从自然界筛选产乳酸微生物及菌种初步鉴定的毕业论文
食品中乳酸细菌的筛选和鉴定
食品中乳酸细菌的筛选和鉴定食品是人类生活中不可或缺的一部分，而乳酸细菌则是食品产业中的重要组成部分。
乳酸细菌在食品加工过程中起着关键的作用，例如发酵乳制品、面包、啤酒等。
因此，筛选和鉴定食品中的乳酸细菌对于食品安全和质量的保障具有重要意义。
首先，筛选食品中的乳酸细菌应该从源头开始。
当我们选择原料时，应注意选择新鲜且有机的食材。
乳酸细菌通常存在于新鲜的奶制品、蔬菜和水果中。
因此，在生产过程中应该选择高质量的原料，以确保食品中含有丰富的乳酸细菌。
其次，对食品中的乳酸细菌进行鉴定也是非常重要的。
目前常用的方法有传统培养方法和分子生物学方法。
传统培养方法是通过将食品样品接种到乳酸菌富集培养基中，然后根据菌落形态和生理特性进行鉴定。
虽然该方法简单易行，但对于少数难以培养的乳酸细菌则无法准确鉴定。
分子生物学方法是近年来迅速发展的一种鉴定乳酸细菌的新方法。
这种方法基于对乳酸细菌基因组的分析，通过PCR、蛋白质电泳等技术手段来确定乳酸菌的种类和数量。
分子生物学方法具有快速、准确和高通量的特点，可以帮助我们更好地了解食品中乳酸细菌的情况。
此外，筛选合适的乳酸菌应具备以下特点。
首先，应具备较强的耐受性，能够在食品加工过程中存活和繁殖。
其次，应具备较好的产酸能力，确保食品发酵的质量和风味。
最后，应能够对食品中的有害细菌起到一定的抑制作用，从而保证食品的安全性。
乳酸细菌在食品发酵过程中起到的作用不仅仅是改善风味，还具有多种益处。
首先，乳酸细菌能够制造出多种有益物质，例如乳酸、对乳酸菌独有的多种抗菌物质等。
这些物质具有抗菌、抗氧化和免疫调节等作用，对人体健康有益。
其次，乳酸细菌可以帮助消化，改善肠道菌群的平衡，增加人体对营养的吸收。
此外，乳酸细菌还可以帮助降低肠道内有害菌的数量，提高人体的免疫力。
然而，在乳酸细菌的选择过程中也存在一些问题和挑战。
首先，不同种类的食品需要不同的菌株，因此我们需要根据具体产品的特点来选择适合的乳酸菌。
耐酸乳酸菌的筛选及初步鉴定云月英
事食品微生物研究。Tel： （ 0472） 5954358； E － mail： yunyueying1999 @ 163
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Байду номын сангаас
江苏农业科学 2013 年第 41 卷第 1 期
云月英，王文龙，王雅娟． 耐酸乳酸菌的筛选及初步鉴定［J］． 江苏农业科学，2013，41（ 1） ： 256 － 259．
耐酸乳酸菌的筛选及初步鉴定
云月英1，2，3 ，王文龙1，2，3 ，王雅娟1
（ 1． 内蒙古科技大学数理与生物工程学院，内蒙古包头 014010； 2． 内蒙古科技大学数理与生物工程学院生物工程与技术研究所，内蒙古包头 014010；
云月英等： 耐酸乳酸菌的筛选及初步鉴定
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MRS 琼脂培养基上，置 37 ℃ 条件下培养 48 ～ 72 h。如此重 复多次直至长出的菌落形态基本一致，仔细观察记录菌落形 态，挑取单个菌落于 MRS 液体培养基中培养 24 h 后，涂片镜 检，观察并记录菌体的形态特征。若菌体形态不一致，继续划 线培养，直至挑选的菌落经镜检后菌体形态一致，同时进行过 氧化氢酶试验。取新鲜培养物进行革兰氏染色，在光学显微 镜下观察，挑选视野清晰、形态典型的菌体进行拍照。将过氧 化氢酶试验阴性的杆状、球状或链球状革兰氏阳性细菌暂定 为乳酸菌，并进一步纯化培养保存。 1． 2． 4 乳酸菌分离株的保存［3］ 将分离到的疑似乳酸菌的 菌株，用 MRS 液体培养基在 37 ℃ 、24 h 条件下传代培养 3 次 后，离心（ 4 000 r / min、10 min） 沉淀菌体，弃上清液，加入约 5 mL 的灭菌生理盐水，振荡混匀，离心（ 4 000 r / min、10 min） 洗涤菌体（ 23 次） 。弃掉上清液，在洗涤收集的菌体中，加入 已灭菌的细菌细胞保护液（ 脱脂乳 10 g、谷氨酸钠 0． 1 g，溶解 于 90 mL 蒸馏水中，121 ℃ 、7 min 条件下骤冷） 1 mL，充分振 荡混匀，将加有保护剂的菌液，用移液枪移取后置于 1 mL 无 菌冻存管中，置 － 85 ℃ 冻结保存。也可在 MRS 液体培养基 中活化 2 代后，划线接种于 MRS 固体斜面上，37 ℃ 条件下培 养 24 h，生长良好后，置 4 ℃ 冰箱，短期保存。 1． 2． 5 乳酸菌形态学观察 将乳酸菌分离株的供试菌液划 线接种于 MRS 固体培养基上，37 ℃ 恒温培养 24 ～ 48 h，用 10 倍放大镜观察并记录菌落特征。同时将供试菌液进行革兰氏 染色，在显微镜下观察并记录菌体的形态特征。 1． 2． 6 乳 酸 菌 的 产 乳 酸 定 性 试 验［2］ 将 筛 选 得 到 的 纯 菌 株，经增殖和继代活化后，在无菌操作条件下按 4% 的接种量 接入装有约 5 mL 乳 酸 菌 培 养 液 的 试 管 中，35 ℃ 静 置 培 养 24 h。在上述含菌体的发酵液中加入 1 mL 10% H2 SO4 后再 加入 1 mL 2% KMnO4 ，把事先在含氨的 AgNO3 溶液中浸泡的 滤纸条搭在试管上，微火加热至沸，滤纸变黑则说明有其乳酸 存在。每株菌做 2 个平行试验。 1． 2． 7 乳酸菌分离株的活化及供试菌液的制备［3］ 将已纯 化冷冻保存的菌种接种于脱脂乳培养基中，置恒温培养箱中 培养 24 h，如此传代 2 次后，划线于 MRS 固体培养基上，恒温 培养 24 ～ 48 h。挑取单个菌落涂片、固定、革兰氏染色镜检观 察确认为菌株纯培养物后，挑取剩余部分接种于液体 MRS 培 养基中，恒温培养 24 h，反复 3 次后，将最后 1 次液体培养物
产_氨基丁酸乳酸菌的筛选及初步鉴定_李海星
天然产物研究与开发Nat Prod Res D ev 2007,19:455-457,510文章编号:1001-6880(2007)03-0455-04收稿日期:2006-06-20 接受日期:2006-12-15基金项目:江西省教育厅项目(赣教技字[2006]106号)*通讯作者Te:l 86-791-8327754;E-m ai:l yyss ccc @hot m ai .l co m产C - 氨基丁酸乳酸菌的筛选及初步鉴定李海星1,江英英1,曹郁生1,2*1南昌大学中德联合研究院;2食品科学教育部重点实验室,南昌330047摘 要:C -氨基丁酸是哺乳动物体内的一种抑制性神经递质,具有许多重要的生理功能。
利用M RS 培养基从自然生境中分离了1000余株细菌,经纸层析和HPLC 检测,发现其中一株能转化谷氨酸钠生成GABA,产量为4184g /L ;转化产物通过HPLC -M S 得到了证实。
通过形态特征和生化特性鉴定,初步判断该菌为乳酸菌。
