微生物实验中常见的问题汇总
微生物检验中的问题及对策
微生物检验中的问题及对策摘要】随着医疗技术的不断进步，微生物检验也获得了长足的发展，在临床工作中，微生物检验也越来越至关重要了。
但是，医学微生物检验还有许多问题等待我们去探索和解决。
【关键词】微生物检验问题对策【中图分类号】R446.5 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）16-0368-011 微生物检验中存在的问题1.1微生物标本采集质量提高检出率的重要因素就在于一定要正确采集标本。
标本采集时，一定要进行严格的无菌操作，避免标本感染而产生误检，直接影响微生物检验的临床诊断。
尽量在抗菌药物使用之前采集标本。
对于寒战和间歇期发热患者，应该在体温寒战期或上升期采集血液。
1.2微生物标本保存运送不够规范微生物标本保存和运送的原则是维持病原菌的活力，防止非病原菌的污染或过量繁殖。
标本应置于无菌容器之中，采集后立即送至细菌室。
以棉拭子采集的标本如咽拭子，肛拭或伤口拭子，宜插入运送培养基送检。
对环境敏感的微生物包括志贺氏菌、淋球菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌对低温敏感，在标本运送过程中，要保持在室温条件下尽快送检，特别是在冬天，更应注意。
1.3微生物检验中的质量控制微生物检验结果的准确性，依赖于标本质量、相关临床资料，还有检验人、检验方法、检验过程、培养基、试剂、仪器、结果的报告等相关，应制定相关的文件和程序，及时发现错误，采取纠正措施。
2 对策2.1临床微生物检验人员应具有良好的职业道德，熟练的实验技能，结合工作中的实际经验，制定微生物检验的规范。
制定标本的采集、保存、运送的具体要求，并向医护人员宣教，宣传正规采集标本的重要性。
2.2微生物检验人员应加强检验中质量控制。
从标本采集前到检验中、检验后出具结果，均要进行严格的质量控制。
同时加强与临床医师的联系，使临床医护人员能正确理解和解释报告并用于临床诊断，使微生物检验报告能发挥相应的作用。
微生物检验中存在的问题及改进方法
微生物检验中存在的问题及改进方法微生物检验在临床实践中是诊断感染性疾病最有效的方法，其通过对患者的病原体进行检测，可以明确导致患者引发疾病的微生物，并根据检验结果合理选择药物。
但现阶段，在微生物检验中在检验人员素质、标本质量、检验方案以及检验室与临床的沟通等方面还存在一些亟需解决的问题，本文将对这四方面所存在的问题进行简单分析，并提出相应的改进方法，以供参考。
1.微生物检验中存在的问题1.检验人员素质方面微生物的检验是需要大量的专业理论知识做基础的，然而，通过调查可以了解到，很多医院的微生物检验人员并没有足够扎实的专业理论知识水平，这直接导致其在对标本的形态和反应进行检验的时候缺少足够的判断能力，不利于检验结果的准确性；除此之外，尚有些检验人员素质偏低，责任心不强，因恐惧标本具有传染性而不愿意接受微生物检验工作，专职的微生物检验人员较少。
1.标本质量方面想要获得准确的检验结果，首先检验标本需要合格，而现在很多检验人员因为操作不规范，没有注意采集标本的要求或对注意事项了解不多，导致采集的标本质量出现问题。
例如，微生物检验中常出现的标本痰液，正确的采集方法应该是患者先漱口，然后用力咳出气管深处的痰液，再吐到无菌容器中，而现实是患者或者没有漱口，或者咳出的痰只是气管浅处的，这样会造成检验结果不精准，出现假阳性或者假阴性的现象，耽误患者的病情。
另外，还有的医院在采集标本后，没有妥善保存标本，使标本接触到了外界空气，空气中的有毒有害物质污染了标本，这样也会影响检测结果。
1.检验方案方面微生物检验的检验方案，是检验人员专业技能水平的直接体现，也关系到检验结果是否准确。
比如说，检测痰液标本通常有以下几种方法：PCR检测、集菌检查、培养检测、直接涂片，而这些方法检查出来的阳性率依次降低，PCR检测法检出的阳性率甚至比直接涂片法检出的阳性率高出3倍以上。
1.检验室与临床的沟通方面检验室和临床医护人员及时沟通，在现实生活中也是十分重要的，而据了解，现在很多检验室和临床医护人员、患者的沟通很缺乏，一方面检验人员不能充分了解患者的目的，设计的检验方案也许不是最有效的；另一方面医生对检验结果有疑问或不理解时，没有办法及时得到解答，不能给患者更好的治疗方案，最终耽误了患者的治疗。
临床微生物检验中存在的问题，如何改进？
临床微生物检验中存在的问题，如何改进？一、临床微生物检验中存在的问题临床微生物检验是作出正确临床诊断、实施有效治疗的重要基础，伴随科学技术的不断发展，也推动医疗技术上了一个台阶，其中，医学分子生物学的发展成果最为显著。
所以作为医学分子生物学的重要组成部分，临床微生物检验可以帮助医务工作者快速获取致病菌的准确信息，其临床意义重大。
但是临床上对微生物检验的要求很高，我国临床微生物检验中也还存在一些问题，临床微生物检验还未达到令人满意的程度。
