色谱分析法在药物分析中应用
色谱技术在药物分析中的应用
色谱技术在药物分析中的应用随着药物研究的不断深入，药物分析技术也得到了极大的发展，其中色谱技术是其中的重要方法之一。
色谱技术通过利用物质在不同条件下在固体、液体等介质中的差异，实现对药物的定性和定量分析。
本文将围绕色谱技术在药物分析中的应用进行阐述。
一、药物分析的背景和意义随着国内外医学研究的不断深入，新药研发数量不断增加。
而药物的合成、纯化、稳定性和生物效应等因素会影响药物的疗效和安全性。
为保障人体的健康和生命安全，药物的研究开发过程中，需要对药物进行严格的质量控制和稳定性评估。
药物分析是药物质量评价的核心内容之一。
药物分析可分为药物质量分析、药物稳定性分析、药物纯度分析、药物杂质分析等多个方面。
其中，药物质量分析是药品质量控制的基础，可为药物研发和制造提供可靠的质量指标和控制手段。
药物稳定性分析能够及时发现药物在储存和使用中的变化情况，为制定药物储存和使用标准提供基础数据。
药物纯度分析则能够快速判断药品的质量，确保药品符合质量标准。
二、色谱技术在药物分析中的应用1. 气相色谱技术气相色谱法是一种基于化学物质固、液分离特性的分离技术。
气相色谱技术可用于药物杂质含量分析、药物定量分析等多个方面。
其中，气相色谱-质谱联用技术可用于药物分子结构的确定。
2. 液相色谱技术液相色谱法是一种基于化学物质在溶液中的相互作用特性进行分离的技术。
液相色谱技术广泛应用于药物的定性和定量分析。
例如，药物含量分析、药物纯度分析、药物残留分析等方面。
此外，液相色谱-质谱联用技术还可用于药物的分子识别、化合物定性等方面。
3. 常见的色谱技术在药物分析中，比较常见的色谱技术有高效液相色谱法（HPLC）、离子色谱法（IC）、气相色谱法（GC）、毛细管色谱法（CE）等。
各类色谱技术在药物分析中有各自的特点，具体应用需根据药物的特性和待分析物质的物理化学性质进行选择。
三、色谱技术在药物分析中的挑战及应对措施在药物分析中，色谱技术的应用常受到许多限制。
色谱法在药物分析中的应用
１ 对 已知 化合 物进 行定 性分 析及 结构 鉴定
酯在 ５～５ ０ ｍ ｌ （ ｒ ＝ ０ ． ９ ９ ９ ８ ） 范 围 内线性 良好 ， 加样 回收率 为 ９ ４ ． ７ ％， Ｒ Ｓ Ｄ为 ２ ． ８ ％ 。测 定 结 果显 示 ， ９批 不 同产地 的独 一 味药材 中山栀 子苷 甲酯 的含 量差 异较
（ ６ ０ ：３ ６ ：４ ） 为流 动相 ， 测定 细 辛属及 马 兜铃 属药 材 中
铃 酸 Ａ进样 量 线 性 在 ０ ． ０ １～ ０ ． ２ ５／ ｘ ｇ范 围 内 ， 平 均 回
（ Ｃ） ， 进 行梯 度 洗 脱 ， 结果显示绿原酸、 木 犀 草 素 和 蒙
ｒ ｎ ｌ （ ｒ ＝０ ． ９ ９ ９ ３ ） ， １ ０ ． ５～ ｍｌ （ ｒ ＝０ ． ９ ９ ９ ６ ） 和 １ ． ２～１ ２ ． ０ ｘ Ｉ ｇ ／ ｍ ｌ （ ｒ ＝
种 。另有 ２ ０种 成 分 分 别 为 各 产 地 所 独 有 ， 但 含 量 甚
泛 地应 用 于环境 保 护 、 药 物分 析 、 食品安全、 生 命 科 学 微 ， 其 他 的成分 则 在 ２种 以上产 地上 存在 。
等 领域 。根 据分 离方 法分 为 薄层 色谱 法 、 气 相 色谱 法 、 ２ 对 药 品质 量 的控 制 柱 色谱法 、 高效液 相 色谱法 离 子交换 色谱 法 等 … 。随着
天津 药学
Ｔ ｉ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍ ａ ｃ ｙ ２ ０ １ ４年
第２ ６卷
第 １ 期
６ ５
色谱法在药物分析中的应用
色谱法在药物分析中的应用【摘要】色谱法在药物分析中扮演着重要的角色。
本文通过介绍液相色谱法、气相色谱法、超高效液相色谱法、色谱联用技术和毛细管电泳色谱法在药物分析中的应用，展示了色谱法在药物分析中的广泛应用和重要性。
本文探讨了色谱法在药物分析领域的未来发展趋势，指出色谱法在药物分析中仍然具有巨大的发展空间和潜力。
通过本文的研究，可以更好地了解色谱法在药物分析中的应用情况及未来发展方向，为药物研发和质量控制提供参考和指导。
【关键词】关键词：色谱法、药物分析、液相色谱法、气相色谱法、超高效液相色谱法、色谱联用技术、毛细管电泳色谱法、发展趋势。
1. 引言1.1 背景介绍色谱法是一种重要的药物分析技术，其应用得到了广泛的认可和应用。
色谱法通过物质在不同条件下的分配和迁移规律，对药物进行分离和检测，具有高效、灵敏、准确的优点。
在药物研究和开发中，色谱法被广泛应用于药物成分的分析、质量控制、药代动力学研究等方面。
1.2 色谱法在药物分析中的重要性液相色谱法在药物分析中的应用主要体现在其在复杂混合物样品的分析上具有很高的分辨率和灵敏度，可以有效分离和测定不同化合物的含量。
气相色谱法则常用于对气体和挥发性有机化合物的分析，具有较高的灵敏度和分辨率。
超高效液相色谱法是近年来发展起来的一种新型色谱方法，其在药物分析中的应用越来越广泛，能够提高分析速度和灵敏度。
色谱法在药物分析中的应用对于确保药物的质量和安全具有重要意义，未来随着技术的不断发展和完善，其在药物领域的地位将会进一步得到强化和拓展。
2. 正文2.1 液相色谱法在药物分析中的应用液相色谱法在药物分析中被广泛应用，其原理是利用不同化合物在流动相和固定相之间的分配系数不同而实现分离。
通过选择合适的流动相和固定相，可以对药物进行高效、快速、准确的分析。
液相色谱法可以用于药物的纯度检验。
通过检测样品中杂质的含量，可以确保药物的纯度符合标准要求，保证药物的质量。
液相色谱法还可以用于确定药物中的主要成分的含量，帮助调整生产工艺，提高药物的制备质量。
药物分析中的色谱技术测定药物纯度
药物分析中的色谱技术测定药物纯度色谱技术是一种广泛应用于药物分析领域的有效方法。
通过分离、检测和定量药物活性成分、杂质和有关化合物，色谱技术能够准确测定药物的纯度。
本文将介绍常见的色谱技术在药物分析中的应用，并深入探讨色谱技术的原理及测定药物纯度的方法。
一、色谱技术在药物分析中的应用1. 气相色谱(GC)气相色谱是一种常用的色谱技术，其运用气体作为载气相，将待测物质分离。
