多重荧光免疫组化染色试剂盒
HER2检测试剂盒(免疫组化法)说明书-Agilent
DAB 显色液。 5% 3, 3’-二氨联苯胺四盐酸显色剂溶液。
3×500mL
2×5
抗原修复液（包含清洗剂）（10×）。 0.1 mol/L柠檬酸盐缓冲液，1% 吐温-20，pH 5.7。
质控切片
P04605CN_01_SK00121-2CN/2017.02 2/26
P04605CN_01
10 × 试剂瓶
外。该试剂盒所提供的材料足够用于最多 10 次免疫组化染色。
数量
说明
1×22 mL
过氧化物酶阻断剂。 3%的过氧化氢，含有15 mmol/L的叠氮钠（NaN3）。
1×12 mL
1×22 mL
兔抗人HER2多克隆抗体。 即用型亲和分离的抗体,保存在0.05 mol/L Tris/HCl, 0.1 mol/L NaCl, 1%BSA, 酒 石黄(Tartrazin), 专利蓝V(Patentblue V), 15 mmol/L NaN3, pH 7.2溶液中。 免疫原：合成的HER2蛋白的C-末端（细胞质部分）片段部分，并偶联至血蓝蛋 白上。
2×22 mL
阴性质控试剂。
与HER2抗体等价蛋白浓度下的正常兔血清免疫球蛋白成分，保存在0.05 mol/L Tris/HCl, 0.1 mol/L NaCl, 15 mmol/L NaN3, pH 7.2，并含有1%BSA稳定剂的溶液 内。
1×1mL
DAB底物缓冲液。 50 mM咪唑, 1mM N, N'-乙基双 (2-[2-羟基苯基]甘氨酸) (EDHPA), 0.1%乙基苯基 聚乙二醇（Nonidet P-40）, 0.02% 过氧化氢, 0.01% 氯化苯二甲烃铵, pH 7.5。
【检测原理】
HercepTest™检测试剂盒包含对常规处理的、石蜡包埋的样本进行两步法免疫组化染色 所需要的全部试剂。兔抗人 HER2 蛋白一抗孵育后，该试剂盒采用基于葡聚糖技术的即用型 显色试剂。该试剂包含羊抗兔二抗和偶联至葡聚糖多聚体骨架上的辣根过氧化酶分子。因此， 不需要再依次使用连接抗体，人免疫球蛋白显色试剂和胎牛血清之间的交叉反应也因为使用 固相吸附材料而消除。依次填加的色素原的酶转换，也使得显色反应发生于抗原所在部位。 标本需要复染和封片。反应结果在光学显微镜下观察。质控玻片包含 3 个福尔马林固定、石 蜡包埋的人类乳腺癌细胞系，染色强度分别在 0、1+、以及 3+，提供用于对染色结果进行 评估。这些细胞的染色强度与其所表达的受体密度一致。
多色免疫荧光染色试剂盒使用说明
多色免疫荧光染色试剂盒使用说明多色免疫荧光染色试剂盒使用说明酪酰胺信号放大(TSA，Tyramide signal amplification)技术是一类利用辣根过氧化酶(HRP)对靶蛋白进行标记的酶学检测方法，类似常规免疫组化的DAB显色方法，TSA技术同样采纳HRP标记的二抗，同样有对应的“显色”步骤(HRP催化加入反应体系的酪胺荧光素底物，产生活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸等残基共价结合，使样品上稳定的共价结合酪胺荧光素。
之后用热修复法洗去非共价结合的一抗-二抗-HRP复合物，重复下一种一抗-hrp二抗来其次轮孵育，换另一种酪胺荧光素底物，如此往复就可实现多重标记。
TSA具体原理是利用酪胺Tyramide的过氧化物酶反应(酪胺盐在HRP催化H202下形成共价键结合位点)，产生大量的酶促产物，该产物能与四周的蛋白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)结合，这样在抗原-抗体结合部位就有大量的荧光素沉积，结果使其检测信号得到10-100倍增加。
简洁来说，用这种方法做多重免疫荧光是利用二抗上带有的HRP(而不是直接偶联荧光素)，来催化后续添加入体系的非活性荧光素。
荧光素在HRP和过氧化氢的作用下被活化，跟接近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定结合。
然后微波或煮沸或者水浴等热修复处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧光素稳定共价结合在样本切片蛋白上。
再换个一抗来其次轮孵育，周而复始。
等到全部抗体孵育结束，荧光素都结合好后，最终去检测结果。
由于每次体系中都只有单一抗体孵育，因此无需担忧抗体交叉反应，以及一抗二抗种属匹配问题，大大削减了试验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。
也就是说，假如用TSA技术，同一张片子上全部的靶标都可以选用特异性高的兔单克隆抗体。
搭配同一支抗兔的HRP二抗就可以进行试验，而且信号放大的倍数大大增加。
