实验三细菌生理生化鉴定-LOPAT试验

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细菌鉴定中常用的生理生化反应

葡萄球菌可产生凝固酶，使血浆中的纤维蛋白原转变为纤维蛋白，导致血浆凝固。
其他细菌的分类和鉴定
氧化发酵试验
细菌对碳水化合物的代谢方式不同，可分为氧化型和发酵型。通过观察细菌在氧化发酵培养基中的生长情况和颜色变化来判断结果。
硝酸盐还原试验
细菌可将硝酸盐还原为亚硝酸盐或氮气，通过观察培养基中硝酸盐的颜色变化来判断结果。
细菌鉴定在医学、工业等领域的应用
细菌鉴定对于医学诊断、流行病学调查、食品卫生、环境监测等领域具有重要意义，因此，掌握细菌鉴定的方法和技巧至关重要。
细菌鉴定的重要性
准确识别病原菌
通过细菌鉴定，可以准确识别引起人类和动植物疾病的病原菌，为疾病的预防和治疗提供
科学依据。
保障食品安全
细菌鉴定在食品工业中用于检测食品中的有害菌和腐败菌，确保食品的安全和质量。
细菌鉴定中生理生化反应的改进方向
自动化技术应用
通过自动化仪器和计算机技术，实现生理生化反应的自动化操作和数据分析，提高鉴定效率和准确性。
多项指标联合应用
将多个生理生化反应指标联合应用，形成综合评价体系，提高细菌鉴定的准确性和可靠性。
新型反应的开发
针对现有生理生化反应的不足，开发新的反应类型和试剂盒，以满足更多种类细菌的鉴定需求。
明胶液化试验
某些细菌可分泌明胶酶，将明胶分解为可溶性的多肽和氨基酸，通过观察明胶的液化情况来判断结果。
05
细菌鉴定中生理生化反应的优缺点及改进方向
生理生化反应的优缺点
准确性高
通过特定的生理生化反应，可以准确地鉴定细菌种类。
操作简便
大多数生理生化反应的操作步骤相对简单，易于掌握。
生理生化反应的优缺点

细菌的生理生化反应实验

细菌的生理生化反应实验一．目的与意义一般来说，对一株从自然界或其他样品中分离纯化的未知菌种的鉴定要做以下几个方面工作。

①个体形态观察，进行革兰氏染色，分辨是G（+）菌还是G（-）菌。

并观察其形状、大小、有无芽孢及其位置等；②菌种形态观察，主要观察其形态、大小、边缘情况、隆起度、透明度、色泽、气味等特征；③做动力试验，看他能否运动及其鞭毛着生类型（端生、周生）；④做生理生化反应及做血清学反应实验。

最后根据以上实验项目的结果，通过查阅微生物分类检索表，给未知菌进行命名。

此实验为生理生化反应实验，就是使不同种类的细菌在对营养物质的利用、代谢产物的种类、代谢类型等方面表现出差异，故利用这些差异作为细菌分类作为细菌分类鉴定的重要依据。

要求在此实验中了解细菌在不同底物环境中各种代谢途径和产物，加深理解细菌生化反应原理；根据细菌在培养基中生理生化特点，学会鉴定细菌。

生理生化反应的项目很多。

本实验结合肠道杆菌科的分类鉴定，选作其中重要的几项实验。

二．材料与用具1.菌种：大肠杆菌、沙门氏菌。

2.培养基：（葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖）糖发酵半固体培养基（添加溴甲酚紫试剂）、葡萄糖蛋白胨水培养基、童汉氏蛋白胨水培养基、柠檬酸盐斜面培养基（添加溴麝香草酚蓝变色范围pH6.8 绿—pH7.6 蓝）、三糖铁琼脂培养基。

3.试剂：甲基红指示剂、40%NaOH、吲哚检验试剂（对二甲基氨基苯甲醛）、双氧水等。

4.用具。

酒精灯、接种环、接种针、试管等。

三．实验内容与方法1.糖（醇）类发酵实验多数细菌都能利用糖类作为碳源及能源，但各种菌因含有不同发酵糖（醇）类的酶，故表现出有的能分解或不分解某些糖类，有的分解糖产酸，并产气，或只产酸不产气，可根据这些特点鉴别细菌（培养基中指示剂溴甲酚紫pH6.8以上呈紫色，pH5.2以下呈黄色）。