在药物分析中，GC能够精确测定药物中的有机物质，如挥发性成分及有机溶剂残留。
该技术具有分离效果好、分析速度快且准确的特点，因而被广泛应用于药物质量控制和质量评价。
2. 液相色谱(LC)液相色谱是一种基于样品溶解于流动相中进行物质分离的技术。
在药物分析中，LC可用于分离复杂样品中的多个组分，并测定其中药物的纯度。
LC具有广泛的应用范围，包括药物成分分析、药物稳定性研究和药物相溶性研究等领域。
3. 薄层色谱(TLC)薄层色谱是一种常见的简单分离技术，其原理是将待测物质分离于涂层在均匀薄板上的固定相上。
在药物分析中，TLC常用于快速鉴别药物中特定成分的存在以及评估药物的纯度。
由于操作简便、成本低廉，TLC被广泛应用于药物分析实验室。
二、色谱技术的原理色谱技术基于样品成分在固定相和流动相之间的分配行为进行分离。
固定相可为固体或涂覆在固体支持物上的涂层，而流动相则可为气体或液体。
在色谱分离中，样品溶解于流动相中，然后通过固定相，其中成分之间的分配系数不同，使其在固定相中有不同的迁移速度。
通过调节流动相组成和固定相性质，可以实现对药物中各个成分的分离和测定。
三、药物纯度的色谱测定方法1. 直接法直接法是一种常见的测定药物纯度的方法，在这种方法中，将待测药物样品直接注入色谱仪中进行分析。
通过比较药物样品的峰面积或峰高度与标准品进行对比，可以确定药物的纯度。
2. 衍生化法衍生化法是一种将药物样品在色谱前进行化学反应，生成易于分离和检测的衍生体，从而提高色谱分离效果和药物纯度测定的准确性。
色谱法分析技术在药物研究中的应用
色谱法分析技术在药物研究中的应用近年来，随着人们对健康的关注程度不断提高，药品的发展也越来越重要。
药物的研究和生产需要先进的分析技术来验证质量和安全性。
色谱法分析技术作为一种高效、准确、灵敏的药物分析方法，被广泛应用于药物研究中。
本文将介绍色谱法分析技术的基本原理、常见类型以及在药物研究中的应用。
一、色谱法分析技术的基本原理色谱法是一种通过分离混合物中各组分的方法。
其基本原理是使用稳定的相对运动，例如液相和固相、气相和液相、气相和固相等相对运动来达到部分或全部分离混合物中不同成分的目的。
在实际应用中，色谱法的分离效果取决于物理和化学性质的差异。
色谱法分析技术适用于分析含量低、结构复杂的化合物，并且分手性化合物的分离也可以通过色谱法完成。
该分析技术具有操作简单、结果准确、灵敏度高、检测能力强等优点。
因此，它已成为药物研究中被广泛采用的一种分析技术手段。
二、常见类型的色谱法1. 气相色谱法气相色谱法是利用气相柱和薄膜固定相进行，通常需要使用大量的气体作为载流气体。
这种方法适用于描绘挥发性物质的分离和定量，如血浆中的药物。
2. 液相色谱法液相色谱法将混合物溶解在能够分离成分的流动液体之中，并通过与固相进行交互，以使分子组分分离出来。
主要应用于药物精密分子筛和化学分析中，例如药物低浓度分析、毒性分析。
3. 离子交换色谱法离子交换色谱法是以固定在固定相表面的离子作为有效分离相，来分离可离性阴离子或阳离子混合物的分析方法。
该方法常用于药物中阴离子或阳离子离子的分离和检测，例如筛查药品中的杂质。
4. 碳氢化合物色谱法碳氢化合物色谱法是以气相柱中的填料作为分离对象，以干燥气体为载流气体，利用流速的快慢，将不同的化学组分分离，适用于分离挥发性物质和固定物质。
三、色谱法在药物研究中的应用色谱法在药物研究中的应用十分广泛。
它通常用于药物分析、结构鉴定，以及反应动力学研究等方面。
1. 药物分析药物的分析是药物研究中最重要的部分之一。
药物分析中的色谱技术应用于药物质量控制
药物分析中的色谱技术应用于药物质量控制色谱技术在药物分析中扮演着至关重要的角色，特别是在药物质量控制方面。
通过色谱技术，我们能够准确测量和分析药物中的各种成分，确保药物的安全性和有效性。
本文将探讨色谱技术在药物分析中的应用，以及其对药物质量控制的重要性。
1. 色谱技术简介色谱技术是一种分离和分析混合物的方法，通过样品溶液在某种载体上的运移速度不同，从而使各种成分分离出来。
常见的色谱技术包括气相色谱（GC）、液相色谱（LC）和超高效液相色谱（UHPLC）。
这些技术基于不同的原理，可以应用于不同类型的药物分析。
2. 色谱技术在药物分析中的应用2.1 药物成分分析药物往往是由多种成分组成的复杂混合物，色谱技术可以对这些成分进行准确的分离和分析。
例如，LC可以用于测量药物中各种活性成分的含量，确保其符合临床使用要求。
GC则可以用于检测药物中的残留溶剂和杂质，保证药物的纯度和质量。
2.2 药物稳定性研究药物的稳定性是指药物在储存和使用过程中是否会发生分解或降解的程度。
色谱技术可以帮助我们定量分析药物在不同条件下的稳定性。
通过测量药物在不同温度、湿度和光照条件下的降解程度，可以确定其最佳储存条件，保证药物质量的稳定性。
2.3 药物含量测定药物的含量测定是药物质量控制中的重要环节。
色谱技术可以准确测定药物中各种成分的含量，并且具有高灵敏度和高选择性。
这对于确定药物的剂量和疗效非常重要。
例如，通过GC测定药物中的活性成分含量，可以确保患者获得正确的药效。
3. 色谱技术在药物质量控制中的重要性药物质量控制是保证药物安全和有效的关键环节。
色谱技术在药物质量控制中的应用可以提供准确和可靠的分析结果，确保药物的质量符合国家和国际标准。
同时，色谱技术还可以帮助识别和鉴定药物中的杂质和不良成分，确保患者的安全。
4. 色谱技术的未来发展随着科学技术的不断进步，色谱技术在药物分析中的应用将变得更加广泛和精确。
例如，液质联用技术（LC-MS）的发展使得对药物中低浓度成分的检测变得更加容易。
高效液相色谱法在药物分析中的应用
高效液相色谱法在药物分析中的应用引言：药物分析是研究药物有关品质、特性和性能的科学，为解决药物的质量控制、卫生监督、疗效评价等问题提供重要依据。
高效液相色谱法（HPLC）作为一种广泛应用的分析技术，被广泛用于药物分析领域。
本文将介绍HPLC的原理、分类、样品前处理以及在药物分析中的应用。
一、高效液相色谱法的原理高效液相色谱（HPLC）是依据溶质在液相中的分配行为，通过使用高压将流动相以高流速通过填充在色谱柱中的填充物，使溶质在液相中迅速地分离和富集的色谱法。
