流式检测上机前细胞处理流程与注意事项
流式检测上机前细胞处理流程与注意事项
流式检测上机前细胞处理流程与注意事项流式细胞检测是一种常见的细胞学技术，用于研究和分析细胞的表型特征。
流式细胞检测通常包括细胞样品的处理、染色和分析等步骤。
下面将介绍流式检测上机前的细胞处理流程及注意事项。
流式细胞检测的基本流程包括：细胞样品制备、细胞染色、样本处理与检测。
在上机前的细胞处理阶段，需要进行以下步骤：1.细胞培养和扩增：首先，选择所需的细胞系进行培养和扩增。
细胞应该在适当的培养基和培养条件下生长，并保持细胞的活性和稳定性。
2.细胞收获：当细胞达到适当的生长状态后，使用适当的方法（例如胰蛋白酶消化、细胞刮取等）将细胞从培养瓶中收获。
3.细胞计数和离心：将收获的细胞进行计数，以确定要投入到流式细胞仪中的细胞数量。
通常使用血球计数板或自动细胞计数仪进行计数。
然后，用适当的速度进行离心，以收集和清洗细胞。
4.细胞固定和渗透化：对细胞进行固定和渗透化处理，以保持细胞在染色过程中的形态和结构。
常用的方法包括用乙醇固定和洗涤溶液进行渗透化处理。
5.抗体染色：根据研究的目的和需要，选择适当的标记抗体对细胞样品进行染色。
可以选择直接染色或间接染色方法，通过荧光标记的抗体对特定的细胞表面标记物或细胞内标记物进行检测。
6.控制样品的制备：在流式细胞检测中，为了进行质量控制和校准，需要准备确定性阳性和阴性对照样品。
阳性对照样品含有已知的标记物，用于评估流式细胞仪的性能和染色的品质。
注意事项：1.选择适当的细胞培养条件：细胞培养的条件对于细胞的生长和功能非常重要。
细胞应在适当的培养基和培养条件下生长，并定期检查细胞的健康状态。
2.加入适量的细胞：投入到流式细胞仪中的细胞数量应根据实验需要和仪器的要求来确定，过多或过少的细胞都会对结果产生影响。
3.使用合适的固定和渗透化方法：细胞固定和渗透化处理要严格按照方法的要求进行，以确保细胞在染色过程中保持完整和稳定。
4.选择适当的抗体和染色方案：根据研究的目的和需要选择合适的抗体和染色方案。
流式细胞仪操作规程
流式细胞仪操作规程流式细胞仪是一种用于单个细胞分析的高通量仪器，广泛应用于生物医学研究、药物开发和临床诊断等领域。
为了确保流式细胞仪的正常运行和准确结果的获取，需要制定一套规范的操作规程。
以下是流式细胞仪操作规程的一些基本要点：一、实验前准备：1.确保流式细胞仪处于稳定状态，并将其连接到电源并打开电源。
2.检查仪器的液氮箱和压力容器，确保液氮和气源充足。
3.准备实验所需的标本样品和相应试剂。
4.检查流束对齐和测量准备：校准激光、确定流速、检查流束质量控制。
二、流式细胞仪样品制备：1.使用无菌技术制备样品，并严格遵循相关操作规范。
2.样品的准备应考虑到细胞的数量和稳定性，避免细胞聚集、损伤或死亡。
3.样品的制备应注意避免氧化和污染的发生，以确保结果的准确性。
三、样品装载和分析：1.使用无菌技术将样品加载到流式细胞仪中，并确保样品注射器和管道清洁和无气泡。
2.对于多个样本的分析，应注意正确的样品顺序和识别，以避免混淆。
3.设置合适的仪器参数和测量条件，例如流速、激发和发射光源、滤光片设置和增益调节等。
4.开始样品分析之前，应进行负空白检测和仪器的系统背景校正。
5.开始实验后，密切观察结果窗口，并根据需要进行相应的数据记录和保存。
四、实验后操作：1.实验结束后，关闭流式细胞仪和相关辅助设备，并进行正常关机程序。
2.将仪器和试剂的残留物清洁干净，并按照相关操作规范进行废弃物的处理。
3.维护仪器的常规保养，例如清洁仪器表面、更换滤光片、标定仪器等。
4.及时记录和整理实验数据，并进行必要的数据分析和结果解释。
五、安全注意事项：1.在操作过程中，应遵守相关的生物安全和化学安全规范，例如穿戴好实验室服装、戴手套、戴眼镜等。