大肠杆菌与沙门氏菌的生理生化鉴定区别操作：（葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖）糖发酵半固体培养基（添加溴甲酚紫试剂）中，无菌操作，穿刺接种，37℃培养1天。

细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告

细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告一、引言在微生物学中，鉴定细菌的方法有很多种，其中生理生化反应实验是最常用的一种方法之一。

生理生化反应实验可以通过观察细菌对不同物质的代谢情况来确定其种类和特性。

本报告将介绍细菌鉴定中常用的生理生化反应实验。

二、目的本报告旨在介绍常用的生理生化反应实验，包括试剂、操作步骤、结果解释等内容，以帮助读者更好地了解和掌握这些实验。

三、材料与方法1. 大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）培养基；2. 硝酸盐还原试剂；3. 糖类试剂：葡萄糖、果糖、半乳糖；4. 氨基酸试剂：天冬氨酸、赖氨酸；5. 酶试剂：淀粉酶、蛋白酶；6. 无水硫酸铜溶液。

四、实验步骤及结果解释1. 硝酸盐还原试验步骤：（1）取一支细菌液体培养物，加入硝酸盐还原试剂；（2）观察液体颜色变化。

结果解释：若液体变为红色，则表示细菌能够还原硝酸盐为亚硝酸盐，是亚硝化菌。

若无颜色变化，则表示细菌不能还原硝酸盐。

2. 糖类代谢试验步骤：（1）取三个试管，分别加入葡萄糖、果糖、半乳糖；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。

结果解释：若在葡萄糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用葡萄糖进行发酵代谢；若在果糖或半乳糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用果糖或半乳糖进行发酵代谢。

3. 氨基酸代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入天冬氨酸和赖氨酸；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。

结果解释：若在天冬氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用天冬氨酸进行代谢；若在赖氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用赖氨酸进行代谢。

4. 酶代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入淀粉和蛋白质；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内颜色变化情况。

结果解释：若在淀粉试管内出现了透明带，则表示该细菌能够分泌淀粉酶；若在蛋白质试管内出现了变色，则表示该细菌能够分泌蛋白酶。

(完整word版)细菌的生理生化鉴定方法

方法2.3。

5 细菌的生理生化鉴定１、形态学观察采用插片法、埋片法, 对该拮抗细菌的菌落形态特征作镜检观察。

用革兰氏染色进行油镜观察。

① 革兰氏染色溶液和试剂：革兰氏染液，草酸铵结晶紫染液，卢戈式碘液，95％乙醇，番红复染液等.试验步骤：（1) 涂片：取活跃生长期菌种按常规方法涂片（不易过厚）、干燥和固定。

(2) 初染：滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位1～２min，用水冲洗至流出水无色。

（3）媒染：先用卢戈氏碘液冲去残留水迹，再用碘液覆盖１min，倾去碘液，水洗至流出水无色。

(4）脱色：在上述涂片上流加95％乙醇溶液（一般20~30s）,当脱色至流出液无色时立即用水洗去乙醇。

（5）复染：将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色2min,水洗,用吸水纸吸去残水晾干。

(6）镜检：用油镜观察。

②芽孢染色（1）制片:按常规方法涂片、干燥及固定。

（2）加热染色：向载玻片滴加数滴5％孔雀绿水溶液覆盖涂菌部位，用夹子夹住载玻片在微火上加热至染液冒蒸汽并维持５min,加热时应注意补充染液，切勿让涂片干涸.脱色：待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水无色.(3）复染：用0.5％番红水溶液复染2min。

(4) 水洗:用缓流自来水冲洗至无色。

(5) 镜检：晾干载玻片后油镜镜检。

③鞭毛染色(硝酸银染色法）(1) 载玻片准备:将载玻片置于含洗衣粉或洗涤剂的水中煮沸 20min，然后用清水充分洗净,再置于 95%乙醇中浸泡，使用时取出在火焰上烧去乙醇及可能残留的油迹。