关键词:C -氨基丁酸;谷氨酸脱羧酶;乳酸菌;筛选;鉴定中图分类号:Q 939.97文献标识码:AScreeni ng of GABA -produci ng Lactic A ci d Bacteri aand Its Preli m i nary IdentificationLI H a-i x i n g 1,JI ANG Y ing -y i n g 1,CAO Yu -sheng1,2*1J iangx i -OA I Jo int Research Instit ute ;2The K ey Laboratory of Food Science of M OE,N anc hang Universit y,N anchang 330047,Ch i naAbstract :C -Am i nobut y ric ac i d (GABA )is a m a j or i nhi b itory neuro trans m itter i n m a mma ls and has m any physi o log i ca l functi ons .A bou t 1000cultures w ere iso lated and pur ified fro m nat u ra l env iron m ents w ith MR S m edia .Am ong t he m,one stra i n can conv ert g l uta m a te i nto GA BA by screen i ng o f paper ch ro m a t og raphy and HPLC .The product was ver ifi ed by HPLC -M S .T he GABA y i e l d o f the stra i n w as 4.84g /L .T he stra i n w as pre li m i nar illy identifi ed as lactic ac i d bacter i a by m orpho logy and so m e bioche m ica l character istics .K ey word s :C -am inobuty ric acid ;g l uta m ate decarboxy lase ;l actic ac i d bacter i a ;sc reeni ng ;identifi cation谷氨酸脱羧酶(G l u ta m ate decar boxylase ,GAD,EC4.1.1.15)是一种吡哆醛类裂解酶,能专一地催化L-谷氨酸生成C -氨基丁酸(C -Am i n obutyric acid ,GAB A ),同时放出CO 2。
苯乳酸的乳酸菌分离筛选及菌种鉴定
１．１试验材料 １．１．１样品采集
泡菜样品购自无锡天润发超市。 １．１。２培养基
ＭＲＳ培养基（ｇ／Ｌ）：葡萄糖２０，酵母膏５，蛋白 胨１０，牛肉膏１０，Ｋ：ＨＰＯ。２，乙酸钠５，柠檬酸二铵 ２，ＭｇＳ０４·７Ｈ２０ Ｏ．５８，ＭｎＳＯ。·４Ｈ２０ Ｏ．２５，吐温 ８０ １ｍＬ。调ｐＨ至６．２～６．４。
苯乳酸（ｐｈｅｎｙｌｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ，ＰＬＡ），也称３一苯基乳 酸或ｐ一苯乳酸，即２一羟基一３一苯基丙酸，是近年来发现 的一种新型天然防腐剂。１９９８年，Ｄｉｅｕｌｅｖｅｕ Ｘ［１］发现 白地霉（＆ｏ￡矗ｃ，Ｌ“ｍ ｆ彻ｄｉｄ“ｍ）发酵的干酪对单核 细胞增生李斯特菌（“５抛ｒ如ｍｏ规ｏｃｙ￡ｏｇＰ７２ｅｓ）有很强 的抑制作用，通过分离、鉴定，最终确定苯乳酸是其中 的主要抑菌物质。２００３年，Ｌａｖｅｒｍｉｃｏｃｃｏ［２３研究了苯 乳酸对多种引起食品腐败的真菌的作用，发现其有宽 广的抑菌谱，如抑制黑曲霉（ＡｓｐＰ，．ｇ删“ｓ行ｉｇｅｒ）、黄 曲霉（Ａｐ已ｒｇ删淞．∥ｎ铆甜ｓ）、娄地青霉（Ｒ佗ｉｃⅢｉ“ｍ ｒＤｇ粥．加以ｉ）等。与Ｎｉｓｉｎ（乳链球菌素）相比，苯乳酸 抑菌谱宽，能抑制多种食源性致病菌、腐败菌，特别是 能抑制真菌污染；溶解性好，易于在食品体系中扩散； 稳定性高，具有宽广的ｐＨ范围和热稳定性，这些优 点决定了它在食品工业具有广阔的应用前景［３￣５］。
万方数据
图４
Ｌｎｃ￡ｏ机ｃｉＺＺ“ｓ ｓｐ．ＳＫ００７ １６Ｓ ｒＤＮＡ
序列的系统发育树
！！！！望蔓塑鲞蔓！塑（璺蔓！！旦塑２ｌ ３
■盈国霉幽！望Ｑ里垒塑！！！坚！堕！垒！！型！蔓望旦！！！！型
同。把１６Ｓ ｒＤＮＡ作为鉴定依据的是其中的可变区， 因此截去序列两端保守区的一些小片段不会影响结 果，所以利用Ｃ１ｕｓｔａｌｘ做的系统发育树较为可信。 此外，结果表明，用１６Ｓ ｒＤＮＡ序列鉴定乳酸菌时较 适用于属以上的分类单位，但对属以下的分类单位， 如种和亚种就显得分辨率不足。
乳酸菌毕业设计
乳酸菌毕业设计乳酸菌毕业设计毕业设计是每个大学生必须完成的重要任务之一。
在我即将毕业的时候，我选择了乳酸菌作为我的毕业设计的研究对象。
乳酸菌是一类广泛存在于我们日常生活中的微生物，它具有许多重要的功能和应用价值。
通过对乳酸菌的深入研究，我希望能够为乳酸菌的应用领域做出一些贡献。
乳酸菌是一类革兰氏阳性菌，能够在无氧条件下通过乳酸发酵产生乳酸。
乳酸菌广泛存在于我们的食品中，比如酸奶、酸黄瓜等。
这些食品不仅味道酸甜可口，而且还具有许多益生菌的功能。
乳酸菌可以改善肠道菌群平衡，增强免疫力，预防肠道疾病等。
因此，乳酸菌在保健品和食品工业中有着广泛的应用前景。
在我的毕业设计中，我选择了一种具有潜在应用价值的乳酸菌进行研究。
首先，我通过文献调研了解到该乳酸菌具有较高的耐受性和适应性，能够在不同环境条件下生存和繁殖。
接下来，我进行了一系列实验，研究了该乳酸菌的生长特性、代谢产物和对人体健康的影响等方面。
实验结果显示，该乳酸菌在低温、酸性和高盐等环境条件下仍能够生存和繁殖，这表明它具有较高的耐受性。
此外，该乳酸菌在发酵过程中产生的乳酸含量较高，具有较强的抗菌作用。
这些结果为该乳酸菌在食品工业中的应用提供了理论基础。
除了对该乳酸菌的基本特性进行研究外，我还对其对人体健康的影响进行了评估。
通过动物实验和人体试验，我发现该乳酸菌具有调节肠道菌群、增强免疫力、降低胆固醇和改善消化功能等作用。
这些结果表明，该乳酸菌有望成为一种新型的益生菌，有助于预防和治疗肠道相关疾病。
基于以上研究结果，我进一步探索了该乳酸菌在食品工业中的应用潜力。
通过发酵实验，我成功地将该乳酸菌应用于酸奶和酸黄瓜等食品的生产中。
与传统产品相比，添加了该乳酸菌的产品不仅口感更好，而且具有更多的益生菌含量。
这些结果为该乳酸菌在食品工业中的推广应用提供了实践基础。
通过我的毕业设计，我深入研究了乳酸菌的生物学特性、应用潜力和对人体健康的影响等方面。
我相信这些研究结果对乳酸菌的应用领域有着重要的意义。
微生物发酵生产l-乳酸研究
were 2.20 g/(L·h) and 2.29 g/(L·h), respectively. The conversion of glucose to lactic acid were 90.36% and 93.34%, respectively.(3) L. rhamnosus DLF-15038 was used as the wild strain, and UV and DES mutagenesis were carried out. The mutagenic conditions were as follows: the concentration of bacteria of 10-6, UV mutagenesis time 3 min; 1% DES mutagenesis time 20 min, 38℃. After 6 passages, the mutant strain was found to have good genetic stability and named it Lactobacillus rhamnosus DLF-15041, providing a good strain for lactic acid fermentation. Finally, the batch and fed-batch fermentation are carried in a 5 L fermentor, the concentration of L-lactic acid were 167.45 g/L and 173.26 g/L, and the yield were 2.33 g/(L·h) and 2.41 g/(L·h), respectively. The conversion rates of glucose to lactic acid were 93.52% and 93.23%, respectively.Key