HPLC的关键是：高流速、高效分离柱、高灵敏检测器及自动化数据处理。
其主要原理是利用在流动相动力学不断交互和琢磨下，溶质主动与固定在填充柱中的固定相交互和琢磨而实现分离。
二、高效液相色谱法的分类1. 液相色谱法液相色谱法是利用液相作固定相，将溶质吸附于填充柱的一端的一种色谱法。
根据固定相的种类，又可分为吸附色谱、间隙色谱、离子交换色谱等。
2. 气相色谱法气相色谱法是利用气相作固定相，溶质在气相中沿柱壁表面扩散、交换、迁移分离的一种色谱法。
根据固定相的种类，又可分为草胺酸色谱、膜层分离、毛细管电色谱等。
三、高效液相色谱法中的样品前处理样品前处理在药物分析领域扮演着重要的角色。
在HPLC分析中，如果样品中的杂质较多，可能会干扰分析结果，影响分析的准确性和灵敏度。
因此，合适的样品前处理方法可以减少或消除干扰物，提高分析效果。
常见的样品前处理方法包括前处理、萃取、分配、浓缩、保护性介质法等。
四、高效液相色谱法在药物分析中的应用1. 药物纯度检测HPLC广泛用于药物纯度检测，可以准确测定药物的含量、杂质、有关化合物等。
通过HPLC可以快速、准确地得到药物的质量信息，保证药物的合格出货。
2. 药物稳定性研究药物稳定性对药物的长期储存和使用具有重要意义。
HPLC可以对药物与其他成分的相互作用、不同储存条件下的降解行为进行研究，评估药物在不同条件下的稳定性。
色谱法在药物分析中的应用
色谱法在药物分析中的应用作者：刘翠来源：《科学与技术》2019年第05期摘要：随着人们生活水平的提高，人们提高了对药物的使用要求。
随着我国科技技术的不断提升，色谱法广泛应用于药物分析领域中，能够有效提升分离效能，并且可加快分析速度，同时有较高的专属性，广泛应用于复杂成分分离、药品研发以及质量控制等。
本文就色谱法在药物分析中的应用展开探讨。
关键词：药物分析；色谱法；应用引言随着现代药物分析技术的不断创新和学科交叉的加强，药物分析学势必将得到更迅猛的发展，在新药研发、生产和临床应用等各个方面，药物分析学将发挥所长，解决更为关键的药学科学前沿问题。
1药物分析学科的现状随着21世纪药物科学的迅猛发展，生命科学与药学的融合趋势日益加深，药理学、医学等生物学相关学科的科学问题对药物分析学形成了新的挑战和机遇。
应用现代分析技术和方法，研究药物作用于机体产生的效应及其作用机理，是药物分析学又一个正在拓展的领域，而药物分析学的进一步发展，也需要生物学、医学、理学和工学的技术支撑，呈现明显的学科交叉特征。
众所周知，哪里有药物，哪里就需要药物分析学。
药理学、毒理学、药剂学、药物化学和中药学等学科的发展，都离不开药物分析学。
保障药品质量安全离不开各种药物及其杂质或代谢物的分析方法；各类药物组学（药物基因组学、药物转录组学、药物蛋白质组学、药物代谢组学、药物细胞组学等）研究中，分析和鉴定技术发挥着关键的作用；各类生物标志物的发现和药物的体内过程探究更是需要药物分析学提供高灵敏的分析检测技术。
而药物分析学的发展也离不开相关学科的促进，药学各相关学科对药物分析学学科不断提出更高更新的要求，只有通過与相关学科的深入交叉和合作研究，才能更好地发挥分析方法先行的作用。
2色谱法概述色谱法是现代化学分析中较为重要的一种分析技术，在食品安全、药物分析以及生命科学等领域中应用较为广泛。
此外，色谱法主要分为气相色谱法、薄层色谱法以及高效液相色谱法等，从分离原理角度分为分配色谱法、吸附色谱法以及离子交换色谱法等。
色谱法在药物分析中的应用研究
色谱法在药物分析中的应用研究色谱法是分析化学中常用的一种分离技术，也是药物分析中最常用的分离技术之一。
它的原理是利用液相或气相对混合物中的成分进行分离，并通过检测器进行定量分析。
在药物分析中，色谱法可以用于分离分析药物的各种成分及其代谢产物、副作用产物、掺假、伪劣药品等，具有成分分离度高、分析速度快、测定灵敏度高等优点。
本文将探讨色谱法在药物分析中的应用研究。
一、气相色谱法在药物分析中的应用气相色谱法是一种常用的色谱法，具有分离能力强、灵敏度高、分析速度快等优点。
在罕见病的药物治疗中，常常需要测定药物在人体内的代谢产物的含量，气相色谱法可以对药物代谢产物进行准确的定量分析。
例如，上海交通大学药学院的陈雪林教授等针对一种治疗罕见病的药物进行研究，通过气相色谱法定量分析药物代谢产物，提高其临床治疗效果。
在其他药物分析方面，气相色谱法还广泛应用于药物的纯度检测、添加剂的检测、残留物的检测等。
二、液相色谱法在药物分析中的应用液相色谱法是一种基于液态相相互作用的色谱法，常用于对药物分析中的不易挥发的有机物、多糖类化合物等进行分离分析。
例如，在糖尿病药物中，液相色谱法常用于对糖分解产物的测定，分析药物治疗效果。
另外，在抗生素的分析中，液相色谱法还可以用于检测抗生素残留等问题。
三、超高效液相色谱法在药物分析中的应用超高效液相色谱法是近年来出现的一种汇聚了传统液相色谱与质谱技术的分析方法，具有灵敏度高、分离能力强、快速等优点。
在药物分析中，超高效液相色谱法被广泛应用于对化学药物、中药成分等的定量与定性分析。
例如，在某种感冒药物中，超高效液相色谱法被用于发现药物中的含有一种对人体有害的成分，并指导企业进行加工生产。
总结：色谱法在药物分析中具有诸多优势，其方法种类不仅包括传统的气相色谱法和液相色谱法，还包括超高效液相色谱法等新颖的分析方法。
其应用范围广泛，不仅限定于化学药物、中药等传统领域，还可用于对罕见病的代谢产物、残留物、添加剂等领域进行分析。
色谱法在药物分析中的应用
色谱法在药物分析中的应用
色谱法是一种用于药物分析的常用方法。
它是一种将混合物中的化学物质分离和定量
分析的技术，通过分离和识别药物中的成分，可以确定其纯度、含量和杂质。
色谱法在药
物研发过程中有广泛应用，被广泛用于新药研究、质量控制、药代动力学、药物代谢和药
物相互作用研究等领域。
色谱法包括气相色谱法（GC）、液相色谱法（LC）、超高效液相色谱法（UPLC）等。
气相色谱法主要用于揭示气态或挥发性化合物的成分，常用于药物中挥发性成分的分析。
液相色谱法主要用于分离非极性和极性化合物，常用于大多数药物分析。
超高效液相色谱