(2) 菌液制备：用接种环挑取菌落边缘菌体，悬浮于1～2mL无菌水中制成菌悬液，不能剧烈震荡。

（3) 制片:取一滴菌悬液滴到载玻片一侧，倾斜玻片,使菌悬液流向另一边,用吸水纸吸取多余的菌悬液,自然干燥。

（4）染色：滴加硝酸银染色A液覆盖3～5min，用蒸馏水充分洗去A液，再滴加B液染色约1 min，期间可用微火加热，当涂面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗。

细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告

细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告细菌鉴定是微生物学中的一个重要分支，它是通过对细菌的形态、生理生化反应、生长特性等方面进行分析，来确定细菌种类的过程。

在细菌鉴定中，生理生化反应实验是一种常用的方法，它可以通过观察细菌在不同条件下的生长情况，来确定细菌的种类。

本文将介绍几种常用的生理生化反应实验。

1. 氧气需求实验氧气需求实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的氧气需求量。

在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同氧气浓度的培养基中，然后观察细菌的生长情况。

如果细菌只能在氧气充足的条件下生长，那么它就是一种需氧菌；如果细菌只能在氧气缺乏的条件下生长，那么它就是一种厌氧菌；如果细菌既能在氧气充足的条件下生长，也能在氧气缺乏的条件下生长，那么它就是一种兼性厌氧菌。

2. 糖类发酵实验糖类发酵实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌对不同糖类的发酵能力。

在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同糖类的培养基中，然后观察培养基的酸碱度变化。

如果培养基的酸碱度发生了变化，那么说明细菌对这种糖类进行了发酵。

通过这个实验，我们可以确定细菌对哪些糖类具有发酵能力，从而进一步确定细菌的种类。

3. 氧化还原实验氧化还原实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的氧化还原能力。

在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同氧化还原剂的培养基中，然后观察培养基的颜色变化。

如果培养基的颜色发生了变化，那么说明细菌对这种氧化还原剂具有反应能力。

通过这个实验，我们可以确定细菌的氧化还原能力，从而进一步确定细菌的种类。

4. 酶活性实验酶活性实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的酶活性。

在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同底物的培养基中，然后观察底物的变化情况。

如果底物发生了变化，那么说明细菌对这种底物具有酶活性。

通过这个实验，我们可以确定细菌的酶活性，从而进一步确定细菌的种类。

细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告再解读

细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告再解读知识专栏：细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告再解读封面图片：一位实验室技术人员在显微镜下观察细菌培养物导语：在细菌学研究领域，生理生化反应实验是常用的方法之一，它可以帮助我们了解细菌的特性、代谢途径以及与环境的相互作用。

本文将对细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告进行具体解读，帮助读者更深入地了解细菌的鉴定过程及意义。

