胡萝卜愈伤组织诱导实验报告
实验一 胡萝卜愈伤组织的诱导培养
本科学生综合性实验报告
学号姓名
学院生命科学学院专业、班级
实验课程名称植物组培实验
教师及职称龙维彪（讲师）
开课学期2013 至2014 学年第二学期填写时间2014 年 4 月27 日
云南师范大学教务处编印
一．实验设计方案
胡萝卜愈伤组织的继代培养流程：
二、实验报告
胡萝卜愈伤组织诱导培养结果
总接种瓶数 5 总接种块数 16
污染瓶数 2 污染块数 5
未污染瓶数 3 未污染块数 11
未污染块中愈伤
组织发生块数
11 愈伤组织发生率 100％
愈伤组织发生情况记录愈伤组织呈淡黄色和黄色，发生在原胡萝卜块表面，总体发生的很好，很大很蓬松。
未污染3瓶都发生的很好。
胡萝卜愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养研究
山西师范大学学报(自然科学版)第18卷第2期Journal of Shanxi Teacher c s University Vol.18No.2 2004年6月Natural Science Edition June2004文章编号:1009-4490(2004)02-0071-06胡萝卜愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养研究尹文兵,李丽娟,黄勤妮,李艳红(首都师范大学生物系,北京100037)摘要:分别以胡萝卜子叶、下胚轴和直根形成层为外植体诱导出愈伤组织,并建立细胞悬浮系.实验结果表明:胡萝卜下胚轴是诱导愈伤组织和进行细胞悬浮培养的理想外植体;诱导松散型愈伤组织的最佳激素浓度配比是1.0mg/L2,4-D+0.5mg/L KT;细胞悬浮培养细胞最佳起始密度为1.125@104个/mL~2.325@104个/50mL时,7d~9d为对数生长期;继代培养4代~5代时,可得到稳定的悬浮细胞系.关键词:胡萝卜;组织培养;细胞悬浮培养;松散型愈伤组织;生长曲线中图分类号:S631.2文献标识码:A胡萝卜(Daucus carota L.),属于十字花科植物,是一种十分重要的蔬菜作物,由于其营养价值高,及其适于生食、加工、烹调等多种用途,在世界范围内广泛栽培.中国是农业大国,胡萝卜作为蔬菜作物在人们生活中起着重要的作用.因此,加快我国胡萝卜育种研究以成为迫切需要[1].近些年来,随着生物技术与分子生物学技术的快速发展,作为生物技术研究的理想材料,许多国家对胡萝卜体细胞杂交技术、遗传转化与再生技术、分子标记与基因克隆技术进行了广泛深入的研究.我国科研工作者在胡萝卜的生物技术与分子生物学研究上也取得了一定进展,特别是在组织培养、原生质体融合[2]、遗传转化及再生等方面.但是在胡萝卜细胞培养方面并不是太多,因此继续深入研究还是很有必要的.本文对胡萝卜愈伤组织诱导的最佳培养基和细胞悬浮培养的条件进行探讨,为其次生代谢产物A-胡萝卜素、B-胡萝卜素的生产以及将来的工厂化和分子生物学研究打下基础.1材料和方法1.1材料来源胡萝卜种子由中国农科院蔬菜所提供.1.2方法收稿日期:2004-03-22作者简介:尹文兵(1979)),男,山西安泽人,首都师范大学在读硕士研究生,主要从事功能基因组学方面的研究.72山西师范大学学报(自然科学版)2004年1.2.1胡萝卜愈伤组织的诱导(1)以胡萝卜子叶和下胚轴为外植体诱导[2].将胡萝卜种子搓去种毛,然后在75%的酒精中消毒5min,无菌水冲洗一遍后,用0.1%的升汞消毒10min,接着用无菌水漂洗一遍,再用无菌水浸泡30min,最后用无菌水漂洗一遍,接种在无激素的MS培养基上.10d左右种子开始萌发,待两片子叶伸展,而心叶刚刚显露时,将幼苗的下胚轴和子叶切成0.3c m 左右的小段,接种在附加植物激素1.0mg/L2,4-D,1.0mg/L2,4-D+0.5mg/L KT,2.0mg/L 2,4-D,2.0mg/L2,4-D+0.5mg/L KT的MS培养基的三角瓶中,培养30天左右,即可诱导出愈伤组织.继代培养时,将老的和生长不良的愈伤组织去掉,将大的健康的愈伤组织切至0.5c m,再放于含0.1mg/L2,4-D的MS培养基(pH5.7)上继续培养.诱导和继代培养均在黑暗条件下进行,培养温度为25e,继代培养时间为3周~4周更换一次培养基.观察并记录继代过程中愈伤组织状态的变化.(2)以胡萝卜直根形成层为外植体诱导.用清水洗净胡萝卜直根,用小刀削去表皮和顶部,将其在75%的酒精中消毒5min,再用0.1%的升汞消毒10min,接着用无菌水漂洗一遍,再用无菌水浸泡30min,最后用无菌水漂洗一遍.消毒好的胡萝卜直根,切去下边的2/ 3部分,留下部分用消毒好的小刀,沿截面横切成厚度1mm左右的小圆片,然后将小圆片的韧皮部和木质部切去,留下形成层,再切成长3mm,宽1.5mm,高1mm的小长块,接种在(1)中的诱导培养基上,获得愈伤后进行继代培养,培养环境条件与(1)相同.1.2.2胡萝卜细胞悬浮系的建立[3]用镊子夹取在固体继代培养基上继代20d左右的胚性愈伤组织即分散性好、疏松的愈伤,接种在含0.3mg/L2,4-D的液体培养基(pH5.7)中,每100mL的三角瓶中加入液体培养基50mL,摇床转速为110r/min,温度为25e,黑暗培养.每隔7d继代一次,连续培养4代~5代后逐渐形成稳定的细胞系.细胞悬浮培养液体培养基成分与愈伤组织继代培养的培养基相同,但不加琼脂.每隔1d在倒置显微镜下观察细胞形态、分散程度并照相,进行细胞计数,以建立细胞数生长曲线.1.2.3细胞悬浮生长曲线的测定取0.5g悬浮培养物,接入新鲜液体培养基中,进行振荡培养,每隔1d取样1次,共培养13d,连续做3次平行实验.1.2.4悬浮细胞数目的测定用血球计数板法[1]对胡萝卜悬浮细胞计数,全部操作在无菌环境下进行,每个结果为4次平行实验的平均值.细胞数按下面公式计算:1mL悬浮液中的总细胞数=A/5@25@ 104@B,A为5个中方格总细胞数,B为稀释倍数.2结果与讨论2.1外植体对愈伤组织状态的影响有文献报道,不同外植体的脱分化能力不同,诱导出愈伤组织的频率和愈伤组织的状态也不同.在胡萝卜愈伤组织诱导时,本实验采用三种外植体:胡萝卜子叶、下胚轴和直根形成层.经过30d观察发现,三种外植体经过培养均诱导获得了愈伤组织.结果如下:以子叶为外植体的大约有2/3诱导获得了愈伤组织,多数愈伤组织呈浅黄色,生长旺盛,质地松散,含水量大,分散性好,但也有一些状态不好,色泽发暗,选取好的可作为细胞悬浮培养的材料;以下胚轴为外植体几乎所有都获得了愈伤组织,并且愈伤组织生长旺盛,呈黄色,比较疏松,分散性好,适宜于细胞悬浮培养;而以直根形成层为外植体获得的愈伤组织不多,色泽较暗,有些带褐色,愈伤组织生长缓慢,质地较硬,分散度差,不适宜于细胞悬浮培养.因此,可认为胡萝卜下胚轴是诱导愈伤组织和进行细胞悬浮培养的理想外植体.2.2 激素对愈伤组织状态的影响不同的激素及激素浓度直接影响着愈伤组织的状态、质地和分散性,而这些因素又是松散愈伤组织的关键,也是进行细胞悬浮培养的必要前提.因此,本实验诱导胡萝卜愈伤组织及继代培养设计了4种激素组合[见1.2.1(1)],通过多次继代培养发现,1.0mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT 组合诱导出的胚性愈伤组织(见图1)生长旺盛、呈黄色米粒状分散性好、质地松软、含水量小,有利于细胞悬浮培养,而半胚性愈伤不适合进行细胞悬浮培养.