2.对于辐射性或有毒性样品的操作，应采取额外的防护措施，例如使用密封容器、穿戴防护服等。
3.在使用激光和其他高能源光源时，注意防护眼睛和暴露部位，避免直接观察激光光源。
总结：流式细胞仪是一种复杂的仪器，需要严格的操作规范来确保实验结果的准确性和数据的可靠性。
流式细胞实验安全操作及保养规程
流式细胞实验安全操作及保养规程一、前言流式细胞技术是一种高效、准确、快速、灵敏的分析和检测细胞数量和特征的方法，被广泛应用于细胞学、免疫学、生物医学和生命科学等领域。
在进行流式细胞实验时，安全操作和正确的规范操作是非常重要的，以确保人员和实验设备的安全，并获得可靠和准确的实验结果。
本文档介绍流式细胞实验操作安全和实验设备的保养规程，帮助实验人员保证实验过程的安全和实验结果的准确性。
二、操作安全1. 实验前准备在进行实验前，应仔细阅读相关实验室安全规定，了解实验室的安全标准以及操作的风险和安全防护要求，采取必要的安全措施。
冷冻样品必须在室温解冻，并用20%酒精或0.5%次氯酸钠消毒，消毒时要避免使用重金属离子。
实验人员应全程戴手套、防护眼镜和口罩、穿工作服。
加入细胞荧光素时，要避免吸入细胞荧光素雾气，以免引起呼吸系统不适。
2. 仪器操作操作前必须检查仪器和实验器材的状态，确保和维护设备的正常运行；特别是流式细胞仪的激光器部分的光学装置，在使用前查看工作状态、检查光路和水路，确保激光器正常发光和散热。
操作时应按照操作手册的正确步骤执行，防止操作错误和实验器材故障造成人员伤害和设备损坏。
操作员在操作时，必须保持操作半径内的放样器、样本管和设备清洁，避免出现样本或指令交叉感染。
3. 废液处理实验室废液、试剂、细胞废物等都必须按照实验室废弃物处理方法和规定处理。
废液处理必须在处理场地完成，处理过程中必须穿戴防护设备。
废液处理时，特别是在使用有剧毒化学试剂和生物试剂的实验时，需遵守防护措施，采取防护措施，避免产生反应物和气味污染。
三、设备保养1. 流式细胞仪定期保养流式细胞仪在使用前应根据仪器的使用说明书检查设备、清洗光学元件、检查滤光玻璃和波长选择器的状态。
并根据仪器使用记录年份，定期进行设备的点检和维护。
维护时应按照细胞仪的使用说明执行，包括清洗光学元件、检查滤光玻璃和波长选择器的状态，同时检测仪器的运行状态，保证仪器在最佳状态下使用。
流式染色注意事项
流式染色注意事项
流式细胞术是一种常用的细胞分离技术，其应用非常广泛。
流式
染色是流式细胞术中的重要步骤，本文主要介绍流式染色的注意事项。
1. 操作前准备
操作前必须准备好全部试剂和仪器，并检查其是否干净、完好无损、过期等。
尤其是要确保荧光标记物的纯度和浓度。
2. 细胞预处理
对于带有表面受体的细胞，可先将其孵育在与特定抗体结合的荧
光标记物中，进行前处理。
对于固定的细胞，建议使用增透离子溶液
来打开细胞表面的细胞膜。
3. 荧光标记物染色
在荧光标记物的浓度确定后，将其加入细胞悬液中，进行染色。
应尽可能避免荧光标记物与其他物质结合或发生光敏反应。
4. 染色后处理
进行荧光标记物染色后，应立即进行后处理。
移除无用的荧光标
记物并清洗细胞悬液，使其集中于流式细胞仪分析器可以接受的浓度。
5. 结果分析
分析结果前应验证流式染色是否成功，比如染色效率和准确性。
应对数据进行评估，并进行正确的统计分析。
总之，流式染色是流式细胞术中极其重要的步骤，正确的操作能
够获得准确的结果，从而解决许多细胞学问题。
流式细胞仪细胞分选的操作步骤
细胞分选的简要操作步骤一、上样前的准备FACSCalibu可以分选细胞进行培养或功能性研究，而这些研究需要清洁环境以保持分选后细胞不受污染继续培养，因此在样本制备，上机检测分选等过程中需严格按无菌技术操作。
