血液RNA提取方法修订稿

血液RNA提取

血液RNA提取完全可以,我曾经全血标本6个小时后分离白细胞提RNA,结果很好.因为你提的是白细胞内的RNA,因而在细胞没破损前,一般情况下不会出现RNA的降解,当你开始加TIIZOL时,你的所有器材的处理尤其重要,因而放心的做吧,本人长期从事白血病融合基因的检测，曾经使用4度保存3天的血液进行RNA提取，效果同样非常满意，目前使用的一次性耗材基本上不用DEPC水处理，只要注意规范操作，按TIIZOL说明书操作，提取的RNA 质量同样非常的高。

附上本试验室的简易操作程序：1．外周血及骨髓（抗凝）利用淋巴细胞分离液分离单个核细胞（1）外周血送检需5-10ml抗凝血，骨髓需1-3ml抗凝，常温送检(样本量根据单个核细胞的数量来确定，一般需要5x106单个核细胞以上)。

（2）加入等体积无菌PBS于外周血及骨髓中充分混合，形成细胞悬液；（3）加入5ml淋巴细胞分离液于另一离心管。

（4）吸取5ml细胞悬液沿管壁轻轻加入到淋巴细胞分离液表面（注意勿与淋巴细胞分离液混合）。

离心1500rpm 20min。

（5）用吸管轻轻吸出界面层（白膜）中的MNC入另一离心管中。

无菌冷PBS洗2次，最后1次洗涤可以将细胞悬液移入EP管中，离心去上清直接或加入TRIzol混匀后-70℃冻存，或直接提取RNA（可以先进行细胞计数以保证细胞数）。

2．利用Trizol的方法提取细胞总RNA（参照Invitrogen公司Trizol说明书）以下步骤要严格防止RNA酶降解RNA，所使用的离心管和枪头要用0.1% DEPC水处理24h，然后高压灭菌并烤干。

尽量快地进行操作，减少RNA降解。

（1）先加1ml Trizol于1×107细胞中，若冻存细胞直接加入Trizol，不需解冻，吹打裂解后室温静置5-10min。

（可-70℃，1月）（2）加入0.2ml氯仿（三氯甲脘），剧烈震荡（vigorously）15s，室温静置2-3min。

血液提取RNA

786787?技术与方法?从血液中提取总rna的一种快速高效方法?明张页张沙周柔丽?京大学医学部基础医学院细胞生物学与遗传学系?京100083摘要血液中含有大?的rna酶可引起rna的降解
维普资讯
ＩＳＮＳ１０７２０７．６６
中国生物化学与分子生物学报
ｇａｉｉｕｉｏｈｏｙｎｔｕｎｄｎｉｍｓｔｉｃａａｅ．ＡｇｒｓｅｌｃｒｐｏｅｉｒｍｈｏａａｏｅｇｌｅｅｔｏｈｒｓｓｆｏｔｅｔｔＲＮＡｓｏｔｉｅｙｔｅｉｒｖｄｍｅｈｄｌｂａｎｄｂｈｍｐｏｅｔｏ
ｔｅｈｉｇｅｔｅｍｎｄｔａｕｓｎｉｒＴＲＩｎｈＺＯＬｏｕｎｉｉｉｍｓｔｉｃａａｅａｏｇｂｉｇａｃｍｂｎｔｏｆＴＺＯＬａｄｒｇａｄｎｕｉｏｈｏｙｎｔｎｙｕｓｎｏｉａｉｎｏＲＩｌｎ
ＨｏｖｒｍａｘｓｉｇＲＮＡｉｏａｉｎｍｅｈｄｒｏｅｙｓｔｓｅｕｏｉｃｍｐｅｅｎｉｉｏｆＲＮＡａｅｗｅｅ．ｎｙｅｉｔｎｓｌｔｏｔｏｓａｅｎｔｖｒａｉｆｄｄｅｔｎｏｌｔｉｈｂｔｎｏｉｉｓａｔｖｔｓＡｃｉｉｅ．ｍｏｉｅｔｏａｅｎｔｅＴＲＩｉｄｆｄｍｅｈｄｂｓｄｏｈｉＺＯＬｐｏｏｏ．ｔｗａｏｎｈｔｍｕｈｂｔｒｒｓｌｒｂ— ｒｔｃ１Ｉｓｆｕｄｔａ，ｃｅｔｅｕｔｗｅｅｏｅｓ

