Calponin_1表达沉默对子宫平滑肌细胞生物学行为的影响

Calponin-1表达沉默对子宫平滑肌细胞生物学行为的影响

谷永红1，周昌菊2，胡灵玉2，陈倩1，张卫社3（中南大学湘雅三医院1病理科，2妇产科，湖南长沙410013；3中南大学湘雅医院妇产科，湖南长沙410008）

摘要：目的研究抑制calponin-1表达对人子宫平滑肌细胞增殖、侵袭、凋亡和细胞骨架的影响，探讨妊娠时人子宫平滑肌细胞中calponin-1蛋白表达上调在分娩发动中的作用机制。方法构建腺病毒siRNA-calponin-1质粒，转染原代培养的人子宫平滑肌细胞，分别用四甲基偶氮唑蓝（MTT ）、Transwell 侵袭实验和流式细胞术（AnnexinV/PI 双染法）检测转染siRNA-calponin-1前后对子宫平滑肌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响；同时用Rhodamine-Phalloidin 标记子宫平滑肌细胞骨架蛋白（F-actin ），荧光显微镜观察其变化并进行荧光定量检测。结果实验组与空载体组、空白对照组比较，子宫平滑肌细胞的运动能力明显下降（P <0.05），细胞增殖能力及凋亡率无明显差异（P >0.05）；空载体组与空白对照组比较，差异无统计学意义(P >0.05)。实验组子宫平滑肌细胞中F-actin 的含量减少，排列松散、不规则、微丝较细；空载体组、空白对照组子宫平滑肌细胞中F-actin 微丝明显增多增粗、呈束状平行排列。结论体外实验表明抑制calponin-1的表达可以抑制子宫平滑肌细胞的运动而不影响其增殖和凋亡，并可引起子宫平滑肌细胞F-actin 的形态变化与重排。此结果提示：妊娠时子宫平滑肌细胞迁移能力的改变及F-actin 的重排，可能是导致分娩发动的重要机制之一。关键词：calponin-1；RNA 干扰；分娩发动中图分类号：R329.28

文献标识码：A

文章编号：1673-4254(2010)06-1369-04

Effects of calponin -1gene silencing on the biological behavior of uterine smooth muscle cells

GU Yong-hong 1,ZHOU Chang-ju 2,HU Lin-yu 2,CHEN Qian 1,ZHANG Wei-she 3

1

Department of Pathology,

2

Department of Obstetrics and Gynecology,Third Xiangya Hospital,Central South University,Changsha

410013,China;3Department of Obstetrics and Gynecology,Xiangya Hospital,Central South University ,Changsha 410008,China

Abstract:Objective To study the effects of calponin-1expression inhibition on the proliferation ,invasiveness,apoptosis and cytoskeleton of uterine smooth muscle cells,and explore the molecular mechanism of calponin-1in the uterine smooth muscle cells for labor onset.Methods siRNA-calponin-1adenovirus plasmid was constructed and transfected into primarily cultured uterine smooth muscle cells.The proliferation,invasiveness and apoptosis of the cells were determined by MTT assay,matrigel invasion assays and flow cytometry,respectively.Rhodamine-Phalloidin was used for labeling filamentous actin (F-actin),and the morphology and the distribution of F-actin was observed under fluorescence microscopy and analyzed quantitatively.Results The motor ability of uterine smooth muscle cells decreased significantly after transfection with siRNA-calponin-1adenovirus plasmid (P <0.05).The transfected cells showed thinner,loosened and irregular F-actin microfibers,and the cells in the empty vector and blank control groups showed thicker and longer F-actin microfibers.Conclusion Inhibition of calponin-1expression can inhibit uterine smooth muscle cell migration and cause the morphological change and rearrangement of F-actin without affecting its proliferation and apoptosis in vitro ,suggesting that the morphological change and rearrangement of F-actin of uterine smooth muscle cell may be one of the important mechanisms in the labor onset.

Key words:calponin-1;small interfering RNA ;labor onset

calponin-1是平滑肌能量和信号传递系统的重要

组成部分。它主要的功能包括调节平滑肌收缩、抑制细胞增生、参与细胞信号转导和维持细胞骨架等。我们在前期的研究中发现，calponin-1在分娩活跃期子宫体部与子宫下段平滑肌细胞中表达均上调，由此推测calponin-1与分娩发动后子宫平滑肌的收缩有必然联系，可能是分娩发动的调节因子。我们应用RNA

干扰（RNA i ）技术构建calponin-1重组腺病毒质粒，并转染原代培养的人子宫平滑肌细胞，观察抑制

calponin-1表达对子宫平滑肌细胞生物学行为的影

响，进一步探讨妊娠时人子宫平滑肌细胞中

calponin-1蛋白表达上调在分娩发动中的作用机制。1材料与方法1.1材料

细胞培养、质粒构建及细胞转染等所用材料及试剂见参考文献［1-2］。其他主要试剂：Transwell 小室

(Corning Costar ，美国)，四甲基偶氮唑蓝（MTT ）（Amresco ，美国），AnnexinV-Cy5/PI Assay Kit （深圳晶

收稿日期：2009-12-05

基金项目：湖南省科技计划项目（2008SK3116）

作者简介：谷永红（1966-），女，博士，副主任医师，E-mail:guyonghong

0815@

通讯作者：周昌菊，女，主任医师，E-mail:huangdong6619@

2010;30(6)南方医科大学学报(J South Med Univ)

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