其他3种组合中,2.0mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT 诱导出的愈伤组织也比较疏松,而另两种诱导出的愈伤组织质地比较坚实,有褐化现象.可见,2,4-D 与KT 的结合有利于疏松愈伤组织的诱导.图1 胡萝卜松散型愈伤组织 左图:胚性愈伤 右图:半胚性愈伤Fig.1 The imcompact calli.of Daucus carota L Left:embrogenic callus Ri ght:semiembrogenic callus2.3 继代次数与细胞状态之间的关系在细胞悬浮培养的过程中,需要不断地进行继代,来筛选出良好的、较稳定的细胞系.继代过程中,细胞悬浮液的颜色、细胞的形态、大小、数量不断在发生着变化.第1、2次继代时,细胞悬浮液为白色或浅黄色,混浊,有许多大颗粒,倒置显微镜下观察,细胞多数成团,保持较旺盛的分裂能力,单细胞大多呈长形、梭形、不规则形(见图2),细胞个体较大;3、4次继代时,细胞悬浮液变为黄色,比较粘稠,颗粒大小分布均匀,倒置显微镜下观察,分裂的细胞团增多,有的细胞团明显可见有20个~30个球形细胞组成,单细胞数目增多,而且大多呈球形;5次继代时,细胞悬浮液(见图3)呈透明的黄色,澄清,呈油状流动,颗粒分布很均匀,直径大多在0.5m m~1mm,倒置显微镜下观察,细胞团和单细胞很多,大多呈球形(见图4),大小均匀;6、7次继代以上时,悬浮液变得比较澄清,呈浅黄色,悬浮颗粒大小均匀,倒置显微镜下观察,细胞大多成团,可以清楚的看出细胞呈球形,比较均匀,73 第2期 尹文兵,等:胡萝卜愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养研究也有单细胞,但是不多,这可能与细胞聚集成团的特性有关.图2 不规则细胞(10@) 图3 黄色的细胞悬浮液Fig.2 Irregular cell (10@)Fig.3 Yellow cell suspension因此,继代培养过程中,随着继代次数的增多,细胞悬浮液由无色或浅黄色变为黄色,由混浊变为澄清、透明,颗粒大小由不均匀到均匀,最终直径在0.5mm~1mm,倒置显微镜下观察,单细胞由长形、梭形、不规则形变为规则的球形,细胞系逐渐趋于稳定.随后,我们又从筛选出来的细胞系将细胞接种到不含激素的MS 培养基上,7d 后长出新的愈伤组织,30d 后长出胡萝卜全苗并转入蛭石成活(图5),说明以细胞系转化为新的愈伤组织生成再生植株是成功的.图4 球形细胞(40@) 图5 再生植株Fi g.4Global cell (40@) Fig.5Plant regeneration2.4 细胞起始密度对细胞悬浮培养的影响在细胞悬浮培养时,细胞生长需要一个最低生长密度,低于此密度,细胞生长速率降低或根本不生长[4].适宜的起始密度可以缩短细胞系筛选的时间,起始密度过大过小不仅会影响细胞系筛选的时间而且不利于稳定细胞系的建立.同时,细胞的起始密度对细胞培74山西师范大学学报(自然科学版) 2004年养周期也有影响.为此,本实验设计了4个密度梯度:0.4@104个/50mL,1.125@104个/50mL,2.325@104个/50mL,8.875@104个/50mL.培养13d,细胞状态随天数的变化见表1。
实验2-3 胡萝卜愈伤组织继代培养基的配制
（2）植物材料的表面灭菌和接种
①操作人员洗手消毒
②装材料的容器及玻璃棒用酒精表面消毒
③将待消毒的材料浸入75％的酒精中10秒， 取出用无菌水冲洗干净。 ④倒入消毒剂（ 0.1%HgCl2 ）并计时
⑤到预定时间（20分钟）后倒出消毒液并 用无菌水清洗干净。
⑥将材料切块后接种到诱导培养基上。
6 实验流程
（1）准备工作
① 外植体表面灭菌前的准备工作 a 接种室的清洁和消毒； b 超净工作台的开机和消毒；
c 消毒溶液、无菌水、装等的准备。
② 实验材料的准备
a 准备新鲜健康的胡萝卜肉质直根作实验 材料；
b 实验材料的修整、刷洗、冲洗； c 用洗衣粉水或肥皂水浸洗后再用自来水 冲净。
（2）胡萝卜愈伤组织增殖培养基的配制
配方：MS基本培养基＋ 2mg/L NAA＋ 0.1mg/L 6-BA＋200mg/L水解酪蛋白＋ 0.7 ％琼脂＋3％蔗糖 配制流程：同胡萝卜愈伤组织诱导培养基 的配制
作业
详细写出胡萝卜愈伤组织诱导培养的操作 步骤。
实验2-2 胡萝卜愈伤组织的诱导
1 实验目的
通过本次实验，使同学能够熟练掌握外植 体的表面消毒技术和无菌操作技术。 2 实验原理 将胡萝卜的贮藏根（根的变态）表面消毒 后切割成小块接种于愈伤组织诱导培养基 上，诱导外植体脱分化产生愈伤组织。
3 主要实验用具和仪器
用具：酒精棉球、小块纱布、已灭菌滤纸、 枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养 皿、酒精灯等。 仪器：超净工作台、恒温培养箱 4 药品和试剂 胡萝卜愈伤组织诱导培养基、无菌水、75 ％酒精、0.1%HgCl2。 5 实验材料：胡萝卜肉质直根
胡萝卜愈伤组织诱导实验报告
南昌大学实验报告胡萝卜愈伤组织诱导姓名：学院：专业：班级：学号：胡萝卜愈伤组织诱导实验一母液的配制与保存一、实验目的1.学习母夜的配制方法和母液的保存方式。
2.熟悉掌握制备母液的操作。
二、实验原理培养基中提供植物生长所需的营养成分，才能满足植物正常的生长发育的需求。
主要包括水分、有机物质、盐类，而配制母液时将其分为大量、微量、钙盐、镁盐、铁盐、有机和肌醇分别配制。
配臵培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配臵，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的母液臵于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配臵即可。
三、实验材料、试剂和仪器设备1．试剂NH4NO3,KNO3,KH2PO4,CaCl2〃2H2O,MgSO4〃7H2O,FeSO4〃7H2O Na2-EDTA, MnSO4〃4H2O,ZnSO4〃7H2O,H3BO3,KI,Na2MoO4〃2H2OCuSO4〃5H2O,CoCl2〃6H2O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，蒸馏水。
2.仪器设备电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，移液管（10ml，5ml，1ml）试剂瓶，玻璃棒数支，药芍，称量纸等。
四、实验步骤 1 、计算：计算各化学成分所需要的量。
大量、微量和盐类按扩大50倍，定容500ml的配制计算。
有机和肌醇按扩大100倍，定容200ml的配制计算。
计算后制成配方表。
2、制定标签：裁取7张适当大小的牛皮纸，用铅笔写上MS，种类，并标明此类母液所含物质，质量，定容体积，扩大倍数吸取量，制备人，制备日期。
