病毒载量检测对HIV抗体确证实验结果不确定样本的辅助诊断研究要点
天津地区无偿献血者HIV确证不确定结果分析
天津地区无偿献血者HIV确证不确定结果分析王全慧【摘要】目的了解天津地区无偿献血人群人类免疫缺陷病毒(HIV)感染状况,并对HIV不确定结果进行分析.方法回顾分析本实验室2016年9月1日—2017年8月31日无偿献血者HIV筛查及确证数据.结果研究期间157130名无偿献血者中291例筛查反应性,其中59例酶联免疫试验(ELISA)双试剂反应性,确证不确定3例;单试剂反应性232例,不确定36例,不确定百分率为13.4％(39/291).结论 HIV抗体不确定结果多与非特异性反应有关,但是不可忽视早期感染的可能,对于不确定献血者,也应多加重视,以免造成不必要的疫情扩散.【期刊名称】《继续医学教育》【年(卷),期】2018(032)007【总页数】3页(P136-138)【关键词】人类免疫缺陷病毒(HIV);核酸检测(NAT);确证结果;不确定【作者】王全慧【作者单位】天津市血液中心检验科,天津 300110【正文语种】中文【中图分类】R446目前HIV的实验室检查包括病原学检查和血清学检查即HIV抗体检测。
抗体检测包括初筛实验和确认实验。
筛查反应性标本须经CDC确证，目前国内主要采用蛋白印迹试验（WB）进行确证。
确证结果可报告为：HIV 抗体阳性、HIV抗体阴性或HIV抗体不确定。
HIV 抗体不确定指的是出现HIV 抗体特异带，但不足以判定为阳性[1]。
近年来，HIV不确定标本不断增多，越来越引起医务人员的重视。
本研究统计了2016年9月1日—2017年8月31日无偿献血者HIV筛查及确证结果，并对39例不确定样本结果进行了分析。
1 材料与方法1.1 标本来源2016年9月—2017年8月年天津地区无偿献血者共157 130人次，年龄为18～55岁。
所有献血者均经过HBsAg、抗-HIV，抗-HCV、TP 快速试纸条检测，条带阳性淘汰献血。
1.2 仪器与试剂仪器为：MicroLab STAR（瑞士）、MicroLab FAME（瑞士）。
病毒载量检测对1型艾滋病病毒的诊断价值分析
Mod Diagn Treat现代诊断与治疗2021Jan32（1）艾滋病是由于感染人类免疫缺陷病毒（HIV）而引发的全身性疾病，该疾病可导致人体出现不同程度的免疫缺陷，且随着病程越长，免疫缺陷越严重，因此应早诊断早治疗，以降低疾病损伤［1］。
HIV分为HIV-1型和HIV-2型，以HIV-1为主。
目前临床多采用免疫印迹实验（WB）确诊艾滋患者，但诊断过程中，仍会出现部分不确定感染患者［2］。
根据技术要求，HIV抗体不确定的样本需要结合同时期流行病学资料，并于4周后进行随访检测，且在随访期间，带型患者有进展但是检测结果并不满足阳性标准的患者，仍需随访至第8周，再次检测，整体耗时2个月，时间较长，可能会增加病毒传播风险，同时可能延误患者早期治疗。
当人体被HIV-1感染后，病毒载量随之增加，且会对淋巴系统进行攻击，从而对机体免疫系统造成损伤，而有部分研究学者认为，病毒载量检测可提高HIV-1的检出率［3］。
基于此，本研究选取我院治疗的128例疑似艾滋病患者作为研究对象，旨在分析病毒载量检测对1型艾滋病病毒的诊断价值。
报道如下。
1资料与方法1.1一般资料选取2018年8月~2020年3月我院收治的128例疑似艾滋病患者，所有患者均进行酶联免疫吸附试验、WB检测，不确定患者进行病毒载量检测。
其中男82例、女46例；年龄26~39（32.31±5.80）岁。
1.2纳入与排除标准纳入标准：（1）近3个月内未服用免疫抑制剂等药物；（2）首次检查；（3）患者同意翻阅病历资料。
排除标准：（1）抗病毒药物治疗史；（2）依从性差、无法完全配合检查；（3）无其他免疫系统疾病。
1.3方法HIV抗体检测程序和方法根据《全国艾滋病检测技术规范（2015年修订版）》［4］进行。
1.3.1筛查阳性复试实验分别使用北京金豪公司HIV-1+2抗体和珠海丽珠公司HIV-1+2抗原抗体进行两种不同酶联免疫吸附试验。
操作严格按照试剂盒说明书进行。
艾滋病检测技术HIV-1核酸检测规范
艾滋病检测技术HIV-1核酸检测规范1 范围本章规定了HIV-1核酸定性和定量检测（病毒载量）的意义、实验室要求、检测方法、质量控制及结果判定标准，适用于HIV-1核酸的定性检测和定量的测定。
2 核酸检测的意义核酸检测可用于HIV感染诊断、血液筛查、病程评估及抗病毒治疗效果监测。
2.1 感染诊断2.1.1 作为补充试验：用于筛查试验有反应但抗体确证试验不确定或阴性样本的判定；对筛查试验有反应但抗体确证试验不确定或阴性的疑似艾滋病晚期患者需将核酸检测、临床病史和CD4+T淋巴细胞计数检测结果综合判断。
对于抗体筛查试验阴性但免疫功能低下者，也可进行核酸检测，结合临床综合判断。
2.1.2 急性期诊断：对近期有明确流行病学史的个体，包括患有性病或有性病史，有同性和异性性接触不安全性行为，有共用注射器吸毒史，有医源性暴露史，有职业暴露史，HIV/AIDS 患者的配偶或性伴侣，HIV/AIDS 母亲所生子女等，如抗体筛查试验无反应，可通过核酸检测判定是否为急性期感染。
核酸检测结果阴性或低于最低检测限不能排除HIV-1感染。
2.1.3 HIV-1暴露婴儿感染早期诊断HIV-1感染母亲所生小于18个月龄的婴儿，不同时间的两次HIV-1核酸检测均为阳性即可作出诊断。
18个月龄以上儿童诊断与成人相同。
2.2 血液筛查：对献血者及采供血机构的原料血浆进行核酸检测，可及时发现窗口期感染，降低输血的“残余危险度”，减少二代传播。
2.3 抗病毒治疗效果监测HIV感染者和艾滋病病人经抗病毒药物治疗后，定期进行HIV-1病毒载量检测，可判断抗病毒药物治疗的疗效。
病毒载量结果动态分析，对决定是否继续使用原定的治疗方案以及是否需要更改治疗方案起到重要作用。
一般启动抗病毒治疗6个月后应进行病毒载量检测，以监测治疗效果，每年应检测一次。
治疗前进行检测可了解病人的病毒载量基线，有助于评价治疗后效果。
如适时重复检测病毒载量，没有低于检测限，需要考虑治疗是否失败。
HIV检测技术的现状及进展
HIV检测技术的现状及进展HIV病毒引发艾滋病的一种严重传染病。
早发现HIV病毒是预防和控制艾滋病最有效的措施，随着生物检测技术的发展，HIV检测技术有了巨大的发展，且诊断的正确性和可靠性大大提高。
本文就来HIV检测的现状及进展综述如下。
1检测技术1.1HIV抗体检测酶联免疫吸附法（ELISA）ELISA是HIV抗体检测常用方法之一[1］。
ELISA试剂在经历到第4代，也就是我们现在所用的抗原抗体联合检测试剂，第4代检测试剂检测窗口期明显缩短。
ELISA法目前仍然是最常用的筛查试验。
明胶颗粒凝集试验（PA）PA是一种快速、简便的筛查试验，适合对少量标本的检测，但灵敏度和准确度不如ELISA法。
金标快速反应试验用于快速检测HIV抗体。
特点：出结果快，特异性好，快速简便，适用于应急检测以及边远地区检测。
免疫印迹试验被称为HIV抗体检测的“金标准”，它通过电泳把蛋白带分离开来，再把不同蛋白转移到醋酸纤维素膜上，每一条醋酸纤维素薄膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原[2]。
免疫层析/渗滤实验是近年迅速发展起来检测方法[3]。
特异性好，敏感度也较高，适宜于偏远地区临床用血检测。