1、微生物样本质量控制问题关于实验室中微生物检验样本的质量控制问题，主要从样本的采集、运送及储存几个方面考虑。
微生物检验样本的采集往往由临床医护人员负责，如果在采集样本的过程中，医护人员不清楚样本采集要求，采集方式、采集过程不规范，则容易使其所采集的样本被污染或出现错误。
有些医护人员可能采集到了致病菌，但是由于所采集的量太少，而无法获得正确的检验结果等。
除了微生物样本的采集方式，样本的采集时间也关乎中微生物检验结果的准确性。
通常情况下，样本的采集应该是在早期、症状较典型时期及患者服用之前进行，如果采集样本的医护人员不对时间进行仔细的区分，而盲目的进行采集，比如在患者已经服药的状态下进行样本采集，则会影响样本检验结果的质量。
不符合样本采集时间而采集的微生物样本，所得出的检验结果是不可信的。
再有，微生物样本的运送与存储也是决定检验结果的关键，样本运送过程是否干净、无污染，样本的保存是否合理，这都是保障样本检验结果准确的重要前提。
临床上，不同病原微生物具有不同的生活习性，所以其运送和保存条件有所不同，比如淋病奈瑟菌对低温条件比较敏感，所以应该将其储存于合适室温环境中。
检验人员对目标病原微生物的特性加以区别，在样本的运送与储存过程中注意卫生和自我防护，确保样本不被污染。
2、检验人员的专业素养问题在临床微生物检验过程中，检验人员的主观判断及操作技能对检验结果意义重大，而大部分临床微生物检验都是要求很高的高精度实验，检验结果不能出现错误。
微生物检测过程中的问题及解答
微生物检测过程中的问题及解答1.微生物实验过程中使用的移液枪怎么灭菌？答：移液枪用纱布包好，外面报纸包好灭菌。
不能湿热灭菌的枪，在枪口处塞入少许棉花，外面采用表面灭菌的方法擦拭灭菌，里面采用热空气交换法或者洁净空气交换法处理。
2.微生物实验过程中如果移液枪枪头想要重复使用怎么办？答：枪头盒装好，报纸包好灭菌。
枪头少的话放入平皿或者小烧杯后，报纸包好灭菌。
3.微生物实验回收率上下限是多少？答：50—200%（药典规定）。
4.灭菌后的物品怎么保存，几天内可以继续使用?答：移液管、平皿之类的工器具没打开放无菌室一般可以放置两个星期左右。
灭菌后的培养基放冰箱冷藏保存通常可放一星期。
6.新国标GB4789.10-2016金黄色葡萄球菌检验中培养时间很多都改成了24-48h，这个跨度有点大，具体怎么判定啊？答：如果培养24h后已经长菌就不需要再进行培养了；如果培养24h后未长菌则需要继续培养至48h。
7.新标准GB4789.15-2016霉菌和酵母计数，有一条新的变化：“菌落数在10以内时，采用一位有效数字报告；菌落数在10-100之间，采用两位有效数字报告”，有这样一种情况：样品按照1:10稀释后，最低稀释倍数10倍的结果，如果分别为：1，0，算平均数并乘以相应稀释倍数后，结果为：5，这个时候，结果报：5CFU/g(mL)吗？以前我们是报<10。
就是如果样品稀释了10倍，检测结果是5，这个时候报"5"还是"<10"?这条规则其他标准没提，只适用于霉菌酵母？其他项目菌落总数，大肠菌群等，是否适用？？？答：6.1.5若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
也就是说以小于1乘以稀释倍数形式报告时，是指均无菌落生长时，你的平板既然有长菌落，结果就应该是5，“菌落数在10以内时，采用一位有效数字报告；菌落数在10-100之间，采用两位有效数字报告”这个主要是为了防止出现8.5这样的结果，按10版100以内采用两位有效数字报告，那8.5是符合要求的，存在歧义，16版更严谨了些。
微生物问题及解决方法
微生物问题及解决方法
微生物是一类极小型的生物体，包括细菌、真菌、病毒和原生动物等。
它们在自然界中广泛存在，有些对人类和其他生物有益，有些则可能对生物体造成危害。
以下是一些关于微生物的问题以及针对这些问题的解决方法：
1. 微生物在食品中的污染问题，食品中的微生物污染可能导致食品腐败和食品中毒。
解决方法包括加强食品卫生管理，采取适当的储存和加工措施，以及使用抗菌剂和防腐剂等技术手段。
2. 医院感染问题，医院是微生物传播的重要场所，医院感染可能对患者造成严重危害。
解决方法包括加强医院环境清洁和消毒、医护人员的个人防护措施，以及严格执行感染控制措施。
3. 抗生素耐药性问题，微生物的抗药性是当前全球面临的严重问题，解决方法包括合理使用抗生素、开发新型抗生素、加强监管和管理，以及推广正确的抗生素使用知识。
4. 土壤微生物多样性保护问题，土壤微生物是土壤生态系统中的重要组成部分，对土壤肥力和作物生长具有重要影响。
解决方法
包括保护自然生态环境、合理施肥、减少农药使用，以及推广有机农业等做法。
5. 水体微生物污染问题，水体中的微生物污染可能对人类健康和水生生物造成危害。
解决方法包括加强水体保护、改善水质、加强污水处理和消毒，以及推广健康饮水知识。