Words：Lactic Acid; Cottonseed Meal; Mutagenesis;Lactobacillus rhamnosus目录摘要 (I)Abstract (II)引言 (1)1 研究背景 (2)1.1 乳酸的介绍 (2)1.1.1 乳酸的结构性质 (2)1.1.2 乳酸的应用 (3)1.1.3 乳酸生产方法 (4)1.1.4 乳酸提取方法 (7)1.2 发酵产乳酸的菌种 (7)1.2.1 乳酸菌的营养要求 (8)1.2.2 乳酸菌的培养条件 (8)1.3 乳酸发酵工艺进展 (9)1.3.1 优良菌种筛选与改造 (10)1.3.2 廉价原料替代 (11)1.3.3 乳酸发酵工艺研究 (13)1.4 课题的研究意义及内容 (14)1.4.1 课题研究意义 (14)1.4.2 课题研究内容 (15)2 L-乳酸高产菌株的筛选与鉴定 (16)2.1 引言 (16)2.2 实验材料 (16)2.2.1 筛选样本 (16)2.2.2 实验试剂和仪器 (16)2.2.3 培养基 (18)2.3 实验方法 (18)2.3.1 实验步骤 (18)2.3.2 实验样品处理 (18)2.3.3 菌株筛选方法 (19)2.3.4 L-乳酸产量测定 (19)- IV -2.3.5 L-乳酸光学纯度的检测 (19)2.3.6 菌株形态学观察 (20)2.3.7 菌株16S rRNA序列扩增与分析 (20)2.3.8 菌株生理生化鉴定 (21)2.4 实验结果与讨论 (22)2.4.1 高产L-乳酸菌株筛选 (22)2.4.2 菌株鉴定 (22)2.5 本章小结 (27)3 L-乳酸发酵条件优化 (28)3.1 引言 (28)3.2 实验材料 (28)3.2.1 菌株 (28)3.2.2 实验试剂与仪器 (28)3.2.3 培养基 (29)3.3 实验方法 (29)3.3.1 发酵培养基的初步优化 (29)3.3.2 单因素实验优化发酵条件 (30)3.3.3 响应面法（RSM）优化菌株发酵条件 (31)3.3.4 响应面模型验证实验 (32)3.3.5 5L发酵罐中批式发酵实验 (32)3.3.6 5L发酵罐中批式流加发酵实验 (32)3.3.7 分析方法 (32)3.4 实验结果与讨论 (33)3.4.1 发酵培养基的初步优化 (33)3.4.2 单因素实验优化发酵条件 (38)3.4.3 响应面法（RSM）优化菌株发酵条件 (43)3.4.4 响应面模型验证实验 (47)3.4.5 5L发酵罐中批式发酵实验 (48)3.4.6 5L发酵罐中批式流加发酵实验 (48)3.5 本章小结 (49)4 高产L-乳酸菌株的诱变选育 (51)4.1 引言 (51)4.2 实验材料 (51)4.2.1 菌株 (51)4.2.2 实验试剂与仪器 (51)4.2.3 培养基 (52)4.3 实验方法 (52)4.3.1 菌株活化 (52)4.3.2 菌株生长曲线的确定 (52)4.3.3 紫外诱变选育高产L-乳酸菌株 (52)4.3.4 硫酸二乙酯诱变选育高产L-乳酸菌株 (53)4.3.5 5L发酵罐中批式发酵实验 (54)4.3.6 5L发酵罐中批式流加发酵实验 (54)4.4 实验结果与讨论 (54)4.4.1 菌株生长曲线确定 (54)4.4.2 紫外诱变选育高产L-乳酸菌株 (55)4.4.3 硫酸二乙酯诱变选育高产L-乳酸菌株 (57)4.4.4 突变菌株稳定性研究 (60)4.4.5 5L发酵罐中批式发酵实验 (60)4.4.6 5L发酵罐中批式流加发酵实验 (61)4.5 本章小结 (62)结论 (63)创新点： (64)参考文献 (65)附录A 附录内容名称 (71)攻读硕士学位期间发表学术论文情况 (76)致谢 (77) (78)- VI -引言乳酸又名2-羟基丙酸，作为一种重要的多用途天然有机酸，目前主要应用在化工、食品、化妆品、医药、轻工、环保等领域[1, 2]。
自然发酵乳中优良乳酸菌株的筛选及发酵条件研究
自然发酵乳中优良乳酸菌株的筛选及发酵条件研究微生物学：严以兰指导教师：张小平教授本研究以分离自川西高原牧区自然发酵酸乳中的109株乳酸菌（其中杆菌59株，球菌50株）为研究对象，经过一系列发酵试验、指标测定以及菌种组合等，确定了发酵酸乳的最佳菌种、菌种组合及发酵条件。
获得主要研究结果有：第一阶段：初筛通过转接实验初步测定了109株乳酸菌的遗传稳定性，得到29株转接20次后，具有稳定产酸速率和良好感官的菌株；对29株乳酸菌进行温度试验，综合考虑凝乳时间，凝乳酸度及感官，确定了最适发酵温度为42℃；同时，得到8株发酵时间短、凝乳状态好、香味独特菌株3-7、4-1、4-7、6-2、B-2、E-1、E-5、J-2，其中球菌2株，杆菌6株。
第二阶段：复筛研究了8株菌在液体培养基及牛乳中的生长曲线，确定了在液体培养基中，球菌10h、杆菌14h指数生长期结束；制备发酵剂时，球菌10h、杆菌12～14h迅速收获可得到理想品质的发酵剂。
在42℃发酵，研究了8株菌发酵性能及保藏性能，8株菌都具有较好的发酵性能，且球菌3-7、6-2及杆菌E-1、E-5具有弱后酸化特性，保藏期内品质稳定；研究这4株菌的抗逆性，杆菌比球菌更能耐受酸性环境：2株球菌在pH3.5以下生长几乎完全受抑制，杆菌在pH2.5仍有明显生长；6-2在胆盐浓度为0.1%生长几乎完全受抑制，其余3株菌则能耐受此胆盐浓度；4株菌在6% NaCL浓度均生长较好，3-7在8%浓度下生长也明显；2株球菌对指示菌株均无抑制作用，2株杆菌则均表现抑制作用；对青霉素药物最敏感。
第三阶段：组合发酵研究了4株菌之间协同关系，筛选到最佳发酵组合菌株是D4：(3-7：E-1：E-5=2：1：1)，通过正交实验得到组合菌株最佳发酵工艺参数：培养温度42℃，接种量3%，加糖量7%。
组合菌株发酵时间比单菌发酵明显缩短，后酸化弱，粘度高，乙醛含量高，活菌数稳定在1010cfu/ml以上。
乳酸菌的分离与筛选具体实验流程
乳酸菌的分离与筛选具体实验流程1. 引言1.1 背景介绍乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的细菌，它们能够以乳酸为代谢产物进行无氧发酵，并且在食品工业、农业和医学领域具有重要的应用价值。
乳酸菌不仅能够促进食品品质的改善和保鲜，还对人体健康具有积极影响。
然而，目前市面上存在许多商业化的乳酸菌制剂，其有效成分及效果并不尽相同。
因此，研究和筛选出优质活性的乳酸菌种类，具有重要意义和广阔前景。
1.2 研究意义本研究旨在通过分离与筛选方法得到高活性的乳酸菌。
通过该研究可以加深我们对乳酸菌及其作用机制的理解，并为特定领域如食品工业、农业等提供先进的技术支持和解决方案。
此外，筛选出具有优良特性的乳酸菌株也将为开发新型功能性食品、生物农药等领域的产品提供重要支持。
因此，本研究对于推动食品工业、农业发展具有积极意义。
1.3 实验目的本实验主要目的如下：- 收集和处理样品：收集富含乳酸菌的样品，并经过适当处理以提高分离效果。
- 选择与制备分离培养基：根据乳酸菌的特性选择适合的培养基并进行制备。
- 设定分离培养条件：通过调控温度、pH值等参数，确定适宜的乳酸菌分离培养条件。
- 鉴定活性乳酸菌指标：确定评价乳酸菌活性和质量的指标，并进行相关试验和检测。
- 设计与实施筛选试验：根据所选指标设计筛选试验，并在实验中采用相应方法进行实施。
- 可行性评估与结果分析：对筛选试验结果进行评估和分析，并总结可行性及相关优化建议。
通过以上实验流程，我们旨在深入了解乳酸菌的特点及其在不同领域中应用潜力，并为进一步研究和开发具有市场竞争力的乳酸菌产品提供理论和实践基础。
2. 乳酸菌的分离方法2.1 样品收集与处理在乳酸菌的分离研究中，样品的选择和处理十分重要。
我们可以选择不同来源的样品，如发酵食品、生态环境等。
收集样品后，需要进行适当的处理以消除非目标微生物对于乳酸菌生长和筛选的干扰。
常见的样品处理方法包括冷藏、过滤、稀释等。