血液白细胞RNA提取步骤

血液白细胞RNA提取步骤1.人淋巴分离液从冰箱取出，恢复至室温后，取20ml置于50ml的离心管内2.取新鲜抗凝血10ml（肝素锂抗凝管），与PBS1:1混匀后(室温)，小心加于20ml 的人淋巴分离液（Ficoll）的液面上，大离心机内1500rpm、室温（22℃）离心30min(设置离心机，缓慢升速降速)，离心管中由上至下分为四层，用1000μl 的移液枪直接抽取第二层，用PBS反复洗2次既得所需细胞（每次加入PBS至总体积45ml，大离心机内2000rpm、4℃离心5min），用1mlPBS悬浮所得细胞。

3.取10μl菌液与10μl台盼蓝混合染色5min，镜检计数，死细胞为蓝色（统计活细胞与死细胞的比例）。

每5*106个细胞加入600μl Lysis Buffer (其中已加入1%的β巯基乙醇)。

（预计加入6000μlLysis Buffer，使用15ml的离心管）4.使用vortex震荡混匀，取10μl镜检细胞裂解情况，裂解完全后大离心机内12000*g离心2min5.将上清转入15ml离心管中6.加入适当体积的无水乙醇（使其终浓度为35%），vortex震荡混匀.(预计加入3300μl)，会有少量絮状沉淀出现。

7.将液体（包括沉淀）转入吸附柱中，小离心机内12000*g离心15s，弃下面的离心液（每次700μl，分多次加入离心）8.加入700μl Wash Buffer I，小离心机内12000*g离心15s，弃下面的离心液，将吸附柱转入新的离心管（1.5ml）中9.加入500μl Wash Buffer II，小离心机内12000*g离心15s，弃下面的离心液10.重复一次步骤911.再次小离心机内12000*g离心1min,将吸附柱转入新的离心管(1.5ml)中12.在吸附柱中央加入30μl Rnase-Free 水13.室温孵育1min14.小离心机内12000*g离心2min15.取10μl RNA电泳（1%琼脂糖凝胶，150V电泳20min）16.长期保存：-20℃；马上使用置于4℃保存使用试剂、仪器及厂家：1.人淋巴细胞分离液：主要成分为聚蔗糖(Ficoll)和泛影葡胺(Hypaque)，产地：Pharmacia 。