3、大量元素母液的配制：先用量筒量取300ml蒸馏水放入500ml 烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取：NH4NO3 ,KNO3 , KH2PO4 , 待第一种化合物完全溶解后再加入第二种化合物，溶解过程用玻璃棒搅拌，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液转移至500ml 容量瓶中，并用蒸馏水将烧杯和玻璃棒洗涤3次，每次约50ml，而后用蒸馏水定容至500ml，然后转移至细口试剂瓶中，贴上标签，并臵于冰箱中低温保存备用。
胡萝卜愈伤组织诱导培养实验
云南大学生命科学学院本科教学实验教学中心细胞工程实验实验报告胡萝卜愈伤组织诱导培养实验摘要：以胡萝卜为实验材料，利用直根形成层为外植体诱导出愈伤组织，探讨了不同激素比例对胡萝卜愈伤组织诱导的影响，然后在诱导后的愈伤组织多次继代培养获得生长旺盛的分化组织，接着进行再分化，在胡萝卜培养过程中掌握诱导培养技术还有细胞培养所要求的无菌技术。
关键字：胡萝卜；愈伤组织；继代培养；再分化；组织培养胡萝卜(Daucus carota L)为伞形科两年生草本植物，因其营养丰富、又具药用价值，且耐运输、易栽培、病虫害少和耐贮藏，而成为人们常食蔬菜。
同时又作为生物技术研究的理想材料，因此建立一个高效的、实用的组织培养快速繁殖体系则是研究植物遗传转化的基础。
本文对胡萝卜愈伤组织诱导的最佳培养基进行探讨，研究了激素对胡萝卜愈伤组织诱导的影响，为其高效生产次生代谢产物α-胡萝卜素、β-胡萝卜素以及将来组织培养的工厂化和分子生物学研究打下基础【1】。
1.材料和方法1.1材料来源：胡萝卜根，长10~20cm，直径1cm以上。
1.2方法：1.2.1愈伤组织的诱导培养（1）培养基的配制：MS +2，4-D 2mg/L + KT 0.5mg/L+3%（30g/L）白砂糖+0.95%（9.5g/L）琼脂，pH5.8（2）胡萝卜的选材、修剪和清洗：选择新鲜较粗的萝卜，先用自来水冲洗，再2％洗涤剂浸泡20分钟，清水冲洗（注意材料损伤）（3）对材料进行灭菌：在超净工作台上用75％乙醇30-60s；0.1%升汞8-10分钟; 无菌水冲洗3-5次；（4）无菌修剪：用解剖刀进一步去除两端1cm，将中断切成0.5cm厚的薄圆片，然后再切去外壁2—3mm厚的皮，选取中间的部分移至无菌的部分，用刀通过形成层切成1cm2的小块；（5）接种：无菌操作将处理好的材料接种于培养基上，2-3个材料/瓶（6）培养及观察记录：25 ℃，光照培养，定期观察污染情况，生长状况1.2.2继代培养从培养瓶中取出愈伤组织，置于无菌培养皿内，用解剖刀将愈伤组织坏死部分剔除并将愈伤组织切成黄豆大小颗粒，放在无激素的新鲜培养基表面，用镊子轻轻压实，每个培养瓶接种2~3个切块。
胡萝卜肉质根愈伤组织的诱导及继代增值培养实验报告
综合性实验报告胡萝卜肉质根愈伤组织诱导及继代增殖培养一、实验原理及目的（一）实验目的1、通过MS培养基母液的配制和保存，掌握配制于保存培养基母液的基本技能。
2、通过MS固体培养基的配制，掌握培养基的制备基本技能。
3、学会和掌握诱导愈伤组织的基本技术。
4、初步掌握组织培养的无菌操作技术。
5、初步掌握外植体的消毒技术。
6、掌握组培室常用的化学试剂。
7、学会和掌握愈伤组织继代培养的基本操作技术。
（二）实验原理1、配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
2、在自然情况下，根主要为植物吸收和固定的重要器官，同时，有些植物的根亦具有繁殖的功能。
植物根生长快、代谢能力强、变异小，使得其在研究根的营养吸收、生长和代谢的变化规律、器官分化、形态建成规律等方面具有重大的理论与实践意义。
依据细胞全能性原理，即指任何具有完整细胞核的细胞（动物、植物等），都拥有形成一个完整个体所必需的全部遗传信息（DNA）。
就胡萝卜根来说，其肉质根细胞同样具有形成完整再生植株的能力。
这种由单个根衍生而来并经继代培养而保存的，在遗传上具有一致的根的培养物，称为离体根无性系。
利用这些离体根的无性系可以进行器官再生体系、苗木无性系快速繁殖和其他方面的实验研究。
3、愈伤组织（callus）原指植物体的局部受到创伤刺激后，在伤口表面新生的组织。
它由活的薄壁细胞组成，可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。
在植物体的创伤部分，愈伤组织可帮助伤口愈合；在嫁接中，可促使砧木于接穗愈合，并由新生的维管组织使砧木与接穗沟通。
在植物器官、组织、细胞离体培养时，条件适宜也可以长出愈伤组织。
其发生过程是：外植体的活细胞经诱导，恢复其潜在的全能性，转变为分生细胞，继而其衍生的细胞分化为薄壁细胞组织而形成愈伤组织。
胡萝卜实验报告数据
一、实验目的1. 掌握植物组织培养技术，特别是胡萝卜愈伤组织的诱导培养方法。
2. 了解胡萝卜愈伤组织诱导过程中各因素对愈伤组织生长的影响。
3. 熟悉无菌操作技术，提高实验操作的规范性和准确性。
二、实验材料1. 胡萝卜（品种：心里美）2. MS培养基母液3. 常用试剂：琼脂、蔗糖、硝酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1、氯化钙、氢氧化钠、盐酸、酒精等4. 实验器材：超净工作台、高压蒸汽灭菌器、移液器、剪刀、镊子、培养皿、培养瓶等三、实验方法1. 胡萝卜外植体的选取与消毒选取胡萝卜根尖部位作为外植体，用70%酒精消毒30秒，再用无菌水冲洗3次。
2. 胡萝卜愈伤组织的诱导培养将消毒后的胡萝卜外植体接种到MS培养基中，添加适量的植物生长调节剂（如2,4-D、NAA等），在恒温培养箱中培养。
3. 胡萝卜愈伤组织的继代培养当愈伤组织生长到一定阶段后，将其转移到新的培养基中进行继代培养，继续观察愈伤组织的生长情况。
4. 胡萝卜愈伤组织的诱导效果分析通过观察愈伤组织的生长速度、颜色、质地等特征，分析不同植物生长调节剂对愈伤组织诱导的影响。
四、实验结果1. 胡萝卜愈伤组织的诱导培养在MS培养基中添加2,4-D浓度为0.5mg/L时，胡萝卜愈伤组织诱导效果最佳，诱导率可达90%。
2. 胡萝卜愈伤组织的继代培养在继代培养基中，胡萝卜愈伤组织的生长速度较快，颜色逐渐变浅，质地逐渐变软。
3. 不同植物生长调节剂对愈伤组织诱导的影响在实验中，我们发现2,4-D、NAA、IAA等植物生长调节剂对胡萝卜愈伤组织的诱导效果有一定影响。
其中，2,4-D浓度在0.5mg/L时，诱导效果最佳。
五、实验结论1. 胡萝卜愈伤组织诱导培养是一种有效的植物组织培养方法，可用于植物繁殖、基因转化等研究。
2. 在胡萝卜愈伤组织诱导过程中，植物生长调节剂2,4-D对愈伤组织的诱导效果最佳。
3. 通过实验，我们掌握了胡萝卜愈伤组织诱导培养的基本操作技术，为进一步研究植物组织培养提供了实验基础。
胡萝卜愈伤组织的诱导
植物材料表面的灭菌具体过程为
A．工作人员吸收消毒；
B．装材料的容器及玻璃棒用酒精进行表面消毒；
C．将待消毒材料浸入75%酒精中10秒，取出用无菌水冲洗；
D．倒入消毒液并计时；
E．到时（30min后）倒出消毒液；
F．倒入无菌水清洗后（依次放到3瓶无菌水中进行冲洗。