免疫荧光试验（IFA）此法操作简便，敏感性及特异性较ELISA法高，但对某些血清非特异性荧光难以去除，仪器价格昂贵，结果判断主观性强。
无创性HIV抗体检测[4] 适用于人体体液检测HIV。
这些体液的收集避免静脉穿刺，优点是标本来源是无创的，易被接受，尤其是采血困难的人群，缺点是不适合大量样品的同时检测。
1.2非HIV抗体检测核酸检测包括PCR和RT-PCR，可分为定性检测和定量检测两大类。
①定性检测 HIV核酸定性检测常用PCR，检测前病毒DNA序列，RT-PCR检测血浆中HIV的RNA。
是HIV感染早期检测手段之一。
②定量检测HIV核酸检测即病毒载量测定，一般以拷贝数来表示。
病毒载量测定主要用于评估HIV感染的进程、监测抗病毒治疗效果以及HIV感染早期的辅助诊断[5]。
艾滋病病毒感染实验检测方法研究进展
艾滋病病毒感染实验检测方法研究进展刘凤艾滋病是人类免疫缺陷病毒（HIV）感染引起的一种获得性免疫缺陷病，是全球主要公共卫生问题。
截至2019年底，全球约有3 800 万人感染，其中仅有67%接受了抗逆转录病毒治疗（ART），仍有710 万感染者甚至不知道自己的感染状况[1]。
随着抗逆转录病毒治疗技术的发展，HIV感染已成为一种可控制的慢性病，感染者能够过上长期的健康生活，寿命与未感染人群无明显差异。
联合国艾滋病规划署的3个90%目标中，首个即是90%的艾滋病病毒感染者知道自己的感染状况，而实验室检测是确定艾滋病感染的唯一办法。
随着科学的进步，HIV检测引入了许多新方法，取得了长足的进步。
本文将近年来艾滋病病毒的血清学检测和核酸检测方法的研究进展综述如下。
1 血清学检测1.1抗体检测或抗体抗原联合检测抗体检测是实验室最常用、最主要也是灵敏度和特异度均较高的HIV 检测方法。
1.1.1酶联免疫吸附试验（ELISA）中国于1985年出现艾滋病病例时开始研制第1代ELISA试剂，至今已发展到第5代，每一代新试剂都旨在克服前一代的不足。
第1代和第2代试剂只能检测IgG抗体，窗口期分别为6～8周和4～5周。
第3代试剂可检测到HIV-1 IgM抗体，窗口期为3～4周。
第4代试剂是一种HIV-1/HIV-2抗体与p24抗原的联合检测方法，窗口期为2～3周。
目前，我国HIV筛查普遍使用第3代试剂，也有部分地区使用第4代试剂，献血员的筛查使用第4代试剂，以提高输血的安全性。
2015年美国FDA批准了第5代试剂BioPlex 2200 HIV Ag-Ab assay用于临床HIV筛查，此试剂采用多重磁珠流式免疫测定的方法，可同时定性检测并准确区分HIV-1抗体、HIV-2抗体和p24抗原，可用于诊断HIV-1急性感染[2]，但在公共卫生领域中尚未广泛使用。
第5代试剂目前在中国未获得国家药品监督管理局（NMPA）批准。
HIV-1抗体确证不确定和阴性样本HIV-1核酸定量检测结果分析
HIV-1抗体确证不确定和阴性样本HIV-1核酸定量检测结果分析摘要目的：探讨HIV-1核酸定量检测在HIV-1抗体确证试验不确定和阴性样本中的应用，为艾滋病及时诊断提供科学依据。
方法：对204例HIV-1抗体确证试验不确定和阴性样本进行核酸定量检测，通过随访分别进行HIV-1抗体确证试验和核酸定量检测并结合流行病学资料确定其感染状况。
结果：204例样本中，抗体不确定样本9I例，核酸定量检测≥5000CPs/ml 53例，低于检测线38例。
抗体阴性样本II3例，核酸定量检测≥5000CPs/ml 2例，低于检测线111例。
核酸定量检测≥5000CPs/ml 55中随访检测38例，抗体阳转38例占I00%，核酸定量检测≥5000CPs/ml 38例占100%，失访17例。
核酸定量检测低于检测线的149例中，未见阳转病例，核酸定量检测低于检测线149例。
结论：核酸检测作为补充试验的其中之一，在HIV-1抗体不确定和阴性样本中采用核酸定量检测有助于更快、更早对个体艾滋病感染者进行诊断。
关键词：HIV-1抗体确证试验、不确定、阴性、HIV-1核酸定量检测、诊断随着《全国艾滋病检测技术规范》（2020年修订版）和《艾滋病和艾滋病感染诊断》（WS-293-2019）的出台和实施。
HIV感染检测手段由HIV抗体确证试验改变为补充试验—HIV抗体确证试验和HIV-1核酸试验。
随着扩大检测策略的实施，窗口期和晚期艾滋病患者及非特异性反应的病例被初筛检测出来，采用单一的HIV-1抗体确证试验，这些艾滋病感染者/艾滋病病例就不能及时得到明确诊断。
不仅增加患者的心理压力、影响病人的治疗、增加了艾滋病的传播风险、给艾滋病防治工作带来了很大的困难。
但艾滋病核酸检测需要投入的设备、检测环境、人员要求比较高，检测成本与HIV-1抗体确证试验相比也比较高，短时间内在本地区很难普片推广。
本研究提出了HIV-1抗体确证试验中的不确定和阴性样本增加HIV-1核酸定量检测。
全国艾滋病检测技术指导规范
修改、增补和完善
(6) 完善了检测报告。 A: 抗体筛查和复检报告整合为 HIV抗体筛查检测报告 B: 增加HIV-1核酸检测报告,婴儿艾滋病感染早期诊断
检测报告 C: 取消了流行病检测HIV抗体检测报告单、艾滋病病毒
抗体检测数和阳性人数统计报表、艾滋病职业暴露 个案登记表和艾滋病防治工作人员职业暴露事故汇总表
附表2
送检单位
送检样品
姓名 国籍
身份证号 现住址
户籍地址 检测方法
WB RIBA/LIA
其他 结论
检测者 检测单位（公章）
HIV抗体确证检测报告
全血□ 血浆□ 血清□ 口腔黏膜渗出液□ 尿□ 其它：_____
编号: 送检日期 年 月 日
送检人群
年龄
性别
职业
民族
婚姻 状况
文化 程度
□□□□□□□□□□□□□□□□□□
用于该检测策略的三种试剂，至少 有一种样品S/CO比值≥试剂说明书 中给出的特定阈值，可报告“HIV
抗体阳性”，无需再做免疫印迹试
验；否则，应进一步作免疫印迹试
验，结果按照免疫印迹试验报告的 要求进行，见图6。此流程也可用 于发光试剂试验
筛查阳性反应样品 酶免或发光试剂 根据S/CO值判断
高S/CO值 报告抗-HIV阳性
HIV核酸定性与定量、基因型检测和HIV-1分离培养。
尿液和口腔黏膜渗出液
尿液：推荐使用专用采尿管，保持尿液稳定。尿液样品可采集随机 尿，女性经期应取中段尿。 口腔黏膜渗出液：使用试剂盒提供的容器收集样品。存放时间和是 否冻存以试剂盒说明书为准。口腔黏膜渗出液应采集口腔渗出液,不 是唾液。
样品的采集和处理
特定条件的用于确证的三种酶联免疫、三种快速试验或酶联加快
国家质量监督检验检疫总局艾滋病检测工作管理办法
国家质量监督检验检疫总局艾滋病检测工作管理办法第一章总则第一条为加强对出入境检验检疫机构艾滋病检测工作的监督管理，规范艾滋病检测实验室的设置和验收，确保艾滋病检测工作质量，依据《中华人民共和国传染病防治法》、《艾滋病防治条例》、《全国艾滋病检测工作管理办法》和国家相关法律、法规的规定，特制定本管理办法。
第二条国家质量监督检验检疫总局（简称质检总局）主管出入境检验检疫机构艾滋病检测及其监督管理工作，各直属局主管辖区内的艾滋病检测及其监督管理工作。
第三条本管理办法适用于出入境检验检疫机构所有开展艾滋病检测工作的单位。
第二章艾滋病检测实验室的设置第四条质检总局根据出入境检验检疫机构分布和口岸艾滋病流行情况，统筹规划确定承担艾滋病检测工作的实验室。
第五条质检总局对艾滋病检测实验室实行分类管理，按照实验室的职能、开展检测工作的性质及范围共分4类实验室，分别是艾滋病检测确证中心实验室、艾滋病检测确证实验室、艾滋病检测筛查实验室和艾滋病筛查检测点。