红细胞rna提取

红细胞rna提取红细胞RNA提取是一种常见的实验技术，用于研究红细胞中的基因表达和功能。

红细胞是人体中最常见的细胞类型之一，主要负责输送氧气到身体各个组织和器官。

虽然红细胞被认为是没有细胞核和DNA的，但事实上它们含有一定量的RNA，这对于研究红细胞的生物学特性具有重要意义。

红细胞RNA提取的过程相对简单，但需要一些特殊的技术和试剂。

首先，需要收集足够数量的红细胞样本。

可以通过采集新鲜的全血样本，然后进行红细胞的分离。

红细胞分离的方法有多种，常用的包括离心法和红细胞沉淀法。

这些方法可以有效地将红细胞与其他细胞类型分离开来，从而得到纯净的红细胞样本。

一旦获得了红细胞样本，就可以开始红细胞RNA的提取过程。

提取红细胞RNA的方法有多种，其中最常用的是酚-氯仿法。

该方法利用酚和氯仿的特性，将红细胞破坏并分离RNA。

首先，将红细胞样本加入含有酚的缓冲液中，使红细胞破裂并释放出RNA。

然后，通过离心将红细胞残渣与缓冲液分离开来。

接下来，将上清液转移到含有氯仿的管中，并进行混合。

氯仿可以与酚相分离，使RNA在上清液中富集。

最后，通过离心将RNA沉淀下来，去除上清液，得到红细胞RNA的提取物。

红细胞RNA提取后，可以进行进一步的实验操作。

其中最常见的是利用反转录酶将RNA转录为cDNA，然后进行定量PCR或测序等分子生物学实验。

这些实验可以帮助研究者分析红细胞中的基因表达水平和功能。

通过比较不同样本之间的RNA表达差异，可以发现不同红细胞样本之间的生物学差异，并深入了解红细胞的功能和调控机制。

红细胞RNA提取的关键步骤是确保高质量的RNA样本。

为了避免RNA的降解和污染，实验过程中需要严格控制样本的处理时间和条件。

此外，使用高质量的试剂和设备也是保证提取RNA质量的重要因素。

在实验过程中，可以通过比色法或电泳等方法检测RNA的纯度和完整性。

总结起来，红细胞RNA提取是一种重要的实验技术，可以帮助研究者深入了解红细胞的生物学特性。

提取血液总RNA两种方法的比较和分析_吕娜

图１两种方法的总ＲＮＡ浓度比较Ｆｉｇ．１Ｔｈｅｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｔｗｏｍｅｔｈｏｄｓｏｆｔｈｅｔｏｔａｌ
ＲＮＡｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
２．２总ＲＮＡ样品的１％的琼脂糖凝胶电泳总ＲＮＡ完整性检验的常规方法是高压快速电
泳，在较短的时间内，使ＲＮＡ电泳完毕，防止ＲＮＡ降解。结果见图２。
收稿日期：２００７－０３－３０作者简介：吕娜（１９８１－），女，黑龙江人，硕士研究生，研究方向为营养与食品安全。＊通讯作者Ｅ－ｍａｉｌ：ｎｉｎｇｌｉｕ６６６６＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
用微量加样器取上清液，转移入另一个无菌、无ＲＮＡ酶的１．５ｍＬ离心管内，向管内加入８００ !Ｌ异丙醇，混匀，室温静置８ｍｉｎ。４ ℃、１２０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，弃上清液，加预冷的焦碳酸二乙酯处理水配制的７５％乙醇１．２ｍＬ，轻轻颠倒洗涤离心管管壁，弃乙醇，再加入１ｍＬ７５％乙醇，震荡摇匀，使ＲＮＡ沉淀重新悬浮。４ ℃、８０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，弃上清，倒置于干净滤纸上片刻，开盖，使乙醇挥发，剂盒提取总ＲＮＡ
２结果与分析
２．１总ＲＮＡ提取纯度通过ＯＤ２６０／ＯＤ２８０的比值可以判断ＲＮＡ的纯度。
本试验用两种不同的方法所提ＲＮＡ样品的纯度都达到了１．８～２．０，准确计算ＲＮＡ的纯度和得率，结果见表１。根据表１的浓度结果作出图１，从图１中得出，两种方法提取的ＲＮＡ纯度均较高，但是用试剂盒提取的ＲＮＡ浓度明显高于ＴＲＩｚｏｌ法提取的浓度，说明用试剂盒提取的ＲＮＡ得率更高。

血液RNA提取方法修订稿

血液RNA提取方法修订稿血液RNA提取是基因研究和生物医学研究中常用的方法之一、它的主要目的是从血液样本中提取出RNA，以进一步研究基因表达和功能。

在过去的几十年里，血液RNA提取方法已有了很大的改进和发展。

本文主要介绍了血液RNA提取的常用方法以及一些修订的新技术。

目前，血液RNA提取常用的方法主要有酚/氯仿方法、载体方法和商业试剂盒方法等。

酚/氯仿方法是最早用于RNA提取的方法之一，它包括细胞破碎、酚提取、酸解和氯仿萃取等步骤。

这种方法提取的RNA质量好，适用于大规模提取和高通量分析。

然而，它的操作繁琐，时间长，并且使用了大量的有机溶剂，可能对环境造成污染。

载体方法是另一种常用的血液RNA提取方法。

它利用特定的载体分子与RNA结合，然后通过离心或磁力分离的方式将RNA与其他细胞成分分离开来。

这种方法操作简单，快速且不需要有机溶剂，因此更环保。

它适用于小规模提取和快速分析，但对于大规模提取和高通量分析来说，效果可能不如酚/氯仿方法好。

商业试剂盒方法是近年来发展起来的一种血液RNA提取方法。

这种方法使用了经过优化的试剂盒，通过吸附、洗涤和洗脱等步骤从血液中提取RNA。

这些试剂盒通常配备有详细的操作说明和专业的技术支持，使得操作更加简单和可靠。

此外，一些商业试剂盒还可以将DNA和RNA同时提取，提高了样本的利用率。

商业试剂盒的缺点是价格相对较高，但对于大规模提取和高通量分析来说，它仍然是一种可行的选择。

除了传统的血液RNA提取方法，近年来还出现了一些修订的新技术。

例如，磁性颗粒技术可以通过载体磁性颗粒快速分离血液中的RNA。

这种方法不仅操作简单，还可以提高RNA的纯度和质量。

此外，微流控芯片技术也逐渐应用于血液RNA提取中。

这种技术可以精确控制液体的流动和混合，从而提高RNA的提取效率和准确性。

血液RNA提取方法的选择应根据具体的实验目的和条件来确定。

如果需要提取大量和高质量的RNA样本，酚/氯仿方法可能是一个很好的选择。

RNAblood 超纯全血总RNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书

RNAblood 超纯全血总RNA快速提取试剂盒目录号：RN25目录编号包装单位RN2502 50次❖适用范围：适用于快速提取全血高纯度总RNA❖试剂盒组成、储存、稳定性：﹢试剂盒组成保存50次10X红细胞裂解液RLB 裂解液RL室温4℃避光25 ml50 ml去蛋白液RE 室温25 ml漂洗液RW 室温10 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RNase-free H2O 室温10 ml70%乙醇室温9ml RNase-free H2O第一次使用前按说明加指定量乙醇RNase-free吸附柱RA 室温50个收集管（2ml）室温50个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项：1.所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。