总的来说，解决微生物问题需要综合运用科学技术手段、加强管理监管、推广科学知识和改善环境等多种途径，才能有效应对微生物可能带来的各种问题。
微生物检验常见问题解答
微生物检验常见问题解答微生物检验常见问题解答一、方法验证1.做过验证的样品微生物检验方法是否都需要按照新的方法进行重新验证?答：对于微生物限度检查的产品而言，由于培养时间调整，应重新进行验证。
对于无菌检查的产品而言，如果方法未作实质性调整，可以不必重新验证。
个别产品在各论中收载了新的无菌检查方法，对这些品种，应对收载方法的适用性进行验证。
2.以前做过无菌验证的品种是否需要重新按照新的标准再验证?答：参见问题1。
3.“新增抗生素供试品应选择低吸附的滤器及滤膜”比如注射用克林霉素磷酸酯属于抗生素，是否需要重新选取滤膜再验证?答：目前采用的方法如果经验证表明可行，则可以继续使用该方法。
4.微生物方法学验证时，培养时间是否跟样品日常检验所培养时间一致?答：应该一致。
5.微生物限度验证时，如果一个方法只有金葡回收率达不到要求，该方法时是否可以用来做细菌霉菌的检测方法?答：按药典的规定，一个计数方法通过验证，是指所有试验菌的回收率均达到要求。
如果采用各种方法以及方法的组合仍无法使金葡回收率达标，则可以采用使金葡回收率最高的方法作为计数方法。
6.薄膜过滤的冲洗量不能超过1000ml，我公司的喹诺酮类产品原来的方法是每张膜冲洗量为1500和2000ml，请问有没有合适的方法将冲洗量降至1000，各菌的回收率仍能符合规定?答：有几种办法可以降低冲洗剂的用量：1)降低接触滤膜的供试品的浓度;2)改进冲洗的方式，如少量多次地冲洗、降低蠕动泵的转速等;3)添加中和剂，如高价金属离子。
7.微生物限度检查法规定，技术方法验证时，采用上述方法若还存在一株或多株试验菌的回收率达不到要求，那么选择回收率最接近要求的方法和试验条件进行供试品检验。
请问，上述方法是指仅通过一种方法还是一定要通过几种方法联用的?答：应该要把可能采用的所有方法包括方法联用都进行验证。
8.供试品不溶于稀释剂，同时又有抑菌性，限度检查时应如何消除抑菌性?答：采用低速离心的方式，尽可能把供试品去除干净，取离心后的上层液，进行薄膜过滤。
无菌检测和微生物限度常见问题
无菌检测和微生物限度常见问题1、问:做无菌验证时阳性对照菌是怎么加入的？可以在加完培养基后用无菌的注射器把菌液注入吗？答:严格的说是要在最后一遍冲洗液中加入阳性对照菌的,这主要是考量滤膜对于阳性菌的截留性～但是滤器如果可以提供滤膜对于阳性菌的充分截留的话在最后的培养体系中加入阳性菌也是未尝不可的.如果供试品没有抑菌作用,可以在加完培养基后用无菌的注射器把菌液注入,摇匀如果供试品有抑菌作用,正如安哥洛卡所讲,在最后一次冲洗液中加入阳性对照菌,摇匀,抽虑,加培养基.无菌检查，加入阳性的方法可以有许多种，可以根据个人的习惯。
只是注意：1、避免人为污染。
2、阳性菌加入数量2、问:离心沉淀法的原理、操作和注意事项是什么?答:原理:利用沉降系数的差异将供试品和微生物进行分离;操作:取规定量的供试液，3000转/分离心20分钟（供试液如有沉淀，先以500转/分离心5分钟，取全部上清液再离心），弃去上清液，留底部集菌液约2ml，加稀释剂至原规定量.注意事项:真菌由于沉降系数比较小,500r/min离心5min，黑曲霉、白色念珠菌回收率为20%,因此其检查不适宜用低速离心沉淀法.3、问:稳定性实验的微生物及无菌检查,是否每次都要做?答:是;原因:一实验期内可能会染菌;二灭菌后微生物并不是就彻底"死亡",有些成为碎片,这些碎片在一定的条件和时间下,可以自我修复而复活.三稳定性的考察，也应包括药品有效期的考察，在此期间所有的项目都应是合格的，无菌也是其中之一，如果在有效期内无菌不合格，也可以说明该药品存在一定的缺陷，至少，有效期有问题。
4、问:眼部给药制剂如何做卫生学检验?答:液体制剂:无菌检查;半固体及固体制剂:微生物限度检查5、问:滴眼液的微生物限度为何进行无菌检查?答:一滴眼剂产品系按照无菌工艺生产且终产品为灭菌产品,故其成品的微生物质量应要求统一为无菌;所以,滴眼剂产品的临床合理用药应与其卫生标准要求一致,即将其微生物质量要求统一为无菌,显然更为合理;二滴眼剂的微生物质量要求为无菌,是与各国药典在滴眼剂要求上的统一,及对《中国药典》此项规定合理性的补充及完善等方面看,滴眼剂成品的微生物质量要求统一为无菌具有必要性。
微生物32道问答题及答案
1.微生物的分类（按大小、结构来分）非细胞型微生物、原核细胞型微生物、真核细胞型微生物2、革兰阳性菌与阴性菌的细胞壁有何差异2.青霉素++ +溶菌酶++ +3、何为细菌L型，它的成因和特点是怎样的细菌细胞壁的肽聚糖结构受到理化或生物因素的直接破坏或合成被抑制，这种细胞壁受损的细菌在高渗环境下仍可存活者称为细菌细胞壁缺陷型。
特点：高度多形性，大小不一；大多为革兰阴性菌；有一定的致病力。