一、实验背景和目的在细菌鉴定中，我们经常需要对待测的细菌进行分类和鉴定。

而生理生化反应实验是一种非常重要的手段，能够通过观察细菌对不同化学试剂的反应，以及产物的生成情况等特征，来判断细菌的性质。

本实验的目的即是通过几项常用的生理生化反应实验，进一步探究待测细菌的特性和代谢途径。

二、实验方法1. 大肠杆菌的蛋白酶试验（编号：1）在本实验中，我们采用的是凝固酶试纸。

观察到试剂的颜色发生变化，即从黄色转变为品红色，说明大肠杆菌在此试验中结果为阳性。

进一步解读：凝固酶是一种能够水解胶原蛋白的酶，大肠杆菌能够产生这种酶，因此在这一试验中呈阳性反应。

这可以帮助我们进一步确认待测菌株是大肠杆菌，从而对其进行鉴定分类工作。

2. 肺炎克雷伯氏菌的氧化/发酵试验（编号：2）我们使用菲斯氏培养基进行此实验，观察培养基颜色变化。

如果培养基由绿色变为黄色，表示菌株对葡萄糖的进行氧化反应，即为氧化阳性；如果培养基继续保持绿色，表示菌株对葡萄糖进行发酵，即为发酵阳性。

进一步解读：肺炎克雷伯氏菌对葡萄糖的氧化/发酵反应具有很重要的意义。

通过此实验，我们可以判断菌株的能量代谢途径是氧化还是发酵，并且可以辅助鉴定菌株的种类。

3. 金黄色葡萄球菌的氧化/发酵试验（编号：3）氧化/发酵试验在金黄色葡萄球菌的鉴定中也扮演着重要的角色。

在此实验中，当培养基由紫色变为黄色时，表示菌株对葡萄糖的进行氧化反应，即为氧化阳性；若培养基继续保持紫色，表示菌株对葡萄糖进行发酵，即为发酵阳性。

进一步解读：金黄色葡萄球菌的氧化/发酵反应结果也能帮助我们确定菌株的代谢途径，并对其分类鉴定提供重要依据。

细菌生理生化鉴定

细菌生理生化鉴定
细菌生理生化鉴定是通过对细菌在特定生理和生化条件下的反应进行观察和分析，以确定其种类和特性的过程。

这通常包括一系列实验，涉及对细菌代谢途径、酶活性、生长条件等方面的研究。

以下是细菌生理生化鉴定的一些常见方法和实验：
1.形态学观察：
形状：观察细菌的形状，可以是球形（球菌）、杆状（杆菌）、螺旋形等。

结构：使用显微镜检查是否有胞壁、胞膜、纤毛、鞭毛等结构。

2.生理特性：
生长条件：观察细菌在不同温度、pH值和氧气条件下的生长情况。

营养需求：测试细菌对不同营养物质（碳源、氮源、矿物质等）的利用能力。

3.生化反应：
大肠杆菌的IMViC测试：Indole（吲哚）测试、Methyl Red（甲基红）测试、V oges-Proskauer（V-P）测试、Citrate（柠檬酸）测试、
4．氧化还原反应：观察细菌对不同氧化还原指示剂（如甲基红、溴亚甲蓝）的反应，推断其对氧化还原条件的适应性。