（一）艾滋病检测确证中心实验室。
艾滋病检测确证中心实验室设在北京出入境检验检疫局。
其职能包括：1、承担出入境检验检疫机构艾滋病检测实验室网络建设的业务技术指导工作和总局安排的评价工作，为总局制定相关政策提供技术支持。
2、承担艾滋病检测疑难样品的分析和确证，对有争议的检测结果进行仲裁，出具最终检测报告。
3、开展应用性研究，承担与艾滋病防治相关的检测任务。
4、建立出入境检验检疫机构艾滋病病毒毒种库、样品库、质控品库和细胞库。
5、为出入境检验检疫机构艾滋病实验室质量管理、检测、咨询等工作提供技术支持和指导。
6、接受质检总局委托，组织出入境检验检疫机构实验室能力验证工作。
7、接受质检总局委托，承担出入境检验检疫机构艾滋病检测相关业务培训。
8、接受质检总局委托，负责《艾滋病检验检疫信息》及相关资料的收集、汇总分析、上报工作。
（二）艾滋病检测确证实验室。
艾滋病确证实验室设在有能力开展艾滋病检测确证工作的检验检疫机构；其职能是：1、承担口岸艾滋病病毒抗体确证、抗体筛查和其他艾滋病检测及宣传教育工作。
全国艾滋病检测技术规范(2019年修订版)
4
4.5.1样品包裹必须在具有处理感染性材料能力的实验室内、由经过培训的工作人员打开，打开包裹时应穿戴防护衣、戴口罩和防护眼镜，在生物安全柜中打开，用后的包裹应及时进行消毒。
4.2.1.8 样品采集后处理、保存、运输的时限和条件，因不同的检测项目而异，应参见不同检测项目要求。
4.2.1.9 采血完成后的穿刺针头必须丢弃于放置尖锐危险品容器内，妥善处理，防止发生职业暴露。
4.2.2滤纸干血斑
4.2.2.1 根据需要，可将采集的各种血液样品制备成滤纸干血斑，用于检测。最常用的是用抗凝全血、末梢全血和血浆制备滤纸干血斑。
4.2.2.5 血斑充分干燥后，将其放入密封袋中，每张干血斑单独保存，避免血斑之间的相互污染，同时放入干燥剂及湿度指示卡，密封包装，保存备用。
4.2.3尿液和口腔黏膜渗出液
4.2.3.1尿液：推荐使用专用采尿管，保持尿液稳定。尿液样品可采集随机尿，女性经期应取中段尿。
4.2.3.2口腔黏膜渗出液：使用试剂盒提供的容器收集样品。存放时间和是否冻存以试剂盒说明书为准。口腔黏膜渗出液应采集口腔渗出液,不是唾液。
4.4.2.1 第一层容器：直接装样品，应防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的唯一性编码或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。
4.4.2.2 第二层容器：容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。要求不易破碎、带盖、防渗漏、容器的材料要易于消毒处理。
二○ 年 月
前 言
艾滋病在我国流行已数十年，随着感染者和临床病人的不断增加、感染人群变化，艾滋病检测工作量逐渐加大，对监测和检测的需求也不断增加，承担艾滋病检测的实验室已遍及全国各级医疗、疾病预防控制、采供血、妇幼保健机构，出入境检验检疫、军队等各个系统。为了尽早发现HIV感染者和艾滋病病人，及早提供咨询、治疗，同时为适应基层艾滋病检测工作需求，在新的形势下，根据《关于艾滋病抗病毒治疗管理工作的意见》、《中国预防与控制艾滋病中长期规划（1998—2010年）》、《中国遏制与防治艾滋病十二五行动计划的通知（国办发[2012]4号）》、“四免一关怀”等国家艾滋病防治重要方针政策和十三五防治工作重点，在广泛征求各省、市疾病预防控制机构和医疗机构意见的基础上，在中华人民共和国卫生和计划生育委员会艾滋病专家及省级专家的参与下，中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心对《全国艾滋病检测技术规范（2009年版）》进行修改、增补和完善，制定出《全国艾滋病检测技术规范（2015年版）》（以下简称《规范》），使其既能满足目前艾滋病检测工作的实际需求，又能体现检测技术的发展。
精选18全国艾滋病检测技术规范要点
复检试验：对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确认。 对筛查阴性和阳性者，均需做好检测后咨询。
（6）HIV抗体确认试验结果报告确认试验由确认实验室根据检测结果出具“HIV抗体确认检测报告单”（附表3），报告HIV抗体阳性（+）、HIV抗体阴性（-）及HIV抗体不确定（±）。符合HIV-1抗体阳性判断标准，报告“HIV-1抗体阳性（+）”，并按规定做好检测后咨询、保密和疫情报告工作。符合HIV抗体阴性判断标准，报告“HIV抗体阴性（-）”。如果近期有高危行为，如性乱、注射毒品等，或有急性流感样症状等情况，为排除因“窗口期”而出现的假阴性结果，建议高危行为后3个月时再做抗体检测。也可进行HIV-1 P24抗原或HIV核酸检测，作为辅助诊断。
省艾滋病确认中心实验室难以确认的样品，送国家艾滋病参比实验室确认。同一受检对象的样品在不同实验室得到不一致的确认结果时，由国家艾滋病参比实验室和艾滋病确认实验室审评及技术指导专家组予以仲裁。
3．HIV P24抗原的检测
规定了P24抗原的检测方法、适用范围和规范性引用文件。（1）适用范围：HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断。HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助鉴别诊断。第四代HIV-1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性反应，但HIV-1抗体确认阴性者的辅助诊断。监测病程进展和抗病毒治疗效果。
（2）HIV抗体检测实验室应符合《全国艾滋病检测工作规范（1997年版）》中对检测实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。应符合《实验室生物安全通用要求》（GB 19489-2004）对II级生物安全实验室（BSL-2）的各项要求。
HIV-1病毒载量测定及质量保证指南
HIV-1 病毒载量测定及质量保证指南（2013 版）Guideline for HIV-1 Viral Load Testing and QualityAssurance中国疾病预防控制中心2013年1月前言随着HIV-1 病毒载量检测在艾滋病临床辅助诊断、抗病毒治疗监测及相关科研工作中的广泛应用，我国开展该项检测工作的实验室日益增多。
自1997 年艾滋病实验室首次引进HIV-1 病毒载量检测技术以来，截至2012 年底全国已经配备115 台HIV-1 病毒载量检测仪，覆盖疾控、医院、检疫、军队等系统，艾滋病流行重点地区及少数县级实验室均已配备HIV-1 病毒载量检测仪，每年检测量已达13 万人份以上。
由于HIV-1 病毒载量检测质量对艾滋病的早期诊断及治疗有重要影响，因此急需加强该领域的培训和质量控制，规范实验室操作，以保证检测结果的准确性和可靠性。
自2008 年开始实施《HIV-1 病毒载量测定及质量保证指南》（试行，以下简称《指南》）以来，参与HIV-1 病毒载量能力验证工作的实验室从2007 年的29家增加到2012年的107 家，占已开展工作实验室的百分之九十以上。