茹创生物开发的试剂盒详细酪胺荧光染料为以下其中一种或者多种：TYR-480，TYR-520，TYR-570，TYR-620，TYR-690，TYR-780。
免疫组化—ABC试剂盒法
免疫组化ABC试剂盒(VECTOR)操作流程一、工作液准备1、封闭血清（黄色小瓶子）：3滴原液+10mL的缓冲液混合，装入黄色的大瓶子；2、生物素二抗（蓝色小瓶子）：1滴原液+10mL的缓冲液混合，装入蓝色的大瓶子；3、ABC复合物：2滴A液加入10mL的缓冲液混合后，加入2滴B液混匀后装入标有ABC 的大瓶子。
此处反应需要30min。
1滴大概50uL4、试剂（自备）二甲苯、PBS缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、一抗稀释液：3%BSA in TBS，pH7.4DAB工作液：1ml PBS加入50ul DAB stock solution 、50ul Hydrogen Peroxide solution充分混匀二、步骤1.脱蜡和水化脱蜡前，应将组织切片在室温中放置60min或60℃恒温箱中烘烤20min。
1）组织切片置于二甲苯中浸泡10min，更换二甲苯后再浸泡10min；2）无水乙醇中浸泡5min；3）95%乙醇中浸泡5min；4）70%乙醇中浸泡5min；2.PBS洗两次各5min。
3.抗原修复，用于福尔马林固定的石蜡包埋组织切片。
煮沸热修复电炉或者水浴锅加热0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）至95℃左右，放入组织切片加热10~15min，必须等缓冲液冷却后，方能将切片取出。
4.PBS洗5min。
5.用蒸馏水或PBS配置新鲜的3%H2O2，室温封闭5～10min，PBS洗3次，每次2min。
6.滴加封闭血清工作液，室温封闭20min，以减少非特异背景，无需冲洗只需吸去多余血清。
7.滴加一抗，室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时（4℃过夜后在37℃复温45min）。
8.PBS洗3次每次2min。
9.滴加生物素二抗工作液，室温度孵育30min。
10.PBS洗3次每次2min。
11.滴加ABC复合物（提前30min，A液与B液等量混合），室温孵育30min。
12.PBS洗3次每次2min。
13.DAB显色：DAB显色试剂盒或者自配显色剂显色（镜下掌握显色程度）。
常用免疫组化试剂介绍
常用免疫组化试剂介绍概述免疫组化（IHC）是一门通过检测特定抗原在组织切片中的表达程度来揭示组织形态和细胞化学等方面信息的技术。
由于IHC是一种定性分析技术，所以该方法需要与定量技术（如分子生物学）结合使用，从而得到更准确的数据。
IHC涉及到多种试剂，其标记原理和表现形式各异，能够检测的抗原种类也不同。
本文将对常用的IHC试剂进行介绍，以此为指导，让大家更好地了解和应用IHC技术。
常用的免疫组化试剂抗原修复试剂抗原修复试剂（Antigen Retrieval）用于在组织样本中使细胞内蛋白与抗体亲和性和特异性增加。
这种试剂可通过热处理（如高压）或化学处理（如酶样蛋白和酸性处理）来复原被检测抗原的结构和功能。
常用的抗原修复试剂包括：EDTA、Tris、Citrate等。
原位杂交试剂原位杂交试剂（In Situ Hybridization）可检查DNA或RNA分子的特异性结合情况。
这种试剂可将RNA等分子与特定热稳定的蛋白质结合，用于检测基因突变等。
常用的原位杂交试剂包括：流式胶体金试剂、脉冲场凝胶电泳（PFGE）、双链RNA原位杂交等。
细胞计数试剂细胞计数试剂（Cell Counting）用于获得细胞数量或结构变化。
这种试剂通常用于确定某一类细胞的数量、细胞计数和分离、细胞生长和分裂的应用。
常用的细胞计数试剂包括：皮质醇、14C-labeled thymidine等。
细胞信号转导试剂细胞信号转导试剂（Cell Signaling）用于研究细胞分子级别的通讯系统，并采取措施以确定物质在细胞内的作用机理。
常用的细胞信号转导试剂包括：抗体、试剂原和阻断类似物等。
同型抑制剂同型抑制剂（Isotype Control）用于在IHC实验中作为实验设计的对照组，以检测所观察的抗原与探测剂结合的特异性表现。
常用的同型抑制剂包括：IgG1、IgG2a和IgG2b等。
情况控制试剂情况控制试剂（Condition Control）用于确定IHC试验的最佳条件，包括温度、缓冲液、酸碱程度等。
科普讲堂细胞染色的快、准、狠
引言概述：细胞染色是生物学和医学领域中一项重要的实验技术，通过使用染色剂将细胞内特定的结构或分子染色，从而能够更清晰地观察和研究细胞的结构和功能。
本文将继续探讨细胞染色技术的快速、准确、高效的方法。
正文内容：1.快速染色方法：1.1原位染色技术：原位染色技术利用特定的染色剂直接将目标分子染色，如荧光原位杂交（FISH），可以在短时间内获得高分辨率的染色结果。