5.酶活性测试：
氧化酶：使用氧敏感指示剂观察酶的活性。

淀粉酶：利用淀粉琼脂板，观察菌落周围是否发生淀粉分解带。

蛋白酶：使用明胶板检测细菌对蛋白质的分解能力。

6.抗生素敏感性测试：确定细菌对不同抗生素的敏感性，通过纸片扩散法或肉汤稀释法进行。

7.分子生物学方法：16S rRNA测序：通过测序菌株的16S rRNA基因，进行分子水平的种类鉴定。

8.培养基选择：利用特定培养基，如MacConkey琼脂培养大肠杆菌等，根据细菌在培养基上的生长情况进行初步鉴定。

细菌生理生化实验报告

细菌生理生化实验报告细菌生理生化实验报告引言细菌是微生物界中最为广泛存在的一类生物，其在自然界中扮演着重要的角色。

为了更好地了解细菌的生理生化特性，我们进行了一系列的实验研究。

本报告将详细介绍实验的目的、方法、结果和讨论。

实验目的本次实验的目的是通过对细菌的生理生化特性进行观察和分析，探究其对环境的适应能力以及与人类的关系。

实验方法1. 细菌培养与分离：我们从自然环境中采集了多个样品，经过适当的稀释后，分别在琼脂平板上进行涂布，培养出各自的菌落。

2. 形态观察：通过显微镜观察细菌的形态特征，包括形状、大小、颜色等。

3. 静态培养：将细菌接种到含有特定营养物质的培养基中，观察其生长情况。

4. 生化反应：利用生化试剂对细菌进行一系列的生化反应测试，包括氧化酶试验、碳水化合物发酵试验等。

5. 抗生素敏感性测试：通过纸片扩散法，测试细菌对不同抗生素的敏感性。

实验结果1. 形态观察：我们观察到不同细菌的形态各异，有的呈球形，有的呈棒状，还有的呈螺旋形。

大小也有差异，从微小的球菌到较长的杆菌都有。

2. 静态培养：在不同培养基上，我们观察到细菌的生长情况有所差异。

有些细菌在富含葡萄糖的培养基上生长迅速，而在其他培养基上生长较慢。

3. 生化反应：细菌的生化反应也表现出多样性。

通过氧化酶试验，我们发现有些细菌能产生氧化酶，而有些则不具备这一能力。

碳水化合物发酵试验结果也显示了不同细菌的差异。

4. 抗生素敏感性测试：我们测试了多种常用抗生素对不同细菌的敏感性。

结果显示，不同细菌对抗生素的敏感性存在差异，有些细菌对某些抗生素表现出耐药性。

讨论通过本次实验，我们对细菌的生理生化特性有了一定的了解。

细菌的形态、生长特性、生化反应以及抗生素敏感性都表现出多样性。

这种多样性使得细菌能够适应不同的环境，并在自然界中发挥重要的作用。

然而，细菌也与人类密切相关。

有些细菌是人类的益生菌，可以帮助我们维持肠道健康；而有些细菌则是致病菌，会引发各种疾病。

细菌的生理、生化试验简介

细菌的生理、生化试验简介微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。

因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一,微生物检验中常用的生化反应介绍如下：一、糖酵解试验不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。

可用指示剂及发酵管检验。

试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体培养基管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。

接种后，置36±1.0°C培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力，若有动力，培养物可呈弥散生长。

本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力，从而进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。

一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫，溴百里蓝和An-drade指示剂。

二、淀粉水解试验某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。

淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。

试验方法：以18~24h的纯培养物，涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板（一个平板可分区接种，试验数种培养物）或直接移种于淀粉肉汤中，于36±1°C培养24~48h，或于20℃培养5天。

然后将碘试剂直接滴浸于培养表面，若为液体培养物，则加数滴碘试剂于试管中。

立即检视结果，阳性反应（淀粉被分解）为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明环、或肉汤颜色无变化。

阴性反应则无透明环或肉汤呈深蓝色。

淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间，培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。

培养基pH必须为中性或微酸性，以pH7.2最适。

淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱，因而以临用时制备为妥。

三：V-P试验某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。

细菌鉴定用生理生化试验2015

细菌生理生化鉴定技术讲义实验一糖（醇、苷）类发酵试验(安排至少六种糖的发酵实验，包括单糖、双糖、三糖、醇类和非糖类各一种)（1）原理：不同种类细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，因而对各种糖（醇、苷）类的代谢能力也有所不同，即使能分解某种糖（醇、苷）类，其代谢产物可因菌种而异。

检查细菌对培养基中所含糖（醇、苷）降解后产酸或产酸产气的能力，可用以鉴定细菌种类。

(2)方法：在基础培养基中（如肉汤基础培养基pH7.4）加入0.5~1.0％（w/v）的特定糖（醇、苷）类。

所使用的糖（醇、苷）类有很多种，根据不同需要可选择单糖、多糖或低聚糖、多元醇和环醇等，将待鉴定的纯培养细菌接种入试验培养基中，置35℃孵育箱内孵育数小时到两周（视方法及菌种而定）后，观察结果。

若用微量发酵管（杜氏管），或要求培养时间较长时，应注意保持其周围的湿度，以免培养基干燥。

(3)结果：能分解糖（醇、苷）产酸的细菌，使培养基中的指示剂发生变色反应，产气的细菌可在小倒管（Durham小管）中产生气泡，固体培养基则产生裂隙。

不分解糖则无变化。

溴百里香酚蓝的变色范围为pH6.7(黄)~7.5(蓝)，通过指示剂颜色变化可以判断是否产酸，从杜氏管中是否又气泡可以判断利用各种糖时是否产气。

(4)应用：糖（醇、苷）类发酵试验，细菌对各种糖的分解能力及代谢产物不同，可借以鉴别细菌，是鉴定细菌的生化反应试验中最主要的试验，不同细菌可发酵不同的糖（醇、苷）类，如沙门菌可发酵葡萄糖，但不能发酵乳糖，大肠埃希菌则可发酵葡萄糖和乳糖。