通过综合分析近几年能力验证发现的问题与检测技术发展的实际情况，考虑各种试剂的检测要求，结合专家意见和一线实验室工作人员的经验与需求，对本指南进行了适当修改、调整和补充，主要修改内容包括：（1）增加“人员要求”章节；（2）修改“常用HIV-1 病毒载量检测方法”；（3）修改“ HIV-1 病毒载量检测能力验证（PT）”；（4）补充常见问题分析和处理等内容。
修订后的《指南》共分八章，包括：总则，人员要求，实验室环境与设施，样品的采集、处理保存运输，常用检测方法简介，室内质量控制，实验室检测能力验证（PT），实验室生物安全，以及四个附表。
本指南在修改过程中，接纳了国内专家、同行的意见和建议，经过多次修改编写成《指南》（2013）版。
艾滋病病毒检测方法研究
艾滋病病毒检测方法研究艾滋病病毒会对人体免疫系统造成较为严重的侵袭，使得人体出现较多的疾病。
而艾滋病预防控制工作的重点就在于正确地诊断出HIV感染[1]，只有确定了传染源，才能够对艾滋病传播进行更好的控制。
而只有通过检测HIV的病毒分离培养、核酸、抗原、特异性抗体等之后，才能够确诊是否感染HIV [2]，从目前来看，实验室检测HIV的主要方法依旧是血清学实验。
本文就艾滋病病毒检测方法研究进展进行探讨。
1 HIV 抗体检测确证试验和初筛试验是目前较为常用的HIV 抗体检测技术，确证试验包括放射免疫沉淀实验、条带免疫实验、免疫印迹试验；筛查试验包括明胶颗粒凝集试验、胶体金免疫渗滤实验、免疫荧光、酶联免疫吸附试验（ELISA）。
2 HIV核酸测定目前临床上检测HIV最为敏感的方法就是HIV核酸测定，多用于对病毒载量（HIV RNA 拷贝数）进行测定。
人若感染HIV 后，血浆中病毒载量会与病情发展速度呈正相关关系。
在艾滋病发病晚期和艾滋病初期感染时，HIV 病毒载量通常都是处于最高水平，但是也能够在慢性潜伏期检出。
连接酶酶促链式反应、核酸序列依赖性扩增、分支DNA 信号放大系统、逆转录多聚酶链反应是四种测定方法。
虽然病毒核酸检测方法的灵敏度较高，但是由于HIV 基因存在着较大的多样性，会让检测的敏感性存在着较大的限制。
此外，在检测病毒核酸时，通常对于操作人员要求较高，操作复杂，检测试剂昂贵，检测仪器昂贵，既不能快速检测大量患者，又不能推广应用于基层医院[3]。
3 HIV的分离培养HIV的分离培养通常都采用将受检者标本（精液、血浆、全血、PBMC及其他体液）与靶细胞（PBMC）共培养的方法，样本可采用精液、血浆、全血、PBMC 及其他体液，但是新鲜抗凝全血是其首选样本。
HIV分离培养结果为阴性，则不能排除HIV感染；但是只要结果为阳性，那么就说明其为HIV感染。
HIV的分离培养可辅助诊断HIV感染，也可检测HIV表型耐药性，还可以用于研究HIV 生物学特征[4]。
艾滋病是如何诊断鉴别的
艾滋病是如何诊断鉴别的艾滋病诊断鉴别一、并发症的辅助检查艾滋病诊断鉴别二、HIV感染的辅助检查①HIV抗体初筛试验(ELISA)：敏感性高，可有假阳性出现。
对于初筛阳性的患者，应经确证试验确证。
②HIV抗体确证试验(WB)：WHO规定，只要出现2个env条带即可判定为阳性。
③HIV-RNA：敏感性为100%，但偶尔会出现假阳性，但假阳性结果通常低于2000cp/ml，而急性感染期病毒载量通常很高，平均在106cp/ml。
④p24抗原：有助于早期诊断，灵敏性及特异性均较高。
⑤快速检测试验：可采集全血或毛细血管的血液，一般15-30分钟可出结果。
但假阳性及假阴性率均较高，不作为常规检测。
艾滋病诊断鉴别三、诊断标准(一)急性期诊断标准：病人近期内有流行病学史和临床表现，结合实验室HIV抗体由阴性转为阳性即可诊断，或仅实验室检查HIV抗体由阴性转为阳性即可诊断。
80%左右HIV感染者感染后6周初筛试验可检出抗体，几乎100%感染者12周后可检出抗体，只有极少数患者在感染后3个月内或6个月后才检出。
(二)无症状期诊断标准：有流行病学史，结合HIV抗体阳性即可诊断，或仅实验室检查HIV抗体阳性即可诊断。
(三)艾滋病期(1)原因不明的持续不规则发热38℃以上，>1个月;(3)6个月之内体重下降10%以上;(5)反复发作的单纯疱疹病毒感染或带状疱疹病毒感染;(7)反复发生的细菌性肺炎;(8)活动性结核或非结核分支杆菌病;(9)深部真菌感染;(11)中青年人出现痴呆;(12)活动性巨细胞病毒感染;(13)弓形虫脑病;(14)青霉菌感染;(16)皮肤粘膜或内脏的卡波氏肉瘤、淋巴瘤。
诊断标准：①有流行病学史、实验室检查HIV抗体阳性，加上述各项中的任何一项，即可诊为艾滋病。
或②HIV抗体阳性，而CD4+T 淋巴细胞数<200/mm3，也可诊断为艾滋病。
HIV病毒载量检测用于HIV感染诊断的可行性分析
中国艾滋病性病2020年12月第26卷第12期Chin J AIDS STD Vol.26No.12Dec20201283 DOI:10.13419/ki.aids.2020.12.04.论著.HIV病毒载量检测用于HIV感染诊断的可行性分析靳廷丽，易志强，刘丽萍，张娜，唐翼龙，丁晨，雷达，吴争(江西省疾病预防控制中心，南昌330029)摘要：目的基于行标《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断(WS293—2019)》中病毒载量作为新增的艾滋病病毒(HIV)感染诊断方法，探讨HIV病毒载量检测对HIV感染诊断的可行性和存在的问题。
方法采用蛋白印迹法(WB)对442例标本进行HIV抗体确证检测和HIV病毒载量检测，对比结果的一致性。
结果确证检测为HIV-1抗体阳性样本275例和HIV抗体阴性样本167例，275例HIV-1抗体阳性样本中，病毒载量值全部高于检测线(20拷贝/mL),其中272例病毒载量值>5000拷贝/mL,167确证阴性样本病毒载量值均低于检测线。
结论病毒载量检测值>5000拷贝/mL作为艾滋病诊断的方法可靠.«5000拷贝/mL需综合判断并随访。
关键词：艾滋病病毒；病毒载量；诊断中图分类号：R512.91；R373.9文献标志码：A文章编号:1672-5662(2020)12-1283-03Feasibility and problems on HIV viral load test for diagnosis of HIV infection JIN Tingli,YI Zhiqiang,LIU Liping,ZHANG Na,TANG Yilong,DING Chen,LEI Da,WU Zheng.