2.不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

裂解液RL可以常温运输，收到后4℃避光保存。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

❖产品介绍：1.第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!2.所有离心步骤如未加说明，均在室温进行。

使用转速可以达到13，000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

3.裂解液RL和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。

若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

4.考虑到环保问题，本试剂盒不含有实验室常用试剂氯仿，用户使用前需要自备氯仿。

5.常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。

好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带，分别为~5Kb（28S），~2Kb （18S），条带亮度比值约为2：1。

全血提取rna注意事项

全血提取rna注意事项以全血提取RNA注意事项为标题，写一篇文章。

全血提取RNA是一项重要的实验技术，用于从全血样本中提取RNA，以便进行后续的分析和研究。

在进行全血提取RNA的过程中，有一些注意事项需要遵守，以确保提取到高质量的RNA样本。

样本的收集和保存非常关键。

在收集全血样本时，应使用无添加剂的采集管，以避免对RNA的降解产生影响。

此外，在采集样本后，应尽快将其转移到低温环境中保存，如-80摄氏度的冰箱或液氮罐内。

这样可以最大限度地减少RNA的降解并保持其完整性。

样本的处理需要遵循一定的步骤和规定。

在进行全血提取RNA之前，通常需要进行红细胞去除步骤，以减少红细胞对RNA的干扰。

这可以通过血浆或血清分离的方法来实现。

另外，在样本处理过程中，应尽量避免使用RNase酶和其他可能对RNA产生降解作用的物质。

此外，还应注意避免样本的过度离心和过滤，以免对RNA 产生不必要的损伤。

第三，选择合适的提取试剂盒和方法也是至关重要的。

市面上有许多不同的RNA提取试剂盒可供选择，如TRIzol、RNeasy等。

在选择试剂盒时，应考虑其适用于全血样本的特殊性，并根据实验需求选择合适的方法。

此外，遵循提取试剂盒的说明书和操作步骤非常重要，以确保提取过程的准确性和稳定性。

在全血提取RNA过程中要注意实验室的操作规范和生物安全。

应严格遵守实验室安全操作规程，佩戴实验手套和口罩，定期消毒工作台和实验器具，以防止样本的交叉污染和RNA的降解。

全血提取RNA是一项复杂而关键的实验技术。

在进行全血提取RNA时，需要注意样本的收集和保存、样本的处理步骤、选择合适的提取试剂盒和方法，以及实验室的操作规范和生物安全。

只有严格遵守这些注意事项，才能提取到高质量的RNA样本，为后续的实验和研究提供可靠的基础。

如何从-80℃冻存的抗凝全血中提取RNA

如何从-80℃冻存的抗凝全血中提取RNA众所周知，RNA容易降解，所以一般提取RNA都会使用新鲜的样本，如果新鲜样本不能立即提取RNA，应立即放到-80℃冻存。

但关键是血液中的红细胞不含有RNA，提供RNA的主要是白细胞，市面上主要的血液RNA提取试剂盒（比如QIAGEN）用到的原理都是将白细胞与其它组分分离（用红细胞裂解液去除红细胞）再提取其中的RNA。

一旦血液经过冷冻就会出现溶血现象，这时所有的细胞都发生破裂，已经无法分离白细胞了，使用这种方法的试剂盒自然也就提不到RNA。

那么只要我们不使用分离白细胞方法是不是就可以从冷冻的抗凝血中提取到RNA 呢？我接接下来使用Simgen独创的全血总RNA试剂盒，是无需红细胞裂解液分离白细胞，直接从全血中提取RNA的。

我们开始上实验测试：实验材料：-80℃冷冻75天的抗凝全血；预先按500 µl血样比1 ml Buffer L9的比例加入Buffer L9的同一个抗凝全血样本作为对照组（备注：Simgen 全血总RNA试剂盒中的Buffer L9与抗凝全血预混后可在-20℃长期冻存，RNA不会降解）。