即便是两种细菌均可发酵同一种糖类，其发酵结果也不尽相同，如志贺菌和大肠埃希菌均可发酵葡萄糖，但前者仅产酸，而后者则产酸、产气，故可利用此试验鉴别细菌。

一般非致病菌能发酵多种糖，产生多种有机酸和各种气体如CO2、、H2和CH4。

如大肠杆菌能分解葡萄糖有乳糖，产生甲酸等产物，并有甲酸解氢酶，可将其分解为CO2和H2，故生化反应结果为产酸产气，以“⊕”表示。

细菌生化试验实训报告

一、实验目的1. 了解细菌鉴定中常用的生理生化试验反应原理。

2. 掌握测定细菌生理生化反应的技术和方法。

3. 通过实验，学会使用各种生化试剂和仪器，提高实验操作技能。

4. 培养团队合作精神和科学严谨的态度。

二、实验原理细菌的生理生化特性是细菌分类鉴定的重要依据。

各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异，主要体现在对生物大分子糖类和蛋白质分解能力，以及最终代谢产物的不同。

通过微生物生化反应，可以测定细菌在新陈代谢过程中所产生的代谢产物，从而鉴定细菌的种类。

三、实验器材1. 菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌。

2. 培养基：固体淀粉培养基、固体油脂培养基、葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基、蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基。

3. 试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水。

4. 仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管。

四、实验方法1. 接种：将菌种接种于固体培养基上，37℃培养24小时。

2. 观察菌落特征：观察菌落的形态、大小、颜色、边缘等特征。

3. 进行生理生化试验：a. 糖类发酵试验：将接种好的菌落接种于葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基中，37℃培养24小时，观察是否产生气泡。

b. 吲哚试验：将接种好的菌落接种于蛋白胨水培养基中，37℃培养24小时，加入吲哚试剂，观察是否产生红色沉淀。

c. 甲基红试验：将接种好的菌落接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，37℃培养24小时，加入甲基红试剂，观察是否产生红色沉淀。

4. 结果记录与分析。

五、实验结果与分析1. 糖类发酵试验：枯草芽孢杆菌和产气肠杆菌能发酵葡萄糖，产生气泡；大肠杆菌和金黄色葡萄球菌不能发酵葡萄糖；铜绿假单胞菌和普通变形杆菌能发酵乳糖，产生气泡。

2. 吲哚试验：枯草芽孢杆菌和产气肠杆菌产生红色沉淀，为阳性；大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和普通变形杆菌不产生红色沉淀，为阴性。

细菌生化反应鉴定及其它试验操作规程

细菌生化反应鉴定及其它试验操作规程细菌生化反应鉴定及其它试验操作规程1、氧化-发酵试验(O-F试验)原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型。

可以进行无氧降解的，称为发酵型(发酵型细菌在有氧无氧的条件下均能分解葡萄糖)。

不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。

方法：将待检细菌同时穿刺接种两支Hugh-Leifson培养基，其中一支培养基滴加无菌石蜡(或其它矿物油)，高度不少于lcm。

35℃，24小时或更长。

结果：培养基变黄表示细菌分解葡萄糖产酸，两支培养基均无变化为产碱型或不分解糖型；两支培养基均均产酸为发酵型。

若仅不加石蜡的培养基产酸为氧化型。

应用：主要用于肠杆菌科细菌与非发酵细菌的鉴别，前者均为发酵型，而后者均为氧化型或产碱型。

也可用于葡萄球菌与微球菌问的鉴别。

2、β-半乳糖苷酶(ONPG)试验原理：细菌产生半乳糖苷酶，分解邻-硝基酚β-D-半乳糖苷(无色)生成邻-硝基酚(黄色)。

结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在20-30分钟内显色。

应用：主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。

3、七叶苷水解试验原理：有的细菌可将七叶苷分解成葡萄糖和七叶素，七叶素与培养基中的枸橼酸铁的二价铁离子反应，生成黑色的化合物。

结果：培养基变黑为阳性，不变色为阴性。

应用：主要用于D群链球菌与其它链球菌的鉴别。

前者为阳性，后者为阴性。

也可用于革兰阴性菌与厌氧菌的鉴别。

4．甲基红试验原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基pH值降至4.5以下，加入甲基红呈现红色为阳性。