法是一种新兴的分离技术，以其分离效率高、分析速度快等优点被广泛应用于药物研究中。
还有高效液相色谱法（HPLC）、等温点和薄层色谱法等其他色谱技术。
药物分析中，一般首先根据药物的特性选择合适的色谱方法。
然后，样品预处理，如
提取、稀释、制备等，以充分发挥色谱分离和定量的优势。
通过使用色谱柱、色谱仪和检
测器进行分离和检测，获得药物样品的分离和定量结果。
得出的结果可以用于判断药物的
质量、纯度和含量。
还可以用于药物代谢动力学、药物相互作用和体内外药物转运研究
等。
色谱法可以用于药物中有毒物质的定量分析。
有些药物在体内代谢后会产生有毒代谢物，使用色谱法可以定量分析这些有毒物质的含量，从而评估药物的安全性。
色谱法还可
以用于药物的质量控制，例如检测药品中的杂质。
使用色谱法可以确定杂质的种类和含量，以确保药物的安全性和有效性。
气相色谱分析法在药物分析中的应用
药物储存过中的质量控制
01
气相色谱分析法可用于检测药 品在储存过程中的降解产物和 杂质，确保药品质量在有效期 内保持稳定。
02
通过定期检测药品的成分和杂 质，可以及时发现并处理储存 过程中的问题，防止药品变质 和安全隐患。
03
气相色谱分析法还可以用于研 究药品包装材料的性能，确保 药品在储存和运输过程中的安 全性。
03
气相色谱法在药物质量控制中的应用
药物生产过程中的质量控制
药物生产过程中，气相色谱分析法可用于检测原料药、中间体和成品的纯 度和杂质含量，确保产品质量符合标准。
在合成过程中，气相色谱分析法可用于监测反应进程和产物纯度，及时发 现并纠正合成过程中的问题。
在提取和精制过程中，气相色谱分析法可用于优化工艺参数，提高产品的 纯度和收率。
05
气相色谱法在药物分析中的最新进展
高分离效能的气相色谱技术
高分离效能的气相色谱技术能够快速、准确地分离和检测药物中的微量成分，提高 了药物分析的灵敏度和准确性。
新型的气相色谱柱材料和制备技术，如多孔硅胶、有机金属骨架等，具有更高的选 择性、稳定性和寿命，为药物分析提供了更好的分离效果。
新型的进样技术，如微流控进样、二次进样等，能够减小进样体积，提高进样效率， 进一步提高了分离效能。
气相色谱与其他分析技术的联用
气相色谱与其他分析技术的联用能够充分发挥 各自的优势，提高药物分析的效率和准确性。
常见的联用技术包括气相色谱-质谱联用、气相 色谱-红外光谱联用等，能够实现药物成分的定 性和定量分析，提供更全面的药物成分信息。
联用技术还能够解决药物中挥发性、热不稳定 性和高分子量等难以分离和检测的问题，为药 物分析提供了更多的可能性。
色谱分析在药物分析中的运用
检测器的选择
HPLC检测中，当样品有紫外吸收时，常选用紫外检测器，在药物分析文献中，用紫外检测器的占95%以上，使用时要注意溶剂的使用波长，即溶剂的极限波长必须低于检测波长。若使用荧光检测器或电化学检测器，可使灵敏度提高2～3个数量级，但不是所有化合物都有荧光，无荧光的物质可经衍生化作用形成荧光的化合物。电化学检测适用于有氧化还原性的药物。
三、微柱色谱实用性进展
微柱液相色谱法与普通液相色谱法的比较 微柱液相色谱的应用范围
微柱液相色谱法的实用性进展
微柱液相色谱法与普通液相色谱的比较 分类 应用 快速药物分析 在药物分析中，复方制剂分析和治疗药物监测非常适合用微柱，进行快速分析。分析APC片中的3种主药，用100mm×1mm微柱，填充3µm的ODS，用乙腈-5mmol/L辛基磺酸钠溶液（18:20）为流动相，20s内分离即完毕，50个样品15min内即完成。流动相只需14ml，为常规柱的1/21。
微柱液相色谱法的实用性进展
微柱液相色谱法与普通液相色谱的比较 分类 应用 快速药物分析 在药物分析中，复方制剂分析和治疗药物监测非常适合用微柱，进行快速分析。分析APC片中的3种主药，用100mm×1mm微柱，填充3µm的ODS，用乙腈-5mmol/L辛基磺酸钠溶液（18:20）为流动相，20s内分离即完毕，50个样品15min内即完成。流动相只需14ml，为常规柱的1/21。
液相色谱目前在常规分析 仪器中的排列
在2000年版一、二部药典中，用高效液相色谱法测定的品种比1995年版药典成倍地增加，2005年版一、二部药典又增加几倍。而高效液相色谱法在几种仪器分析方法中，其分析数量的排列为第二，因其分离效率高，又能准确地反映所测成分的真实含量。中国药典应用高效液相色谱法的情况，目前仅次于美国药典，而优于英国药典和日本药局方。
色谱分析在药物分析中的运用
色谱分析在药物分析中的运用色谱分析是一种常用的分离和定量分析技术，广泛应用于药物分析领域。
它通过分离复杂的样品混合物，使各个组分能够分散并流动在不同的相中，从而实现各个组分的分离和定量测定。
以下将详细介绍色谱分析在药物分析中的运用。
首先，色谱分析常用于药物的质量控制。
药物的质量控制是确保药品质量稳定和一致性的重要环节。
色谱分析可以对药物中的活性成分进行定量测定，从而确保药品中活性成分的含量符合规定的标准。
通过对药品中其他杂质的定性和定量分析，可以确保药物的纯度和质量。
其次，色谱分析可用于药物代谢研究。
药物代谢是药物在生物体内发生的转化过程，了解药物的代谢途径和代谢产物对于药物的合理使用和安全性评价非常重要。
色谱分析可以对药物代谢产物进行分离和鉴定，从而了解药物在生物体内的代谢途径和主要代谢产物，为药物的研发和合理使用提供依据。
另外，色谱分析在药物中的残留分析也起着重要的作用。
药物的残留是指药物在食品、环境等样品中的残留量，可能对人体健康造成潜在危害。
色谱分析可以对食品、水源、土壤等样品中的药物残留进行定性和定量分析，从而确保食品和环境的安全。
此外，色谱分析还可以用于药物的相互作用研究。
药物相互作用是指多种药物在体内同时使用时相互影响的现象。
色谱分析可以通过分离和鉴定不同药物在体内的浓度和代谢产物，从而了解不同药物的相互作用机制和对药物疗效的影响。
最后，色谱分析还可以用于药物的贮存稳定性研究。
药物在贮存过程中可能会发生分解、氧化等反应，导致药物效果下降甚至失效。
色谱分析可以对不同贮存条件下的药物进行分析，从而了解药物的贮存稳定性，为药物的存储和使用提供依据。
总之，色谱分析在药物分析中的运用广泛而重要。