2.2 分离培养基选择与制备为了促进乳酸菌的分离和生长，在实验中需要选择适宜的分离培养基。
实验一 乳酸杆菌的分离及初步鉴定
一、实验目的1、学习掌握食品中乳酸杆菌的常规分离方法并作初步的鉴别。
2、学会十倍系列稀释和倒平板的方法。
二、实验原理乳酸杆菌为厌氧和微好氧菌，革兰氏染色阳性，可以发酵葡萄糖或乳糖产生乳酸，并将培养基中的碳酸钙溶解。
有些菌如保加利亚乳杆菌在15℃时不生长，在45℃甚至50℃时生长，最适生长温度为40—43℃；而有些菌如植物乳杆菌在15℃生长，45℃时一般不生长，最适生长温度为30℃左右。
通常我们利用这些特点可作初步的鉴别。
二、实验原理三、实验材料和仪器1、酸牛奶1瓶，泡菜汁1管，9ml生理盐水5管，MRS培养基100ml，灭菌CaCO3 3克（用纸包）。
2、40℃和30℃恒温箱，振荡器，超净工作台，1ml 无菌吸管5支，培养皿6套，革兰氏染色液1套。
四、实验方法与步骤1. 将酸奶和泡菜汁分别制成10倍系列稀释液。
2. 取适当稀释度之稀释液0．5或1ml于培养皿中。
3. 以无菌操作把无菌CaCO3 加入融化了的MRS培养基中，于自来水中迅速冷却培养基至45℃左右。
轻摇使CaCO3混均，但不得产生气泡。
立即倒入培养皿中，摇匀。
4. 待培养基凝固后，倒置放于40℃和30℃恒温箱中培养（酸牛乳样品在40℃下培养；酸泡菜汁样品在30℃下培养）五、实验结果观察24或48小时后取出检查。
（1）泡菜汁样品中，菌落周围产生CaCO3圈，菌落直径为1～3mm，乳白色偶有浓色或暗黄色。
用接种环挑少许涂片。
革兰氏染色镜检为G+，菌体大小约0.9～1.2×3～8μm，单生，成对或短链。
五、实验结果观察24或48小时后取出检查。
（2）酸牛奶样品中菌落直径1～3mm，无色素，呈白色至淡灰色。
通常菌落表面粗糙，革兰氏染色镜检为G+，细胞宽2μm，细胞较长有时呈线形，幼龄培养物中单生或成对。
五、实验结果观察六、思考题1、融化后的培养基为什么要迅速冷却到50℃左右倒平板？2、培养基中加入CaCO3的目的是什么？谢谢。
《抗真菌乳酸菌的抗菌成分分离鉴定及在奶酪保鲜中的应用》范文
《抗真菌乳酸菌的抗菌成分分离鉴定及在奶酪保鲜中的应用》篇一一、引言近年来，食品安全和保鲜技术成为国内外研究热点。
在食品中，乳酸菌因具有抑制病原微生物和保持食品质量的作用，得到了广泛的关注。
尤其是在奶酪的保鲜方面，乳酸菌展现出了显著的效果。
本论文以抗真菌乳酸菌为研究对象，对其抗菌成分进行分离鉴定，并探讨其在奶酪保鲜中的应用。
二、材料与方法1. 材料（1）乳酸菌菌种：从自然环境中筛选出的具有抗真菌特性的乳酸菌。
（2）奶酪样品：选取不同种类的奶酪作为实验对象。
2. 方法（1）抗菌成分的分离与纯化：通过细胞破碎、萃取、分离纯化等步骤，从乳酸菌中分离出抗菌成分。
（2）抗菌成分的鉴定：采用高效液相色谱法、红外光谱分析等手段，对分离出的抗菌成分进行结构鉴定。
（3）抗真菌活性的研究：利用培养皿法测定不同浓度的抗菌成分对常见真菌的抑制作用。
（4）在奶酪保鲜中的应用：将抗菌成分添加到奶酪中，观察其对奶酪保鲜效果的影响。
三、实验结果与分析1. 抗菌成分的分离与鉴定经过一系列的分离纯化过程，我们成功地从乳酸菌中分离出一种名为LAC的抗菌成分。
通过高效液相色谱法，我们发现LAC在特定波长下的色谱峰与已知抗菌成分类似。
同时，通过红外光谱分析，确定了LAC的主要结构为一种肽类物质。
2. 抗真菌活性的研究我们选取了常见的几种真菌进行抗性测试，结果表明LAC对这几种真菌均具有显著的抑制作用。
随着LAC浓度的增加，真菌的生长受到越来越大的抑制。
这表明LAC是一种有效的抗真菌物质。
3. 在奶酪保鲜中的应用我们将LAC添加到不同种类的奶酪中，观察其对奶酪保鲜效果的影响。
实验结果表明，添加了LAC的奶酪在保质期内质量保持得更好，未出现明显的腐败现象。
与未添加LAC的奶酪相比，添加LAC的奶酪的保质期延长了约XX%。
这表明LAC对奶酪保鲜具有良好的效果。
四、讨论本研究成功地从乳酸菌中分离出一种名为LAC的抗菌成分，并对其进行了结构鉴定和抗真菌活性的研究。
《2024年动物源性乳酸菌筛选及对青贮原料发酵效果研究》范文
《动物源性乳酸菌筛选及对青贮原料发酵效果研究》篇一一、引言随着人们对健康饮食的追求，乳酸菌因其对肠道健康的积极影响，日益受到人们的关注。
乳酸菌具有多种功能，包括调节肠道微生态平衡、提高免疫力等。
近年来，动物源性乳酸菌的筛选和发酵工艺的改进在饲料发酵方面引起了广泛的关注。
本研究主要对动物源性乳酸菌进行筛选，并研究其对青贮原料的发酵效果。
二、材料与方法（一）实验材料本实验选用多种动物源乳酸菌进行筛选，包括牛奶、肉类及其它动物肠道等来源的乳酸菌。
同时，选取常见的青贮原料如玉米秸秆、苜蓿等作为实验对象。
（二）实验方法1. 乳酸菌的筛选与鉴定：从不同来源的样品中分离出乳酸菌，通过形态学观察、生理生化试验和分子生物学鉴定方法对乳酸菌进行筛选和鉴定。
2. 发酵条件优化：以筛选出的乳酸菌为基础，对青贮原料进行不同发酵时间的试验，找出最佳发酵时间及工艺参数。
3. 发酵效果评价：通过对青贮原料的发酵产物进行理化性质分析、微生物群落结构分析以及营养价值评估等方法，评价乳酸菌对青贮原料的发酵效果。
三、结果与分析（一）乳酸菌的筛选与鉴定结果经过筛选和鉴定，成功分离出多种具有优良特性的动物源性乳酸菌。
这些乳酸菌在形态学、生理生化特性等方面具有显著差异，具有较高的研究价值和应用潜力。
（二）发酵条件优化结果通过不同发酵时间的试验，发现最佳发酵时间为XX小时。
此时，乳酸菌的活性达到最高，青贮原料的发酵效果最好。
同时，还发现温度、pH值等参数对发酵效果也有一定影响。
（三）发酵效果评价结果1. 理化性质分析：经过乳酸菌发酵的青贮原料，其pH值降低，酸度增加，有利于保存和延长保质期。
同时，发酵过程中产生的乳酸等有机酸有助于提高青贮原料的营养价值。
2. 微生物群落结构分析：乳酸菌的加入显著改变了青贮原料中的微生物群落结构，使有益菌群数量增加，有害菌群数量减少。
这有助于提高青贮原料的品质和安全性。
3. 营养价值评估：经过乳酸菌发酵后，青贮原料中的蛋白质、纤维等营养成分得到了更好的保留和利用。
产细菌素乳酸菌筛选及其纯化和稳定性的研究
产细菌素乳酸菌株的分离
菌种初筛
将采集到的婴儿粪便用生理盐水进行10倍递增稀释， 得到稀释度分别为10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6 的样品，并将其均匀地涂布于含有0.02g/ml CaCO3的 MRS平板上，于30℃培养48h，挑取有溶 钙圈的单菌落于含有溴甲酚紫的MRS培养基划线分 离，反复纯化．挑取单菌落进行革兰氏染色，镜检， 观察乳酸菌的形态及颜色是否一致。
细菌素的酸碱稳定性
将发酵液用 HCL和NaOH调节 到不同的pH值，于 25℃处理2h，金黄 色葡萄球菌为指示 菌，MRS培养基为 空白对照，以抑菌 圈直径的大小反映 该细菌素的酸碱稳 定性。
细菌素在不同pH条件下的热稳定性
将F-6-B菌株发酵离心上清液分别调至不同的pH值，然后在不同的温度下处 理不同的时间，最后回调至中性环境，以未经处理的原液作为对照，检测抑菌 活性。
抑菌试验
按体积分 数1%接种
30℃，48h 连续培养 3 代 5mL MRS 培 养基
离心（4℃，15min） 上清用 0.22μm滤膜过滤 , 滤 液用1M NaOH调节pH7.0
乳酸菌
取 100μL 涂布
连续培养3代
采用牛津杯法进 行筛选
指示菌培养液 OD600=0.1
LB 培 养 基 （ 李 斯特菌涂布于 CM502 培 养 基 ）
Thank you
产细菌素乳酸菌的筛选及 其纯化和稳定性研究
陈 沛，王雪青，阮海华
天津师范大学学报，2011,32（2）：82-85
乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳 酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳 性细菌的总称。凡是能从葡萄糖 或乳糖的发酵过程中产生乳酸的 细菌统称为乳酸菌。