若细菌分解葡萄糖产生的酸少，或产生的酸进一步转化为其他产物，则培养基pH值仍在6.2以上，加入甲基红呈现黄色为阴性。

结果：呈现红色为阳性，橘红色为弱阳性。

黄色为阴性。

应用：主要用于鉴别大肠杆菌与产气杆菌，前者阳性，后者阴性。

此外肠杆菌科中变形杆菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属和志贺菌属等阳性，而肠杆菌属、哈夫尼亚菌属则为阴性。

细菌生理生化实验报告

一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应的基本原理。

2. 掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。

3. 通过实验操作，学会观察和分析细菌的生理生化特性。

4. 培养实验操作技能和科学思维。

二、实验原理细菌生理生化反应是指细菌在生长代谢过程中，通过各种酶的作用，对营养物质进行分解、合成和转化的一系列化学反应。

这些反应反映了细菌的代谢类型、生长速度和代谢能力等特性，对于细菌的分类、鉴定和生理研究具有重要意义。

三、实验材料与仪器1. 菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等。

2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基、吲哚试剂、甲基红试剂、V-P试剂等。

3. 仪器：酒精灯、接种环、培养皿、试管、移液枪、滴管、显微镜等。

四、实验方法1. 菌种培养：将待测菌种接种于相应培养基中，在适宜温度下培养一定时间。

2. 生理生化反应检测：- 吲哚试验：将菌液接种于吲哚试剂中，观察是否产生红色沉淀。

- 甲基红试验：将菌液接种于甲基红试剂中，观察颜色变化。

- V-P试验：将菌液接种于V-P试剂中，观察是否产生红色沉淀。

- 糖发酵试验：将菌液接种于糖发酵培养基中，观察颜色变化和气体产生情况。

五、实验结果与分析1. 吲哚试验：大肠杆菌和枯草芽孢杆菌产生红色沉淀，金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌不产生红色沉淀。

2. 甲基红试验：大肠杆菌和金黄色葡萄球菌呈红色，枯草芽孢杆菌和铜绿假单胞菌呈黄色。

3. V-P试验：大肠杆菌和金黄色葡萄球菌产生红色沉淀，枯草芽孢杆菌和铜绿假单胞菌不产生红色沉淀。

4. 糖发酵试验：大肠杆菌和枯草芽孢杆菌发酵葡萄糖，产生红色沉淀和气体；金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌不发酵葡萄糖。

六、实验结论通过本次实验，我们了解了细菌生理生化反应的基本原理和实验方法，掌握了细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。

实验结果表明，不同细菌具有不同的生理生化特性，这些特性可以用于细菌的分类、鉴定和研究。

实验三细菌生理生化鉴定-LOPAT试验

菌落圆形，污白色，全缘，微凹，光滑实验三细菌生理生化鉴定-LOPAT试验一、实验目的：1）了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定lopat实验方法二、实验材料：猕猴桃溃疡病病原菌（分类地位薄壁菌门Gracilicutes，Proteobacteria纲假单胞菌科Pseudomonadaceae假单胞杆菌属Pseudomonas）、SPA培养基：蔗糖20g，蛋白胨5g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁0.25g，琼脂15g，蒸馏水1000ml对照SPA培养基：葡萄糖20g，蛋白胨5g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁0.25g，琼脂15g，蒸馏水1000mlThornley培养基配方：蛋白胨1g，精氨酸10g，氯化钠5g，磷酸氢二钾0.3g，酚红0.01g，琼脂6g，蒸馏水1000ml1%二甲基对苯二胺盐酸盐，3×108 /ml的菌液（病原菌），烟草，马铃薯；灭菌培养皿及培养基（平板）110套、未灭菌培养皿110套，接种针15个，试管110支，接种针55把，滤纸55张，试剂瓶55个，胶头滴管55支，喷壶55个三、试验方法：果聚糖试验（Levan formation）：用细菌悬浮液，在SPA培养基上，再用葡萄糖代替蔗糖培养基平板上分别划线。