1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。
3L 70%乙醇（用无菌蒸馄水配制）5L无菌蒸8留水5L无菌PBS2、在干净的鞘液筒中加入3L 70%乙醇。
盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充分洗涤。
安好鞘液筒。
3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。
4、用70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。
5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。
6、放上一支装有70 %乙醇的进样管。
7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。
9、从Acquire menu选择SortSetup。
在Sort Gate菜单中选择步骤7设定的分选门。
按液流控制键RUN。
10、在Setup 方框中打叉，点击Acquisition Control 菜单中Acquire。
11、跑乙醇直至2支收集管注满（每管注满需要9min ），点击Pause, Abort。
12、再重复上述步骤2次，共需要1h。
13、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL无菌蒸馄水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复操作直至洗净桶内壁残余乙醇。
14、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馄水，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
15、在收集管接口处安装2支新的收集管。
16、放上一支装有无菌蒸馄水的进样管。
17、点击Acquisition Control 菜单中Acquire018、跑无菌蒸8留水直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Paus^ Abort。
19、再重复上述步骤2次，共需要1h。
20、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入3L无菌PBS盖紧盖子。
安好鞘液筒。
21、在收集管接口处安装2支新的收集管。
22、放上一支装有无菌PBS的进样管。
23、点击Acquisition Control 菜单中Acquire024、第一支收集管（最左）中收集15 mL PBS后取下，使PBS由左至右流入下一收集管。
流式细胞术 注意事项
流式细胞术注意事项流式细胞术是一种广泛应用于生命科学研究和临床诊断的重要技术。
它可以用来分离和鉴定细胞群体，并分析其形态学、表型、生理学和功能特性。
然而，在进行流式细胞术时，需要注意以下几个方面。
首先，样本的准备至关重要。
样本的质量直接决定了流式细胞术结果的准确性和可靠性。
因此，在进行流式细胞术前，必须采取适当的方法收集和处理样本。
一般来说，样本应该保持单一细胞悬浮状态，以便通过流式细胞仪进行准确的细胞计数和鉴定。
同时，应该避免细胞团或聚集物的存在，以防止对细胞计数和鉴定造成影响。
其次，合适的抗体选择是十分重要的。
在进行流式细胞术时，抗体是用来鉴定不同细胞亚群和分析细胞表面标记物的重要工具。
因此，选择合适的抗体对于获取准确的结果是至关重要的。
在选择抗体时，应该考虑到其特异性、亲和力和背景噪音等因素。
此外，还要注意抗体的适宜浓度和孵育时间，以确保得到稳定的试验结果。