1.2快速染色试剂盒：市场上现有的快速染色试剂盒，如液基细胞学染色试剂盒，能够在几分钟内完成染色过程，并且结果准确可靠。
2.准确染色方法：2.1免疫组化染色技术：免疫组化染色技术通过利用特异性抗体和酶联反应，能够准确地染色目标蛋白质、细胞器或细胞表面分子，广泛应用于病理学和细胞生物学研究。
2.2激光共聚焦显微镜：激光共聚焦显微镜结合荧光标记技术，能够以亚细胞级别的分辨率观察和研究细胞结构，提供准确的染色结果。
3.高效染色方法：3.1多参数流式细胞仪：多参数流式细胞仪结合多重荧光染色技术，能够同时检测多个目标分子的表达和功能状态，提高染色效率和准确性。
3.2增强染色灵敏性的方法：如放大革片染色法、醛固定染色法等，通过改进染色条件和处理方法，增强染色反应的灵敏性，提高染色效率。
4.详细阐述小点：4.1影响细胞染色效果的因素：样本处理、染色剂的选择和浓度、染色时间和温度等因素对细胞染色效果有重要影响。
4.2不同细胞类型的染色方法差异：由于细胞类型的差异，不同染色方法对不同细胞类型的适应性也有所不同，需要根据具体情况选择合适的染色方法。
4.3细胞硬化剂的应用：细胞硬化剂能够改变细胞的形态和结构，有助于染色剂的渗透和固定，提高染色效果。
4.4图像处理和分析软件的应用：图像处理和分析软件能够对染色结果进行定量分析和三维重构，提高研究的准确性和效率。
4.5细胞染色的应用领域：细胞染色技术广泛应用于病理学、生物医学研究、药物筛选、遗传学等领域，对疾病的诊断和治疗提供重要依据。
多重荧光免疫组化技术的主要流程
多重荧光免疫组化技术的主要流程一、样品处理在进行多重荧光免疫组化实验前，首先需要处理样品。
对于细胞样品，可以通过离心、洗涤等步骤准备细胞悬液。
对于组织样品，需要进行固定、脱水、包埋等处理，以保持组织结构的完整性。
二、抗原解表抗原解表是多重荧光免疫组化实验的关键步骤之一。
通过将样品暴露在适当的条件下，如高温、酶解等，可以使细胞或组织中的抗原裸露出来，为后续的抗体结合提供条件。
三、抗体染色在多重荧光免疫组化实验中，需要使用多个抗体来检测不同的分子。
这些抗体通常是与特定荧光染料偶联的，以便在显微镜下观察到荧光信号。
在进行抗体染色前，需要对抗体进行充分的验证和优化，以确保其特异性和敏感性。
四、荧光显微镜观察在完成抗体染色后，需要使用荧光显微镜观察样品。
荧光显微镜可以通过激发荧光染料发出的荧光信号来获得高分辨率的图像。
通过调整显微镜的参数，如放大倍数、曝光时间等，可以获得清晰的荧光图像。
五、图像处理与分析在获得荧光图像后，需要进行图像处理和分析。
常见的图像处理软件可以用于调整图像的亮度、对比度、色彩平衡等，以提高图像的质量。
同时，可以使用图像分析软件对荧光信号进行定量分析，如计算荧光强度、定位分子的相对位置等。
六、结果解读根据实验结果进行结果解读。
多重荧光免疫组化技术可以同时检测多个分子的表达和定位情况，因此可以提供更全面的信息。
通过对荧光信号的定量分析和图像的解读，可以得出对样品中不同分子的表达和相互作用的结论。
在进行多重荧光免疫组化实验时，还需要注意以下几点：1.选择适当的抗体和荧光染料，确保其特异性和互补性；2.控制实验条件的一致性，如温度、时间等，以保证实验的可重复性；3.合理设计实验对照组，如阳性对照、阴性对照等，以验证实验结果的准确性；4.注意光线的干扰，避免荧光信号的混杂和干扰；5.合理选择荧光显微镜参数，以获取清晰的图像。
多重荧光免疫组化技术是一种强大的工具，可以同时检测多个分子的表达和定位情况。
多重标记免疫组化小知识
常规的多重标记免疫组化，其原理、荧光素配伍及流程优化如下：
基本原理：
多重标记是利用免疫学和细胞化学原理，在同一张切片上同时采用或先后采用不同颜色的荧光色素或酶促产物，或采用不同直径大小颗粒胶体金来原位示踪组织或细胞内不同抗原大分子物质的一项标记染色技术。
采用呈现不同颜色的荧光色素配伍，分别标记不同的抗体，再通过各自与同一切片上的相应抗原特异性结合而加以区别显示所建立起来的双重免疫组化染色技术。
荧光素配伍：
FITC（异硫氰酸荧光素）——翠绿色，常与呈红色的罗丹明或TRITC（异硫氰酸四甲基罗丹明）配伍。
流程优化：
•抗体稀释，染色前先摸索单通道下每个单抗的量佳浓度范围。
•抗体与荧光素匹配，平衡待检样品中靶点峰度和各通道信号强度。
•染色顺序优化，保证多次加热切片不会影响后面靶点表位的完整性。
•构建光谱库
爱必信多重荧光免疫组化染色试剂盒，采用TSA技术，基于酪酰胺的信号放大技术能够检测用传统方法无法检出的低丰度靶标，且无需担心抗体交叉反应，以及一抗。
免疫组化经验总结第一部分步骤及常见问题