4、细菌特殊结构有哪些，它们各自的意义如何荚膜：抗吞噬作用，是病原菌的重要毒力因子；抗杀菌物质损伤，如溶酶体、补体；粘附作用，与致病性有关；形成生物膜鞭毛：细菌的运动器官；某些细菌鞭毛与致病有关；鞭毛蛋白有抗原性：H抗原菌毛：普通菌毛粘附结构，性菌毛传递质粒芽胞：有强大的抵抗力；致病性；芽胞的大小、形状、位置等随菌种而异，有重要的鉴别价值5、根据细菌对氧气的需求与否可把细菌分为哪几类；专性厌氧菌厌氧的原因（1）专性需氧菌（2）专性厌氧菌（3）兼性厌氧菌（4）微需氧菌专性厌氧菌厌氧的原因：缺乏完善的呼吸酶系统，利用氧以外的其他物质作为受氢体6、细菌个体及群体的繁殖规律细菌个体的生长繁殖：二分裂繁殖；繁殖速度一般20～30分钟一代细菌群体的生长繁殖：以培养时间为横坐标，培养物中活菌数的对数为纵坐标，可绘制一条生长曲线。
分为四期：迟缓期、对数期、稳定期、衰亡期7、生长曲线的分期及各期的应用生长曲线分为四期：迟缓期、对数期、稳定期、衰亡期研究细菌的生物学性状（形态染色、生化反应、药物敏感试验等）选对数期的细菌；细菌的芽胞、外毒素和抗生素等代谢产物大多在稳定期产生8、IMViC试验是哪几个试验，典型的大肠埃希菌的试验结果是怎样的I：吲哚试验M：甲基红试验Vi：VP试验C：枸橼酸盐于鉴定肠道杆菌，大肠埃希菌+ + - -9、热原质的定义及特点热原质：细菌合成的一种注入人体内引起发热反应的物质。
大多数是G-菌的脂多糖。
热原质耐高温，高压蒸汽灭菌不能破坏（121℃，20 min），250℃高温干烤才能破坏。
最新微生物实验问题与答案
微生物实验问题与答案一、光学显微镜的操作及细菌、放线菌个体形态的观察1、为什么油镜的放大倍数比普通物镜大？答：油镜能减少光的折射，进而提高视野的亮度；通过提高显微镜的数值口径增加显微镜的分辨力。
2、数值口径的表达公式？答案：N.A=n ×sin α，n为介质折射率；α为光线最大入射角的半数。
3、显微镜数值口径与分辨力的关系？答案：分辨力是指显微镜能辨别两点之间最小距离的能力，它与光的波长成反比，与数值口径成正比。
4、油镜的使用与普通物镜有何不同？答案：油镜必须借助于光折射率等于或接近于玻璃的试剂，如香柏油等才能使用，而普通物镜则不需要；油镜是由100×物镜与香柏油构成，而普通物镜则限于10×物镜、40×物镜等。
5、使用油镜时应特别注意什么？答案：上下调节镜头时应使用微螺旋，否则容易损坏镜头；应使油镜始终浸泡在香柏油中，否则就不是油镜；使用完毕后，必须用搽镜纸沾取二甲苯等有机溶剂搽去残留的油迹，否则会玷污油镜。
6、什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？答：在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜的同焦。
利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。
7、根据你的实验体会,谈谈应如何根据所观察微生物的大小,选择不同的物镜进行有效地观察答：细菌用油镜，真菌用高倍镜。
都是先用低倍镜找到目标后，再用高倍镜调到合适的视野和合适的清晰度。
答：放线菌、酵母菌、多细胞真菌相对较大，用放大40倍的物镜就可以看了，细菌小，要用放大1000倍的物镜看，感觉还很小。
病毒那就要用电子显微镜看了。
二、微生物染色1、单染色的原理是什么？答案：主要基于微生物细胞能与各种染料进行不同程度地结合。
临床微生物检验有哪些问题
临床微生物检验有哪些问题在临床某些疾病的诊断和治疗中，微生物检验具有重要作用，随着抗生素的使用，以及药物滥用等现象的出现，微生物检验也越来越重要。
但微生物检验中存在多种问题，其严重影响检验准确性。
因此，下文为您讲讲临床微生物检验有哪些问题，希望对您有所帮助，积极改进，进而完善各项检验技术，提升微生物检验准确性。
一、临床微生物检验有哪些问题？(1)检验者不专业：临床微生物检验中，不仅要严格根据相关标准和流程操作，检验者还要具备一定专业度、丰富的专业知识。
因为，微生物检验过程中，各项操作和判断比较精细，若检验者专业度不足，检验过程中难免会出现不规范操作，进而影响微生物检验准确性。
现今，很多医院管理者对检验者的专业水平监督和考核不够，有些检验者比较散漫，工作态度不严谨，致使微生物检验结果有一定误差。
此外，有些检验者未积极了解微生物学新进展，也会影响微生物检验质量。
(2)检验流程规范性较差：微生物检验中，有些检验者未严格遵守相关规章制度进行操作，进而影响微生物检验准确性。
于此同时，微生物检验过程中，若监督力度不足，则会出现多种问题，例如未分析检验结果就出具检验报告，或者检验报告附件中无相关检验结果，进而导致检验报告可靠性和真实性较差，严重影响微生物检验质量。
