液质联用操作规程

1、适用范围

本设备配备ACQUITY UPLC液相色谱仪、ＴＱS ＭS/MS 质谱仪,适用于食品、药品中各种有机物得定性、定量分析,就是一种具有高灵敏度得检测仪器,仪器由主机、计算机与数据处理软件等组成、

2、职责

2.1操作人员按照本规程操作仪器,认真填写实验使用记录、

２、２保管人员负责对仪器进行定期维护与保养。

2.3科室负责人负责监督检查规程得执行。

3.操作程序

日常操作步骤:

准备UPLC —→设置样品表—→运行样品—→定量—→打印报告、

注:如果一个星期内不运行样品请不要关质谱仪,使其保持真空。

建立新方法与proｊeｃｔ得操作步骤:

准备UＰLC-→建立新得project —→用标准品调谐—→编辑质谱方法-→编辑UP ＬC方法—→设置样品表—→运行样品—→定量—→打印报告、

3。1开机:

3.1.１彻底开机顺序(仪器已关闭)

确定MS及其它仪器电源电缆已连接,开氮气发生器、开氩气,小表〈0。1mｐa。打开计算机电源〉等待windｏws正常启动＞电脑界面右下角网络图标红叉。打开UPＬC自动进样器电源,等到电脑界面右下角网络图标出现感叹号！、

打开ＵPLC泵电源,等约3０s或者就是有响声。

打开质谱电源,等待5min,离子源透视镜里面亮。

打开Ｍasｓlynｘ软件,mａsslynx主界面—-——－左侧ｉｎstruｍent—--—Maｓs tune－-－界面菜单栏vａcｕum——-pｕmｐ同样界面左侧偏上dｉagnosｔｉc ｓ—--vacuｕm—－－aｎalyser MＳ１ｔurbo speｅｄ［%］要在5分钟内升到８0。至少抽真空4个小时〉查瞧真空状态主界面mass ｃonｓoｌe--—界面左侧xe

ｖo tq ms ｄeｔectoｒ加号展开——-ｍs diｓｐlay > 碰撞室真空度〉达

到7、ｘｅ-5mbａr。

３.1．２日常开机顺序(仪器未关闭)

开氮气发生器、开氩气,小表＜0.1mpａ,打开Masslynx软件,进入工作站。

３、２建立项目

点击file下得projｅcｔｗizard ,出现对话框,单击yｅs 出现对话框,输入proｊecｔ,ｌocａｔioｎ为Ｃ:\MS ＤＡTA ,单击next ,选择cｒeａte exiｓtiｎg ｐrｏject as ｔｅmｐlａte,并以ｃ:\ｍａｓsｌｙnx\dｅfaｕlt、pro 为模板,单击ｆiniｓｈ.点击OK。

３。３准备ＵＰＬC系统

准备液相得一般流程:准备流动相> 准备样品〉灌注二元泵＞灌注自动进样器〉建立液相方法> 平衡液相

３．3.1.准备流动相

用0、22ｕｍ得膜过滤缓冲液,所有得缓冲液与超纯水都要新配制,超纯水与缓冲液使用不得超过二天,缓冲盐一定要就是可挥发得,而且浓度不要大于1０ｍＭ。

3。3.2、样品要求

所有样品都要用流动相初始梯度比例得溶剂来溶解,并用0、22um得膜过滤、3.3．３灌注二元泵

在Mａsslynｘ主界面,单击MS Coｎｓｏlｅ,进入ＵPＬC交互显示界面,点击左栏ＡcquitｙＵPＬC Sysｔem>Control〉Ｓtart Up System ,单击ＱSM,选择需要用到得流动相位置,如A 与Ｂ,选择seal wash,时间设为３分钟。

单击SM,选择Stroｎg Wａsh 5 cycｌes, Ｓaｍple syｒiｎgｅ20

单击ＥqｕiｌibrａｔｅtｏMetｈod,将流速设为0 ,单击Stａrｔ开始灌注.时间大约为9min 左右、

设定流速,平衡液相

在Ｍａsｓlynx主界面,单击ＩnleｔMetｈod 图标,打开液相方法编辑窗口,单击ｓtatｕs＞ACＱＵＩＴY AdｄitionaｌSｔatus,进入液相控制台,单击A 或Ｂ或流速得位置,出现流速、比例设定对话框, 设定液相流速与比例,单击对勾,开始平

衡液相,如果后面要做调谐,可设定流速0.2ml/min,有机相与水相得比例为50:50。

3。4 准备质谱

3。４.１、计算化合物单同位素质量数

Mａssｌynx主界面＞单击Tooｌs〉MoleｃuｌarＷｅｉght Caｌculator, 输入化合物得分子式(大写—注意Cl、Ｂr等正确得输入方法) ,注意选单同位素Moｎｏiso ,Ion Ｍode:离子化模式,+ve 正离子,-ｖe 负离子,单击Cａlculａtｅ。

3．4.２用Inteｌliｓtａrt进行自动调谐

在Masslyｎｘ主界面单击ＭS Tunｅ图标,打开调谐窗口,

单击Ion Ｍｏde＞ES+ 或ＥS－,单击API Gａs图标打开氮气, 单击

打开高压

选择ＭS Moｄe 图标,设定液相流速0.2ml/min, 水:乙腈得比例为50:5０。

把标准品调谐液放入质谱仪塑料瓶位置处得Ａ(或B或C)号位(注:浓度在200ppb左右)

单击Fluidicｓ,选择Resｅrvoｉr为A ,Ｆlow Staｔe 为ＬC模式,点击Ｐｕrge 图标。

Ｐurge结束后,将Ｆlｏw Staｔe 改为Cｏｍbｉｎe 模式,设定Funｃtion为ＭS １sｃａn, Masｓ为计算出化合物得质量数,ｓpan 为５,点击进样,开始进样,直到离子得响应比较稳定。保存调谐文件:Filｅ〉SavｅAs至已建得项目下。

在Masslynx主界面,选择Ms Consｏle> Xeｖo ＴQ MＳＤeteｃtoｒ

选择Intellｉstarｔ,选择SampｌｅＴune aｎd Dｅvelop Mｅｔhod ,ES+

单击Start 图标,出现Ｉntｅlｌisｔart 自动调谐编辑窗口,选择Sｗｉｔch to Aｄvanｃed

mｏdｅ,输入Coｍpounｄｎame (化合物名称) ,Moleculａr Mass/Ｆormuｌa (分子量或分子式) Adduct A+(［M+Ｈ］+, 选择LｏaｄExiｓtiｎg SampｌeＴunｅ,在SamplｅTune Ｎame 方框后得“。。。"处调用开始保存得调谐文件,在DeveｌoｐMＲM Method前得方框打钩,并在方框出输入MＲＭ方法得文件名,路径为已建得项目下。在Priｎt Rｅｐort 前方框打钩,Cone Vｏltａge,Ｃo