免疫组化经验总结第⼀部分步骤及常见问题免疫组化技术流程及常见问题解析（修改版）说明：加粗的字体部分是我认为要注意的地⽅和提出的问题，⽽红⾊字体部分表⽰还不太确定的第⼀部分载玻⽚与盖玻⽚的处理：载玻⽚与盖玻⽚重铬酸钾浸泡1-2天，⽔清洗直到没有颜⾊为⽌，放⼊⽆⽔⼄醇中，⽤纱布擦⼲（如需开展原位杂交，还需将玻⽚240℃烤2h），载玻⽚涂上多聚赖氨酸，37度烘⼲，备⽤第⼆部分冰冻切⽚前期处理1冰冻切⽚组织处理。
肿瘤组织从体内取出后，迅速放于液氮中冰冻，然后放于－８０度保存，切⽚时先⽤OCT 固定（尽量减少⽓泡⽣成），-20度20-30分钟固定好后即可切⽚（最好时间长⼀点，时间太短容易使切⽚卷起，也使切⽚不均匀）。
2切⽚，切⽚时要慢，稳⼀点，切好后⽤涂有多聚赖氨酸的载玻⽚粘取切下的组织⽚，粘的时候有⼀个向内拉伸的动作，这样可以使组织⽚充分展开。
⽚⼦的厚度⼀般为10um,也有的要切30um（根据需求调整）。
切好的⽚⼦⽴即放⼊4﹪的新配的多聚甲醛中处理8-10分钟(或在丙酮中固定10S，具体⽤什么固定要看⼀抗的要求)3 PBS中洗⼀下（约2分钟）去掉残留的多聚甲醛。
（丙酮切⽚的话省去本步骤）（从冰箱中取出的⽚⼦最好在PBS中浸泡2分钟，再往下做。
如果打孔不充分，可以在PBS 中加⼊triton x-100洗三次。
再⽤PBS洗⼏次，除去triton x-100）4 ⽚⼦切好后可放于37度烘⼲，但是时间不要太长，2-3⼩时即可，或者室温风⼲，然后放于-20度或-80度冰箱可长期储存。
但是⽤丙酮或有机溶剂固定的⽚⼦上如果还有其他有机溶性的染料的话建议尽快做掉，因为有机溶剂在长期储存中（⼀个⽉）缓慢作⽤的话，也会使染料变得模糊。
第三部分加抗体5 10％正常⼭⽺⾎清（PBS稀释，可加少量的triton x-100打孔），封闭（依⼆抗的来源⽽定），室温孵育30分钟。
6倾去⾎清，擦⼲各组织之间的⽔滴，防⽌有⽔滴粘连。
滴加适当⽐例稀释的⼀抗1：100左右或⼀抗⼯作液，37℃孵育1~2⼩时或4℃过夜，4℃过夜后需在37℃或室温复温30分钟。
免疫组化试剂盒说明书
(HopeBiot) 镇江厚普生物科技有限公司Zhenjiang Hope Biotechnology Co.，Ltd订货电话：*************传 真：*************网 站：http:// E-mail ：*******************Histostain-Plus Kits免疫组化染色试剂盒货号：SP-9002简介: 本试剂盒为美国ZYMED 公司SP 系列试剂盒，全称为过氧化物酶标记的链霉卵白素（Streptavidin/Peroxidase ）染色试剂盒。
由美国ZYMED 公司于1986年首建。
由于链霉卵白素的分子量是60kDa ，有四个亚基和生物素结合，等电点为6.5，所以该方法具有灵敏度高、特异性强、背景清晰、成本低廉的优点，是理想的免疫组化染色方法。
包装：试剂（无色液体）： 3％ H 2O 2去离子水， 6ml ；试剂A （蓝色液体）：封闭用正常山羊血清工作液， 6ml ；试剂B （黄色液体）：生物素化山羊抗小鼠IgG 二抗工作液， 6ml ；试剂C （橙色液体）：辣根酶标记链霉卵白素工作液（S-A/HRP ），6ml 。
标本染色步骤：1， 石蜡切片，常规脱蜡至水。
2， 蒸馏水冲洗，PBS 浸泡5分。
（如需采用抗原修复，在此步骤后进行） 3， 3％ H 2O 2去离子水（无色液体）孵育5-10分钟，以消除内源性过氧化物酶活性。
4， 滴加试剂A （蓝色液体）室温孵育10-15分钟，倾去，勿洗。
5， 滴加适当比例稀释的一抗，37℃孵育2-3小时或4℃过夜。
6， PBS 冲洗，3分钟×3次。
7， 滴加试剂B （黄色液体），室温或37℃孵育10-15分钟。
8， PBS 冲洗，3分钟×3次。
9， 滴加试剂C （橙色液体），室温或37℃孵育10-15分钟。
10，PBS 冲洗，3分钟×3次。
11，显色剂显色DAB 。
12，自来水充分冲洗。
一种p16免疫组化检测试剂盒[发明专利]
![一种p16免疫组化检测试剂盒[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/7bbdeb4a1611cc7931b765ce050876323112748e.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910806526.1(22)申请日 2019.08.28(71)申请人 深圳市森盈生物科技有限公司地址 518000 广东省深圳市南山区桃源街道龙珠三路南山睿园9栋4楼401(72)发明人 黄子权 (74)专利代理机构 广州德伟专利代理事务所(普通合伙) 44436代理人 黄浩威 何文颖(51)Int.Cl.G01N 33/543(2006.01)G01N 33/532(2006.01)G01N 1/30(2006.01)(54)发明名称一种p16免疫组化检测试剂盒(57)摘要本发明涉及生物科技技术领域，具体为一种p16免疫组化检测试剂盒，包括一抗：冻干粉p16抗体；无色试剂：内源性过氧化物酶阻断剂10－15ml；试剂A：免疫组化封闭液；试剂B：生物素标记二抗工作液；试剂C：辣根酶标记链酶卵白素工作液；棕色显色液D液1－2ml ；白色显色液E液20－25ml；0.1M PBS缓冲液；柠檬酸钠抗原修复液；二氨基联本胺DAB染色液。