(Jiangxi Provincial Center f or Disease Control and Prevention,Nanchang330029,China)Corresponding author:YI Zhiqiang,************************Abstract：Objective To analyze the application of HIV viral load test for diagnosis of HIV infection based on the standard"Diagnosis of AIDS and HIV Infection^^(WS293-2019).Methods442samples were detected by HIV-1antibodyconfirmation test and HIV-1viral load test.Results275cases of the samples were HIV-1antibody positive and167caseswere HIV antibody negative.The viral load value was all higher than the detection line(20CPs/mL)for all the HIV-1antibodypositive cases,and272cases with load value>5000CPs/mL.The167cases of HIV-1antibody negative cases did not receive HIV-1viral load test.Conclusion The value of HIV-1viral load>5000CPs/mL is reliable as HIV-infection diagnosismethod,otherwise it will require comprehensive analysis and follow-up.Keywords:HIV;viral load;diagnosis艾滋病病毒（HIV）病毒载量通过检测HIV在人体血浆中的病毒核酸含量获得，一直作为HIV感染者/艾滋病（AIDS）病人的随访指标，判断病人的治疗效果以及传播风险，从《全国艾滋病检测技术规范（2015年修订版）》“将HIV核酸试验作为检测策略的补充试验后，HIV病毒载量开始作为HIV重要的辅助诊断方法。
病毒载量检测方法及其意义
标准试验：能够定量400-750000拷贝/毫升的 HIV RNA，需要0.2毫升血浆。
超敏试验：能够定量50-75000拷贝/毫升的 HIV RNA,需要0.5毫升血浆。
第8页，此课件共29页哦
NucliSens EasyQ HIV-1实验 是使用NASBA技术的靶扩增试验。NASBA技术选择性地直接扩 增RNA而没有PCR步骤，用2个寡核苷酸引物、3个酶、三磷酸脱氧核苷和合适的缓冲液进行一步 夹心杂交。首先用异硫氰酸胍和氧化硅颗粒提取高纯度RNA，RNA通过重复的合成和转录双链DNA 中间体得到扩增。在AMV-RT的作用下，HIV-1gag区的引物P1介导由标本RNA合成cDNA， RNA链被RNAse降解。引物P2结合启动第二条DNA链合成，反义RNA通过T7多聚酶启动双链 DNA合成，这个循环不断重复，使得靶RNA在等温条件下大量扩增100万到1000万倍，然后直接 用化学发光法确定核酸量，通过HIV特异的gag和pol区的3个内标同时扩增而达到定量目的。 它具有高度敏感性和广阔的动态范围。 最近NucliSens HIV-1定量实验有了较大改进，将 NASBA核酸扩增技术与实时(real-time)检测技术结合起来,能够对检测进行实时监控。结果表达 方式由每毫升标本的拷贝数（cp/ml）改变为每毫升国际单位（IU/ml）。 可扩增HIV-1 M组的A-G亚型。
第20页，此课件共29页哦
样品的保存温度：
-70℃室温冻融3次，HIV RNA变化的幅度小于0.2log。 -70℃保存5个月，HIV RNA减少0.3-0.5log。保存12个
月，HIV RNA减少一般不超过0.4log. 血浆在室温或4 ℃保存3天，HIV RNA减少不超过0.5log。 -20 ℃保存2-3年，病毒载量大约减少50%左右。反复
HIV临床检测研究
HIV临床检测研究在医学领域中，HIV（人类免疫缺陷病毒）的检测是至关重要的一项工作。
HIV 感染若未能及时发现和治疗，可能会导致艾滋病（获得性免疫缺陷综合征）的发生，对患者的健康造成严重威胁。
因此，准确、可靠且及时的 HIV 临床检测对于疾病的防控、诊断、治疗以及患者的管理都具有极其重要的意义。
HIV 病毒主要通过攻击人体免疫系统中的 CD4+T 淋巴细胞，导致免疫系统逐渐受损。
在感染后的不同阶段，病毒在体内的复制水平和免疫反应各不相同，这就要求临床检测方法能够灵敏地检测到病毒的存在，并准确评估感染的阶段和病情的进展。
目前，常用的 HIV 临床检测方法主要包括抗体检测、核酸检测和抗原检测。
抗体检测是最为常见的检测手段之一。
人体在感染 HIV 后，免疫系统会产生相应的抗体来对抗病毒。
通过采集血液、唾液或尿液样本，利用酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光法等技术，可以检测出这些抗体的存在。
ELISA 是一种常用的大规模筛查方法，具有较高的灵敏度和特异性。
但需要注意的是，在感染后的早期，抗体可能尚未产生，从而出现所谓的“窗口期”，导致检测结果为假阴性。
为了提高检测的准确性，有时会采用确证试验，如免疫印迹法（Western blot），对初筛阳性的结果进行确认。
核酸检测则直接检测病毒的遗传物质，即 RNA 或 DNA。
这种方法能够大大缩短窗口期，在感染后的数天内就可能检测到病毒。
常见的核酸检测方法包括逆转录聚合酶链反应（RTPCR）和核酸序列依赖性扩增技术（NASBA）等。
核酸检测的灵敏度极高，对于早期诊断、判断治疗效果以及监测病毒载量变化等方面具有重要价值。
然而，核酸检测的技术要求较高，成本也相对昂贵。
抗原检测主要针对 HIV 病毒的 p24 抗原。
在感染后的早期，病毒大量复制时会产生 p24 抗原，可通过特定的试剂进行检测。
抗原检测能够在一定程度上弥补抗体检测的窗口期问题，但单独使用时的准确性可能不如抗体检测和核酸检测的联合应用。
2011 HIV抗体确证实验结果不确定样本的检测分析
ml， 结合受检者流行病学资料 ， 最终作出 HIV 抗体阳性结论 。
说明书判断标准进行判读 。 关健词 ： HIV 抗体 ； 不确定 ； 确证试验
［ 结论 ］ 随着 HIV 抗体不确定样本不断增多 ， 特别是一
些特殊病例的出现 ， 现行 HIV 抗体检测策略在实际工作中的应答表现出了一定的滞后性 ； 确证试验检测结果要结合试剂
现代预防医学 2011 年第 38 卷第 3 期
Modern Preventive Medicine ， 2011 ， Vol.38 ， NO.3
中 图 分 类 号 ： R512.91 文献标识码： A
·
533
·
文 章 编 号 ： 1003-8507 （ 2011 ） 03-0533-03
【 实验技术及其应用 】
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2.2
随访检测结果 在距离首次检测 1 个月 、 3 个月后两次 进 行 随 访 ， 采 集 受
MP HIV BLOT2.2 试 剂 ， 该 试 剂 阳 性 判 断 标 准 要 求 ： 检 测 出 两