它可以用于药物质量控制、药物代谢研究、药物残留分析、药物相互作用研究和药物贮存稳定性研究等方面。
通过色谱分析技术，可以更好地了解药物的性质和特点，为药物的研发、生产和使用提供科学依据。
色谱法在药物分析中的应用
色谱法在药物分析中的应用
色谱法是一种用于分离和分析混合物中各种成分的化学分析方法。
在药物分析中，色谱法已经成为一种常用的技术，因为药物中可能含有多种成分，并且这些成分需要被准确地定量和分离。
其中，常用的色谱法有气相色谱、液相色谱和毛细管电泳等。
1. 气相色谱法
液相色谱法是一种将药物样品溶于溶剂并通过色谱柱分离的技术。
该方法可以根据药物溶液中不同成分的亲水性和疏水性来进行分离和定量。
液相色谱法广泛应用于药物质量控制、生产监管和药物分析等领域。
其中，常用的液相色谱法有高效液相色谱法和超高效液相色谱法等。
3. 毛细管电泳法
毛细管电泳法是一种高分辨率的药物分析方法，它可以根据物质的电荷量、大小和形状等特性来分离不同的化合物。
毛细管电泳法具有灵敏度高，分离速度快，样品准备简单等优点。
因此，在药物分析中，毛细管电泳法已经成为一种受欢迎的技术。
总的来说，色谱法在药物分析中具有很大的应用前景。
随着新药研究的不断发展以及药物产业的不断壮大，色谱法不断完善和发展，将促进药物分析的进一步发展。
气相色谱分析法在药物分析中应用
常用确 证方法
2024/2/16
质谱法——可准确鉴定化合物结 构，用于实验结果的确证。
双柱法——采用不同的色谱柱再 次进行分析。
衍生化法——采用小规模的化学 反应，反应产物再通过色谱技术 进行复验。
（四）应用实例
2024/2/16
第六章
一、化学药物的鉴别
气相色谱法在药 二、化学药物有关物质 物分析中的应用 的鉴别与检查
蜡质、叶绿素及胺类、糖类、酚类等可溶于提取 溶剂的物质一起被萃取出来，严重影星残留量大 的分析。
净化——将被测农药与干扰物质的分离
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净化要求与方法：主要取决于农药和样本的性 质以及最终的检测方法，并保证具有一定的回 收率。 净化方法：液-液分配法、吸附柱色谱法、固相 萃取法、凝胶色谱法。
3.溶液直接进样法 既适用填充柱，又适用适宜极性固定液
毛细管柱。
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四、含量测定 《中国药典》（2005年版）采用气相色谱法
进行含量测定的吧花心儿药品很少，只有林旦乳 膏、维生素E等5个，而BP和USP共超过100个化 学药品采用GC法测定含量。
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和样本决定，遵循尽量完全提取出待测农药，且 共萃取物尽量少原则。 提取溶剂的选择原则：相似相溶原理
注意：所用溶剂对气相色谱检验应无干扰
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提取技术
液液萃取 振荡萃取 索氏萃取 超声波萃取 微波萃取 加速溶剂提取 超临界流体提取 固相微萃取
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2. 提取液的净化和浓缩 由于萃取 过程中不可避免将样品中的油脂、
农药残留分析
前处理——对农药提取、并 对提取液净化、浓缩。
检测
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高效液相色谱法在药物分析中的应用
高效液相色谱法在药物分析中的应用高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种广泛应用于药物分析领域的分离和检测技术。
它通过利用样品中化合物的物理化学性质在液相中的分配行为，实现对复杂混合物中目标化合物的分离和测定。
在药物研发、质量控制和临床药物监测等方面，HPLC技术发挥着重要的作用。
首先，HPLC在药物分析中的应用可以实现对药物的分离和纯化。
药物的研发过程中，需要从复杂的天然产物或合成化合物中提取出目标药物，并对其进行纯化。
HPLC技术可以通过调节流动相的组成、柱温和流速等参数，实现对目标药物的有效分离和纯化。
这为药物的结构鉴定和后续的生物活性评价提供了可靠的基础。
其次，HPLC在药物质量控制中的应用也非常重要。
药物的质量控制是保证药物安全有效的关键环节。
HPLC技术可以通过建立合适的色谱分析方法，对药物中的主要成分进行定量分析。
这些成分包括活性成分、杂质和附加剂等。
通过HPLC分析，可以准确测定药物中的目标成分的含量，以及检测和定量分析其中的杂质。
这为药物的质量控制提供了可靠的手段。
此外，HPLC在药物代谢动力学研究中也发挥着重要的作用。
药物代谢动力学研究是了解药物在体内的代谢过程和代谢产物的形成机制的关键环节。
HPLC技术可以通过建立适当的样品前处理方法和色谱分析条件，对药物及其代谢产物进行分离和检测。
通过HPLC分析，可以得到药物在体内的代谢产物的结构和含量，从而揭示药物的代谢途径和代谢动力学特征。
此外，HPLC技术在临床药物监测中也发挥着重要的作用。
药物的治疗效果和安全性与其在体内的浓度密切相关。
因此，对药物在体内的浓度进行监测是评价药物治疗效果和调整用药剂量的重要手段。
HPLC技术可以通过建立合适的生物样品前处理方法和色谱分析条件，对生物样品中的药物进行测定。
通过HPLC分析，可以准确测定药物在生物样品中的浓度，为临床用药提供科学依据。
高效液相色谱法在药物分析中的应用
高效液相色谱法在药物分析中的应用高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分析方法，可广泛应用于药物分析领域。
本文将探讨HPLC在药物分析中的应用，包括样品前处理、色谱条件优化、质量控制和药物定量等方面。
一、样品前处理在药物分析中，样品的复杂性和多样性常常是分析的一大挑战。
为了获得准确可靠的结果，样品前处理是不可或缺的步骤。
HPLC分析通常需要对样品进行提取、净化和浓缩等处理。
在提取过程中，选择适当的溶剂和提取方法可以有效地将目标分析物从样品基质中分离出来。