在25℃条件下培养3–7 d，形成白色、粘稠、圆顶、隆起而有闪光的菌落为阳性反应。

在此条件下，在SPA培养基上可形成前述菌落，果聚糖试验为阳性；而在用葡萄糖代替蔗糖培养基上，不形成前述菌落。

氧化酶试验（oxidase reaction）：在培养皿内放一张滤纸，滤纸上加3–4滴1%二甲基对苯二胺盐酸盐，使其湿润。

用玻棒挑取生长24 h的菌苔涂在滤纸上，若菌苔在10 s内变成紫色，为阳性反应；在60 s以后变色或一直不变色，为阴性反应。

在此条件下，菌苔的氧化酶试验为阴性反应氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶马铃薯软腐试验（potato erroring capacity）：在马铃薯上做刺伤伤口，将细菌接到伤口上，几天后观察，是否出现软腐。

【2017年整理】细菌的生理生化反应实验报告

细菌的生理生化反应实验报告【实验目的】了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。

了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。

【实验原理】通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些第五的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物带血的多样性。

某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。

微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。

乙酰甲基甲醇在碱性条件下与肌酸类物质反应，生成红色化合物为V.P.反应阳性。

有些细菌发酵糖类产生有机酸较多，使发酵液的pH下降到4.2以下，当加入甲基红试剂后，时发酵液变红色，为甲基红反应阳性。

某种微生物能以某种糖类为碳源，产酸产气，则判断为发酵这种糖。

【实验材料和用具】1.菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌。

2.培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂3.仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管、杜氏小管。

【实验方法】（一）V-P反应1.试管标记取5只装有葡萄糖蛋白胨水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。

2.接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。

空白对照不接种。

置37度恒温培养箱中培养24-48h。

3.观察记录去除以上培养物，分别取出2ml培养液加入另外5支相应编号的空试管中，加入与培养液等量的V-P试剂，充分震荡2min。

放置37度恒温培养箱中培养30min观察记录结果。

（二）甲基红实验于V-P实验留下的培养液中，分别加入2-3滴甲基红指示剂，立即观察培养液的颜色变化（三）吲哚实验1.试管标记取5只装有蛋白胨水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。

三细菌的生理生化试验

《微生物检验技术》
项目四日化产品中菌落总数的测定
《微生物检验技术》
项目四日化产品中菌落总数的测定
【学时数】6（理论2学时、实操4学时）
【知识目标】 1.熟悉不同的日化产品所选择的不同的采样方法； 2.了解菌落总数测定的意义； 3.熟悉和掌握日化产品中菌落总数测定方法和原理。
《微生物检验技术》
项目四日化产品中菌落总数的测定
应该选择哪个平板来计数？
《微生物检验技术》
项目四日化产品中菌落总数的测定
片状菌落
链状菌落
《微生物检验技术》
项目四日化产品中菌落总数的测定
请大家移步无菌操作室开始今天的实操。首先是教师演示，然后同学们分组开始实验。
《微生物检验技术》
项目四日化产品中菌落总数的测定
一、定义二、检测意义三、材料四、检测流程
检样稀释菌落计数报告
倒平板
培养
《微生物检验技术》
稀释
项目四日化产品中菌落总数的测定
倒平板
《微生物检验技术》计数平板的选择：
项目四日化产品中菌落总数的测定
染菌空白对照
菌落分布不均
《微生物检验技术》计数平板的选择：
项目四日化产品中菌落总数的测定
【技能目标】 1.掌握菌落总数的计数原则； 2.能正确填写原始数据记录表及检测报告。
《微生物检验技术》
项目四日化产品中菌落总数的测定
【教学重点】 1.倾注平板法的操作注意事项； 2.菌落总数计数和报告方式。【教学难点】 1.倾注平板法的操作注意事项； 2.菌落总数计数和报告方式。