Ⅳ：植物细胞具有全能性。离体条件下，在适宜的培养基中，加入一定量的植物生长调节物，主要是细胞分裂素和生长素，使胡萝卜块根细胞脱分化形成愈伤组织。
Ⅴ:愈伤组织诱导成败的关键主要不是外植体的来源和种类而是培养条件，其中激素的种类和浓度更为重要。
Ⅵ:诱导愈伤组织常用的生长素是2,4—D，IAA,NAA等，常用的细胞分裂素是KT和6-BA。其中2,4—D常能在没有任何外源细胞外源细胞分裂素存在的情况下，十分有效地促进愈伤组织的增值，它使用浓度一般在10-7—10-5mol|L。IAA,NAA，2,4—D等具有热稳定性，但IAA容易被光降解和被培养的组织中的酶氧化，因此，加在培养基中的IAA浓度应当较高（一般在1-30mg/L）,NAA不受IAA氧化酶的作用，可以在较低的浓度加在培养基中（一般在0.1-2.0mg/L）
0.025
5
4.1.1.3有机成分母液的配制
MS培养基中所需的维生素和氨基酸等有机成分母液应分别单独配制，配
制步骤同上（具体配制见下表）
母液成分
成分
规定用量(mg/L)
扩大倍数
母液定容体积/L
称取量/mg
配1LMS培养基吸取量/ml
有机成分
甘氨酸
2.0
200
0.5
40
50
盐酸硫胺素
0.5
2
胡萝卜愈伤组织诱导
胡萝卜愈伤组织的诱导摘要:以胡萝卜直根为外植体,进行植物组织培养，并探讨解决胡萝卜组织培养不易成功的因素。
先后进行了两次实验,研究了不同的植物生长调节剂(2,4-D、6-BA)对胡萝卜脱分化形成愈伤组织速度的影响。
实验结果表明在母液中加入2,4-D(2.2 mg/L)效果最好,优于加入6-BA(0.5mg/L)+ 2,4-D(1.0mg/L)。
关键词：胡萝卜；愈伤组织；激素一、引言19世纪30年代，德国植物学家施莱登和德国动物学家施旺创立了细胞学说，根据这一学说，如果给细胞提供和生物体内一样的条件，每个细胞都应该能够独立生活。
1902年，德国植物学家哈伯兰特在细胞学说的基础上，大胆提出要在试管中人工培育植物。
他预言离体的植物细胞具有发育上的全能性，能够发育成为完整的植物体。
这种细胞全能性的理论是植物组织培养的理论基础。
1958年，一个振奋人心的消息从美国传向世界各地，美国植物学家斯蒂瓦特等人，用胡萝卜韧皮部的细胞进行培养，终于得到了完整植株，并且这一植株能够开花结果，证实了哈伯兰特在五十多年前关于细胞全能的预言。
植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。
植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
狭义是指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。
植物组织培养新技术在快繁脱毒、育种、种质资源保存、次生代谢物提取、基因转化等方面有着良好的前景以及研究热点。
在植物育种上的应用：单倍体育种，离体胚培养和体外受精，细胞融合，基因转化，培养细胞突变体、在植物脱毒和快速繁殖上、在人工种子和种质保存方面、在提取植物次生产物生产上、在植物免疫方面的皆能有其应用。
胡萝卜愈伤组织实验报告
北京师范大学珠海分校实验报告姓名：实验名称：胡萝卜愈伤组织的诱导学院（系、所）：工程技术学院学科专业：生物技术导师姓名：报告时间：2012.2.15—2012.3.20实验序号01实验名称胡萝卜愈伤组织的诱导实验时间2012.2.15—2012.3.20实验室工程技术学院1206 1209 1．研究背景1.1 胡萝卜胡萝卜（Daucus carrot），属于十字花科植物，是一种十分重要的蔬菜植物。
由于其营养价值高,及其适于生食、加工、烹调等多种用途,在世界范围内广泛栽培。
中国是农业大国,胡萝卜作为蔬菜作物在人们生活中起着重要的作用.因此,加快我国胡萝卜育种研究以成为迫切需要。
近些年来,随着生物技术与分子生物学技术的快速发展，作为生物技术研究的理想材料，许多国家对胡萝卜体细胞杂交技术、遗传转化与再生技术、分子标记与基因克隆技术进行了广泛深入的研究。
我国科研工作者在胡萝卜的生物技术与分子生物学研究上也取得了一定进展，特别是在组织培养、原生质体融合、遗传转化及再生等方面。
但是在胡萝卜细胞培养方面并不是太多。
因此继续深入研究还是很有必要的。
此外，由于市面上的胡萝卜价格比较便宜，材料易得，而且在组织培养方面容易诱导发生，我们可以通过这个实验熟悉植物组培。
1.2 组织培养植物组织培养概念（广义）又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织。
器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
植物组织培养概念（狭义）指用植物各部分组织，如形成层。
薄壁组织。
叶肉组织。
胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。
2．实验设备与材料2.1 实验设备冰箱、普通天平、分子天平、试剂瓶（棕色和白色）、量筒、烧杯、容量瓶、药勺、称量纸、玻棒、标签纸、三角瓶、吸管、玻璃棒、精密pH试纸（5.4～7.0）、PH试纸（5.4～7.0）、封口膜、橡皮筋、微波炉、高压蒸汽灭菌锅、已灭菌滤纸、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、大烧杯、小烧杯、50ml三角瓶、50ml 量筒、100ml量筒、10ml和5ml还有2ml吸管、200ml定容瓶。
胡萝卜愈伤组织诱导
胡萝卜愈伤组织的诱导摘要:以胡萝卜直根为外植体,进行植物组织培养，并探讨解决胡萝卜组织培养不易成功的因素。
先后进行了两次实验,研究了不同的植物生长调节剂(2,4-D、6-BA)对胡萝卜脱分化形成愈伤组织速度的影响。
实验结果表明在母液中加入2,4-D(2.2 mg/L)效果最好,优于加入6-BA(0.5mg/L)+ 2,4-D(1.0mg/L)。
关键词：胡萝卜；愈伤组织；激素一、引言19世纪30年代，德国植物学家施莱登和德国动物学家施旺创立了细胞学说，根据这一学说，如果给细胞提供和生物体内一样的条件，每个细胞都应该能够独立生活。
1902年，德国植物学家哈伯兰特在细胞学说的基础上，大胆提出要在试管中人工培育植物。
他预言离体的植物细胞具有发育上的全能性，能够发育成为完整的植物体。
这种细胞全能性的理论是植物组织培养的理论基础。
1958年，一个振奋人心的消息从美国传向世界各地，美国植物学家斯蒂瓦特等人，用胡萝卜韧皮部的细胞进行培养，终于得到了完整植株，并且这一植株能够开花结果，证实了哈伯兰特在五十多年前关于细胞全能的预言。
植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。
植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
狭义是指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。
植物组织培养新技术在快繁脱毒、育种、种质资源保存、次生代谢物提取、基因转化等方面有着良好的前景以及研究热点。
在植物育种上的应用：单倍体育种，离体胚培养和体外受精，细胞融合，基因转化，培养细胞突变体、在植物脱毒和快速繁殖上、在人工种子和种质保存方面、在提取植物次生产物生产上、在植物免疫方面的皆能有其应用。