第三，流式细胞术过程中，仪器的性能和维护也是需要注意的。
流式细胞仪是流式细胞术的核心设备，其性能直接关系到结果的质量。
因此，在使用流式细胞仪前，需要进行适当的校准和质控操作。
例如，校正仪器的光源和光探测器，检查流速和压力，以及进行仪器的清洁和消毒等。
同时，还需要定期检查和更换仪器的关键零部件，以保证仪器的正常运行和准确度。
此外，流式细胞术的分析结果需要妥善解读。
流式细胞仪可以同时获得大量的数据，包括细胞数目、细胞表面标记物表达水平和细胞分布情况等。
因此，在分析结果时，需要借助适当的软件和统计方法进行数据处理和解读。
同时，应该对结果进行合理的验证和再现，以确保结果的可靠性和可重复性。
最后，安全操作也是进行流式细胞术时需要注意的事项之一。
流式细胞术涉及到使用一些潜在的有害物质和生物样本，如细胞染色剂、细胞培养液和细胞悬液等。
因此，在操作过程中，需要正确佩戴个人防护设备，如实验服、手套和面罩等。
同时，应该遵守实验室的安全操作规程，如避免直接接触有害物质、正确处理和处置废液和废弃物等。
流式细胞术操作规程
流式细胞术操作规程流式细胞术是一种常用的细胞分析技术，它可以用来检测和分析细胞表面标记物、细胞数量、细胞分布等信息。
以下是一份流式细胞术操作规程，详细介绍了该技术的操作步骤和注意事项。
一、实验前准备1. 准备所需的实验材料，包括流式细胞仪、标记抗体、孵育培养基、样本组织、显微镜片等。
2. 检查流式细胞仪的功能是否正常，确认仪器能够正常运行。
3. 清洁实验台面，确保操作环境干净整洁。
4. 准备所需的试剂和溶液，如PBS缓冲液、抗体染色溶液等。
二、样本处理1. 准备样本组织，将其转移到离心管中，并添加适量的孵育培养基使其完全浸泡。
2. 使用离心机将样本离心，去除上清液。
3. 重悬样本，将其转移到离心管中，并加入足够的PBS缓冲液进行洗涤。
4. 重复洗涤过程，直到样本完全洗净。
三、标记抗体染色1. 取出经过洗涤的样本，将其转移到离心管中，并加入足够的标记抗体溶液。
2. 在黑暗条件下孵育样本，使其与标记抗体充分结合。
3. 静置反应15-30分钟，确保充分染色。
4. 在光线和温度适宜的条件下冰冻样本，避免抗体的结合。
5. 根据实验需求，可以选择单标记或多标记抗体。
四、样本准备1. 取出经过标记抗体染色的样本，将其转移到离心管中，并加入足够的PBS缓冲液进行洗涤。
2. 将样本离心并去除上清液。
3. 重悬样本，并根据实验需要加入适量的PBS缓冲液进行稀释。
4. 检查样本的细胞数目和活性是否符合实验要求，如有必要，可以使用显微镜进行观察和计数。
五、流式分析1. 打开流式细胞仪，并确认仪器的设置和参数是否符合实验要求。
2. 调整仪器的流速和灵敏度，使其适应样本的特性。
3. 将样本转移至流式细胞仪的样本管中。
4. 开始流式细胞分析，记录并保存实验数据。
5. 根据实验需要，可以进行不同的数据分析和处理，包括细胞分布、细胞数量、表面标记物的表达等。
六、实验后处理1. 关闭仪器，清洁工作台和操作区域。
2. 处理和储存实验数据，可以使用相应的图像科学软件进行数据处理和结果分析。
流式细胞仪使用规范
流式细胞仪使用规范流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种常用的细胞分析仪器，广泛应用于细胞学、免疫学、生物学、医学等领域。
流式细胞仪可以对细胞进行快速、准确的多参数分析，能够检测和分离不同细胞类型、测定细胞数量、评估细胞活性以及研究细胞表面标记物等。
为了保证流式细胞仪的正常使用，以下是一些流式细胞仪的使用规范和注意事项。
1.准备工作：a.检查仪器：确认仪器的状态，包括是否通电、通气、光源是否正常工作等。
b.清洁样品室：使用无菌纯水或适当的清洁剂擦拭样品室，确保没有杂物或污染物。