例如，液-液萃取法、固相萃取法和超滤法等常用的提取方法可以实现对药物的富集和纯化。
净化步骤旨在去除样品中的干扰物质，以提高分析的准确性和灵敏度。
净化方法包括固相萃取、液液分配和凝胶层析等，可以根据药物特性和分析要求进行选择。
浓缩处理可以提高目标物质的浓度，以便后续的色谱分析。
浓缩方法常用的有氮吹、旋转蒸发和固相萃取等。
二、色谱条件优化色谱条件的优化对于获得良好的分离度和分析效果至关重要。
以下是一些常用的参数和技巧，可用于优化HPLC色谱条件。
1. 流动相选择：根据目标化合物的特性选择合适的流动相，包括溶剂选择和溶液pH值调整。
2. 色谱柱选择：根据目标化合物的特性和分析要求选择适当的色谱柱。
不同的色谱柱具有不同的分离性能和选择性，包括反相色谱柱、离子交换柱和手性色谱柱等。
3. 流速调整：流速对分离和保留时间有重要影响，需要根据分离要求进行调整。
4. 柱温控制：柱温对分析结果的准确性和重复性有一定影响，需要根据药物的热稳定性和分析要求进行控制。
三、质量控制在药物分析中，质量控制是确保结果准确可靠的关键环节。
HPLC技术可以提供快速、准确和灵敏的质量控制手段，主要包括以下几个方面。
1. 标准曲线建立：通过建立标准曲线，可以进行目标化合物的定量分析。
标准曲线的建立需要准备一系列不同浓度的标准溶液，并根据峰面积或峰高与浓度的关系确定标准曲线方程。
色谱分析技术在药物分析中的应用研究
色谱分析技术在药物分析中的应用研究色谱分析技术是一种用于分离、鉴定和定量化学分析的重要技术。
在药物分析中，色谱分析技术的应用越来越广泛，成为药物研究和开发中不可或缺的工具。
本文将探讨色谱分析技术在药物分析中的应用研究。
一、色谱分析技术简介色谱分析技术是一种通过化学物质在某种固定相或移动相的非均相情况下的相互作用进行分离、纯化、测定或鉴定化合物的方法。
色谱分析技术可分为气相色谱（GC）、液相色谱（LC）和超高效液相色谱（UPLC）等。
其中，气相色谱和液相色谱是药物分析中最常用的技术。
二、色谱分析技术在药物分析中的应用1. 药物纯度分析药物纯度对药物的治疗效果、安全性和稳定性有着至关重要的影响。
色谱分析技术可用于药物纯度分析，即在药物中检测和定量存在的杂质和未反应的成分。
色谱分析技术能够提高分析的灵敏度和准确度，同时能够快速确定药物中存在的杂质种类和含量。
2. 药物代谢产物分析药物代谢产物是指药物在体内经过一系列代谢反应后产生的代谢产物。
药物代谢产物的分析对于药物研究和开发具有重要意义，可用于评估药物的作用机制、药代动力学和安全性等。
色谱分析技术可用于药物代谢产物的分离和鉴定，其中毛细管电泳（CE）和液相色谱-质谱联用（LC-MS）是目前应用最广泛的技术。
3. 药物稳定性研究药物稳定性是指药物在储存、运输和使用过程中所受到的各种环境因素（如温度、湿度、光照等）的影响程度。
稳定性研究对于药物的存储和使用有着重要的指导意义。
色谱分析技术可用于药物稳定性的研究，即通过分析药物在不同环境因素下的分解产物和含量变化来评估药物的稳定性。
高效液相色谱（HPLC）和气相色谱-质谱联用（GC-MS）是常用的分析技术。
4. 药物成分分析药物成分分析旨在测定药物中各成分的含量和配比，以评估药物的质量和效果。
色谱分析技术可用于药物成分分析，即通过分析药物中的各种成分、杂质和掺假物来确定药物的真实成分和质量。
在药物成分分析中，常用的技术包括高效液相色谱（HPLC）、气相色谱（GC）和液相色谱-质谱联用（LC-MS）等。
药物分析中的色谱技术应用
药物分析中的色谱技术应用药物分析是药学领域中的重要研究方向，它旨在对药物进行定性和定量的分析，以确保药物的质量和安全性。
色谱技术是药物分析中一种常用的分离和定量分析方法。
本文将探讨色谱技术在药物分析中的应用，并介绍其原理、分类和操作方法。
一、色谱技术综述色谱技术是一种将混合物的成分分离并提取的技术。
在药物分析中，色谱技术可以根据物质间的分配系数、亲和性、电荷、大小等性质，将药物的成分进行有效分离，并通过检测器进行定量分析。
色谱技术的主要分类包括气相色谱（GC）、液相色谱（HPLC）和超高效液相色谱（UPLC）等。
二、色谱技术在药物分析中的应用1. 药物化学分析药物化学分析是药物分析的一项重要内容，它可以用于分析药物的化学成分和结构。
色谱技术可以应用于分析药物的有机成分、杂质和降解产物等。
例如，在气相色谱技术中，可以使用毛细管柱和选择性检测器，如质谱检测器，对药物进行定性和定量分析。
在液相色谱技术中，可以根据药物和杂质的亲水性、亲脂性等特性，选择合适的固定相和溶剂体系，实现药物的分离和分析。
2. 药物生物分析药物生物分析是药物分析的另一个重要领域，它用于研究药物在生物体内的代谢、排泄和药代动力学等过程。
色谱技术可以结合质谱技术，应用于生物样品中药物和代谢产物等的分析。
例如，在液相色谱-质谱联用技术中，可以利用高灵敏度的质谱检测器，对药物代谢产物进行结构鉴定和定量分析。
此外，色谱技术还可用于药物的生物利用度、半衰期和药物相互作用等研究。
3. 药物质量控制药物质量控制是保证药物质量和安全性的关键环节。
色谱技术可以用于药物的纯度检测、含量测定和控制。
例如，在液相色谱技术中，可以通过比较药物峰面积与标准药物峰面积的比值，计算出药物的含量百分比，并根据国家药典的标准判断药物的合格与否。
此外，色谱技术还可以用于检测和控制药物中的杂质和残留物，确保药物的质量和安全性。
三、色谱技术的操作要点在进行药物分析中，色谱技术的操作要点对于确保分析结果的准确性和可靠性至关重要。
色谱法在药物分析中的应用
色谱法在药物分析中的应用色谱法是一种广泛应用于药物分析领域的分析方法，其原理是将混合的化合物在固定相和移动相作用下分离，从而得到具体化合物的含量信息。
色谱法具有分离效果好、重现性高、分析速度快、灵敏度高等优点，因此被广泛应用于药物分析、制药工艺控制、药物代谢动力学研究等方面。
HPLC是一种高效、灵敏的分析方法，可以同时分析多个化合物。
因此，它被广泛应用于药物分析领域。
HPLC常常被用于药物含量测定、纯度分析、杂质检测和成分定量等方面。
其中，药物含量测定是HPLC应用最为广泛的领域之一，它能够快速准确地测量药物含量，提高药品的质量控制。