实验试剂：全血总RNA试剂盒（simgen，Cat.No.5201050）cDNA第一链合成试剂盒（simgen，Cat.No.7306025）2×SYBR Green PCR Mix（simgen，Cat.No.7106100）人β-actin引物（Forward：TGACGTGGACA TCCGCAAAG/Reverse：CTGGAAGGTGGACAGCGAGG）实验方法：1. 分两组进行对比实验，每组各做两管：第一组取2个2 ml离心管，各加500 µl新鲜全血，编号1、2；第二组加入500 µl新鲜全血后再加入1 ml Buffer L9，混合均匀，编号3、4。

将两组样本置于-80℃冻存，冻存75天。

2. 75天后取出后置于室温，待血样全部融化后，向1、2中加入1 ml Buffer L9混合均匀；3. 13000 rpm离心10分钟；4. 吸取700 µl离心上清转移到装有500 μl无水乙醇的1.5 ml 离心管中混匀；5. 分两次将混合液转移到核酸纯化柱中，离心去滤液；6. 依次用500 µl Buffer WA和700 µl Buffer WBR各洗涤一次；7. 用50 µl RNase-Free Water洗脱RNA；8. 在微量紫外分光光度计上测量RNA的浓度；9. 琼脂糖凝胶电泳；10. 逆转录制备cDNA；11. 取5 μl cDNA模板进行RT-PCR检测。

血液总RNA抽提

血液总RNA抽提第一篇：血液总RNA抽提血液总RNA抽提1.取250ul血清加入750ul Trizol LS（用于液体中RNA的抽提）中，剧烈震荡，静置。

2.加入200ul 三氯甲烷，剧烈震荡，静置10min。

3.4度，12000g 离心15min。

4.吸上清至新的EP管，加入500ul(与所吸出的上清比列为1:1)异丙醇，并加入1ul的糖原，轻轻上下颠倒混匀，-20度冰箱沉淀过夜。

5.4度，12000g 离心15min。

留沉淀（RNA），将上清倒掉，加入1ml 75%的乙醇（DEPC水配），上下颠倒，洗涤RNA沉淀。

6.4度7500g离心10min。

去上清，将沉淀晾干（不能太干）加入10ul左右的Rnase free 的水溶解即可。

第二篇：沉淀法抽提RNA沉淀法抽提RNA 1.取适量组织（不超过黄豆大小），加入液氮碾磨至粉末状。

2.趁冷加入1ml trizol 碾磨覆盖所有组织粉末，室温待其彻底融化后吸入ep管中。

3.加入200ml氯仿剧烈震荡20 sec，12000 rpm离心8分钟，吸出上清到新ep管中。

4.加入等体积异丙醇，混匀后-20度沉淀半小时以上或沉淀过夜。

5.12000 rpm 4度离心10 min，倒去上清。

6.加入300 ul 75%乙醇，vortex 10 sec 至沉淀飘起。

7.12000 rpm 离心3分钟倒去上清蘸干，离心1~2分钟用移液枪吸干上清。

8.加入50~100 ul Rnase free H2O，vortex 溶解沉淀。

9.测定浓度后，用磁珠纯化以去除杂质。

磁珠法纯化RNA 1.加入1倍体积混匀后的beads和2倍体积的无水乙醇，vortex混匀，室温放置3分钟。

3.5000rpm离心1分钟，置于磁力架上1分钟，吸去上清。

4.加入加入100 ul 80%乙醇，vortex混匀，静置1分钟，5000rpm离心30s。

5.磁力架上放置1分钟，吸去上清，重复一次。

血清microRNA提取方法(biog方法)

BIOG血清microRNA提取方法操作方法1.请自行准备：无水乙醇、无RNA酶1.5mL离心管。

2.取出洗涤液，按以下操作：a) 洗涤液A（BIOG cfRNA easy kit）：21mL加入9mL无水乙醇；42mL加入18mL无水乙醇。

b) 洗涤液B（BIOG cfRNA easy kit）：9mL加入21mL无水乙醇；18mL加入42mL无水乙醇。

c) 配制好的洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。

3.取无RNA酶的1.5mL离心管，加入200μL血清样本，4μL RNA Carrier混合均匀，再加入300μL 裂解液（BIOG cfRNA easy kit)及20μL 消化液（BIOG cfRNA easy kit），漩涡震荡10秒，充分混匀，56℃水浴10 分钟至完全裂解。

4.加入1000μL无水乙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响RNA的提取与后续实验。

5.将吸附柱放入收集管内，将760μL上述溶液转入吸附柱内，静置2 分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液.6.将剩余760μL溶液转移至吸附柱内，重复步骤5。

7.将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液A至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。

8.将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液B至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。