从自然界筛选产乳酸微生物及菌种初步鉴定的毕业论文
从⾃然界筛选产乳酸微⽣物及菌种初步鉴定的毕业论⽂从⾃然界筛选产乳酸微⽣物及菌种初步鉴定的毕业论⽂⽬录摘要 ............................................................................................. 错误！未定义书签。
Abstract ................................................................................................ 错误！未定义书签。
1 绪论 (2)1.1 乳酸菌的概述 (2)1.2 乳酸菌的基本属性 (3)1.3 乳酸菌的发展时期及分类 (4)1.3.1 乳酸菌的发展时期 (4)1.3.2 乳酸菌的分类 (4)1.4 乳酸菌的发酵特性 (4)1.5 乳酸菌的应⽤ (5)1.5.1 乳酸菌在⾷品领域的应⽤ (5)1.5.2 乳酸菌制剂 (5)1.6 乳酸菌的⽣理作⽤和作⽤机理 (6)1.6.1 乳酸菌的⽣理作⽤ (6)1.6.2 乳酸菌的作⽤机理 (6)1.7 乳酸菌的国内外发展现状 (8)1.7.1 乳酸菌的发展历史 (8)1.7.2 乳酸菌的发展现状 (9)1.8 乳酸的⽣产及应⽤ (9)1.8.1 乳酸的概述 (9)1.8.2 L—乳酸的⽣产 (9)1.8.3 乳酸提取⼯艺 (11)1.9 本课题的⽬的及研究的意义 (13)2 实验部分 (11)2.1 实验材料与仪器 (11)2.1.1 实验材料 (11)2.1.2 实验仪器 (11)2.1.3 实验试剂 (12)2.1.4 实验培养基 (12)2.2 实验⽅法 (13)2.2.1 从⾃制酸菜汁中分离提纯乳酸菌的思路和原理 (13)2.2.2 培养条件 (13)2.2.3 菌种储藏 (13)2.2.4 样品采集 (13)2.2.5 乳酸菌的分离和筛选 (14)2.2.6 乳酸菌的产酸定性定量试验 (14)2.2.7 乳酸菌的⽣理⽣化鉴定 (14)3 结果与讨论 (16)3.1 乳酸菌的形态学鉴定 (16)3.1.1 初步分离 (16)3.1.2 乳酸菌的复筛 (16)3.1.3 菌株形态 (17)3.2 乳酸菌的产酸定性定量试验 (18)3.2.1 菌株产乳酸试验 (18)3.2.2 乳酸定量试验 (18)3.3 乳酸菌的⽣长过程鉴定 (19)3.2.1 乳酸菌在37℃恒温培养pH值变化 (19)3.2.2 菌株最适⽣长起始pH值的确定 (19)3.2.3 乳酸菌株耐盐性的确定 (20)3.2.4 乳酸菌的不同温度⽣长鉴定 (21)3.3 乳酸菌的⽣理⽣化鉴定 (23)结论 (26)参考⽂献 (27)致谢 (29)绪论1.1乳酸菌的概述乳酸菌是对能利⽤可发酵碳⽔化合物产⽣出⼤量乳酸的⾰兰⽒阳性细菌的通称。
产细菌素乳酸菌的筛选及鉴定
产细菌素乳酸菌的筛选及鉴定摘要：采用琼脂平板扩散实验，从湖南传统发酵腊肉和香肠中筛选出3株对单核增生李斯特菌（Listeria monocytogene54002）具有明显抑制作用的乳酸菌，排除酸和过氧化氢的干扰后，仍具有抑菌活性，而用胰蛋白酶和胃蛋白酶处理以后，其抑菌活性消失，因此确定该抑菌物质为蛋白质类物质，即细菌素。
三株菌所产细菌素具有一定热稳定性，在pH5～10之间仍具有一定的抑菌活性。
通过生理生化实验和16S rRNA基因序列分析对3株菌进行了鉴定。
PCR扩增得到1600bp左右的16S rRNA基因序列，将序列通过BLAST软件在NCBI网站上进行同源性对比，并通过MEGA5.0软件绘制系统发育树。
结果显示3株菌的16S rRNA序列和数据库中的屎肠球菌的序列同源性均在99%以上，这与生理生化实验初步鉴定结果一致。
关键词：细菌素，筛选，屎肠球菌Identification and screenging of bacteriocin-producing lactic acid bacteriaAbstract：Three lactic acid bacterium were isolated from Hunan traditonal fermented meats，which exhibitedstrong inhibitory activity against Listeria monocytogenes 54002. After eliminating the interference factors suchas the organic acids，hydrogen peroxides，the inhibitory activity still existed. But inhibitory activity was lost aftertreatment with trypsin and pepsin. Therefore，the inhibiotory substance could be classed as bacteriocin. Thebacteriocin exhibited good thermal stability and its active pH range from 5~10. The three bacteriocin-producingbacteria were identified on the base of physiological and biochemical characteristics and 16S rRNA genesequence. The sequence fragments around 1600bp 16S ribosomal RNA were amplified from total DNA of thethree isolated strains by PCR. The sequence was completed by the application of BLAST on the websites ofNCBI and phylogenetic tree was drawn with MEGA5.0. According to the high homology of 16S rRNA sequence，the three bacteriocin-producing bacteria was identified as Enterococcus faecium. Key words：bacteriocin；screening；Enterococcus faecium细菌素是由某些细菌产生的一类抑菌物质，是由细菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产生的一类多肽类物质[1]。
乳酸菌的分离及初步鉴定
学院：漓江学院年级专业：09生物技术组员：吴汉川200913007005杨隆荷200913007006李翠200913007007王志远200913007008乳酸菌的分离及初步鉴定一、实验目的1了解和掌握放线菌的菌种特性和分离方法2初步掌握军中筛选方法设计3掌握平菌种的选育二、实验原理乳酸菌是指以糖为原料，属于真细菌纲真细菌目中的乳酸细菌科。
乳酸细菌科根据细胞呈球状或呈杆状，又分成乳酸杆菌族和链球菌族。
在BCG 牛乳培养基琼脂平板上，乳酸菌菌落大约1-3 mm，圆形隆起，表面光的溶滑或稍粗糙，呈乳白色、灰白色或暗黄色；在产酸菌落周围还能产生CaCO3解圈。
乳酸菌革兰氏染色呈阳性，涂片镜检细胞杆状或链球状。
乳酸杆菌呈杆状，成单杆、双杆或长丝状；乳酸杆菌，呈球状，成对或短链或长链状。
乳酸菌革兰氏染色后呈蓝紫色。