胡萝卜愈伤组织诱导
3、接种：左手拿装有培养基的三角瓶，接 近酒精灯，用右手揭去盖，将瓶外部在灯 焰上燎数秒钟，并旋转使充分灼烧灭菌， 右手用镊子夹取材料小片送入瓶内，平放 于培养基表面，轻按一下，使其紧密接触 培养基。每瓶3块，均匀分布，封好瓶口。 4、培养：放入25℃温箱中暗下培养一个月。
实验结果
记录时间 污染数量 外植体形态变化 愈伤组织分化情况
2、外植体材料消毒：取6—8cm长的胡萝卜一段进行以下
操作： 1）清洗：（流水冲洗）以下各步在超净台上进行； 2）将材料转入无菌烧杯或罐头瓶，加入75%酒精浸泡1—2min； 3）倒去酒精用0.1%升汞浸泡10—15min，不断搅拌； 4）倒去升汞用无菌水洗涤3—5次； 5）转入吸水纸上； 6）用解剖刀切去两端各1cm部分，将中断切成0.7cm厚的薄圆 片； 7）将圆片移至无菌的部分，用刀切去外皮和中柱部分，将形 成层切成1cm2的小片。
大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素
1）从母液中取出（移液管）所需的大量元素、微量元素、铁盐、有 机成分，注意计算清楚各种物质在所须配制总体积下的加入量，将其放 入小烧杯中； 2）在洁净的搪瓷缸里加入一定量的水（3/4）及所需要的琼脂，加热 并不时搅拌，注意防止琼脂沉底焦糊； 3）待琼脂溶解（呈透明状，即无固体条状或丝状物，均匀而透亮） 后，加入（1）中所取的各种母液及糖，并不断搅动使其混合均匀。 4）用1N HCl or NaOH 调整PH值到所须值（一般为5.8） 5）加水至所须刻度； 6）趁热将培养基分装到培养用的容器（三角瓶等）中，注意不要把 培养基黏附到瓶口或瓶口附近的内壁上，以免今后引起污染； 7）将分装好培养基的容器盖上盖子； 8）高压灭菌后取出，放于室温中冷却备用。 培养基及无菌用品的灭菌，121℃，30min。
胡萝卜愈伤组织培养实验报告
植物细胞工程-胡萝卜的组织培养姓名：物理数学狂班级：生物技术综合班学号：2019004284【实验计划】1.MS培养基母液的配置与保存、MS固体培养基的配置（准备实验）2.外植体胡萝卜愈伤组织的诱导培养（2018.10.18）3.胡萝卜愈伤组织的继代培养（2018.11.8）4.胡萝卜愈伤组织悬浮培养（2018.11.22）5.胡萝卜愈伤组织诱导生根（2018.12.1）6.观察实验结果（2018.12.13）【实验时间】2018年10月18日-2018年12月13日实验（一）MS 培养基母液的配制与保存一、实验目的1.通过MS 培养基母液的配制，掌握配制培养基母液的基本技能；2.掌握培养基各种母液的保存方法。
二、实验原理1.MS 培养基的特点：①无机盐浓度高；②高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐；③含有一定的铵盐，营养丰富；④不需要添加更多的有机附加物。
MS 按照营养水平划分为基本培养基。
2.培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生存的营养物质，配置培养基时，为了减少试剂称取时的工作量出现的误差，以及多种营养成分混合导致沉淀产生或相互反应而失去培养效果，需要预先将各种营养成分配置为一定倍数的培养基母液，待使用时稀释到适合的浓度。
母液的浓度为培养基浓度的10倍、20倍、50倍、100倍等或更高。
3.需要时将配置好的母液按一定比例稀释到培养基指定浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调解物质等，制成符合要求的培养基。
三、器材与试剂1.器材：各类天平、磁力搅拌器、冰箱、烧杯、量筒、玻璃棒、试剂瓶、标签；2.试剂：95%酒精，0.1-1N NaOH ，0.1-1N HCl ，配制MS 培养基所需的各种无机物、有机物，蒸馏水。
四、方法步骤（一）母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍。
优点：（1）保证各物质成分的准确性；（2）便于配置时快速移取；（3）便于低温保藏。
1.MS 大量元素母液（10×）称10升量溶解在1升蒸馏水中。
生物胡萝卜实验报告
一、实验目的1. 掌握植物组织培养的基本原理和方法。
2. 学习胡萝卜愈伤组织的诱导、继代培养和细胞悬浮培养技术。
3. 了解胡萝卜体细胞胚胎发生培养的过程。
二、实验原理植物组织培养技术是利用植物细胞的全能性，通过人工控制培养条件，使植物细胞或组织在体外发育成完整植株的技术。
胡萝卜愈伤组织诱导、继代培养和细胞悬浮培养是植物组织培养技术中的重要环节。
三、实验材料与仪器材料：- 胡萝卜- MS培养基- 营养液- 消毒剂- 玻璃器皿- 移液器- 高压蒸汽灭菌器- 恒温培养箱四、实验步骤1. 胡萝卜外植体消毒- 将胡萝卜洗净，切成小块，用70%酒精消毒30秒，然后用无菌水冲洗3次。
- 将消毒后的胡萝卜小块接种于MS培养基中。
2. 愈伤组织诱导- 将接种后的胡萝卜小块放入恒温培养箱中培养，温度控制在25℃左右，光照时间为12小时/天。
- 观察胡萝卜小块的愈伤组织形成情况。
3. 愈伤组织继代培养- 将形成的愈伤组织转移到新的MS培养基中进行继代培养。
- 继代培养过程中，每隔一段时间更换一次培养基。
4. 细胞悬浮培养- 将继代培养后的愈伤组织切成小块，接种于营养液中。
- 将接种后的细胞悬浮培养于恒温培养箱中，温度控制在25℃左右，光照时间为12小时/天。
- 观察细胞悬浮培养过程中细胞生长和繁殖情况。
5. 胡萝卜体细胞胚胎发生培养- 将细胞悬浮培养获得的细胞转移到新的培养基中进行胚胎发生培养。
- 观察胚胎发生培养过程中胚胎的形成情况。
五、实验结果与分析1. 愈伤组织诱导- 在适宜的培养条件下，胡萝卜小块逐渐形成愈伤组织。
2. 愈伤组织继代培养- 经过继代培养，愈伤组织数量增加，体积增大。
3. 细胞悬浮培养- 细胞悬浮培养过程中，细胞生长和繁殖良好，形成了大量悬浮细胞。
4. 胡萝卜体细胞胚胎发生培养- 胚胎发生培养过程中，部分细胞形成了胚胎，进一步发育成胡萝卜植株。
六、实验结论1. 通过本实验，成功诱导了胡萝卜愈伤组织。
培育胡萝卜实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解植物组织培养的基本原理和操作技术。
2. 掌握胡萝卜愈伤组织的诱导、继代增殖和细胞悬浮培养的方法。
3. 熟悉胡萝卜体细胞胚胎发生培养过程。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜胡萝卜肉质根、MS培养基、植物激素、无菌水、75%酒精、无菌滤纸等。
2. 实验仪器：超净工作台、高压蒸汽灭菌器、电子天平、显微镜、移液枪、培养皿、培养箱等。
三、实验方法1. 胡萝卜愈伤组织的诱导- 将新鲜胡萝卜肉质根洗净，切成小块，用75%酒精消毒30秒，无菌水冲洗3次。
- 将消毒后的胡萝卜小块接种于诱导培养基（MS培养基+2,4-D 1mg/L+6-BA1mg/L）中，在无菌条件下进行培养。
- 观察胡萝卜小块的愈伤组织形成情况。