例如，HPLC可以用于测定口服药物中活性成分的含量，包括非处方药、处方药和复方制剂。
此外，HPLC还可以用于测定注射剂、眼药水、口服液、中药提取物、生物药物等复杂的样品中的药物含量。
GC是一种高分辨率和高灵敏度的分析方法，常常被用于分离和定量挥发性和半挥发性化合物。
在药物分析中，GC可以用于分析药物中的挥发性成分、分析药物代谢产物，以及药物制剂中的残留溶剂或杂质等。
例如，GC可以用于分析药物中的芳香族化合物、半挥发性有机化合物和具有反式结构的化合物等。
另外，GC可用于分析药物代谢产物及其在生物体中形成的代谢产物，为药物代谢动力学研究提供重要数据。
此外，GC也是药物制剂中残留溶剂或杂质测定的主要方法之一。
3. 液质联用技术（LC-MS）在药物分析中的应用液质联用技术是液相色谱和质谱仪的结合，能够同时实现分离、检测和鉴定药物中的组成成分。
LC-MS被广泛应用于药物发现、药物代谢动力学研究、药物安全性评价等领域。
在药物代谢动力学研究中，LC-MS被广泛应用于测定药物代谢产物及其在体内的浓度变化等领域。
综上所述，色谱法在药物分析中的应用十分广泛，包括高效液相色谱法、气相色谱法和液质联用技术等。
这些方法能够快速、准确地测定药物中的化合物含量、分辨残留溶剂和杂质、测定药物代谢产物等，从而提高药品的质量标准，为药物研发和制药工艺控制提供有力的支持。
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色谱分析法在药物分析中的运用气相色谱法测定丁香药材中丁香酚的含量丁香Eugenia caryopbllata Thunb．药材来源于桃金娘科植物的干燥花蕾，收载于中国药典1995年版一部。
在95版药典中，丁香药材的音量测定只收载了测定挥发油音量的方法，但没有测定挥发油中丁香酚(C10H12O2)的音量。
为进一步控制和考察丁香药材中丁香酚的音量，我们分别采用了浸溃法和挥发油提取法，提取后用气相色谱法分别来测定丁香药材中丁香酚的音量。
1 仪器与试砖GC-9A 和GC-14B气相色谱议(日本岛津)。
10%PEG-20M 色谱柱。
丁香酚耐照品购自中国药品生物锚品检定所(批号：725—8802)，经标化其音量为98%以上，其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果2 1 色谱条件厦系统适用性试验：色谱柱：lO%PEG-20M，检测器FID，N2：60kPa，柱温：180℃，进样口温度：250℃，衰减2。
在上述条件下丁香酚峰与其它组分峰均能达到基线分离，且出峰对间较快，峰形较好，阴性样品无干扰。
吸取上述对照品溶液1μL，注人气相色谱仪，结果理论塔板数n> 1200。
拖尾因子在0.95～1.05之间，校正因子的相对标准偏差小于2.0%。
2．8 供试品和对照品溶液的制备2．2 1 提溃时间的确定：在试验研究中比较了不同浸渍时同丁香药材中丁香酚的含量。
上述结果表明，浸渍24 h以上，丁香药材中的丁香酚已浸渍完全。
2．2．2 供试品溶液的制备：取本品粗粉约0.6g，精密称定，量具塞锥形瓶中，精密加入乙醇2OmL，称定重量，摇匀t宣温放量24h以上，再称定重量，补足损失重量，振摇后放量，用滤纸滤过。
精密量取滤液5mL，量25mL的容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，作为供试品溶液。
2．2 3 对照品溶液的制备：精密称取对照品适量，加无水乙醇溶解，制得0.492 mg／mL 的溶液，作为对照品溶液。
2．3 线性范围的考察分别精密吸取上述对照品溶液0.5、1、1.5、2.0、2.5、3.0、4、5μL，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵座标，丁香酚音量为横座标，计算得回归方程Y= 9.26×10000X一35.94，r=0.9999，表明丁香酚在0.246～2.46ng具有良好的线性关系。
2．4 精密度试验：精密吸取丁香酚对照品溶液1μL，重复进样6次，结果测得平均峰面积为151654，RSD为1.3%。
2. 5 重现性试验：取同一批药材5份，按丁香酚音量测定方法操作，结果丁香酚音量的平均值为121.02mg／g，RSD 为0.7%。
2．6 回收率试验：采用加样回收法，精密称取已知音量的丁香药材0.1 g(每克药材吉丁香酚121.6mg)，分别加对照品适量，按音量测定方法试验，结果平均回收率为98.6％，RSD为0.5%。
2．7 样品音量的测定分别取不同来源的5批丁香药材，按吉量测定方法试验，分别测定丁香酚的含量。
3 小结实验结果表明，采用浸溃提取法比挥发油提取法简便、可控和准确，可以作为该药材的质量检控指标之一。
HPLC-ELSD在药物分析中的应用1、在天然药物及复方成药分析中的应用ELSD能够测定没有紫外吸收或为紫外末端弱吸收的样品，天然产物中的许多成分无疑找到了直接、准确的测定方法。
ELSD在天然产物及其复方成药分析中的应用报道主要有皂苷类、生物碱类、萜类内酯等。
皂苷无紫外吸收或仅为末端吸收，ELSD能够对其不经衍生进行检测，在HPLC—ELSD的应用中这方面的报道最多。
主要有一次性分离分析天然人参、生脉散复方、育精胶囊中的多种人参皂苷；西洋参中的人参皂苷和拟人参皂苷定量测定；三七中的三七皂苷的含量分析；黄芪、黄芪注射液和保元汤中的黄芪皂苷、黄芪甲甙的分离和测定；麦冬中的甾体皂甙元；天麻中的天麻甙的含量测定等。
这些研究主要采用Cl8柱、乙晴与水作流动相，不经衍生直接测定多组分含量，结果显示方法灵敏度高(一般检测限低于3μg／m1)、线性关系良好。
对于无紫外吸收的生物碱类成分，ELSD 同样显示出操作简单、灵敏度高的优点。
对比HPLC—UV法测定贝母中的甾类贝母生物碱，采用ELSD检测器，不但不需衍生化操作，提高了结果的准确度，而且可检测出不含双键的贝母甲素，对动物体内的生物碱类成分如河豚毒素，无紫外吸收且安全性低，不适合衍生化法，可用ELSD法进行检测，获得满意结果。