本发明利用链霉亲和素－生物素信号放大技术生产的免疫组化检测试剂，具有高灵敏度，特异性强、定性定位准确、背景清晰、低倍景染色，直接滴加，操作方便，孵育时间短，适用于冷冻切片、石蜡切片及固定的细胞涂片；可用于检测细胞、组织内的特异性抗原。
权利要求书2页 说明书4页CN 110501498 A 2019.11.26C N 110501498A1.一种p16免疫组化检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒中包括以下试剂：一抗：冻干粉p16抗体；无色试剂：内源性过氧化物酶阻断剂10－15ml；试剂A：免疫组化封闭液；试剂B：生物素标记二抗工作液；试剂C：辣根酶标记链酶卵白素工作液；棕色显色液D液1－2ml；白色显色液E液20－25ml；0.1MPBS缓冲液；柠檬酸钠抗原修复液；二氨基联本胺DAB染色液。
免疫组化原理步骤及试剂
免疫组化原理步骤及试剂免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种广泛应用于生物医学领域的实验技术，用于检测组织切片中特定抗原的分布和表达水平。
它结合了免疫学和组织学的原理，能够在组织切片上定位和检测抗原，并通过染色方法将抗原可视化，从而实现对抗原的定性和定量分析。
免疫组化实验的步骤通常包括固定、脱脂、抗原修复、抗体和检测步骤。
下面将详细介绍每个步骤的操作和常用试剂。
1.组织固定：组织固定的目的是保持组织结构完整并固定细胞的抗原。
常用的固定试剂包括10%中性缓冲福尔马林（10% neutral buffered formalin，NBF）和乙醇等。
2.脱脂：脱脂是将组织切片中的脂质去除，以提高抗体对抗原的结合效率。
常用的脱脂试剂包括二甲苯、甲醛和乙醚等。
3.抗原修复：抗原修复是为了使被固定的组织恢复原样，增强抗原的可检测性。
抗原修复的方法包括热处理、酶解法和pH调整等。
常用的抗原修复试剂包括热解剂例如EDTA缓冲液、Tris-EDTA缓冲液，酶解剂例如胰蛋白酶和蛋白酶K，以及甲酸、盐酸等酸性溶液。
4.抗体：5.检测：检测步骤用于将抗原-抗体复合物可视化。
这通常通过染色方法完成。
常用的染色方法包括免疫酶标记、免疫荧光和免疫金标记等。
免疫组化实验所需的试剂种类繁多，下面列举一些常用的试剂：1. NBF（10% neutral buffered formalin）：用于组织固定，保持组织形态完整。
2.二甲苯：用于脱脂步骤，去除组织中的脂质。
3.甲醛：用于脱脂步骤。
4.乙醚：用于脱脂步骤。
5.EDTA缓冲液：用于抗原修复的热解剂。
6. Tris-EDTA缓冲液：用于抗原修复的热解剂。
7.胰蛋白酶：用于抗原修复的酶解剂。
8.蛋白酶K：用于抗原修复的酶解剂。
9.盐酸：用于抗原修复的酸性溶液。
10.一抗：选择特异性良好的一抗抗体，常用的有多克隆和单克隆抗体。
11.二抗：用于检测一抗结合的抗体，常用的二抗有反兔、反小鼠或反人的多克隆抗体。
免疫显色试剂说明书
免疫显色试剂说明书【产品名称】免疫显色试剂【包装规格】【预期用途】在免疫组化反应或原位杂交反应中与首要抗原抗体结合，通过染色，将靶点进行标记。
【检测原理】免疫显色试剂是二步法免疫组化试剂盒，适合与兔或鼠源一抗配用。
其主要过程为，一抗与切片中的靶抗原形成抗原抗体复合物，酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物与抗原抗体复合物中的一抗结合，再利用辣根过氧化物酶催化二氨基联苯胺（DAB）在抗原部位形成棕色显色。
由于该系统不含生物素和链亲和素，所以不受内源性生物素干扰，染色背景非常清晰。
【主要组成成分】其他需要但未提供的材料：PBST缓冲液（pH7.2-7.4）、纯化水、酒精、脱蜡液、苏木素染色液、中性树胶、塑料湿盒、染色缸、染色架等。
【储存条件及有效期】储存条件：2-8℃，有效期18个月。
请在开瓶3个月内使用。
生产日期、有效期至：见标签。
【样本要求】常规经福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片。
【检测方法】常规脱蜡水化：石蜡切片经常规脱蜡和水化。
抗原热修复：参照一抗说明书进行抗原修复。
DAB工作液的配制：按每毫升DAB缓冲液（试剂D）中加入50μL DAB色原（试剂C）（约1滴）的比例配制DAB工作液，DAB工作液应现配现用。
配制好的DAB 工作液需在2小时内使用，如出现沉淀，使用前先混匀。
操作步骤：1）抗原修复完毕后自然冷却的切片，用自来水清洗。