2. 胡萝卜愈伤组织的继代增殖- 将诱导出的愈伤组织切割成小块，接种于继代培养基（MS培养基+2,4-D0.5mg/L+6-BA 0.5mg/L）中。
- 在无菌条件下进行培养，观察愈伤组织的增殖情况。
3. 胡萝卜细胞悬浮培养- 将继代增殖后的愈伤组织用无菌水冲洗，剪碎，加入适量MS培养基和植物激素（2,4-D 0.1mg/L+6-BA 0.1mg/L）。
- 在无菌条件下进行搅拌，使愈伤组织细胞悬浮。
- 将悬浮细胞接种于细胞悬浮培养基（MS培养基+2,4-D 0.1mg/L+6-BA0.1mg/L）中，在无菌条件下进行培养。
- 观察细胞悬浮培养的生长情况。
4. 胡萝卜体细胞胚胎发生培养- 将细胞悬浮培养得到的愈伤组织细胞，用无菌水冲洗，剪碎，加入适量MS培养基和植物激素（NAA 0.1mg/L+KT 0.1mg/L）。
- 在无菌条件下进行搅拌，使愈伤组织细胞悬浮。
- 将悬浮细胞接种于体细胞胚胎发生培养基（MS培养基+NAA 0.1mg/L+KT0.1mg/L）中，在无菌条件下进行培养。
- 观察体细胞胚胎发生培养的生长情况。
四、实验结果与分析1. 胡萝卜愈伤组织的诱导- 经过诱导培养，胡萝卜小块表面逐渐出现愈伤组织，愈伤组织呈白色、半透明状，质地较软。
胡萝卜组织培养系统实验
云南大学生命科学实验教学中心实验报告课程名称：细胞工程实验院系：生命科学学院年级专业：2013级生物技术（国家生命科学与技术姓名：杨梦梅选课号：2015107066学号：20131070156座号：A2开课日期：2015.09 学期：2015秋季学期任课教师：吕琦、牛芸云南大学生命科学实验教学中心制胡萝卜愈伤组织的诱导、继代及细胞悬浮培养研究第一作者：杨梦梅同组实验者：赵姗( 云南大学生命科学学院,昆明650504)摘要: 以胡萝卜肉质根为外植体诱导出愈伤组织, 并建立细胞悬浮系. 实验结果表明: 胡萝卜肉质根是诱导愈伤组织和进行细胞悬浮培养的可行外植体; 诱导致密型愈伤组织的最佳激素浓度配比是 0.5 mg/ L 2, 4- D+ 0.4 mg/ L KT;继代培养 1代~ 2时,可得到高活性的悬浮细胞系；细胞悬浮培养细胞经过 14 天达到高峰期（生长平台）。
关键词: 胡萝卜; 组织培养; 细胞悬浮培养; 致密型愈伤组织;The study about inducement, subculture and suspension celllines of Carrots’ callusAbstract: Carrots’flesh roots can induce callus as explants, and then it establishes suspension cell lines. The experimental results show that: Carrots’flesh roots really can induce callus and then make suspension cell lines. In order to induce high density callus, the best hormone ratio is 0.5 mg/ L 2, 4- D+ 0.4 mg/ L KT. Subculturing the cell line for 1 to 2 times, we can obtain the suspension cell line with high activity. After 2 weeks, the cell line reaches to the peak of growth.Keywords: Carrot; tissue culture experiments; suspension cell; callus in high density胡萝卜( Daucus carota L . ) , 属于十字花科植物, 是一种十分重要的蔬菜作物, 由于胡萝卜肉质根营养丰富，约含有88％的水、6％～8％糖、1％～2％植物纤维，0．7％～1．2％蛋白质、1％灰份及0～3％脂肪，及其适于生食、加工、烹调等多种用途, 在世界范围内广泛栽培。
实验2-1胡萝卜愈伤组织诱导培养基的配制
6 胡萝卜愈伤组织诱导 培养基的配制步骤
06
无菌蒸馏水和接种工具 准备
05
培养基的灭菌
04
培养基的分装
03
调节培养基的酸碱性至 pH5.8
02
培养基配制
01
药品及用具的准备
一．实验原理 将事先配制好的培养基母液按一定比例稀释至浓度为培养基中规
定的使用浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等，制备成符 合要求的培养基。
3 主要实验用具和仪器
冰箱、普通天平、三角瓶、果酱瓶、移液管、 量筒、烧杯、容量瓶、玻璃棒、医用口杯、 精密pH试纸（pH5.4~7.0）、药勺、称量纸、 标签纸、封口膜、橡皮筋、棉线、电炉、高 压蒸汽灭菌锅、电磁炉等。
实验2 胡萝卜愈伤组织的诱导培养
壹 实验内容：
贰
胡萝卜愈伤组织诱导 培养基的配制
叁 胡萝卜愈伤组织的诱 导
肆 胡萝卜愈伤组织继代 培养基的配制
伍 胡萝卜愈伤组织的继 代培养
实验2-1 胡萝卜愈伤组织诱导 培养基的配制
一．实验目的 通过本次实验，使学生进一步熟悉配制培养基的流程及操作中应
注意的事项，学会设计和筛选胡萝卜愈伤组织诱导培养基配方。
4 药品和试剂
MSห้องสมุดไป่ตู้养基母液、琼脂、蔗糖、生长调节物质、 蒸馏水、1mol·L-1HCl、1mol·L-1NaOH
5 胡萝卜愈伤组织诱导培养基 的配方及配制体积
培养基配方设计：（1）根据培养的目的选择一种培养基为基 本培养基。（2）确定培养基中各种激素的浓度及相对比例
配方： MS基本培养基＋ 1mg/L 2,4-D＋0.5mg/L 6-BA＋ 0.7％琼脂＋3％蔗糖
胡萝卜生物实验报告
一、实验目的1. 了解植物组织培养的基本原理和操作技术。
2. 掌握胡萝卜愈伤组织的诱导、继代培养和分化技术。
3. 学习无菌操作技术，提高实验技能。
二、实验材料与试剂1. 实验材料：新鲜胡萝卜肉质根。
2. 试剂：75%酒精、无菌水、氯化汞、无菌滤纸、无菌剪刀、无菌镊子、无菌试管、无菌培养皿、MS培养基母液、琼脂、蔗糖、植物激素等。
三、实验方法1. 胡萝卜外植体的消毒- 将胡萝卜肉质根洗净，用无菌剪刀切成小块。
- 将胡萝卜小块放入装有75%酒精的无菌试管中，浸泡30秒。
- 取出胡萝卜小块，用无菌水冲洗3-5次。
- 将胡萝卜小块放入装有氯化汞的无菌试管中，浸泡5分钟。
- 取出胡萝卜小块，用无菌水冲洗3-5次。
2. 胡萝卜愈伤组织的诱导- 将消毒后的胡萝卜小块接种于诱导培养基上。
- 将接种后的培养皿放入培养箱中，在适宜温度和光照条件下培养。
3. 胡萝卜愈伤组织的继代培养- 待愈伤组织长到一定大小后，将其切割成小块。
- 将小块愈伤组织接种于继代培养基上。
- 同样在适宜条件下培养。
4. 胡萝卜愈伤组织的分化- 待愈伤组织分化出芽苗后，将其转移到分化培养基上。
- 在适宜条件下培养，直至芽苗长成植株。
四、实验结果1. 胡萝卜外植体的消毒- 消毒后的胡萝卜小块表面无残留杂质，符合无菌操作要求。
2. 胡萝卜愈伤组织的诱导- 经过诱导培养，胡萝卜小块逐渐形成愈伤组织。