9.将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，离去残留的洗涤液。

10.取出吸附柱，放入新的无RNA酶的1.5 mL 离心管内，加入30-50μL 洗脱液（BIOG cfRNA easy kit），静置3 分钟，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，收集RNA溶液。

11.-70℃保存，或直接用于下一步实验。

注意事项1. 为防RNA酶污染，实验过程中最好戴一次性干净手套、口罩，使用处理过的无RNA酶的容器和无RNA酶的超纯水。

全血提取rna步骤及注意事项

全血提取rna步骤及注意事项全血提取RNA步骤及注意事项引言：RNA是一种重要的生物大分子，它在细胞内参与了许多关键的生物过程。

全血提取RNA是一种常用的实验方法，用于获取全血样本中的RNA，并进一步应用于分子生物学研究。

本文将介绍全血提取RNA的步骤及注意事项。

一、全血提取RNA的步骤：1. 样本采集：a. 使用无菌技术，采集全血样本，并将其转移到无菌离心管中；b. 保持样本无菌，避免污染。

2. 血浆分离：a. 将全血样本离心，将血浆和混浊的细胞沉淀分离开；b. 小心地将血浆转移到新的离心管中。

3. 细胞沉淀处理：a. 将细胞沉淀洗涤，去除血浆中的残留细胞；b. 加入适量的PBS缓冲液，轻轻混合，离心沉淀；c. 去除上清液，获得纯净的细胞沉淀。

4. 细胞破碎：a. 加入适量的细胞破碎缓冲液，使细胞完全破碎释放RNA；b. 使用离心机离心，去除细胞碎片。

5. RNA纯化：a. 加入适量的RNA纯化试剂，使RNA与其他杂质分离；b. 使用离心机离心，将RNA沉淀下来；c. 去除上清液，使用酒精洗涤RNA沉淀；d. 最后用RNase-free水溶解RNA沉淀。

6. RNA质量检测：a. 使用比色计或生物分析仪检测RNA的浓度和纯度；b. 确保RNA质量良好，无降解和污染。

二、全血提取RNA的注意事项：1. 样本处理：a. 采集全血样本时，注意样本的无菌和无污染；b. 在处理全血样本时，尽量避免样本的降解和污染。

2. 实验操作：a. 在操作过程中，使用无菌技术，保持实验环境的清洁；b. 使用RNase-free材料和试剂，避免RNA的降解；c. 注意各步骤的离心条件和时间，确保样本的分离和沉淀效果。

3. RNA质量检测：a. 使用合适的方法和仪器，准确测量RNA的浓度和纯度；b. 检测RNA的完整性，确保RNA未受到降解。

4. RNA保存：a. 在提取完RNA后，及时将其保存在-80℃的冰箱中，避免RNA的降解和损失；b. 使用RNase-free管和RNase-free手套进行保存。

全血RNA提取

Qtiangen的RNAprep pure 血液总RNA提取试剂盒本试剂盒可从血液中快速提取总RNA，可同时处理大量不同样品。

提取的总RNA 纯度高，没有蛋白和其它杂质的污染，可用于RT-PCR、Real Time RT-PCR、芯片分析、Northern blot、Dot blot、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析分子克隆等多种下游实验。

操作步骤：1. 红细胞裂解液的稀释：根据处理血液样品的体积选取适当体积的10×红细胞裂解液（例如待处理的血液样品体积为200 μl，则取140 μl 10×红细胞裂解液），用RNase-free ddH2O 稀释至1×红细胞裂解液。