2）除去切片上组织周围的液体，用免疫组化笔圈定玻片上的待测组织区域并放入PBST缓冲液中。
3）取出切片，除去PBST缓冲液，滴加内源性过氧化物酶阻断剂（试剂A）（视切片大小以完全覆盖切片组织为宜），于组织上孵育10分钟，用PBST清洗切片。
4）除去PBST缓冲液，滴加100μL左右一抗工作液（视切片大小以完全覆盖切片组织为宜），于组织上进行孵育（按照各自一抗说明书操作）。
一抗孵育完毕，用PBST清洗切片。
5）除去PBST缓冲液，每张切片加酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物（试剂B）100μL左右（视切片大小以完全覆盖切片组织为宜），室温下孵育30分钟。
多重免疫组化VS免疫荧光
免疫荧光技术（Immunofluorescence technique，IF ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。
它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
多重免疫组化（mIHC）：主要的技术原理来自TSA技术，TSA即酪酰胺信号放大(Tyramide signal amplification)是一类利用辣根过氧化酶（HRP）对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。
该技术可与高性能染料Alexa Fluor®、传统荧光染料和比色检测系统相兼容。
TSA主要原理是利用酪胺Tyramide的过氧化物酶反应(酪胺盐在HRP催化H202下形成共价键结合位点)，产生大量的酶促产物，该产物能与周围的蛋白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)结合，这样在抗原-抗体结合部位就有大量的生物素沉积，与随后加入的Streptavidin—HRP/荧光基团结合，经几次这样的循环放大，可以结合大量的酶分子or 荧光基团，结果使其检测信号得到几何级放大。
mIHC和IP的区别：。
组织免疫荧光
免疫染色实验方法和步骤免疫染色(immunol staining)包括免疫荧光(immunol fluorescence)、免疫组化(immunol histochemistry)、免疫细胞化学(immunol cytochemistry)等，可以参考如下步骤进行操作。
1. 样品准备(Sample preparation)对于贴壁细胞：可以直接用多孔板，例如6孔板、24孔板等，培养细胞，然后到预定时间时进行固定等后续操作。
也可以用洁净的盖玻片，70%乙醇中浸泡后，用无菌的镊子放置到6孔板内，然后用无菌的生理盐水、PBS或培养液洗去残留的乙醇。
这时就可以种入细胞进行培养，待细胞贴在盖玻片上生长良好后，即可进行固定等后续操作。
对于悬浮细胞：把细胞先在固定液中固定，然后把细胞滴加在载玻片上，干燥后细胞会紧贴在载玻片上。
然后就可以进行后续操作。
如果细胞的粘附能力不佳，可以在载玻片上用PDL等物质进行处理，以增强载玻片的粘附能力。
对于冷冻切片：切片放置在载玻片上后，可以直接进行固定等后续操作。
对于石蜡切片：脱蜡：切片在二甲苯中脱蜡5分钟，再换用新鲜的二甲苯脱蜡，共用二甲苯脱蜡3次。
无水乙醇5分钟，两次。
90%乙醇5分钟，两次，70％乙醇5分钟，一次。
蒸馏水5分钟，两次。
抗原修复：根据不同的抗原和抗体，可以选择把切片放置在如下抗原修复液中，10mM柠檬酸钠，pH6.0，或1mM EDTA，pH8.0，或10mM Tris, pH10.0，95℃加热12分钟，大约在30分钟内缓慢冷却至室温。
2. 固定可以使用适当的固定液固定细胞或切片，例如碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)。
固定完毕后，可以用免疫染色洗涤液(P0106)洗涤两次，每次5分钟。
3. 封闭(Blocking)加入免疫染色封闭液(P0102)，封闭60分钟。
如果背景较高，可以4℃封闭过夜。
从封闭开始所有的步骤，一定要注意样品的保湿，避免样品的干燥，否则极易产生较高的背景。
免疫组化实验--全套试剂耗材