(3)样本管理不合理：采集样本中，要避免样本混合、外来致病菌混入，但医院空气内存在多种致病菌，未合理管理样本，包括样本采集、样本保存、样本送检等，则会影响微生物检验质量。
目前，微生物检验时，样本方面存在多种问题，例如采集方法不当、容器使用不当、样品采集没有经过审核、采集时间不对、样品标识不清、运输不平稳等。
所以，微生物检验开始至结果出来前，均要严格根据相关制度操作，每个环节都非常重要，一旦操作失误，样本就易被污染，或者保存不当，就会损伤样本，进而让微生物检验结果出现一定误差，甚至还会让样本失去使用价值。
于此同时，样本采集方法和时间也会影响微生物检验质量，大多数样本要在特定时间、无菌环境下采集，一旦工作疏忽，就会让样本污染，进而让检验结果失去参考价值。
临床微生物检验有哪些问题？怎样改进
临床微生物检验有哪些问题？怎样改进在对感染性疾病诊断时，病原学检查是最准确、最有效的方法，但因为病原微生物具有体积小、种类多的特点，培养难度较大，加之样本采集、检查方法等方面因素的制约，导致临床微生物检验结果的准确性极易受到影响，进而影响疾病的诊断与治疗效果。
在进行临床微生物检验工作时，从样本采集到结果出来之间的时间比较长，期间诸多因素对检验的进行及结果的准确性会产生影响。
那么，临床微生物检验中都存在哪些问题呢？对这些问题又该如何改进呢？下面我们就来了解一下这些问题。
一、微生物检验中存在哪些问题？·标本收集方面标本质量是影响微生物检验结果准确性的主要因素，在对标本收集及保存的过程中，很多因素都会影响标本质量。
所以，临床微生物检验工作中，我们在收集、保存标本时，要严格按照标本采集方法及标准进行执行，由专业医护人员实施操作，保证标本采样的合格性与合理性。
最大限度的降低外界因素对标本产生的影响。
标本采集后，要在最短的时间内送往检验科进行检验。
·检验人员方面微生物检验结果很大程度上与检验人员的操作技术水平有关。
因为这样检验工作具有复杂性特点，只有检验人员具有专业的操作技术水平，才能保证检验工作规范开展，检验结果的准确性才能得到保障。
但目前，很多医院在临床微生物检验工作开展中，专业检验人员比较缺乏，专业素质不高，甚至因为害怕感染、污染而不按照要求进行检验，缺乏敬业精神与专业素养，工作马虎，导致检验结果的可信度大幅降低。
除此以外，检验人员与临床医师有效沟通也是微生物检验的重要环节，但实际上二者沟通存在明显的不足，也直接影响了检验结果的准确性。
所以，医院也要重视这项工作，选择经验丰富的检验人员开展微生物检验工作。
二、微生物检验问题怎样改进？·提升检验人员的综合素质。
临床微生物检验工作中，对微生物检验结果质量进行保证非常关键，所以在各项检验制度严格落实的同时，要保证管理工作的公开、公平，做到奖惩分明。
微生物培养实验中常见问题及解决方法
微生物培养实验中常见问题及解决方法培养基制备要求配制培养基的质量将直接影响微生物的生长。
由于各种微生物有不同的营养需求和不同的培养目的，各种培养基的配制要求如下:1.根据培养基配方的成分，按量称取，然后溶于蒸馏水中。
使用前，应用的试剂和药物应经过质量检验。
2.PH测定及调节：PH测定要在培养基冷至室温时进行，因在热或冷的情况下，其PH有一定差异，当测定好时，按计算量加入碱或酸混匀后，应再测试一次。
培养基PH值一定要准确，否则会影响微生物的生长或影响结果的观察。
但需注意因高压灭菌可影响一些培养基的PH降低或升高，故不宜灭菌压力过高或次数太多，以免影响培养基的质量，指示剂、去氧胆酸钠、琼脂等一般在调完PH后再加入。
3.培养基应保持透明，以便于观察细菌生长。
培养基加热煮沸后，可用脱脂棉花或绒布过滤除去沉淀物。
必要时可用蛋清澄清。
所用的琼脂条在使用前应事先洗净晾干，以免琼脂中的杂质影响透明度。
4.不要用铁、铜等容器盛装培养基，最好用水洗过的中性硬玻璃容器。
5.培养基的灭菌既要达到完全灭菌目的，又要注意不因加热而降低其营养价值，一般121℃15min即可，如为含有不耐高热物质的培养基如糖类、血清、明胶等，则应采用低温灭菌或间歇法灭菌，一些不能加热的试剂如亚碲酸钾、卵黄、TTC、抗菌素等，待基础琼脂高压灭菌后凉至50℃左右再加入。
6、每批培养基制备好后，应做无菌生长试验及所检菌株生长试验。
如果是生化培养基，使用标准菌株接种培养，观察生化反应结果，应呈正常反应，培养基不应贮存过久，必要时可置4℃冰箱存放。
7、目前各种干燥培养基较多，每批需用标准菌株进行生长试验或生化反应观察，各种培养基用相应菌株生长试验良好后方可应用，新购进的或存放过久的干燥培养基，在配制时也应测PH，使用时需根据产品说明书用量和方法进行。
8.化学试剂、灭菌条件、菌种生长试验结果、生产人员等。
应记录每批培养基中使用的情况以备查询。
样品采集及处理要求1.采集的检验样品必须具有代表性。
药品微生物检验常见问题
药品微生物检验常见问题在药品生产和销售过程中，微生物检验是非常重要的环节。
它可以有效防止药品受到微生物污染，确保药品的质量和安全性。