c.校准仪器：根据仪器规定进行标定和校准，确保仪器的准确性和稳定性。
2.样品准备：a.细胞处理：合理处理样品，保证单细胞悬浮状态。
可以通过胰酶消化、筛选等方法获取单细胞悬浮液。
b.细胞计数：使用合适的细胞计数仪进行细胞计数，计算出所需的细胞悬浮液浓度。
c.细胞染色：根据实验需求对样品进行适当的荧光染色或抗体标记，以便在流式细胞仪中检测和分析。
3.流式细胞仪操作：a.设置参数：根据实验设计和研究目的，设置合适的仪器参数，包括激光器选择、激发波长、检测波长、门控设置等。
b.样品加载：将样品注入流式细胞仪样品室，避免气泡的产生，并确保样品完整进入样品室。
c.数据采集：开始数据采集前，进行流式细胞仪的标定、峰位校正和峰间校正，以保证数据的准确性和可靠性。
d.数据分析：对采集到的数据进行分析和解读，根据实验要求选取合适的分析策略和软件进行数据处理。
4.清洁和保养：a.实验后清洁：实验结束后，及时清洁仪器，避免样品残留和交叉污染。
b.仪器维护：定期检查仪器的部件和附件，保证其正常工作。
如需要更换部件或常规维护，请按照厂家指南进行操作。
c.长时间停用：如果流式细胞仪长时间不使用，应按照厂家指南进行仪器的合理关闭和长期存储。
5.安全注意事项：a.避免直接接触激光线：在进行样品加载和设置参数时，避免接触激光线以避免损伤眼睛。
b.使用无菌操作：在样品加载和处理过程中，使用无菌操作和材料，避免细菌污染和交叉感染。
流式细胞仪操作流程
流式细胞仪操作流程流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种广泛应用于生物医学研究领域的仪器，它能够对单个细胞进行快速、准确的细胞分析和分类。
本文将详细介绍使用流式细胞仪的操作流程。
一、实验准备在进行流式细胞仪实验之前，需要做好以下准备工作：1. 准备样品：收集和准备待分析的细胞样品，确保样品质量符合要求。
处理样品时要注意细胞的保存和处理条件，以避免样品的污染或破坏。
2. 准备反应体系：根据实验的需要，按照标准操作规程制备所需的反应液和缓冲溶液。
3. 检查和校准仪器：在使用流式细胞仪前，需要对仪器进行检查和校准，确保仪器状态良好，获得准确的实验结果。
二、仪器开机和设置1. 打开流式细胞仪电源，并等待仪器启动完成。
2. 进行仪器的初始化设置，包括选择所需的参数和实验模式等。
3. 设置流式细胞仪的激发和检测通道，根据实验需要选择适当的滤光片和荧光探针。
调整激光功率和检测灵敏度，确保后续实验过程中的信号质量。
三、样品加载和检测1. 将样品转移到适当的离心管中，并进行样品标记。
根据实验需要可以使用荧光标记物、抗体等对细胞进行特异标记。
2. 打开流式细胞仪的样品载架，将样品离心管安置在载架上，并将载架插入流式细胞仪的样品槽中。
3. 启动数据采集软件，设置样品参数和实验条件。
选择合适的采集速度和事件数目，确保获得足够的数据。
4. 开始数据采集，点击软件上的“实时运行”按钮，流式细胞仪将开始读取样品中的细胞信息，并将其转化为电子信号。
5. 采集完成后，保存数据并关闭数据采集软件。
四、数据分析1. 导出数据文件：根据实验需要，将采集到的数据文件导出到数据分析软件中进行进一步处理。
2. 进行数据筛选和清洗，去除噪音污染和非特异信号。
3. 根据实验的目的和问题，选择合适的数据分析方法，对细胞数据进行统计学和生物学分析。
4. 生成结果图表：根据数据分析结果，生成合适的图表或图像，用于展示实验结果和研究发现。
5. 结论和讨论：根据数据分析结果，撰写实验结论和讨论，解释实验结果并提出相应的科学推论。
流式细胞仪安全操作及保养规程
流式细胞仪安全操作及保养规程1. 前言流式细胞仪是一种高端的生命分析仪器，广泛应用于医学、化学、生物学等领域，已经成为现代实验室不可或缺的仪器之一。