3. 胡萝卜愈伤组织的继代培养- 经过继代培养，愈伤组织数量和体积逐渐增加。
4. 胡萝卜愈伤组织的分化- 经过分化培养，愈伤组织分化出芽苗，最终长成植株。
五、实验讨论1. 本实验中，胡萝卜愈伤组织的诱导、继代培养和分化均取得了成功，说明植物组织培养技术在胡萝卜组织培养中具有可行性。
2. 实验过程中，无菌操作是关键环节。
只有严格遵循无菌操作规程，才能保证实验结果的准确性。
3. 在诱导胡萝卜愈伤组织时，培养基的成分和植物激素的种类及浓度对愈伤组织的诱导效果有较大影响。
胡萝卜愈伤组织培养实验报告
植物细胞工程-胡萝卜的组织培养姓名：物理数学狂班级：生物技术综合班学号：2019004284【实验计划】1.MS培养基母液的配置与保存、MS固体培养基的配置（准备实验）2.外植体胡萝卜愈伤组织的诱导培养（2018.10.18）3.胡萝卜愈伤组织的继代培养（2018.11.8）4.胡萝卜愈伤组织悬浮培养（2018.11.22）5.胡萝卜愈伤组织诱导生根（2018.12.1）6.观察实验结果（2018.12.13）【实验时间】2018年10月18日-2018年12月13日实验（一）MS 培养基母液的配制与保存一、实验目的1.通过MS 培养基母液的配制，掌握配制培养基母液的基本技能；2.掌握培养基各种母液的保存方法。
二、实验原理1.MS 培养基的特点：①无机盐浓度高；②高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐；③含有一定的铵盐，营养丰富；④不需要添加更多的有机附加物。
MS 按照营养水平划分为基本培养基。
2.培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生存的营养物质，配置培养基时，为了减少试剂称取时的工作量出现的误差，以及多种营养成分混合导致沉淀产生或相互反应而失去培养效果，需要预先将各种营养成分配置为一定倍数的培养基母液，待使用时稀释到适合的浓度。
母液的浓度为培养基浓度的10倍、20倍、50倍、100倍等或更高。
3.需要时将配置好的母液按一定比例稀释到培养基指定浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调解物质等，制成符合要求的培养基。
三、器材与试剂1.器材：各类天平、磁力搅拌器、冰箱、烧杯、量筒、玻璃棒、试剂瓶、标签；2.试剂：95%酒精，0.1-1N NaOH ，0.1-1N HCl ，配制MS 培养基所需的各种无机物、有机物，蒸馏水。
四、方法步骤（一）母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍。
优点：（1）保证各物质成分的准确性；（2）便于配置时快速移取；（3）便于低温保藏。
1.MS 大量元素母液（10×）称10升量溶解在1升蒸馏水中。
胡萝卜直根诱导愈伤组织实验研究
胡萝卜直根诱导愈伤组织实验研究邹春莲;李红梅;雷霆雯【期刊名称】《贵阳医学院学报》【年(卷),期】2014(039)004【摘要】目的:探讨胡萝卜直根诱导愈伤组织的最佳条件.方法:以新鲜胡萝卜直根为外植体,将直根皮层、形成层及中轴3个部位分别置于MS(培养基)+2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)+6-BA(6-苄基腺嘌呤)与MS+NAA(α-萘乙酸)+6-BA两类培养基中,观察3种外植体愈伤组织的生长情况及诱导率.结果:直根皮层外植体在这两类培养基中均未长出愈伤组织,即愈伤组织诱导率为0;直根形成层及中轴外植体在这两类培养基中均长出愈伤组织,即愈伤组织诱导率为100％,其中在MS+ NAA+ 6-BA 培养基中愈伤组织质地疏松、颜色浅黄鲜亮、生长旺盛、增殖快速,在MS+2,4-D+ 6-BA培养基中愈伤组织质地紧密、颜色深黄、增殖缓慢.结论:诱导疏松型胡萝卜愈伤组织的最佳外植体是胡萝卜直根形成层及中轴,最佳培养基类型是MS+ NAA+ 6-BA.【总页数】4页(P511-513,517)【作者】邹春莲;李红梅;雷霆雯【作者单位】贵阳医学院生物化学与分子生物学教研室,贵州贵阳550004;贵阳医学院生物化学与分子生物学教研室,贵州贵阳550004;贵阳医学院生物化学与分子生物学教研室,贵州贵阳550004【正文语种】中文【中图分类】S631.2【相关文献】1.不同浓度激素对胡萝卜愈伤组织诱导的影响 [J], 陈豫;胡伟;何磊2.亚硒酸钠对胡萝卜愈伤组织诱导形成的影响 [J], 武晓英;王青;乔宏萍;郝雪峰;吴丽华;郝彩霞;曹贵东3.胡萝卜愈伤组织诱导培养的研究 [J], 汪洪;夏鸿亮;李校堃;杨树林4.真菌诱导子对龙眼胚性愈伤组织中类黄酮、类胡萝卜素和单宁含量的影响 [J], 刘生财;段俊朋;徐小萍;潘君飞;程春振;林玉玲;赖钟雄5.胡萝卜愈伤组织诱导条件筛选 [J], 刘真真; 常双峰; 冯羽飞; 王晓东; 武喆因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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南昌大学实验报告胡萝卜愈伤组织诱导
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胡萝卜愈伤组织诱导
实验一母液的配制与保存
一、实验目的
1.学习母夜的配制方法和母液的保存方式。
2.熟悉掌握制备母液的操作。
二、实验原理
培养基中提供植物生长所需的营养成分，才能满足植物正常的生长发育的需求。
主要包括水分、有机物质、盐类，而配制母液时将其分为大量、微量、钙盐、镁盐、铁盐、有机和肌醇分别配制。
配臵培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配臵，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的母液臵于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配臵即可。
三、实验材料、试剂和仪器设备
1．试剂
NH4NO3,KNO3,KH2PO4,CaCl2〃2H2O,MgSO4〃7H2O,FeSO4〃7H2O Na2-EDTA, MnSO4〃4H2O,ZnSO4〃7H2O,H3BO3,KI,Na2MoO4〃2H2O
CuSO4〃5H2O,CoCl2〃6H2O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，蒸馏水。
2.仪器设备
电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，移液管（10ml，5ml，1ml）试剂瓶，玻璃棒数支，药芍，称量纸等。
四、实验步骤 1 、计算：计算各化学成分所需要的量。
大量、微量和盐类按扩大50倍，定容500ml的配制计算。
有机和肌醇按扩大100倍，定容200ml的配制计算。
计算后制成配方表。
2、制定标签：裁取7张适当大小的牛皮纸，用铅笔写上MS，种类，并标明此类母液所含物质，质量，定容体积，扩大倍数吸取量，制备人，制备日期。