然而，在进行微生物检验时，常常会遇到一些问题。
本文将介绍常见的药品微生物检验问题及其解决方法。
一、样品处理在微生物检验过程中，样品的处理是非常关键的。
常见的问题包括样品提取不当、样品保存条件不当等。
在样品提取过程中，应注意采样工具和容器的清洁，并避免外界环境的污染。
同时，在样品保存过程中，应确保温度适宜，避免细菌的生长繁殖。
解决方法：正确选择和使用样品提取工具，并在采样前进行消毒处理。
在采样后，应立即将样品送至实验室，并确保保存条件适当。
二、培养基选择培养基的选择对微生物的检验结果具有重要影响。
常见的问题包括培养基成分不合适、菌落生长过多等。
选择适当的培养基可以提高检测的准确性，并减少假阳性和假阴性结果的发生。
解决方法：根据待检测微生物的特点和需求，选择适当的培养基。
并在使用前，确保培养基的质量和保存条件符合要求。
三、试验环境和设备试验环境和设备的卫生状况对微生物检验结果也具有重要影响。
常见的问题包括实验室环境污染、设备清洁不彻底等。
不良的试验环境和设备可能导致微生物的污染，从而影响检验结果的准确性和可靠性。
解决方法：保持实验室环境的良好卫生状况，定期进行清洁消毒。
对于使用的设备，要进行定期维护和清洁，确保其正常运行。
四、检测方法微生物检验方法的选择和操作也是常见的问题。
不同的方法可能会导致不同的检验结果。
常见的问题包括方法选择不当、操作不规范等。
选择适当的方法并按照规范的操作步骤进行微生物检验是确保检验结果准确可靠的关键。
解决方法：根据检测要求和实际情况，选择适当的微生物检验方法。
在进行检验前，要充分了解该方法的详细操作步骤，并按照规范要求进行操作。
五、结果判读结果的判读也是微生物检验中的一个重要环节。
常见的问题包括判读结果主观性强、判读标准不明确等。
不准确的结果判读可能导致错误的结论，并对药品的质量评估产生误导。
病原微生物实验室常见问题
病原微生物实验室可能会遇到一些常见问题，以下是一些示例：
1. **生物安全问题**：处理病原微生物可能涉及潜在的感染风险，因此实验室必须严格遵守生物安全规定，包括正确的防护设备使用、样本处理和灭菌程序等。
2. **样品污染**：病原微生物样本可能会受到其他微生物或杂质的污染，这可能影响实验结果的准确性。
3. **仪器故障**：实验室中的仪器设备可能会出现故障或校准问题，这可能导致数据不准确或实验失败。
4. **实验误差**：实验操作中的人为因素或其他不可控因素可能导致实验结果的误差。
5. **供应链问题**：确保实验所需的试剂、培养基和其他材料的质量和供应的稳定性可能是一个挑战。
6. **数据管理**：有效地记录、存储和管理实验数据对于后续分析和报告非常重要。
7. **人员培训**：实验人员需要接受适当的培训，以确保正确的操作技术和安全意识。
8. **法规符合性**：病原微生物实验室必须遵守相关的法规和规定，以确保生物安全和实验的合法性。
9. **清洁和消毒**：定期清洁和消毒实验室设施是防止交叉污染和维护生物安全的关键。
10. **应急计划**：制定应对意外事件和事故的应急计划是必要的，以保
障人员安全和减少潜在风险。
为了应对这些问题，病原微生物实验室通常会采取一系列的质量控制措施、培训计划、设备维护和管理策略。
此外，定期的审查和评估也有助于发现和解决潜在的问题。
微生物检验常见问题解答
13.铜绿假单胞如何保藏?答：可以使用低温冷冻保存的方法。
14.工作用菌液是否属于亚培养或传代一次?
答：工作用菌液应属于一次传代。
三、微生物限度
1.包装材料的大肠埃希菌检查?
答：根据包装材料的不同，大肠埃希菌的检查方法大致有两种，
一种是将浸提液合并后，取一部分，接种胆盐乳糖培养基进行检查;另
答：与其他菌种一样，所不同的是使用的培养基应改为改良马丁
琼脂培养基。
6.干粉状的是否可做第0代使用?
答：只要是菌种保藏机构提供的冻干保藏的菌种，可以确定为第
0代。
7.菌种每次传代都要做纯度、特性等的确认吗?
答：从外部购入的菌种，在进入本实验室的菌种保藏体系时，需
要进行纯度和特性的确认。以后的每次传代，可以通过显色培养基做简
答：没有必要。可参见问题2。
11.菌液制备中菌液是否都要验证储存期?
答：稀释菌液可参考药典规定。如要保存浓菌液，则需要验证有
效期。
12.菌种CMCC是否可以用ATCC替代，从省所或中检所购买
的菌种是否每次都可以出具规范的COA?
答：中国药典使用CMCC的菌种，并没有规定可以使用其他等
效的菌种。省所提供的菌种严格讲属于标准贮备菌种，无法提供ATCC
以不必重新验证。个别产品在各论中收载了新的无菌检查方法，对这些
品种，应对收载方法的适用性进行验证。
2.以前做过无菌验证的品种是否需要重新按照新的标试品应选择低吸附的滤器及滤膜比如注射用克
林霉素磷酸酯属于抗生素，是否需要重新选取滤膜再验证?
答：目前采用的方法如果经验证表明可行，则可以继续使用该方
要验证或确认?