条 env 带 和 至 少 一 条 pol 带 或 gag 带 。 据 此 我 们 把 3 次 确 证 实 验的结果均判为 “HIV-1 抗体不确定 ”， 这也体现了新 “ 规范 ” 增补判断标准的在实际工作中的操作意义 。 我 国 的 艾 滋 病 检 测 策 略 对 HIV 抗 体 不 确 定 者 ， 采 取 了 随 访的办法 ， 办法规定对于抗体不确定者 “4 周 后 随 访 检 测 ， 如 带型没有进展或呈阴性反应 ， 则报告阴性 ； 如随访期间出现阳 性反应 ， 则报告阳性 ； 如随访期间带型有进展 ， 但不满足阳性 标准 ， 应继续随访到 8 周 ”。 虽 然 有 文 献 显 示 ， 在 HIV 抗 体 不 确 定 者 中 ， 有 相 当 一 部 分 并 非 HIV 窗 口 期 感 染 而 是 因 非 特 异 免疫反应所致 ［3］， 还有一部分最终排除窗口 期 感 染 但 确 证 试 验 结果仍为不确定 ［4］， 但我们需要真正关注的 是 那 些 不 确 定 者 中 真 正 的 HIV 感 染 者 ， 他 们 经 过 漫 长 的 随 访 期 ， 直 至 WB 试 验 较 完 整 条 带 出 现 ， 最 终 得 以 诊 断 HIV 感 染 ， 这 样 的 “ 等 待 ” 让他们承受着巨大的心理压力 ， 同时还耽误其抗逆转录病毒治 疗时间 。 本次研究的病例就是在初检 3 个月后通过病毒载量检 测 结 果 才 得 以 认 定 HIV 感 染 ， 最 终 得 以 享 受 国 家 “ 四 免 一 关 怀 ” 政策获得抗病毒治疗 。 对这一病例处置过程的分析 ， 我们 不难看出现行 HIV 抗体检测策略存在着一定的应答滞后性 。 一 般 情 况 下 ， HIV 抗 体 检 测 足 以 对 HIV 感 染 与 否 作 出 正 确 诊 断 ， 但 在 特 殊 情 况 下 ， 单 纯 HIV 抗 体 检 测 结 果 不 能 进 行 明确的诊断 ， 如在感染早期或疾病终末期出现抗体不确定反应 时 ， HIV 病 毒 载 量 测 定 结 果 可 帮 助 提 供 HIV 感 染 早 期 或 终 末 期 的 证 据 。 本 次 研 究 的 受 检 者 最 终 判 断 为 HIV 抗 体 阳 性 ， 正 是通过病毒载量检测结果结合流 病 调 查 资 料 作 出 的 结 论 。 HIV 感染发生后病毒载量变化具有一定的规律 ， 这种变化与疾病的 进 程 有 着 密 切 的 相 关 性 ， 病 毒 载 量 ﹥ 100 000 IU ／ ml 时 ， 6 年 发 病 率 为 22.4% ［2］。 本 次 研 究 病 例 病 毒 载 量 达 290 000 IU ／ ml， 结合流调资料 ： 其原因不明腹泻持续 1 个月以上 ， 最近 3 个月 体重 下 降 10% 以 上 ， 可 以 初 步 判 断 该 病 人 处 于 疾 病 的 终 末 期 ， 提示应对其进行有针对性的抗逆传病毒治疗 。 参考文献 ： （ 下转第 539 页 ）
87例HIV抗体不确定患者病毒载量检测分析
DOI: 10.13419/j .cnki.aids.2021.01.17•工作研究•87例HIV抗体不确定患者病毒载量检测分析严亚军，桂希恩，冯玲，杨蓉蓉(武汉大学中南医院感染科，武汉430071)摘要：目的探讨病毒载量（VL)检测对87例艾滋病病毒（HIV)抗体不确定患者感染诊断的价值。
方法对蛋白印迹试验(WB)确证为HIV抗体不确定患者进行VL检测及分析，并对这些患者进行随访及流行病学调查，以证实 其感染情况。
结果87例HIV抗体不确定患者中，VL低于检测限18例（20.69%),VL高于检测限69例（79.31%),其 中VL在20~5 000拷贝/mL 4例（4.60%),VL>5 000拷贝/mL65例（74.71%)。
经随访，VL低于检测限者最终排除了 HIV感染，而VL高于检测限者最终诊断为H1V感染。
结论VL检测可以快速准确地鉴别HIV抗体不确定患者是否 感染，是WB的一种有效补充检测试验方法，有助于提高HIV感染的诊断率。
关键词：病毒载量；艾滋病病毒抗体；不确定患者中图分类号：R 512.91; R 373.9 文献标志码：A文章编号：1672-5662(2021 )01-0067-04Analysis of viral load detection in 87 patients with indeterminate HIV-1 antibodies YAN Yajun, GUI Xien, FENG Ling, YANG Rongrong. (Zhongnan Hospital, Wuhan University, Wuhan 430071, Hubei, China)Correspondingauthor:GUIXien,Email:*************Abstract: Objective To evaluate the value of viral load (VL) in diagnosis of 87 patients with indeterminate HIV antibodies. Methods The indeterminate HIV antibody patients confirmed by western blot (WB) were tested with VL, and followed up, then epidemiological investigation were conducted to confirm their infection status. Results Among the 87 patients with indeterminate HIV antibodies, there were 18 (20.69%) cases with VL below the detection limit, 69(79.31%) cases with VL above the detection limit, 4 (4.60%) cases with VL between 20-5000 copies/mL, and 65 (74.71%)cases with VL above 5000 copies/mL. After follow-up, those with VL lower than the detection limit were finally excluded from HIV infection, while those with VL higher than the detection limit were finally diagnosed as HIV infection.Conclusion VL test can quickly and accurately identify whether the HIV antibody is indeterminate and whether they are infected or not. It is an effective test method to supplement WB, which can improve the diagnosis rate of HIV infection.Keywords: viral load; HIV antibody; indeterminate patient目前,蛋白印迹试验(W B)是我国艾滋病确证实 验室诊断艾滋病病毒（H I V)感染的主要方法，但其 缺陷在于对某些特殊患者（如引起非特异性反应的 非H I V感染者、急性期/窗口期H I V感染者、晚期艾 滋病患者等）不能明确诊断，容易产生一定数量的 H I V不确定结果:|:，这不仅给受检者造成极大的精神 压力，还能引起H I V传播的风险=]。
不确定样品的追踪与处理 HIV初筛实验室保密程序制度
不确定样品的追踪与处理 1. 目的规范相关样品的处理 2. 适用范围HIV抗体阴性而近期有过高危行为者的样品、灰区的样品、不确定的样品、HIV抗体阳性的样品、3. 职责3.1 实验室操作人员按照本规则进行样品的追踪与处理3.2 科室负责人负责综合管理。