免疫组化实验试剂耗材大全华越洋---------------------------- 0.1%胰蛋白酶消化液waryong 10ml 110多聚甲醛merk 25g 504%多聚甲醛waryong 500ml 22010X多聚赖氨酸waryong 10ml 260抗荧光衰减封片剂waryong 25ml 230防脱载玻片waryong 50片310mayer'苏木素染液（免疫组化）waryong 100ml 410封闭用正常绵羊/山羊/兔/人血清waryong 10ml 75弗氏不完全佐剂sigma 10ml 180弗氏完全佐剂sigma 10ml 200柠檬酸钠缓冲液0.01mol/L PH6.0 waryong 1L 10DAB amresco 1g 13520XDAB显色液 A，B液各1.5ml waryong 3ml 95NBT amresco 100mg 95BCIP amresco 100mg 310BCIP/NBT底物显色试剂盒waryong 25ml 210PBST(PH7.4)抗体稀释液waryong 1ml 25一抗稀释液waryong 100ml 390HRP标记抗体稀释液waryong 100ml 390AP标记抗体稀释液waryong 100ml 390荧光抗体稀释液waryong 50ml 110免疫组化名称规格价格Super Polymer-二步法IHC试剂盒3ml35818ml1598兔Streptavidin-HRP试剂盒3ml19818ml998鼠Streptavidin-HRP试剂盒3ml19818ml998兔∕鼠通用型Streptavidin-HRP试剂盒3ml25818ml1198山羊抗兔IgG,Biotin(IHC工作液)3ml6818ml298山羊抗鼠IgG,Biotin(IHC工作液)3ml6818ml298山羊抗兔∕鼠IgG,Biotin(IHC工作液)3ml9818ml498 Streptavidin-HRP(IHC工作液)3ml9818ml49860ml258 AEC底物显色试剂盒20ml98 BCIP∕NBT碱性磷酸酶显色试剂盒(40x)40ml198 BCIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂40ml229改良型苏木素(IHC常用复染试剂)10ml68柠檬酸缓冲液(IHC抗原修复液,100x)100ml68EDTA缓冲液(IHC抗原修复液，50x)100ml68封闭用正常山羊血清工作液(免疫组化封闭液)10ml68内源性过氧化物酶封闭液10ml68内源性碱性磷酸酶封闭液10ml68Biotin标记抗体稀释液20ml中性树胶100g98水性封片剂10ml98 Super Polymer-二步法IHC试剂盒（带DAB显色液）3ml39818ml1698兔Streptavidin-HRP试剂盒（带DAB显色液）3ml25818ml1098鼠Streptavidin-HRP试剂盒（带DAB显色液）3ml25818ml1098兔∕鼠通用型Streptavidin-HRP试剂盒（带DAB显色液）3ml29818ml1298。
常用免疫组化试剂介绍完整版
常用免疫组化试剂介绍完整版免疫组化试剂是一类用于检测细胞和组织中特定分子的试剂。
它们能够与目标分子发生特异性的结合反应，通过显色、荧光等方式实现目标分子的定位和检测。
常用的免疫组化试剂有抗体、底物、荧光染料等。
下面将详细介绍常用的免疫组化试剂。
一、抗体单克隆抗体：单克隆抗体是由单个克隆的B细胞分泌的抗体组成。
它们具有更高的特异性和一致性，适用于特定的免疫组化实验。
单克隆抗体一般通过酶联免疫吸附试验或杂交瘤技术获得。
二、底物底物是一种被特定酶催化后能够产生染色或荧光信号的化学物质。
在免疫组化实验中，常用的底物有DAB、VIP、AP、HRP等。
DAB：DAB（3,3'-二氨基联吡啶）是一种常用的免疫组化染色底物。
当DAB与过氧化物酶结合后，在特定条件下会产生棕色沉淀物，用于检测目标分子的位置。
VIP：VIP（维珍纳胶体阳离子）是一种特殊的底物，其在经过过氧化物酶催化后，形成带有阳离子电荷的胶体颗粒。
VIP用于染色后，可以形成黑色沉淀物。
AP：AP（碱性磷酸酶）是一种常用的底物，可以和特定基质反应生成可见或荧光信号。
AP基质有两种常用的类型，一种是快速红色溶液（Fast Red），另一种是紫色溶液。
HRP：HRP（过氧化物酶）是一种广泛使用的底物，在过氧化物酶的作用下可以产生明亮的荧光或染色信号。
HRP染色通常呈现为褐色或黑色。
三、荧光染料荧光染料是一种通过吸收特定波长的光线并在另一个波长下发射荧光的化合物。
免疫组化实验中常用的荧光染料有FITC、TRITC、Cy3、Cy5等。
FITC：FITC（荧光异硫氰酸酯或荧光同硫氰酸酯）是一种常用的绿色荧光染料，其在激发波长为488nm的波长下产生绿色荧光。
TRITC：TRITC（荧光异硫氰酸酯）是一种常用的红色荧光染料，其在激发波长为568nm的波长下产生红色荧光。
Cy3：Cy3是一种荧光发色团，其在激发波长为550nm的波长下产生黄绿色荧光。
Cy5：Cy5是一种荧光发色团，其在激发波长为650nm的波长下产生红色荧光。
多重免疫组化和多重免疫荧光
多重免疫组化和多重免疫荧光1. 引言嘿，大家好！今天咱们聊聊两个在生物医学领域特别炙手可热的工具：多重免疫组化和多重免疫荧光。
听上去是不是有点儿像天文物理学的术语？其实，它们就是帮我们研究细胞和组织中的各种小秘密的高科技神器。