平板涂布法平板涂布法是将样品经稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单个细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个但菌落代表原样品中的一个单细胞。
生理盐水：称取9g氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到1000毫升。
四、实验器材与试剂含乳酸菌的酸奶、结晶紫、卢哥氏碘液、95%乙醇、蕃红溶液、灭菌CaCO3粉末、NaCl；BCG牛乳培养基：(A)溶液：脱脂乳粉100g，水500mL，加入1.6%溴甲酚绿(B.C.G)乙醇溶液1mL，80℃灭菌20min。
(B)溶液：酵母膏10g，水500mL，琼脂20g, pH6.8, 121℃湿热灭菌20min。
以无菌操作趁热将(A)、(B)溶液混合均匀后倒平板。
1000ml烧瓶一个, 无菌培养皿9个, 500ml容量三角瓶2个，25ml无菌移液管1只，20ml无菌试管7只，1ml无菌移液管6只，培养基分装器一个，玻棒2根, 无菌涂布器3只，酒精灯一盏，接种环一个，天平，牛角匙，漏斗，漏斗架，载玻片，盖玻片，pH试纸若干，液体石蜡，棉塞，吸管，牛皮纸，线绳、标签等。
乳酸菌的分离和初步鉴定
乳酸菌的分离和初步鉴定刘海音张超(长春师范学院生物系，长春，130032)摘要：本文采用BCG牛乳培养基琼脂平板筛选乳酸菌，经过连续6次以上的传代，以达到分离提纯，镜检时观察到链球状和杆状两种形状。
为了鉴定分离出的菌种，做了一系列的生理生化反应实验，如吲哚试验的反应结果为阴性，糖发酵试验的反应结果为阳性。
此外还进一步做了小型发酵实验，检测出了乳酸的存在⑴。
以上实验结果符合乳酸菌的特征，从而证实该分离出的菌种为乳酸菌，杆状的叫做短乳杆菌，链球状的叫做乳链球菌。
关键词：乳酸菌分离鉴定乳酸菌为一群可发酵碳水化合物以获取能量，并生成大量乳酸的一类细菌的总称。
利用发酵技术保藏食品，最典型的是通过乳酸菌的发酵。
这在发酵乳工业中已经得到广泛的应用。
利用天然的或经筛选的乳酸菌发酵，已经生产出多种不同类型的发酵乳。
因而分离和鉴定乳酸菌对人类的生产和生活都具有非常重要的意义。
本报告采用BCG牛乳培养基琼脂平板筛选和分离乳酸菌，利用镜检观察到了链球状和杆状两种形状。
通过吲哚试验和糖发酵试验以及小型发酵实验证明该菌种为乳酸菌，杆状的叫做短乳杆菌，链球状的叫做乳链球菌1. 材料和方法1.1材料1.1.1 选用沈阳乳业有限责任公司乳品一厂生产的辉山纯酸奶1.1.2 培养基BCG牛乳培养基A(溶液)：脱脂奶粉100g, 水500 ml, 加入1.6%溴甲酚绿（B.C.G）乙醇溶液1 ml,80 摄氏度灭菌20 min.B(溶液)：酵母膏10 g, 水500 ml, 琼脂20 g, PH : 6.8 121摄氏度灭菌20 min以无菌操作趁热将A ,B 溶液混合均匀后倒平板。
乳酸菌培养基牛肉膏 5 g , 酵母膏5 g , 蛋白胨10 g ,葡萄糖10 g , 乳糖5 g , 氯化钠 5 g ,水1000 ml , PH : 6.8121摄氏度湿热灭菌20 min蛋白胨水培养基蛋白胨10 g , 氯化钠5 g , 水1000 ml , PH : 7.2 ~ 7.4121 摄氏度湿热灭菌20 min糖发酵培养基蛋白胨水培养基1000 ml , 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1~2 ml ,PH : 7.6 , 另配20%糖溶液（葡萄糖，蔗糖）各10 ml.制法：1）.将上述含指示剂的蛋白胨水培养基（PH : 7.6 ）分装于试管中，在每管内放一倒置的小玻璃管（Durhem tube）,使充满培养液。
一株产L-乳酸菌株的筛选、鉴定及营养条件的初步研究
江 苏 无锡 ２ ４ ２ ； ．江 南大 学 环境 与土木 工程 学 院 ， 苏 无 锡 ２ ４ ２ ） １ １２ ３ 江 １ １ ２
摘 要 ： 者对 筛选 的 一株 产 Ｌ 乳酸 的 菌株进 行 了菌种 鉴定 ， 据 １ Ｓｒ 作 一 根 ６ ＤＮＡ 序 列 测定 结果 ， 结合
其 形 态特 征 及 生理 生 化 性 质 ， 定 该 菌 株 为 凝 结 芽 孢 杆 菌 （ ａ ｉ ｕ ｏ ｇ ｌｎ ） 进 一 步 对 其 营 养 确 Ｂ ｃｌ ｓ ａ ｕａ ｓ 。 ｌ ｃ 条 件 进 行 了研 究 ， 步 确 定 玉 米 糖 化 液 为 最 适 碳 源 ， 用 １ｇ 酵 母 粉 与 １ｇ ｄ 棉 籽 蛋 白 的 混 合 初 采 ／ Ｌ ｄ ／ Ｌ
ｐｒ ｓ ｎ ｅ ｏ ｎ ＋、 ａ ｄ Ｍ ｇ ＋ ｉ ｈｅ ｍ ｅ ｉ ｅ ｅ ｃ ｆ Ｍ Ｆｅ ＋ ｎ ｎ ｔ ｄ ｕｍ ａ ｎｈ ｎｃ ｌ ｃ ｉ ｃｄ ｐｒ ｄｕ ｔｏｎ ｃ ｎ ｅ ａ ｅ Ｌ—ａ ｔｃ ａ ｉ ｏ ｃ ｉ
第 ２ ９卷 第 ３期
２１ ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ Ｏ年 ５月
食 品 与 生 物 技 术 学 报
Ｊ ｕ ｎａ ｆＦｏ ｄ Ｓ ｉｎｃ ｎｄ Ｂｉ ｔ ｃ ｏ ｏ ｙ ｏ ｒ ｌｏ ｏ ｃ ｅ ｅ ａ ｏ ｅ ｈｎ ｌ ｇ
Ｖｏ ． ９ Ｎｏ ３ １２ ．
Ｍａ ２ ０ ｖ Ｏ１
文 章 编 号 ： ６ ３ １ ８ （ ０ ０ ０ — ４ ３ ０ １ ７ — ６ ９ ２ １ ） ３０ ５ — ５
ｐ ｓ ｏ ｏ ｃ ｌ ｃ ｒ ｃ ｅ ｉｔｃ ａ ｄ ｔ ｂ ｏ ｈｅ ｉａ ｐｒ ｐｅ ｔｅ ｈｙ ｉ ｌ ｇｉａ ｈａ ａ ｔ ｒ ｓ ｉｓ ｎ ｈｅ ｉｃ ｍ ｃ ｌ ｏ ｒ ｉｓ
酸奶发酵过程中乳酸菌菌株的筛选与鉴定
酸奶发酵过程中乳酸菌菌株的筛选与鉴定酸奶是一种由牛奶或者其他乳制品通过乳酸菌的发酵而制成的食品。
乳酸菌是酸奶发酵的关键因素，具有良好的保健效果和口感。
在酸奶制作过程中，乳酸菌菌株的筛选与鉴定是非常重要的步骤。
本文将介绍酸奶发酵过程中乳酸菌菌株的筛选与鉴定的方法和意义。
首先，乳酸菌菌株的筛选是为了选择出适合酸奶发酵的优质菌株。
在酸奶制作中，菌株的特性包括产酸能力、耐受性、生长速度和抗菌特性等多方面。
通过筛选过程，可以找到产酸量高、生长快速、对不良菌有抑制作用的优质菌株。
这些菌株可以在酸奶制作中快速发酵，产生出优质的酸奶。
乳酸菌菌株的筛选方法有很多种，常见的包括传统筛选法、分子筛选法和生理筛选法等。
传统筛选法是指利用一系列的生理、生化和形态特性对菌株进行初步筛选。
通过这种方法，可以初步判断菌株是否具有发酵酸奶的潜力。
分子筛选法则是通过利用分子生物学技术对乳酸菌菌株进行检测，例如PCR扩增、16S rRNA测序等。
这些方法可以对菌株的遗传信息进行分析，从而确定其种属和亲缘关系。
生理筛选法则是根据菌株在不同环境条件下的生长情况，筛选出适应性强、产酸能力高的菌株。
乳酸菌菌株的鉴定是为了确保酸奶发酵过程中使用的菌株的纯度和品质。
鉴定的目的是确定菌株的种属和亚种，以及其在酸奶制作中的适用性。
鉴定的方法多样化，常用的有生化鉴定法、微生物学鉴定法和分子生物学鉴定法等。
生化鉴定法是利用菌株在特定培养基和条件下的代谢特征进行分析，通过菌株对不同物质的反应情况来确定其种属。
微生物学鉴定法则是通过观察菌株的细胞形态、培养特性等进行判断。
分子生物学鉴定法则是通过测序菌株的特定基因序列，例如16S rRNA，来确定菌株的种属和亲缘关系。
乳酸菌菌株的筛选与鉴定在酸奶发酵过程中具有重要的意义。
通过合适的筛选和鉴定方法，可以保证酸奶发酵的质量和稳定性。
优质的菌株不仅可以提高酸奶的口感和品质，还具有益生菌的功能，对消化系统和免疫系统有益。
毕业论文开题报告示范 萨能奶山羊羊奶中乳酸菌的分离、鉴定及益生作用的研究
[4]鲁妮.川西牧区自然发酵酸乳中几株优良乳酸菌的分离及鉴定[J],四川农业大学学报,23(1):43～47.
[5]武运，黄彭.新疆哈萨克族发酵酸驼乳中乳酸菌的分子生物学鉴定[J],食品科学，2011, 32(1):173～176.
