毛细管电泳操作手册

毛细管电泳操作手册

一.毛细管紫外检测器简介

分高压电源（左侧）与毛细管检测主机（右侧）（紫外检测器）。

1.高压电源

设置高压电源分离电压范围在0-30 kV，最高设置不能超过25 kV，参考文献中如若提及分离电压在30 kV，务必不要将本高压电源也设置在30 kV。

2.毛细管检测主机

主机分毛细管系统、进样系统、和紫外检测系统。

a.毛细管系统主要包括：缓冲池、冲洗器、毛细管、高压电极。

缓冲池是两个高约3.5 cm 的玻璃瓶，用于乘装运行缓冲液。

冲洗器包括弹簧压力器和2.5 mL的医用注射器，注射器中乘装与缓冲池中一样的运行缓冲液，依靠弹簧压力将运行缓冲液推入毛细管中。

毛细管主要用的是未涂层的50 µm口径石英毛细管，有效长度在50 cm左右。

高压电极的作用是将高压电源产生的高压传输到两个缓冲池中形成电回路。

b.进样系统为一可伸缩的高度进样杆，一般进样升到最高点，所产生的高度差提供0.5 psi

的进样压力。

c.紫外检测系统提供各个波长的紫外光，可根据所做物质的紫外吸收最大波长进行手动

调节。

二.毛细管电泳的日常维护以及注意事项

1.毛细管每次使用之前必须检查正负铂丝电极是否断裂——用手指轻轻挑动电极；

2.毛细管电泳使用完毕后一定要将干燥硅胶置入主机内，如若变红，须烘箱干燥后再放入；

3.毛细管主机内部不能用水清洗，只能在关机状态下用酒精浸泡的脱脂棉擦拭，或用小毛

刷扫除主机内部的灰尘；

4.非正常情况下不要将紫外检测器的暗池打开，以免损坏紫外光接收器；

5.高压电源与主机非正常情况下不要轻易移动位置；

6.实验中手法保持轻盈，毛细管较易折断，主机窗门轻开轻关；

7.实验结束后一定要将高压电源和主机的插头都拔掉，也不要将试验样品留在主机内部的

样品架上，要保持主机内部无任何附加的化学试剂；

8.下雨天或者潮湿天气不要开机，高压电源对湿度比较敏感，湿度较大的情况下开机可能

会使高压电源击穿，造成仪器损坏；

9.寒暑假实验室无人的情况下要将毛细管主机及高压电源用干净的实验服盖住，门窗关

好，保持实验室无人的状态下也干燥；

10.若仪器长时间不用，须定时在不插电关机状态下将毛细管冲洗一次，以免毛细管堵塞。

三.毛细管电泳运行操作

1.开机前的准备

开机实验前需依次用无水乙醇、1 mol/L HCl、1 mol/L NaOH、二次过滤水冲洗毛细管

10 min。用水冲洗时再开机。

2.开机

打开电脑上的“HW-2000”色谱软件

将高压电源和毛细管主机电源插头插上，再分别按下两台仪器上的电源键（下图红圈内）。

当二次水冲洗完毕后，再用此次实验所用的运行缓冲液冲洗毛细管10 min，冲洗完毕后此时毛细管主机的预热也完成了，可以运行基线或者进样分离检测。

3.高压电源的设置

a.高压电源可提供0-30 kV的分离电压，设置时首先按下电源上的“修改”键，再按下“电

压”键，即可看到电压显示窗口光标闪动，此时即可输入实验所需电压，比如25 kV，在面板上按下“2、5、0、0”四个数字键，再按下“确认”键，此时高压电源将提供25kV的电压

b.电源未提供电压时面板上“电流”窗口显示的是保护电流最高值，比如是“100 µA”，

即表示电源启动提供电压使毛细管与缓冲池之间产生电流回路，此时产生的电流如果超过“100 µA”，电源会自动切除高压，保护仪器。保护电流的设置与电压的设置一样。

4.主机检测波长的设置

检测实验样品时，根据参考文献查阅的该物质最大吸收来设置仪器的紫外波长，如下图：

开机后的主机显示窗口光标在最左边，按下“1”键使光标跳到显示窗口的波长上，并按“3或4”键使显示的波长达到所需的数字，并按“2”键使光标调回左边，此时会听到主机光栅机械调节发出的清脆两次声音，此时表示波长调节完毕。

5.运行仪器

A.毛细管仪每次开机预热后正常进样前，首先运行一次基线（毛细管内没有进样品），用

来查看仪器是否正常和缓冲液是否纯净。

a.将配制好的缓冲液装满两个缓冲池的三分之二，放入主机内的两个缓冲池托盘中，左边

的缓冲池此时可以上升并锁死（使左边的铂丝电极在液面以下）。

b.当毛细管用缓冲液冲洗完毕后便可将右边的缓冲池上升并锁死（此边注意铂丝电极和毛

细管都要在液面以下）。

c.将毛细管进样端（左端）从冲洗器中取出并插入左边的缓冲池，使毛细管在液面以下，

此时毛细管和正负铂丝电极形成一个电流回路。

d.关上主机的窗门，并按下主机显示窗口的红色“AUTO ZERO”键使紫外检测器归零。

e.再同时按下电源和主机上的“启动”和主机提供的控制按钮（小遥控上的红色按钮）。

按照以上过程，比如缓冲液是8.5 mM的硼砂和30 mM SDS在pH=9.5，那么电源上的电流显示窗口将出现“23”-“27”µA的正常电流变化。

电脑工作站上将显示一条平直的缓冲液基线，如下图：

或者平直但是稍倾斜的基线：

当缓冲液不纯净，或者仪器出现问题时可能出现下图的基线：

出现这种情况时，可多运行几次基线看是否会变好，或者将缓冲液重新配制（更换溶剂）。

B.进样运行

a.一般进样采用高度进样法，左右两边的缓冲池都上升并锁死，将主机内的高度进样器上

升到最高点固定，样品放置在进样器托盘内，毛细管进样端（左端）迅速插入样品液面以下读取15s，再迅速拿出插入左边的缓冲池并使在液面以下，放下进样器，将主机窗门关合，并开始运行（方法与运行基线一致）。

b.以SDS 30 mM + 硼砂8.5 mM + 30% 乙腈pH 9.5 + 10 mM CD的缓冲液，在18 kV电

压下，15s进样，分离检测四种多环芳烃为例，得到正常峰如下图：

c.当运行完毕后首先按下电脑工作站上的“停止运行按钮”，下图红圈中所示：

并按下高压电源上的红色停止按钮，然后打开主机窗门，放下右端的缓冲池，进行毛细管的冲洗（缓冲液冲洗）。

d.这时可在运行完毕后得到的色谱图上手动读取各物质峰的峰面积、塔板数、和分离度等

有效数据。读取塔板数时需要的是有效塔板数而不是理论塔板数。

在需要的读取的峰上用鼠标点右键，出现如下对话框：