想象一下，你在翻开一本厚重的图鉴，每一页都藏着细胞的秘密，这些工具就像是你的小侦探，让你能看到那些你平时看不到的细节。
来，坐下来，咱们一起揭开这些神秘的面纱，看看它们是如何让科学研究变得既有趣又精彩的。
2. 多重免疫组化（IHC）2.1 什么是多重免疫组化？说到多重免疫组化，首先得弄明白啥是免疫组化。
免疫组化就像是给细胞穿上了“特定的衣服”，这些衣服是用来标记细胞中某些特定的蛋白质的。
好比你在一群人中找特定的朋友，你可以让他穿上你指定的颜色，这样你一眼就能找出来。
多重免疫组化就是在这基础上，把这种“标记衣服”升级为多套不同的颜色，能同时标记几种不同的蛋白质。
这就像你在一场大派对上，能够一下子识别出穿着不同颜色衣服的所有朋友，一下子就能知道他们的“身份”。
2.2 它怎么操作？在操作上，首先你得准备好一块组织切片，把它“煮”一遍，放进含有抗体的溶液中。
这些抗体就像是各式各样的小侦探，能识别并结合到你感兴趣的蛋白质上。
接着，再加入染色剂，它们会给这些抗体着色，使它们在显微镜下变得亮眼可见。
于是，你就能通过这些颜色，清晰地看到组织中不同蛋白质的位置了。
简单来说，就是把一个复杂的组织样本变成了一个五彩斑斓的地图，让你一目了然。
3. 多重免疫荧光（IF）3.1 多重免疫荧光的原理说到多重免疫荧光，这玩意儿和多重免疫组化有点儿相似，但又有它自己的独门绝技。
荧光是那种在黑暗中能发光的神奇物质，就像夜晚的萤火虫一样美丽。
通过给组织中的特定蛋白质标记上不同颜色的荧光染料，咱们可以在荧光显微镜下看到这些蛋白质的位置和分布。
而且这玩意儿能同时使用多种荧光标记，这样你就可以一睹多种蛋白质的“风采”了。
空间组学多重免疫荧光
空间组学多重免疫荧光（MxIF）是一个逐步完善的空间组学新方法，可以在一张组织切片中进行超过50-60种蛋白的空间定性定量分析。
这种方法为深入研究肿瘤微环境、开发生物标志物以及发现肿瘤异质性等方面提供了一个强有力的工具。
建立最佳抗体组合是使用Opal多重荧光免疫组化工作流程的关键。
这需要仔细设计、开发和优化用于多重生物标志物定量的抗体组合。
具体步骤包括：
1. 从预先设计的抗体组合开始：选择在多重荧光免疫组化中具有高灵敏度、特异性、再现性和优异性能的可识别所需靶标的抗体。
市面上也有一些商品化的预先设计、优化的抗体组合试剂盒，通过提供识别关键免疫和/或肿瘤细胞标志物的优化一抗组合，为新用户提供了构建多重荧光免疫组化抗体组合的简便途径。
2. 选择抗体：与免疫学家和疾病专家合作，确定理想的一系列生物标志物可以回答手头的生物学问题。
3. 使用对照组织验证所选择的抗体组合：选择正确的阳性和阴性对照组织样品对于开发信息丰富的多重荧光免疫组化检测方法至关重要。
如需了解更多信息，建议咨询相关研究学者或查阅生物科学领域的文献。
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多重荧光免疫组化染色试剂盒
肿瘤微环境系列
【背景介绍】
免疫组化染色是一种研究组织形态和原位蛋白表达的常见技术，随着免疫治疗的崛起，越来越多肿瘤微环境中的标志物被发现与疾病治疗、进展密切相关，对这些标志物进行同时染色标记、并研究它们之间的共定位、表达量和距离关系成为肿瘤免疫研究的普遍需求。
爱必信公司多色试剂盒是利用酪氨信号放大技术（TSA）把抗体和荧光染料进行优化组合，开发了一系列可以同时标记检测多种生物标记物的荧光免疫组化试剂盒。
【产品简介】
肿瘤微环境是由肿瘤细胞、与癌症相关的成纤维细胞和免疫细胞、以及上述细胞的分泌产物（如细胞因子和趋化因子）和细胞外基质中的非细胞成分构成。
肿瘤微环境系列染色试剂盒可以标记角蛋白（pan-CK）、T细胞、髓系来源的免疫细胞、免疫检验点蛋白，每个试剂盒可任选其中3 个marker。
【用途】
主要用于肿瘤微环境系列TILs的免疫荧光染色。
【技术原理】
酪氨信号放大技术（TSA）采用HRP 标记的二抗，HRP 催化加入体系的荧光素底物，生成活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸共价结合，试样品上稳定地共价结合荧光素。
之后用热修复洗去非共价结合的抗体，再换下一种一抗第二轮孵育，换另一种荧光素底物，如此往复就可实现多重标记。
图1 酪氨信号放大技术原理
【实验流程图】
图2 多重荧光免疫组化染色流程图
【产品优势】
高科研价值：分人、鼠两个系列，方便在小鼠肿瘤模型和人样品上进行平行实验，进行转化医学研究；
高兼容性：选用荧光染料标记适用于所有配备了紫外、FITC、CY3、CY5 等波段的荧光显微镜、共聚焦显微镜和荧光切片扫描设备；
稳定性：加样过程无需避光操作，样品染色完4度保存半年，-20℃保存一年荧光信号依然满足拍照需求；
方便性：所有抗体都经过筛选，特异性好，染色浓度均经过优化，减少研究者自己摸条件的过程。