病原微生物

1，影响血培养阳性分离率的因素有哪些？

答：血液标本采集的质量直接关系到血液培养的阳性率,而标本采集质量受多种因素影响,如采血的时间、部位、容量（采血量）、标本运送、采血的频率（血培养套数）、皮肤定植菌污染，因此严格掌握每种因素都能提高血液培养的阳性率。【采集血培养的最佳方案：

①采血时间：原则上应选择在抗菌药物应用之前进行采集，对已应用药物而病情不允许停药的患者也应在下一次用药前采血，因为此时血液中抗菌药物的浓度最低。

对间歇性寒战或高热应在寒战或体温高峰到来之前0.5~1小时采集血液。

②采血部位：通常为肘静脉。疑似细菌性心内膜炎时，以肘动脉或股动脉采血为宜，切忌在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本。

③采血量：自动化仪器要求成人采血量是8～10ml/瓶，儿童1～5ml/瓶。手工配制培养基要求血液与肉汤之比以1：5~1:10为宜，以稀释血液中抗生素、抗体等杀菌物质。当发生菌血症时，通常成人血液中含有的菌量小于1cfu/ml，而儿童血液中的菌量常超过100cfu/ml，所以婴幼儿、儿童采血量少于5ml时，不会影响培养的阳性率。

④标本运送：采血后立即送检，如不能立即送检，可室温保存，切勿冷藏或孵育。

⑤血培养套数：疑似菌血症患者应在身体不同部位同时采集至少2~3套血培养（1套包括1个需氧瓶和1个厌氧瓶），即“双瓶双侧”。对于成年患者，只采集一瓶血培养是不允许的，因为一瓶血培养标本的培养结果很难解释是致病菌还是污染菌。多套血培养有助于区分污染菌和提高阳性检出率。在采血后的2至5天内，无需重复采血培养，因为第1天采集的2~3套血培养标本，若有菌生长，治疗后的2至5天内血液中的感染细菌不会马上消失，重复抽血会浪费资源。只有怀疑为持续性菌血症：如心内膜炎、导管相关脓毒症时，才要有间隔地（1~24H）几次采血检测、捕捉、指导治疗。

⑥排除皮肤定植菌污染引起的血培养假阳性

严格皮肤消毒程序，严格执行三步法：

（1）、70%酒精擦拭静脉穿刺部位待30秒以上。

（2）、1%~2%碘酊作用60秒或10%聚维酮碘60~90秒，从穿刺点向外画圈消毒区域直径达3cm以上。

（3）、对碘过敏者，用70%酒精消毒60秒，待酒精挥发干燥后采血。

（4）不允许在消毒后按压静脉，除非戴有手套。

（5）采血后勿换针头，直接注入血培养瓶，轻轻颠倒混匀以防血液凝固。】

2，下呼吸道感染合格标本的特点是什么？为何要进行痰标本涂片的细胞学筛选？

合格的痰标本：鳞状上皮细胞≦10个/低倍镜视野，白细胞≧25个/低倍镜视野。细胞学筛选的原因：来自下呼吸道的合格标本应该含脓细胞和支气管柱状上皮细胞较多，而受唾液污染的标本则来自颊粘膜的扁平鳞状上皮细胞较多。

3，尿培养标本采集过程中应注意哪些问题？

①多数药物通过尿液排泄，因此无论何种采集方法均应在抗菌药物应用之前采集。

②尽量采集晨尿，使尿液在膀胱内潴留一夜或至少4h以上。

③标本采集后应及时送检、及时接种，尿标本放置稍久可导致尿内细菌浓度明显增加而影响病原菌与污染菌的区分，因此，室温下保存时间不得超过2小时， 4℃

冷藏保存时间不得超过24小时。冷藏保存的标本不能用于淋病奈瑟菌培养。

④对症状不明显患者应连续采集三天晨尿送检。

⑤标本标识：采集方法、采集时间、患者基本信息、临床诊断、是否摄入过量的水及使用抗菌药物等

⑥中段尿采集：采样前先用肥皂水清洗外阴部及尿道口，女性应分开大阴唇，男性应翻转包皮，仔细清洗后再用清水冲洗尿道口周围，灭菌纱布擦干后，自然排尿，让尿流不间停，截取中段尿约10ml直接排入无菌容器中立即送检。

⑦留置导尿管尿液：采用无菌技术用注射器斜穿导尿管壁抽吸尿液。尿袋和导尿管末端的尿液不能用作培养。除非是流行病学调查，长期留置导尿管的病人常规尿液培养没有临床意义（留置导尿48-72h后常有多种细菌定植）。需要置入一个新的导管后再采集尿液做细菌培养。

4，微生物标本采集的一般原则。

①无菌采集：采集的标本应无外源性污染；标本容器必须清洁无菌；标本采集时应严格无菌操作，避免机体正常常居菌群及其它杂菌污染。

②早期采集：采集时间最好是在病程早期、急性期或症状典型期，而且应尽量在使用抗菌药物之前采集。同时有些标本还要注意在不同时间采集不同部位标本。如伤寒。

③采集适量标本：采集量不应过少，而且要有代表性。

④正确指导患者留取标本。

⑤所有标本必须立即送往实验室，最好在2小时内。对环境敏感的微生物，如淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌（对低温敏感）应立即处理，严禁冷藏，床旁接种可提高病原菌检出率。以无菌拭子采集的标本如咽拭子、肛拭或伤口拭子，宜插入运送培养基送检。

⑥送检标本应注明来源、检验目的、采集时间以及病人信息，使细菌室能正确选用相应的培养基和适宜细菌生长的培养环境，以及正确地解释、判断实验结果。

⑦鼓励送检有价值的标本

5, 是否有必要常规做鼻咽拭子培养?

正常人的鼻咽部带有多种细菌，如金葡、表葡、类白喉、链球菌（包括肺链）、奈瑟菌（包括脑膜炎奈瑟菌）、卡他莫拉菌、流感嗜血杆菌、白色念球菌等。因此，不建议用鼻咽拭子做常规细菌培养。鼻咽拭子不能用来检测鼻窦感染的病原体。

6，引起细菌耐药性的生化机制有哪些？

①产生灭活酶：细菌接触抗生素后，可产生多种灭活抗生素中有效成分的酶，使其失去抗菌活性，因此耐药。此种耐药机制约占80％。

②改变靶位蛋白：细菌可通过改变其代谢途径，改变靶位蛋白与抗生素的亲和力，使抗生素不能与其结合，以维持细菌的正常形态和功能。

③细菌改变细胞外膜的通透性：细菌可通过改变自身外膜的蛋白组成或数量而改变其通透性，从而使抗生素不能通过外膜到达靶位而产生耐药。

④主动外排机制——药物被泵出菌体外。已发现数十种细菌外膜上有特殊的药物主动外排系统，药物主动外排使菌体内抗菌药浓度下降，难以发挥抗菌作用导致耐药，主动外排耐药机制与细菌的多重耐药性有关。

7，药敏试验的判断标准是由什么机构制定的？药敏试验药物选择应遵循哪些原则？

（1）药敏试验的判断标准是由临床实验室标准化研究所（CLSI）制定的。