4. 操作程序4.1样品的范围 4.1.1HIV抗体阴性而近期有过高危行为者为排除窗口期感染的可能报告中必须注明每三个月复查一次连续两次并做好记录通知样品来源单位。
HIV抗体灰区的样品为排除窗口期感染可能报告中每三个月复查一次连续两次并做好记录通知样品来源单位。
收到不确定报告单做好记录并复印一份报告单送流调人员。
收到阳性报告单做好记录并复印一份报告单送流调人员。
对发现并报告的HIV感染者和AIDS病人由疾病控制科进行首次流行病学调查。
对既往的HIV感染者和AIDS病人定期进行随访。
对HIV感染者和AIDS病人密切接触者进行调查随访劝其采样检查并做好记录。
严格保密制度不得向无关人员泄露有关信息。
耐心沟通树立良好的医德和职业道德。
细心随访加强宣传教育让他们全面了解HIV预防知识及传播途径树立对己、对家庭、对社会的高度责任感。
HIV阳性标本的记录按规定妥善保存标本类型、数量、存储温度、时间、保管人等。
试验原始记录、检测记录、标本登记等各种文件记录应妥善保存5年以上。
同时使用计算机保存各种文件和记录。
HIV初筛实验室保密程序制度2010-12-28 来源:检验地带网浏览: 2282次我要评论【字号：大中小】导读： 1 、HIV检测实验室的所有工作人员要具有高度的保密意识。
不得对无关人员透漏任何实验室内部的信息。
2、HIV检测实验室要有专人负责妥善保存与HIV/AIDS相关检测项目的所有资料（包括送检单、各种实验记录、感染者档案、报告单的发放），不得擅自修改和销毁。
1 、HIV检测实验室的所有工作人员要具有高度的保密意识。
不得对无关人员透漏任何实验室内部的信息。
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参数检验中ｔ值分别为０．３９和ｏ．３８，Ｐ值分别为
０．６９６
９和０．７０８ ７。结果显示，病毒载量值与ＣＤ。值
或ＣＤ。：ＣＤ。比值之间不存在线性相关关系。 ５．不确定样本两次病毒载量检测时间与ＷＢ检
测阳转时间间隔：＜５ ｄ共６例，１０～２０ ｄ共３例，
２０～３０ ５０～６０
・９９２・
中华流行病学杂志２０１６年７月第３７卷第７期Ｃｈｉｎ
Ｊ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ，Ｊｕｌｙ ２０１６，Ｖ０１．３７，Ｎｏ．７
・实验室研究・
病毒载量检测对ＨＩＶ抗体确证实验结果 不确定样本的辅助诊断研究
赵璇程绍辉郑敏娜李龙朱静瑾宁铁林
３０００１１天津市疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制所 通信作者：程绍辉，Ｅｍａｉｌ：ｃｈｅｎｇｓｈａｏｈｕｉｌ９７２＠１６３．ｃｏｒｎ
这段时间的延迟会增加传播风险及献血风险。本研 究采取的策略可以缩短不确定样本随访日期０。
８０
ｄ，及早进行抗病毒治疗。而早期抗病毒治疗对
于控制病毒传播是非常重要的。在瑞士的一项研究 中表明停止ＭＳＭ人群早期抗病毒治疗会出现大量 新发感染者，说明目前预防措施并不完善ｎ“。对患者 来说，及早抗病毒治疗能够降低ＨＩＶ感染后患者的死 亡率，促进免疫功能重建，明显降低体内病毒载量。 欧洲地区新的检测规范规定不确定样本如果检
ｔｗｏ
ｖｉｒａｌ】ｏａｄ ｔｅｓｔｓ ｉｎ
Ｔｉａｎｊｉｎ
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Ｆｏｌｌｏｗ ｕｐ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｆｏｒ ｔｈｉｓ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｃｏｎｆｉｒｍ ｔｈｅｉｒ ＨＩＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｓｔａｔｕｓ．Ｒ＇，ｅｓｕｌｔｓ
ＶｉｒＵＳ】ｌｏａｄｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ２ ｖｉｍｌ］ｌｏａｄ ｔｅｓｔｓ．Ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｌｌｏｗ－ｕＤ ｓｕｒｖｅｙ，ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＨＩＶ ａｎｔｉｂｏｄｙ
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．０２５４—６４５０．２０１６．０７．０１７
【摘要】
目的明确在ＨＩＶ抗体确证实验结果不确定，又需及时诊断的情况下，病毒载量检
Ｎｘ寸－诊断的辅助作用：方法对２０１５年天津市ＭＳＭ人群中３２例ＨＩＶ抗体确证实验结果为不确 定的样本进行两次ＨＩＶ病毒载量检测，并对该样本进行跟踪随访和确证实验，以证实其感染情 况。结果３２例样本在ＨＩＶ抗体确证实验结果不确定的情况下，两次病毒载量全部检测到数值， 经随访抗体确证实验全部判为阳性。病毒载量检测结果与抗体确证实验结果相符。结论病毒 载量检测可以对窗口期感染者进行有效的辅助性诊断，可作为抗体确证实验结果不确定样本的辅 助诊断依据。
ｔｅｓｔ
ｗａｓ ｅｆｆｅ，，ｃｔｉｖｅ ｊ１１ ｔｈｅ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｉｔｈ
ｄｉａｇｎｏｓｉｓ
ｏｆ Ｈ：ＩＶ
ｉｎｆＥ，＇ｃｔｉｏｎ ｉ１１ ｗｉｎｄｏｗ ｐｈａｓｅ．ｗｈｉｃｈ
ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ
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１７ａｎｉｉｎ ３０００１ １．Ｃｈｉ凡Ⅱ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｃｈｅｎｇ Ｓｈａｏｈｕｉ．Ｅｍａｉｌ：ｃｈｅｎｇｓｈａｏｈｕｉｌ９７２＠１６３．ｃｏｍ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｉｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ａｕｘｉｌｉａｒｙ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｖｉｒａｌ ｌｏａｄ ｔｅｓｔ ｆｏｒ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｊｉｔｈ ｉｎｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｅ ＨＩＷ ａｎｔｉｂｏＩｅｌｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｉｒｔｙ．ｔｗｏ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｉｔｈ ｊｔｎｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｅ ＨＩＩＶ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ＭＳＭ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ２０ １ ５