2. 向1 体积人类全血中加5 倍体积1×红细胞裂解液(需自备合适的干净管子)。

注意：为获得最佳的混匀效果，血液和1×红细胞裂解液的混合液体积不应超过管子体积的3/4。

如果血液中的白细胞含量较高，可按比例减小血液的使用体积，第6 步中的裂解液RL的使用体积也要进行相应调整。

3. 在冰上孵育10-15 分钟，在孵育过程中涡旋振荡混匀2 次。

注意：在孵育的过程中溶液将变成半透明状态，表明红细胞裂解。

如果必要的话，孵育时间可延长至20 分钟。

4. 4℃ 2,100rpm (~400×g)离心10 分钟，将上清完全去除。

注意：离心后白细胞可能会形成小球，确保完全去除上清，痕量红细胞的存在，会使白细胞小球呈现红色，而该现象会在随后的漂洗步骤中消失。

5. 向白细胞沉淀中加入1×红细胞裂解液（加入1×红细胞裂解液的体积是第1 步中全血用量的2 倍），重悬细胞。

6. 4℃，2,100rpm (~400×g)离心10 分钟，将上清完全去除。

注意：如果上清去除不完全将会影响裂解及随后的RNA 与膜的结合，导致最后RNA产率降低。

7. 向白细胞沉淀中加入裂解液RL（使用前请加入β-巯基乙醇），具体加量按照下表进行，涡旋或使用移液器混匀。

血液RNA提取方法

血液RNA提取方法1.准备工作-清洁实验台面，穿戴好实验室安全装备。

- 准备所需的试剂和器材，包括RNA提取试剂盒、漂白液、异丙醇、1.5 ml离心管，离心机等。

2.血液采集-使用无菌的针头和注射器采集血液样本，将血液保存在无菌离心管中。

-如需处理大量样本，可以使用血液采集管，一次采集多个样本。

3.血液预处理- 将采集到的血液样本倒入1.5 ml离心管中，并加入等体积的漂白液。

-轻轻颠倒离心管，使漂白液和血液充分混合。

4.混合液离心-将混合液置于离心机中，以最大速度离心10分钟，将红细胞沉淀在底部。

5.上清液转移- 小心地用吸管或移液器将上清液转移到新的1.5 ml离心管中，避免沉淀带入。

-上清液中含有白细胞和血小板。

6.细胞溶解-加入等体积的溶解缓冲液到上清液中，充分混合均匀。

-将样本在室温孵育10分钟，使细胞溶解。

7.RNA沉淀-向离心管中加入等体积的异丙醇，轻轻颠倒离心管混合均匀。

-将混合液置于-20℃的冰箱中冷藏30分钟，使RNA沉淀。

8.离心沉淀-将样品置于离心机中，以最大速度离心10分钟，使RNA沉淀在离心管底部。

9.清洗RNA沉淀-轻轻将上清液倒掉，并用70%的乙醇洗涤RNA沉淀。

-注意避免触碰RNA沉淀，以免影响后续的实验分析。

10.干燥和溶解RNA-将离心管打开，将离心管放入干燥器中，使RNA沉淀完全干燥。

- 加入适量的RNase-free水或缓冲液溶解RNA沉淀，使其完全溶解。

11.RNA质量和浓度测定-使用纳米分光光度计或其他方法测定RNA的浓度和纯度。

-确保提取的RNA质量好，以获得准确的实验结果。

12.存储RNA样品- 将提取的RNA样品分装到RNase-free离心管中，并存储在-80℃的冰箱中，避免RNA降解。

RNA提取方法修改版

羽毛RNA提取方法羽毛组织样品采集：1.RNA样品采集相关耗材准备：手术剪，镊子，RNAZap，DEPC水配制的75%酒精2.首先对环境布置并简易去除RNase。