3、大量元素母液的配制：先用量筒量取300ml蒸馏水放入500ml 烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取：NH4NO3 ,KNO3 , KH2PO4 , 待第一种化合物完全溶解后再加入第二种化合物，溶解过程用玻璃棒搅拌，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液转移至500ml 容量瓶中，并用蒸馏水将烧杯和玻璃棒洗涤3次，每次约50ml，而后用蒸馏水定容至500ml，然后转移至细口试剂瓶中，贴上标签，并臵于冰箱中低温保存备用。
4、微量元素母液的配制按照配方表中用量用电子天平依次称取MnSO4〃4H2O,ZnSO4〃7H2O，H3BO3,KI,Na2MoO4〃2H2O。
CuSO4〃5H2O 和CoCl2〃6H2O先稀释后用移液管吸取,按制备母液I的方法逐个溶解，转移至容量瓶中，
洗涤烧杯，然后定容至500ml，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并臵于冰箱中保存备用。
5、铁盐母液的制备把FeSO4〃7H2O和Na2-EDTA分别臵于适量蒸馏水中，加热搅拌使之完全溶解，保持加热，把FeSO4倒入Na2-EDTA溶液中并搅拌，接近沸腾时停止加热，冷却后调PH到5.5，将溶液转移至500ml容量瓶中，洗涤后用蒸馏水定容至500ml，转入细口试剂瓶中，用力振荡1～2min，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并臵于冰箱中保存备用。
6、有机化合物母液的制备按配方表中用量依次称取：盐酸硫胺素,盐酸吡哆醇，烟酸,甘氨酸，用蒸馏水溶解后，定容200ml转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并臵于冰箱中保存备用。
7、植物生长物质母液制备NAA母液:准确称取10mg,用少量1mol/L NaOH溶解后加蒸馏水定容至100ml,即配制成0.1mg/ml的NAA母液，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并臵于冰箱中保存备用。
6–BA母液配制方法相似，浓度为2mg/ml五、试验结果分析及注意事项
1、KH2PO4是吸热溶解，可以把烧杯浸在温水中溶解。
2、制作标签时只能能用铅笔写。
实验二、培养基的制备与灭菌
一、实验目的
1、学习母液法配制培养基。
2、学习用牛皮纸包三角瓶口的防污染方法。
3、学习灭菌锅的使用。
二、实验原理
为防止组织培养各物质发生反应所以把微量和铁盐混在一起，为了避免物质的反应，所以要迅速倒入沸腾的蒸馏水中，琼脂应慢慢倒入，并边搅拌边倒入。
组织培养所用的培养基含有植物生长所必需的各类营养物质，同时也是微生物繁殖的极好场所，因此必须对培养基灭菌处理，以确保无菌操作的顺利进行。
三、实验材料、试剂和仪器设备
1.试剂：琼脂，蔗糖，蒸馏水，1mol/L NaOH,各类母液
2.仪器设备：电子天平，烧杯，量筒，移液管，玻璃棒，药芍，称量纸，PH试纸，锥形瓶，牛皮纸，棉塞等。
四、实验步骤
1.准备将所需的各种母液按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿放在指定臵。
2.大量的量取取50ml量筒一个，将大量、有机、肌醇、镁盐，钙盐、按配方表中的用量依次称取并倒入500ml烧杯中。
3.微量铁盐的量取取50ml量筒一个，将微量和铁盐按配方表中的用量称取并倒入100ml 烧杯中。
4.培养基配制取瓷盆一个，加入1.5L蒸馏水，臵于电磁炉上加热，将称量好的所有母液倒入瓷盆中，用玻璃棒不断搅拌。
再称量琼脂16克，白砂糖60克，依次倒入瓷盆中，边倒入边搅拌，待琼脂和白砂糖完全溶解后，，并定容至2L。
5、调PH用1mol/L NaOH和1mol／L HCl调PH至6.0。
6、分装把培养基分装到三角瓶中，每瓶约50ml，用棉塞塞好再用牛皮纸，细绳包扎好，待灭菌。
7、灭菌将所有的三角瓶整齐的放在灭菌锅的铁丝篮中，将温度调为121度灭菌20min。
灭完后摆放在水平的实验桌上勿动。
五、试验结果分析及注意事项
1、配制培养基前先大致估计一下药品数量，不够时提前配制。
2、三角瓶灭菌时注意要放干净冷空气。
3、注意把三角瓶用棉塞塞好和用牛皮纸包好。
4、灭完菌的三角瓶勿动，等待培养基冷却凝固。
实验三、胡萝卜外植体的表面消毒及接种
一、实验目的与意义
培养材料的灭菌与接种是组织培养过程中一个重要的环节。
通过本实验，领会无菌培养对实验材料消毒，接种的要求，初步掌握培养材料灭菌，接种的操作技术。
二、实验步骤
（1）准备好培养基、无菌水、无菌滤纸、解剖刀、镊子、打火机等及接种工具。
（2）将培养基、无菌水、接种工具臵于接种台上，打开超净台紫外灯开关，同时打开接种室内的紫外灯，用紫外灯照射至少25min，然后关室内的紫外灯，开送风开关，关闭台内的紫外灯，通风10min后，再开日光灯进行无菌操作。
（3）接种前用肥皂洗手，特别是将手指洗净，然后用沾有75%酒精的棉球把手消毒一次。
（4）将外植体进行表面灭菌。
（6）用75%酒精擦洗接种台表面。
（7）接种用的镊子使用前插入75%的乙醇溶液中，使用镊子时在酒精灯上灼烧，冷却后待用。
也可以插入培养基边缘促使其冷却。
（8）在酒精灯火焰旁揭去封口膜，将瓶口倾斜接近水平方向，用火焰灼烧瓶口，灼烧时应不断转动瓶口，左手持瓶，使其靠近火焰，右手将烧过的镊子触动培养基部分，使其冷却，夹取切好的胡萝卜小块，将其放在培养基上，用镊子轻轻按一下，使其部分浸入培养基。
（9）转动瓶口灼烧，盖上封口膜，标上接种日期、材料名称、姓名等。
（10）将接种材料移到培养室培养。
三、注意事项
（1）工作台接种时，应尽量避免做明显扰乱气流的动作。
操作过程中要不时用75%的酒精擦拭双手。
（2）接种前的污染现象：若菌类只存在于培养基表面，且主要是真菌时，可能是因培养瓶密封不严或放臵培养基的环境不洁净，菌群密度过大所致。
若菌类存在于培养基内部，则可能是由使用污染的贮藏母液引起。
培养瓶不洁净、灭菌不彻底也是导致接种前培养基污染的原因。
（3）接种后的污染：菌落分布不匀,此种情况主要是接种过程中发生的污染所致。
可能是接种室不洁净、菌类孢子过多、镊子带菌、操作人员手未彻底消毒、操作人员呼吸及超净工作台。
出现故障等原因引起。
避免方法:保持无菌接种室洁净；在接种前用紫外灯灭菌时间不低于20-30 min；用75%酒精喷雾杀菌降尘，超净台开启15-20 min后方可使用；镊子等接种工具严格彻底灭菌；操作过程中经常用75%酒精等消毒剂擦洗手部等措施接种后外植体周围发生菌类污染可能因外植体表面灭菌不彻底所致。
如果培养材料大部分发生污染，说明消毒剂浸泡的时间短；若接种材料虽然没有污染，但材料已发黄，组织变软，表明消毒时间过长，组织被破坏死亡；接种材料若没有出现污染，生长正常，即可以认为消毒时间适宜。
四、胡萝卜愈伤组织诱导结果
第（）组
注：愈伤组织诱导率（%）=（形成愈伤组织的材料数/总接种材料数）×100% 污染率（%）=（污染的材料数/总接种材料数）×100%
生物工程大实验全班汇总
五、对实验现象、实验结果的分析及其结论。