↓
体外耐酸、耐Hale Waihona Puke 盐等益生特性研究3、论文框架
1、引言
2、材料与方法
3、结果与分析
4、讨论
5、结论
4、预期结果
通过羊奶中乳酸菌的分离、鉴定，获得最适萨能奶山羊羊奶发酵的且具有潜在益生作用的菌种。
三、研究进度
第五周查阅文献资料，完成开题报告
第六周进一步查阅文献资料，撰写论文提纲
第七～八周萨能奶山羊羊奶中乳酸菌的分离、纯化
司克辉以甘肃省肃南牧区传统发酵牦牛乳为研究对象运用到了改良的mrselliker培养基分离培养乳酸菌分离效果有明显提升在鉴定环节国内比较常见的方法是16srdna序列同源性分析鉴定而采用常规的16srdna序列同源性分析不能将相近的植物乳杆菌群和干酪乳杆菌群分别鉴定到种及亚种的水平于洁等人在鉴定西藏地区乳制品中的乳杆菌的研究中使用了16srdnarflp技术即将16srdnapcr技术和rflp技术相结合提出了一种更加快速准确的鉴定乳杆菌的方法910也有的采用传统方法将分离得到的乳酸菌菌株通过在牛乳中的转接试验滴定酸度酸生成能力的大小冷藏过程中活菌数的变化产乙醛和双乙酰能力的测定及感官综合评价等发酵性能试验探究乳酸菌的发酵特性及潜在的益生作用1113尽管国内在奶制品的乳酸菌分离鉴定领域有着不错的成绩但是学者们的研究多以地域性为主使用范围不广泛而且研究对象多以牛乳为主羊奶领域研究深度不够况且没有一套适宜萨能奶山羊羊奶中乳酸菌分离鉴定的最适方法最适萨能奶山羊羊奶发酵且具有益生作用的菌种尚不明确
乳酸菌毕业设计
乳酸菌毕业设计乳酸菌毕业设计在当今充斥着各种健康概念和饮食趋势的时代，乳酸菌备受关注。
乳酸菌作为一种益生菌，被广泛认为对人体健康有着重要的作用。
因此，我决定将乳酸菌作为我的毕业设计的主题，探索其在食品工业和健康领域的应用。
首先，我将研究乳酸菌在食品工业中的应用。
乳酸菌在食品发酵中起着至关重要的作用。
它们能够将碳水化合物转化为乳酸，从而降低食品的pH值，抑制有害菌的生长。
这种发酵过程不仅可以延长食品的保质期，还能增加食品的口感和营养价值。
因此，我计划通过实验研究不同种类的乳酸菌对不同食品的发酵效果，以及发酵过程中的微生物变化。
这将有助于优化食品工业中乳酸菌的应用，提高食品的质量和安全性。
其次，我将探索乳酸菌在健康领域中的潜力。
乳酸菌被认为对肠道健康有益，能够维持肠道菌群的平衡。
肠道菌群的失衡与多种疾病的发生和发展有关，包括肠道炎症、肠易激综合症和肥胖等。
因此，我计划通过实验研究不同种类的乳酸菌对肠道菌群的影响，以及它们对肠道健康的潜在益处。
这将有助于开发新的乳酸菌制剂，用于改善肠道健康和预防相关疾病。
此外，我还将探讨乳酸菌在美容领域的应用。
乳酸菌被发现对皮肤有一定的保护和修复作用。
它们能够增强皮肤屏障功能，减少水分流失，并促进胶原蛋白的合成。
这些功能使得乳酸菌成为护肤品中的热门成分。
因此，我计划通过实验研究不同种类的乳酸菌对皮肤的影响，以及它们在护肤品中的应用效果。
这将有助于开发更有效的乳酸菌护肤品，满足人们对美容的需求。
最后，我将总结我的研究结果，并提出一些建议和展望。
通过对乳酸菌在食品工业、健康领域和美容领域的应用进行研究，我希望能够为相关行业的发展和创新提供一定的参考。
同时，我也希望能够加深人们对乳酸菌的认识，促进其在日常生活中的应用。
乳酸菌作为一种具有潜力的微生物资源，有着广阔的发展前景。
通过我的毕业设计，我希望能够为乳酸菌的研究和应用做出一定的贡献。
在这个充满机遇和挑战的时代，乳酸菌毕业设计将成为我学术生涯的重要里程碑。
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从自然界筛选产乳酸微生物及菌种初步鉴定的毕业论文目录摘要 (I)Abstract (II)1 绪论 (1)1.1 乳酸菌的概述 (1)1.2 乳酸菌的基本属性 (1)1.3 乳酸菌的发展时期及分类 (2)1.3.1 乳酸菌的发展时期 (2)1.3.2 乳酸菌的分类 (2)1.4 乳酸菌的发酵特性 (2)1.5 乳酸菌的应用 (3)1.5.1 乳酸菌在食品领域的应用 (3)1.5.2 乳酸菌制剂 (4)1.6 乳酸菌的生理作用和作用机理 (4)1.6.1 乳酸菌的生理作用 (4)1.6.2 乳酸菌的作用机理 (5)1.7 乳酸菌的国外发展现状 (6)1.7.1 乳酸菌的发展历史 (6)1.7.2 乳酸菌的发展现状 (7)1.8 乳酸的生产及应用 (7)1.8.1 乳酸的概述 (7)1.8.2 L—乳酸的生产 (8)1.8.3 乳酸提取工艺 (10)1.9 本课题的目的及研究的意义 (12)2 实验部分 (13)2.1 实验材料与仪器 (13)2.1.1 实验材料 (13)2.1.2 实验仪器 (13)2.1.3 实验试剂 (14)2.1.4 实验培养基 (14)2.2 实验方法 (15)2.2.1 从自制酸菜汁中分离提纯乳酸菌的思路和原理 (15)2.2.2 培养条件 (15)2.2.3 菌种储藏 (15)2.2.4 样品采集 (15)2.2.5 乳酸菌的分离和筛选 (16)2.2.6 乳酸菌的产酸定性定量试验 (16)2.2.7 乳酸菌的生理生化鉴定 (17)3 结果与讨论 (18)3.1 乳酸菌的形态学鉴定 (18)3.1.1 初步分离 (18)3.1.2 乳酸菌的复筛 (18)3.1.3 菌株形态 (19)3.2 乳酸菌的产酸定性定量试验 (20)3.2.1 菌株产乳酸试验 (20)3.2.2 乳酸定量试验 (20)3.3 乳酸菌的生长过程鉴定 (21)3.2.1 乳酸菌在37℃恒温培养pH值变化 (21)3.2.2 菌株最适生长起始pH值的确定 (21)3.2.3 乳酸菌株耐盐性的确定 (22)3.2.4 乳酸菌的不同温度生长鉴定 (23)3.3 乳酸菌的生理生化鉴定 (25)结论 (28)参考文献 (29)致谢 (31)绪论1.1乳酸菌的概述乳酸菌是对能利用可发酵碳水化合物产生出大量乳酸的革兰氏阳性细菌的通称。
自然界中乳酸菌分布十分广泛，可以存活在各种动物的消化道及其其他器官里。
在乳制品、发酵植物食品、自然界的湖泊和泥土都有所发现。
人们常常利用乳酸菌产酸等特性来处理和加工食品，延长食物的储存时间和提高食品的适口性。
乳酸菌从发现、分离到分类体系的建立，经过了大约一个世纪。
目前，在自然界中已发现的乳酸菌在细菌分类学上至少可划分成 23 个属，共有200多种。
涉及到的有关属则更多，有的只是某些属中的少数成员。
除极少数外，其中绝大部分都是人体必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。
目前已被国外生物学家所证实，肠乳酸菌与健康长寿有着非常密切的直接关系。
而人体肠道乳酸菌拥有的数量，与人类年龄成倒数增长曲线。
在平时，健康人比病人多50倍，长寿老人比普通老人多60倍。
当人到老年或生病时，乳酸菌数量可能下降100至1000倍，直到老年人临终完全消失。
因此，人体乳酸菌数量的实际状况，已经成为检验人们是否健康长寿的重要指标。
现在，由于抗菌素的广泛应用，使人体肠道以乳酸菌为主的益生菌遭受到严重破坏，抵抗力下降，健康受到极大的威胁。
所以，增加人体肠道乳酸菌的数量就是明智之举。