（用75%酒精和RNAZap）3.选取growing feather（见下图1），快速放入将组织放入盛有1mLTrizol的玻璃Telfon管（见下图2）。

RNA提取实验准备工作：1.试剂的准备：Trizol、氯仿、异戊醇、75%乙醇（DEPC处理过水配制）、无水乙醇、DEPC水。

2.仪器的准备：冷冻离心机（提前开好机器，把温度调到4 C）、1.5ml无RNase离心管、枪（100ul、1000ul）。

3.正式提取前，对超净台先用75%乙醇进行处理，然后用RNAZap处理。

所用仪器也用RNAzap进行处理。

常用实验操作流程--分离RNA1.将组织放入盛有1mLTrizol的玻璃Telfon管（见下图2）中，上下反复匀浆，破碎组织。

（该组织液可存放于-80度冰柜一个月）注意：前期采样过程要用75%的酒精，RNAzap喷洒羽毛和剪刀镊子，破碎组织过程全程在冰上进行，该过程比较重要。

2. 将上述匀浆液吸出到1.5ml无RNase离心管，于室温静置5分钟。

3. 加0.2ml氯仿到匀浆液上方，盖上管盖；剧烈震荡15秒（使用振荡器），室温（15-30度）静置2-3分钟。

4. 4度12,000 x g离心样品15分钟。

（液体分层为淡红色苯酚/ 氯仿混合液，中间层，无色上清液（从底部到顶部）。

RNA在无色上清液中，此后步骤RNA都极易降解）5. 打开管盖，45度角倾斜离心管，把上清液转移到新管中，如果分离DNA和蛋白质可保留底层苯酚/氯仿混合液。

6. 加0.5ml 100%的异丙醇，轻柔上下翻转15次，室温静置10分钟。

7. 4度12,000 x g离心10分钟。

8. 离心后在管侧和管底出现胶状沉淀，移去上清。

9. 加1ml 75%乙醇洗涤RNA沉淀（轻柔上下翻转5次）。

血RNA的提取方法

血液RNA的提取过程【血白细胞的提取】①采2ml的鲜血至于肝素抗凝的管中→移入50ml的离心管中→②加3倍以上的体积（6ml）的RBC Lysis Buffer（红细胞裂解液）→③反复轻轻来回颠倒1min混匀（切忌强烈V ortex）→④室温下置于离心机上静置10min（使红细胞充分裂解）→⑤以5000转/min 的速度离心1min（离心前注意在天平上配平）→⑥尽可能清洁的移除上清液→移除后可见白色颗粒沉于管底；如果红细胞未裂解完全，管中仍可见红色沉淀物→继续加200ul的1xPBS Buffer或0.9%的Nacl→重复步骤②-⑤→倒掉上清液（此时白细胞均贴于管壁上）【裂解白细胞，提取RNA】取1ml的TRIZOL贴管壁冲洗管壁上的白细胞→将冲洗液移入1.5或2ml的EP管中，室温下静置5min→加200ul的氯仿（此物有毒，且操作时注意避光），并V ortex一下（10s）→4℃的离心机上以13000转/min的速度离心5min（离心机提前预冷）→取600ul上层水相液置于另一EP管中→加等体积（600ul）的异丙醇，混匀后于-20℃冰箱内静置20min→4℃的离心机上以13000转/min的速度离心10min →倒掉上清液→加75%的乙醇600ul（提前于-20℃的冰箱里预冷一下2-3min）→4℃的离心机上以13000转/min的速度离心10min→离心完毕后倒掉乙醇，并置于真空抽干机上使乙醇挥发掉（约1-2min）→取出RNA产物加10ul Depc H2O【逆转录cDNA】在RNA产物中的乙醇挥发过程中迅速配制PCR体系，体系配制如下：将配好的Mix加入10ul的RNA产物中，形成完整的PCR体系（共计25ul）→置于42℃条件上（金属浴上）40min→迅速移至90℃条件上（金属浴上）3min→置于冰块上（4℃）10s→生成cDNA产物→向产物中加225ul的ddH2O稀释至250ul→置于-20℃的冰箱里保存。

血浆rna提取方法

血浆rna提取方法血浆RNA提取方法引言：血浆RNA提取是一项重要的实验技术，它可以从血浆样本中提取出RNA分子，为进一步的研究和分析提供了基础。

本文将介绍血浆RNA提取的方法，包括样本采集、预处理、RNA提取和质量检测等步骤。

一、样本采集在进行血浆RNA提取实验之前，首先需要采集血浆样本。

常用的样本采集方法有离心法和血浆分离管法。

离心法是将全血样本以高速离心，分离出血浆，再将血浆转移到离心管中。

血浆分离管法是使用一种特殊的采血管，可以在采血的同时将血浆和细胞分离开来。

无论使用哪种方法，采集的血浆样本都需要立即冷藏并尽快进行后续处理。

二、预处理为了提高血浆RNA的提取效果，可以在提取之前进行一些预处理步骤。

首先，将血浆样本从冰箱中取出，使其温度逐渐回升到室温。

然后，将血浆样本转移到冰缸中，并缓慢搅拌，确保样本均匀。

接下来，使用离心机将血浆样本离心，去除悬浮在上层的细胞残渣。

最后，将离心后的上清液转移至新的离心管中，并再次进行离心，去除可能残留的细胞。

三、RNA提取RNA提取是血浆RNA提取的核心步骤，常用的方法有酚-氯仿法、硅胶柱法和磁珠法。

酚-氯仿法是一种经典的RNA提取方法，它通过酚和氯仿的相分离，将RNA分离出来。

硅胶柱法是一种基于硅胶膜的RNA提取方法，它利用硅胶膜的亲和性将RNA吸附在硅胶膜上，并通过洗脱的方式得到RNA。

磁珠法是一种新兴的RNA提取方法，它利用磁珠的磁性将RNA与其他组分分离开来，具有操作简便、提取效果好等优点。

四、质量检测为了确保提取的血浆RNA的质量和纯度，需要进行一系列的质量检测。

常用的质量检测方法有比色法、凝胶电泳和实时荧光定量PCR。

比色法可以通过检测RNA的吸光度来评估其浓度和纯度。

凝胶电泳可以通过检测RNA在琼脂糖凝胶上的迁移情况来评估其完整性。

实时荧光定量PCR可以通过检测RNA的扩增曲线和阈值周期数来评估其含量和质量。

结论：血浆RNA提取是一项重要的实验技术，在生物医学研究和临床诊断中具有广泛的应用前景。