答：同问题1。
微生物的实验室培养常见问题解答
微生物的实验室培养常见问题解答1.什么叫培养基？琼脂是什么性质？有哪些作用？人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质在常规培养条件下呈现固态只起凝固作用，微生物不能利用2.培养基的种类，按物理性质可分为哪些？他们各自有哪些作用？在实验室中最常用的培养基是哪种？培养基按物理性质分为液体培养基和固体培养基液体培养基：选择培养/扩大培养/富聚培养，工业生产菌种的大量繁殖（目的是增加目的菌的数量）固体培养基：分离、鉴定、活菌计数和保藏菌种3.培养基的种类，按用途可以分为哪些？请举例说明。
按用途分为选择培养基和鉴别培养基选择培养基：①加入某种化学物质：a.加抗生素筛选出真菌（如酵母菌、霉菌）和耐药菌b.加高浓度食盐筛选出金黄色葡萄球菌（耐盐突变体细菌）②改变培养基中营养成分：a.缺乏氮源时筛选出固氮微生物b.缺乏碳源时筛选出自养微生物c.以石油为唯一碳源时筛选出分解石油的微生物d.以纤维素为唯一碳源时筛选出分解纤维素的微生物e.以尿素为唯一氮源时筛选出分解尿素的微生物③改变微生物培养条件：a.将培养基放在高温环境培养筛选出耐高温的微生物b.用普通培养基在无氧条件下培养筛选出厌氧型和兼性厌氧型微生物鉴别培养基：伊红美蓝培养基鉴别大肠杆菌（菌落呈现黑色）4.培养基中配方成分主要有哪些？如何通过培养基的营养组成判断微生物的同化类型？一般都含有水、碳源、氮源和无机盐自养型微生物的培养基主要以无机营养为主；异养型微生物的培养基主要以有机营养为主5.培养基在满足主要营养物质的基础上，还需要满足什么条件？还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求6.培养乳酸杆菌时，还需要在培养基中添加什么？培养细菌时的PH？培养霉菌呢？培养厌氧型微生物呢？培养乳酸杆菌时添加维生素培养细菌时将pH 调至中性或微碱性；培养霉菌时将pH 调至酸性培养厌氧微生物时要提供无氧的条件7.牛肉膏和蛋白胨的功能是什么？主要能提供哪些营养物质？功能：提供营养物质和能量牛肉膏提供的主要营养物质是碳源、氮源、维生素、磷酸盐蛋白胨提供的主要营养物质是碳源、氮源、维生素8.获得纯净培养物的关键是？防止外来杂菌的入侵9.对实验操作的空间、操作者的衣着和手要进行什么操作？消毒和灭菌10.用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基要进行什么操作？灭菌11.实验操作应在什么附近进行？酒精灯火焰附近进行12.消毒和灭菌的定义分别是什么？实验室常用的消毒和灭菌的方法分别是什么？消毒消毒：用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物，不包括芽孢和孢子常用方法：煮沸消毒法、牛奶用巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法灭菌灭菌：用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子常用方法：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌13.为什么常用70%酒精作为消毒剂？需要灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌的分别有哪些？70%的酒精杀菌效果最好，浓度过高，会使菌体表面蛋白质变性过快而凝固成一层保护膜，酒精不能渗入其中；浓度过低，杀菌能力减弱灼烧灭菌：接种环、接种针、试管口、瓶口干热灭菌：培养皿、试管、吸管等耐高温、需保持干燥的物品高压蒸汽灭菌：如培养基、无菌水14.培养基丢弃之前要做什么操作？为什么？灭菌防止污染环境或感染操作者15.高压蒸汽灭菌为达到良好的灭菌效果，压力为多少？温度为多少？维持多长时间？高压蒸汽灭菌锅的正确使用方法是什么？100千帕，121摄氏度，15-30分钟16.高压蒸汽灭菌中，把锅内的水加热煮沸的原因是什么？不这样做会引起什么结果？将锅内的冷空气彻底排除，不然会导致温度达不到121摄氏度17.紫外线消毒在照射前需要喷洒什么可以加强消毒效果？石炭酸或煤酚皂等消毒液18.培养牛肉膏蛋白胨培养基的流程是什么？如果要调节PH，需在哪步操作之前？计算→称量→溶化→(调节pH)→灭菌→倒平板先调PH-分装-后灭菌19.为什么称取时动作要迅速？牛肉膏、蛋白胨都易吸潮20.溶化过程中不断用玻璃棒搅拌的作用是什么？防止琼脂糊底而导致烧杯破裂21.培养基灭菌后为什么要冷却到50摄氏度左右才能用来倒平板？用什么来估计培养基的温度？温度过高烫手，温度过低琼脂会凝固而倒不出用手摸不烫手温度大约在50摄氏度左右22.为什么要在酒精灯火焰附近进行倒平板？为什么锥形瓶瓶口要通过火焰？营造一个无菌区，防止杂菌侵入污染通过灼烧灭菌防止外瓶口微生物污染培养物23.如果不小心将培养基溅到皿盖和皿底之间的部位，这个培养基还能用来培养微生物吗？为什么？不能，空气中的微生物可能皿盖与皿底之间的培养基上滋生24.倒平板操作中，平板冷却凝固后还需要如何操作？为什么？平板冷却凝固后需倒置目的：①防止皿盖上的冷凝水落入培养基中造成污染；②减少水分挥发25.微生物的接种技术包括哪些？其核心是什么？接种方法很多，最常用接种方法是？平板划线法、稀释涂布平板法，除此以外还包括斜面接种，穿刺接种等方法核心是防止杂菌的污染，保证培养物的纯度最常用接种方法是：平板划线法、稀释涂布平板法26.菌落的概念是什么？由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体27.平板划线的原理是什么？过接种环(工具)在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面28.划线前灼烧接种环的原因是什么？每次划线之前都要灼烧接种环的原因是什么？划线操作结束后灼烧接种环的原因是什么？第一次灼烧：避免接种环上可能存在的微生物污染培养物以后每次划线前灼烧：杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使每次划线的菌种来自上次划线末端划线结束灼烧：杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者29.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高杀死菌种30.在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线末端开始划线？线条末端细菌的数目比线条起始处要少。
【检测】微生物检测过程中的细节问题汇总（包含稀释液、培养基制作及基本操作等）！
【检测】微生物检测过程中的细节问题汇总（包含稀释液、培养基制作及基本操作等）！一、稀释液的制作磷酸盐缓冲稀释液贮存液：磷酸二氢钾(KH2PO4) 34.0g；蒸馏水 500mL；用大约175 mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2（图1-1、1-2），用蒸馏水稀释至1000 mL后贮存于冰箱。
稀释液：用蒸馏水稀释1.25mL贮存液至1000mL，分装于合适容器，121℃高压灭菌15min。
二、培养基制作① 计算出所需数量，用电子称、称量纸、药勺来称取。
② 放入比所用蒸馏水大的烧瓶中，使之充分混匀于蒸馏水后加热溶解并煮沸。
※ 备注：即使是同一培养基，各个厂家的配制方法多少有些不同，所以一定要充分参照培养基上的说明。
2.1 倾注培养培养基：●平板计数琼脂等：高压灭菌后保存，使用时加温溶解。