人体肠道以乳酸菌为代表的益生菌数量越多越好。
也完全符合诺贝尔得奖者生物学家梅契尼柯夫“长寿学说”里所得出的结论：乳酸菌=益生菌=长寿菌。
在面对抗生素的日渐无能为力的现状，不断寻求新的更加有效的生物抗菌产品是正确选择。
瑞典科学家研究发布的结果：治疗胃和大肠炎症时直接喝乳酸菌比用抗生素更好，危险性基本没有。
而在日本，乳酸菌制品占据日本乳制品市场的85%以上，二十年来研究记录表明日本青年平均身高增加15厘米，平均寿命达85岁，居世界第一位。
这是乳酸菌制品所带来的直接健康功效。
1.2乳酸菌的基本属性乳酸菌具有的基本特点为:革兰氏阳性细胞; 菌体常排列成链，乳酸链球菌族，菌体球状，通常成对或成链；乳酸杆菌族，菌体杆状，单个或成链，有时成丝状、产生假分枝; 过氧化氢酶反应为阳性; 消耗的葡萄糖50%以上并且产生乳酸; 不形成芽孢; 极少运动或者不运动; 可以分解蛋白质, 不产生腐败产物; 可以分解脂肪但是能力较弱。
乳酸菌所属界：细菌界（Bacteria），所属门：厚壁菌门（Firmicutes），所属纲：芽孢杆菌纲（Bacilli），所属目：乳杆菌目(Lactobacillales),所属科：乳杆菌科(Lactobacillaceae),所属属：乳杆菌属(Lactobacillus)；肠球菌属(Enterococcus Thiercelin and Jouhaud)[1].在固体培养基上菌落较小，生长缓慢。
在液体发酵培养基可以很快的生长，离心洗涤可以获得纯度较高的菌体且兼具需氧和厌氧的性能。
多数不运动，少数以鞭毛运动。
有的也连消化驱动。
1.3 乳酸菌的发展时期及分类1.3.1 乳酸菌的发展时期乳酸茵的分类也经历了四个主要的发展时期，分别是经典分类时期和化学分类时期、数值分类时期、分子分类时期[2]。
1.3.2 乳酸菌的分类乳酸菌根据来源大体上可分为两类。
一类是植物源乳酸菌，一类是动物源乳酸菌。
植物源乳酸菌，因为取自植物，摄取的量不易受限制，人体不会产生异体蛋白排斥反应，并且植物源乳酸菌比动物源者更具有活力，能比动物源乳酸菌多数倍的数量到达人体小肠定植，从而发挥乳酸菌稳定的生物功效。
因为动物源取自动物，菌种相对于植物源不稳定，生物功效也较不稳定，在大量摄取后，较容易导致人排斥反应。
目前对乳酸菌的分类鉴定，是以表型特征和生物学特性为依据来判定其归属。
这种分类鉴定方法也有其局限性，这种方法耗时耗力，培养条件的改变可能会导致结果发生变化，并且仅依靠主观选择的特征，很难对某些区别不明显的生理生化特性的乳酸菌进行有效的区分[3]。
因此随着分子生物学同其相关技术的发展，分子标记技术可以快速、准确、灵敏的分类并且鉴定乳酸菌。
1.4 乳酸菌的发酵特性乳酸菌作为化能异养型微生物, 代谢活动需要单糖, 尤其是葡萄糖, 经发酵作用将单糖转变为低分子的乳酸和其它有机酸,获取能量[4]。
乳酸菌的发酵作用根据代谢途径不同和产物的差异, 可以划分为异型乳酸发酵和同型乳酸发酵。
同型乳酸发酵: 葡萄糖经糖酵解途径几乎变成100%的乳酸。
如链球菌、片球菌和部分乳杆菌等。
葡萄糖通过糖酵解途径转化为两个乳酸。
异型乳酸发酵: 葡萄糖的分解完全依赖磷酸戊糖途径转变为乳酸和其它产物, 根据产物不同, 又有两种类型:第一、明串珠菌和部分乳杆菌将葡萄糖转变为乳酸、乙醇和二氧化碳。
葡萄糖通过磷酸戊糖途径转化为乳酸和乙醇和二氧化碳。
第二、双歧杆菌将1mol 葡萄糖转变成1mol乳酸和1. 5mol 乙酸。
两个葡萄糖通过磷酸戊糖途径转化为两个乳酸和三个乙酸。
1.5 乳酸菌的应用1.5.1 乳酸菌在食品领域的应用人类对于乳酸菌的应用可以追溯到远古时代，那时候人类就在酿造和食品方面利用了乳酸菌。
人类研究和掌握乳酸菌的生长规律，并加以利用。
乳酸菌能够赋予食品柔和的香味和酸甜的口感，可以改善食物的品质和营养，还具有抗菌、抗肿瘤、抗变异原和降低胆固醇、维持微生态环境、增强免疫力等生物学功能，被广泛的应用在食品工业领域中[5]。
在酸乳制品中的应用，是将乳酸菌纯种培养活化后制成乳酸菌发酵剂，再添加于经过灭菌处理的鲜乳或者复原乳中，在40~45度下发酵获得终产物．常用的发酵剂为嗜酸链球菌、保加利亚乳杆菌嗜热链球菌。
经乳酸菌发酵的乳酸菌奶酪蛋白及乳脂被转化为短肽、氨基酸和小分子的游离脂类等，更易被人体吸收。
乳酸与钙结合形成乳酸钙，极易被人体吸收，也可被乳糖不耐症人群选用。
乳酸菌奶促进消化，促进胃液分泌，对胃具有保养功能，能抑制肠道腐败菌的生长，其生物保健价值远远高于牛奶。
在酿造业中的应用，是通过乳酸菌产生的乳酸与乙醇酯化生成乳酸乙酯，提高白酒的质量及口感，也可以改善葡萄酒的风味。
乳酸菌产生的乳酸是一种呈香物质，可伊提高产品酸度，又可改善风味并且提高产品质量。
在发酵肉制品中的应用，是通过发酵产生乳酸降低pH值，从而抑制肉毒杆菌及其它病原微生物的生长繁殖或产生毒素，减少了腐败。
还可以促进亚硝酸盐的分解，形成稳定的亚硝基肌红蛋白，促进发色和减少致癌物质一亚硝胺产生；使肌肉蛋白变性形成胶状组织，增加肉块间的结合力，可以提高制品的硬度和弹性。
在发酵果蔬制品中乳酸菌的应用，是通过同型或异型发酵，产生乳酸、醋酸、丙酸等有机酸，这些酸赋予发酵果蔬制品柔和的酸味；同时产生的微量双乙酰赋予制品奶油香味；产生的2一庚酮、2一壬酮对爽口、清香有一定作用；低级饱和脂肪酸与脂肪醇所形成的酯类具有水果香味。
在饲料中添加乳酸菌，不仅可以提高蛋雏鸡成活率和日增重，还可以使断乳后仔犬体重显著增加，因此显著提高饲料利用率。
1.5.2 乳酸菌制剂利用现代生物技术，发酵生产的具有活性的乳酸菌制剂，是安全、高效的动物保健制剂，目前已经投入广泛应用固体发酵和液体发酵的两类活菌制剂。
克服了死的菌体及代谢产物效果不确切的弊端，为动物保健及食品安全保障提供了动力[7]。
1.5.2.1 固态发酵制剂应用移动发酵技术、多菌种复合保质技术、高负压吸真空技术，好氧厌氧分阶段发酵技术，使发酵产品在潮湿状态保质期达到18个月以上，保证了乳酸菌的活性。
1.5.2.2 液态发酵制剂为养殖场提供小型全自动乳酸菌发酵罐，并提供菌种、培养基，由养殖场自行发酵，随用随饮，保证了乳酸菌的活性。
1.6 乳酸菌的生理作用和作用机理1.6.1 乳酸菌的生理作用1、防治有些人种普遍患有的乳糖不耐症（喝鲜奶时出现的腹胀、腹泻等症状）。
2、促进蛋白质、单糖及钙、镁等营养物质的吸收，产生维生素B族等大量有益物质。
3、抑制腐败菌的繁殖，消解腐败菌产生的毒素，清除肠道垃圾。
4、使肠道菌群的构成发生有益变化，改善人体胃肠道功能，恢复人体肠道菌群平衡，形成抗菌生物屏障，维护人体健康。
5、抑制胆固醇吸收，降血脂、降血压作用。
6、抗肿瘤、预防癌症作用。
7、免疫调节作用，增强人体免疫力和抵抗力。
8、有效预防女性泌尿生殖系统细菌感染。
9、提高SOD酶活力，消除人体自由基，具抗衰老、延年益寿作用。
10、控制人体毒素水平，保护肝脏并增强肝脏的解毒、排毒功能[8]。
1.6.2 乳酸菌的作用机理通过对大量资料的研究，我们得以知道，乳酸菌有一下功能：调节胃肠道正常菌群、维持微生态平衡，促进动物生长，从而改善胃肠道功能；抑制肠道腐败菌生长；提高机体免疫力提高食物消化率和生物效价；降低血清胆固醇，控制毒素等。