０００拷贝／ｍｌ，见表１。
４．不确定样本ＣＤ。值及ＣＤ。：ＣＤ。比值分布情 况：３２例不确定样本ＣＤ。值０～２００个／“ｌ共６例， ２００～５００个／“１共１６例，＞５００个／“１共９例；ＣＤ。：ＣＤ。 结果＜０．１共２例，０．１～０．２共８例，０．２～０．４共９例， ０．４～０．９共１２例，＞ｌ共１例，见表１。 病毒载量值与ＣＤ。值，ＣＤ。：ＣＤ。比值相关性分 析：取自变量为病毒载量值，因变量为ＣＤ。值、ＣＤ。：ＣＤ。
Ｆｕｎｄ ｐｒｏｇｒａｍ：Ｋｅｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
ＨＩＶ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔ；Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ
Ｐｒｏｊｅｃｔｓ
ｏｆＨｅａｌｔｈ Ｂｕｒｅａｕ ｉｎ
Ｔｉａｎｊｉｎ（１４ＫＧｌｌ９）
《全国艾滋病检测技术规范（２００９年版）》中， ＨＩＶ确证用免疫印迹试验（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ，ＷＢ）。ＷＢ 的结果有３种：ＨＩＶ抗体阳性、阴性和不确定。按照 技术规范要求，ＨＩＶ抗体不确定的样本需结合流行 病学资料，在４周后随访检测。随访期间带型有进 展但不满足阳性标准的，应继续随访到８周，周期共 ２个月…。而ＨＩＶ感染的窗口期一般为２～３个月， 最长６个月。有队列研究表明，急性期ＨＩＶ传播能 力是其他阶段的２６倍陋］。近期研究显示在ＨＩＶ检测 中推荐核酸检测，特别是在急性感染期和晚期，可以 万方数据
【关键词】病毒载量；ＨＩＶ抗体不确定；诊断
基金项目：天津市卫生行业重点攻关项目（１４ＫＧｌｌ９）
Ｓｔｕｄｙ
ｏｆ
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ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｖａｌｕｅ
ｏｆ ｖｉｉｒａｌｌ Ｉｏａｄ
ｔｅｓｔ
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ｉｉｎｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｅ ＨＩＶ
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测到ＨＩＶ－１ ＲＮＡ，经过１。２周需重新采血检测，如
提高检测敏感性。由于急性感染期ＨＩＶ以指数形 式增长，其病毒载量值可高达１０６拷贝／ｍｌ，形成高病 毒血症。有研究表明５６％～９２％的新感染是由处在 这个时期的感染者传播的““。因此，及时发现处于急 性期的感染者，能够有效降低传播危险。 有研究表明“ＨＩＶ抗体不确定”样本的检出数量 和比例越来越高ｎ２Ｉ，很多感染者尤其是ＭＳＭ人群， 在感染初期，可能不清楚自己的感染情况，并从事高 危行为ｂ１。本研究结果显示从两次病毒载量检测＞ ５ ０００拷贝／ｍｌ到确证阳性间隔最长可达到８０ ｄ， 万方数据
Ｚｈａｏ Ｘｕａｎ．？Ｃｈｅｎｇ Ｓｈａｏｈｕｉ．，Ｚｈｅｎｇ Ｍｈｍａ，Ｌｉ Ｌｏｎｇ．。Ｚｈｕ
Ｊｔｎ自讯，Ｎ讽ｇ
Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ｏｆ
Ａ ｌＤＳ／ＳＴＤ Ｃｏｎｔｒｏｌ
ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，ＴｔＱ面洫Ｃｅｎｔｅｒｓ
ｆｏｒ
Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒ０１｜ｔ ａｎｄ Ｐｒｅｒｖｅｎｔｉｏｎ，
２．研究方法：天津市所有送检样本按照全国艾
３．不确定样本ＥＬＩＳＡ、ＷＢ及两次病毒载量分 布情况：３２例不确定样本中，有７例两次病毒载量
结果均＜５ ０００拷贝／ｍｌ，其中３例两次病毒载量结果 均＜１ ０００拷贝／ｍｌ，有１例样本病毒载量值最低，为
滋病检测技术规范，使用ＨＩＶ抗原抗体（Ａｇ／Ａｂ）诊 断试剂盒进行复检实验及ＷＢ确证实验。当发现抗 体不确定样本时，２４ ｈ内进行第一次病毒载量检测， 若检测结果＞５ ０００拷贝／ｍｌ，４８ ｈ内进行第二次采 血，进行ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞（ＣＤ。）检测及第二次病毒载 量检测。如果结果仍＞５ ０００拷贝／ｍｌ，提示为ＨＩＶ早 期感染期，结合其流行病学资料及临床症状等，进
不确定样本判定的参考。
本研究中，ＨＩＶ抗体不确定样本的ＷＢ条带主 要为ｐ２４和ｇｐｌ６０。有数据显示，在ＨＩＶ二ｌ感染的血 清阳转期，ｐ２４出现的概率为３８％［９ ３。提示来自 ＭＳＭ人群的样本，其ＷＢ不确定结果为ｐ２４、ｇｐｌ６０ 和其他条带时，应高度怀疑为ＨＩＶ早期感染。在判 断这类样本时要慎重对待，有条件的要检测核酸。
行早期药物治疗，在４周后进行ＷＢ检测。如果第 一次检测结果＜５ ０００拷贝／ｍｌ，但大于检测限（５０拷 贝／ｍ１），４８ ｈ内第二次采血进行病毒载量检测并进
９７拷贝／ｍｌ，经１个月后随访确证为阳性。有１例样 本的病毒载量结果一次＞５ ０００拷贝／ｍｌ，一次＜
５ ５
０００拷贝／ｍｌ，２４例样本的两次病毒载量结果均＞
录入数据，直到两个数据库达到一致性。统计学分 析采用ＳＡＳ ９．３软件。采用一元线性回归分析病毒
在ＨＩＶ抗体不确定样本ＥＬＩＳＡ实验中，ｌ例样 本的ＥＬＩＳＡ实验结果阴性，样本在初筛检测时为弱 阳性，所以被纳入本研究。２ｌ例样本的Ｓ／ＣＯ值＞ １０，３２例样本在之后ｌ。２个月的随访中抗体全部阳 转，提示在对男男性行为高危人群检测时，如果该地 区没有核酸检测的条件，高Ｓ／ＣＯ值可作为辅助ＷＢ
值进行判定。根据检测结果及流行病学情况对感
染者及时用药，控制病情，以防止其在社会上继续
传播。
中华流行病学杂志２０１６年７ｆｌ第３７卷第７期Ｃｈｉｎ
Ｊ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ，Ｊｕｌｙ ２０１６，Ｖｏｌ ３７，Ｎｏ ７
・９９３・
对象与方法 １．研究对象：２０１５年天津市共送检确证样本
１
定样本Ｓ／ＣＯ值阴性１例，１～１０间１ｌ例，＞１０共
２０例，见表１。
２．不确定样本ＷＢ带型分布及随访转归：３２例 不确定样本中３１例有ｇｐｌ６０条带，占９６．９％，２８例有 ｐ２４条带，占８７．５％，４周后经随访确证，均转为阳性，
见表１。
３２３例，其中阳性９６３例，阴性２２６例，不确定１３４例；
在不确定样本中，ＭＳＭ人群来源样本３２例，均选 人本研究。
比值，回归方程显著性检验Ｆ值分别为０．１５和０．１４，
行随访。如果第一次检测结果未到检出限，则报告 本次试验结果未检出。 复检采用ＨＩＶ抗原抗体（Ａｇ／Ａｂ）诊断试剂盒 （北京万泰生物药业股份有限公司），具体操作参照 试剂说明书。确证实验采用ＨＩＶ＿ｌ＋２型抗体免疫 印迹试剂盒（ＭＰ生物医学亚太私人有限公司），具体 操作参照试剂说明书。病毒载量检测采用ＨＩＶ定量 检测试剂盒（法国生物梅里埃公司），具体操作参照 试剂盒说明书。ＣＤ。检测采用美国ＢＤ公司生产的 ＦＡＣｓＣａｌｉｂｕｒ流式细胞仪与四色试剂：ＣＤ３ＦＩＴＣ／