银杏作为一种保健药品，其主要活性成分为黄酮类和萜类内酯，以往银杏中的萜类内酯成分主要采用HPLC—UV法和HPLC—RI测定，但由于萜类内酯紫外吸收差，又含少量物质的干扰，结果稳定性和准确性较差．随着ELSD的发展和普及，这些方法已经逐渐被ELSD法所取代。
2、在抗生素分析中的应用HPLC—ELSD早在20世纪九十年代就用于天然产物分析，随着技术的发展，其应用范围已逐渐扩大，近年来屡有用HPLC—ELSD分析抗生素类药物的报道，HPLC—ELSD分析抗生素类药物的报道多见于氨基糖苷类抗生素、氨基糖苷类抗生素是临床上常用的抗生素，可通过微生物发酵或半合成制得，是一类单组分或多组分糖基取代的氨基环醇类化合物，主要有：链霉素、卡那霉素、庆大霉素、阿米卡星、小诺霉素等。
对这一类抗生素的含量测定多采用微生物法，但微生物法测定的是各活性组分的总量，无法反映各组分组成。
为克服这个缺点，国内外的药典采用HPLC法进行测定，但这类抗生素无紫外吸收，只能采取衍生化法(多为柱前衍生)，结果易受衍生化反应条件的影响而不够准确，ELSD法很好地解决了这个问题。
氨基糖苷类抗生素含多个氨基，可产生含不同当量无机酸盐产品，对于这些副产物成分，ELSD也能很好的加以测定。
高效液相色谱- 荧光衍生法在体内药物分析中的应用体内药物分析是在大量复杂组分中进行微量或超微量药物及代谢产物的测定。
体内药物分析最常用的检品是血样(血浆、血清、全血)、尿样、唾液及组织液, 特殊情况下也采用乳汁、泪液、胆汁、羊水、粪便等[1]。
随着药物的开发研究, 药物的服用剂量越来越小, 体内药物的浓度越来越低, 这对分析方法灵敏度和选择性等都提出很高的要求[2]。
高效液相色谱法具有准确、灵敏度、专一性强等特点, 一直是体内药物分析的主要手段[3]。
而高效液相色谱的荧光检测器比紫外吸收检测器灵敏度高。
具有强紫外吸收的化合物检测灵敏度可达ng水平, 而荧光衍生物一般的检测水平为10-12～10-14m ol/L,灵敏度比紫外检测器提高10～1000 倍[4]。
故H PLC 法结合荧光检测法所具有的较高的选择性及灵敏度以及试样用量少的特性, 使得对复杂生物样品中药物及其代谢物的测定变得更加灵敏、准确、快速。
但荧光检测器要求被检测样品能被激发产生荧光. 对于不产生荧光或荧光较弱的样品灵敏度很低, 甚至不能检测。
为了扩大检品范围, 提高检测灵敏度, 常采用荧光衍生法。
荧光衍生法是指在一定条件下利用某种试剂与样品中待测组分相作用, 使其产物具有荧光或荧光增强。
另外,荧光检测器选择性好, 过量的试剂和副产物往往不产生干扰, 衍生物亦不必纯化, 因此荧光衍生技术的采用, 扩大了高效液相色谱- 荧光测定法在体内药物分析中的应用范围, 为药物代谢动力学, 临床药理学和毒理学等研究提供科学依据。
荧光衍生化反应根据衍生反应的场所来分, 有柱前衍生化(pre-colum n derivatization), 柱上衍生化(on-colum n derivati-zation)和柱后衍生化(post-colum n derivatization)三种. 从是否与仪器联机的角度来分有: 在线(on-line)、离线(of-line)和旁线(at-line)(自动化)三种. 目前在H PLC 中以离线的柱前衍生法(简称柱前衍生法)与在线的柱后衍生法(简称柱后衍生法)使用居多. 旁线衍生化方法是发展方向[5]。
1 衍生化试剂常用的荧光衍生化试剂有: 荧光试剂和荧光染料荧光胺(fluorescam ine, 又名胺荧) 、邻苯二甲醛(O-phthaldehyde) 、丹酰氯(dansylchloride, DNS-Cl)、氯化硝基苯骈氧二氮茂(NBD-chloride)、等。
荧光胺是一常用荧光衍生化试剂, 可同伯胺及大多数氨基酸反应, 反应迅速, 衍生物具有高荧光强度的吡咯啉酮, 而试剂本身则迅速水解为不发荧光的产物, 是一理想的柱前衍生化试剂; 丹酰氯是应用最广的荧光衍生试剂, 常用于含氨基药物的测定, 同伯胺和仲胺都能反应, 还可用于含酚羟基药物如雌激素的测定; 邻苯二甲醛, 常用于伯胺类及α- 氨基酸类化合物的荧光分析。
胺类化合物的衍生试剂还有荧光素异硫氰酸酯(FITC) 、芴代甲氧基酰氯(FM OC) 、4- 氯-7- 硝基-2,1,3- 苯骈恶二唑( NBD-C) 、l6-氨喹啉基琥珀酰亚胺碳酸酯(AQC) 等[6～10]。
目前已开发出一些醇和酸的衍生化试剂[11～13]。
醇、酚的衍生试剂有: 羰基氯类(FM OC、CEOC) , 氯甲酸芴甲酯(FM OC-C1); 磺酰氯类(DNs-Cl) , 卤代三嗪类有:1- 乙氧基-4- (二氯- 三嗪)萘(EDTN ) ; 羧酸类化合物的衍生试剂有: 4- 溴甲基-7- 甲氧基香豆素(BrM M C) , 7-N- 哌嗪-4- 二甲氨基苯骈呋喃重氮(DBD-Pz) 、9- 蒽重氮甲烷(ADAM ) 、4- 氨甲基-6, 7- 二甲基香豆素(ADM C)、9-(2- 羟乙基)- 吖啶酮(H EA ) 等。
羰基化合物的衍生试剂有肼类: DNs-H 、CEOC-H , 氨基类有氨基甲基芘等。
另外, 还有些化学试剂可利用化学反应使一些自身不能产生荧光的化合物转变成荧光化合物。
这可能是由于化学反应增加了π电子共轭系统的长度或增加分子结构的刚性和共平面性所致。
常用的化学反应有氧化还原反应、水解反应、缩合反应、络合反应、光化学反应等。
比如维生素B1 可在碱性溶液中被K3Fe(CN)6 氧化成具有荧光的硫色素, 氨苄青霉素在酸性溶液中(pH =2),以甲醛为催化剂, 90℃加热 2 小时,水解成强烈黄色荧光的化合物。
2 生物样品的前处理生物样品中的药物在检测前, 首先应除去蛋白质的干扰, 保证色谱柱的柱效和寿命。
去除蛋白质常用的方法有⑴加入沉淀剂和变性试剂, 如硫酸铵、硫酸钠等中性盐、强酸和重金属盐等; ⑵加入可与水混溶的有机溶剂, 如甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、四氢呋喃等。
经有机溶剂或酸处理后的生物样品与反相H PLC 分析相匹配。
应用反相H PLC 时生物样品甚至可以不用有机溶剂萃取, 可将含药的液体样品直接进样或经过简单的去蛋白后进样, 操作简单, 所以应用前景甚为广泛[14]。