●去氧胆酸盐琼脂培养基：使用时将培养基粉末加温溶解。
※备注：倾注培养时，向培养基分注的步骤参照下述的注意事项：①样液稀释以及从接种到培养基混合完毕，最好在15分钟以内完成。
②每个平皿的分注量约15-20ml。
分注后将平皿倾斜和旋转使之充分混合，但要注意不要让培养基从平皿内溢出，且不要粘附在平皿壁和盖上。
③分注时三角烧瓶挂有培养基滴时，下一次分注的培养基可能被烧瓶外壁的细菌污染，所以要用酒精棉擦拭，再将瓶口用火焰灭菌。
2.2 平板培养基：平板培养基是将溶解后的培养基分注15-20ml到无菌平皿里，使之凝固。
●TCBS琼脂培养基、DHL琼脂培养基：加温溶解后，分注、凝固、干燥表面。
为了防止沉淀的发生，加温溶解后要充分混匀（注意不要起泡）。
● EMB琼脂培养基：高压灭菌后，分注、凝固、干燥表面。
● 卵黄甘露醇高盐琼脂培养基：将鸡蛋放在95%酒精中浸泡1小时左右，用酒精棉（纱布）擦拭蛋壳表面，打开鸡蛋取出卵黄。
加入经高压灭菌后冷却到55-60℃培养基里（6%卵黄）搅拌摇匀凝固后干燥表面（搅拌时不要起泡）。
若培养基温度过高，卵黄凝固，过低则培养基分注时开始结块，所以操作要迅速。
微生物实验中常见的问题汇总
微生物实验中常见的问题汇总一、无菌操作要求1. 接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。
2. 进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。
3. 接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。
4. 进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。
5. 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。
6. 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。
7. 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。
8. 吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
二、无菌间使用要求1、无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7平方米的小窗，以备进入无菌间后传递物品。
2、无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。
3、无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。
4、处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。
5、在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。
三、消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。
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微生物实验中常见的问题汇总
一、无菌操作要求
1. 接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。
2. 进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。
3. 接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。
4. 进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。
5. 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。
6. 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。
7. 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。
8. 吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
二、无菌间使用要求
1、无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7平方米的小窗，以备进入无菌间后传递物品。
2、无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。
3、无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。
4、处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。
5、在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。
三、消毒灭菌要求
微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方
能使用。
（一）干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法
1、灭菌前准备
（1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。
（2）装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。
2、装放
（1）干热灭菌器：装放物品不可过挤，且不能接触箱的四壁。
（2）大型高压蒸气锅：：放置灭菌物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不能过挤。
3、设备检查
（1）检查门的开关是否灵活，橡皮圈有无损坏，是否平整。
（2）检查压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，观察是式高压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应按下列步骤进行：
①手提式高压锅在主体内加入3L清水，立式高压锅加水16L（重复使用时应将水量补足，水变混浊需更换）.
②手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中（无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使用）。
③盖好顶盖拧紧，勿使漏气；置灭菌器于火源上加热，立式压力锅通上电源，并打开顶盖上的排气阀放了冷气（水沸腾后排气10-15min）。
④关闭排气阀，使蒸气压上升到规定要求，并维持规定时间（按灭菌物品性质与有关情况而定）。
⑤达到规定时间后，对需干燥的物品，立即打开排气阀排出蒸气，待压力恢复到零时，自然冷却至60℃后开盖取物，如为液体物品，不要打开排气阀，而应立即将锅去除热源，待自然冷却，压力恢复至零，温度降到60℃以下再开盖取物，以防突然减压液体剧烈沸腾或容器爆破。
（3）卧式压力锅蒸气灭菌器的使用按下列步骤进行：
①关紧锅门，打开进气阀，将蒸气引入夹层进行预热，夹层内冷空气经阻气器自动排出。
② 夹层达到预定温度后，打开锅室进气阀，将蒸气引入锅室，锅室内冷空气经锅室阻气器自动排出。