽提法提取标本中DNA。

1.3.2 PCR扩增采用25 μl反应体系，4xdNTPs终浓度为0.2 mmol／L，引物终浓度为0.2 μmol／L，扩增程序为94℃变性1 min，61℃退火1 min，72℃延伸1 min，循环30次，最后72℃延伸10 min。

扩增产物经2％琼脂糖凝胶电泳。

紫外检测rPOB出现258bp条带、KatG出现282bp条带即为扩增阳性。

PCR-SSCP直接检测临床标本中的结核杆菌rpoB基因突变——附50例报告

PCR-SSCP直接检测临床标本中的结核杆菌rpoB基因突变——附50例报告彭理年;肖瑜;董德琼;杨渝浩;徐荣鑫【期刊名称】《新医学》【年(卷),期】2001(32)6【摘要】目的:探讨聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)直接检测痰标本中的结核杆菌核糖核酸聚合酶亚单位基因(ropB基因,该基因突变便形成结核杆菌利福平耐药株)突变在评价结核杆菌对利福平的耐药性方面的应用价值.方法:以结核杆茵H37Rv株(标准菌株)为对照,应用PCR-SSCP技术直接检测50例痰标本中结核杆菌及培养分离的结核杆菌的rpoB基因突变,并将PCR-SSCP和细菌培养的结果进行比较分析.结果:以细菌培养作为参考方法,PCR-SSCP直接检测50例痰标本中的结核杆菌ropB基因突变的敏感性和特异性分别是92%(23/25)和100%(10/10).用于检测培养分离得到的35株结核杆菌,PCR-SSCP的敏感性和特异性分别为96%(24/25)和100%(10/10).结论:PCR-SSCP操作简单、快速、准确,可望用于直接检测临床标本中的结核杆菌ropB基因突变,以评价结核杆菌是否对利福平产生耐药性.【总页数】2页(P340-341)【作者】彭理年;肖瑜;董德琼;杨渝浩;徐荣鑫【作者单位】遵义医学院附属医院;遵义医学院附属医院;遵义医学院附属医院;遵义医学院附属医院;航天部3247医院【正文语种】中文【中图分类】R52【相关文献】1.应用PCR-SSCP技术检测痰中结核分枝杆菌katG、rpoB、embB基因突变的研究 [J], 朱敏;李锋;盛国平;范玉美2.PCR-SSCP技术快速检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的研究 [J], 闫国蕊;刘国华;刘传玉3.用PCR-SSCP技术检测结核分支杆菌rpoB, KatG, rpsL基因突变 [J], 黄四邑;邱望龙;潘智灵4.痰以外的临床标本中应用结核杆菌直接检测法（MTD）检出结核杆菌：标本制备方… [J], 闫东杰5.PCR-SSCP技术直接快速检测痰标本中结核分支杆菌rpoB,katG,ahpC基因突变的研究 [J], 董德琼;杨渝浩;彭理年;肖瑜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

武汉地区耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变分析

武汉地区耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变分析马峻;温子禄;张朝宝;郭莉;张舒林;王洪海;余晓丽【摘要】目的探讨武汉地区结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药株rpoB基因的突变特征.方法对76例MTB临床分离株包括rpoB核心区域81 bp碱基在内的428 bp碱基进行PCR测定,并进行DNA序列分析.结果 76例临床分离MTB中利福平耐药株56例,敏感株20例.耐药株中92.9％(52/56)存在突变,共涉及10个密码子的18种突变类型.531、526为常见突变位点,其突变率分别为57.7％ (30/52)、19.2％(10/52)；联合突变率为13.5％(7/52)；同时发现了509位(AGC→AGA)新的突变类型和国内少见的517位CAG缺失类型.结论 rpoB基因突变在武汉地区利福平耐药MTB中广泛存在,并存在新的突变位点.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2011(029)008【总页数】3页(P626-628)【关键词】结核分枝杆菌;rpoB基因;耐药性;DNA序列分析【作者】马峻;温子禄;张朝宝;郭莉;张舒林;王洪海;余晓丽【作者单位】武汉市医疗救治中心检验科,武汉430032;武汉工业学院生物与制药工程学院,武汉430023;上海交通大学医学院病原检测研究室,上海200025;武汉工业学院生物与制药工程学院,武汉430023;武汉工业学院校医院,武汉430023;上海交通大学医学院病原检测研究室,上海200025;复旦大学遗传学研究所遗传工程国家重点实验室,上海200433;武汉工业学院生物与制药工程学院,武汉430023【正文语种】中文【中图分类】R378结核病(tuberculosis,TB)迄今仍是全球范围内单一病原体引起死亡人数最多的传染性疾病，其疫情恶化的原因之一是耐多药结核病(multidrug-resistant tuberculosis, MDR-TB)的出现和流行[1]。