然而，流式细胞仪的操作较为复杂，使用过程中需要注意许多安全问题，否则会对自身和实验室环境造成潜在的危害。
为了确保流式细胞仪的正常、安全使用，特制定以下操作及保养规程。
2. 流式细胞仪操作规程2.1 准备工作在使用流式细胞仪前，应注意以下准备工作：2.1.1 带上个人防护装备在使用流式细胞仪时，需要带上一定的个人防护装备，如实验手套、口罩、眼镜等，以防范样本物质对自身的伤害。
2.1.2 样品制备精确地制备样品是获得准确、可重复的流式细胞仪数据的关键。
在制备样品时，需要注意以下事项：•样品应洁净，纯度高；•样品应稀释至适合的浓度；•样品需要避免暴露在光线下。
2.1.3 流式细胞仪清洁使用流式细胞仪前，应将设备清洗并按照操作手册正确设置。
注意声音警报器和信号灯的功效。
2.2 实验操作2.2.1 启动流式细胞仪启动流式细胞仪的前提条件是样品审核通过、清洁完毕并符合清洁过程中设定的安全警戒线。
按照以下操作步骤进行启动：1.将流式细胞仪插头插入电源插座；2.打开流式细胞仪前面板上的电源开关；3.检查设备是否能够正常通电；4.检查设备上的液晶屏是否正常显示。
2.2.2 样品操作样品操作是流式细胞仪的核心，需要遵循以下步骤：1.打开样品架门；2.将样品检测管放在样品架上，注意是否正确安装；3.关上样品架门，并设置喷雾器；4.按下样品检测管的开关，将样品进入流式细胞仪；5.启动流式细胞仪，进行检测。
2.2.3 关闭流式细胞仪实验室操作完毕后，需要及时关闭流式细胞仪，避免发生紧急事故。
按照以下步骤进行：1.关闭流式细胞仪喷雾器；2.将样品架门打开，取出检测管；3.关闭前面板的电源开关；4.拔出插头，关闭电源。
2.3 安全注意事项在实验操作中，需要注意以下安全事项：•在操作流式细胞仪前，应认真阅读使用说明书和操作手册。
「实验笔记」流式细胞术实验过程中的操作要点
「实验笔记」流式细胞术实验过程中的操作要点流式细胞术可以同时分析单个细胞的多个参数。
目前广泛应用于细胞表面和细胞内分子表达特征的分析，界定不同种类的细胞群，测定分离出的亚类纯度，分析细胞的大小和总量等方面，在流式流式细胞术实验过程中，以下操作要点一定要注意，避免影响实验结果。
1、上机前处理小心荧光淬灭操作时必须严格按照孵育时间，如果抗体孵育时间过长，荧光是会逐渐淬灭的。
那如果不得不推迟实验怎么办?可以把试管放在冰里面，这样会稍稍延长淬灭的时间。
注意染色顺序在进行多荧光染色的时候，相同的细胞会因为染色顺序不同而导致荧光强度的差异。
解决办法为：预实验。
做一系列的不同染色顺序的样本，通过对染色前和染色后的各种样本进行比较分析，判断染色顺序对细胞造成的影响。
选好染色方案染色方案不合理也可能会导致荧光染色信号太弱。
解决的方案：预实验。
在正式开始实验之前，通过预实验，设计出一个完美的染色方案。
(考虑试剂种类，试剂质量，试剂用量，孵育时间，洗涤次数，染料浓度，染色时间及染色温度等其他因素。
)做好阴性对照及同型对照试验细胞阴性对照可以显示细胞基准的荧光水平。
同型对照则是为了查看抗体非特异性结合的水平。
选择同型对照需要注意采用相同物种、相同亚类、相同染料、相同浓度，否则，检测的时候会出现乱七八糟的同型对照结果。
选择合适的抗体通用原则是：为表达最弱的抗原选择染色指数最高的荧光素。
根据使用的流式细胞仪性能、激光器、滤光片种类来选择。
对于多色实验，需选择发射光谱重叠小的染料。
2、参数设定数据的获取必须是在仪器性能的校准均合格的基础上进行。
仪器散射光和荧光信号的光电倍增管电压、增益、颜色补偿等参数的设定会直接影响结果。
电压电压的调节需根据阴性对照管来调节。
阈值可以以任意参数及多个参数的组合作为阈值;大多数样本都可以设定FSC/SSC;阈值以下的信号不存储;可以根据阴性对照管来调节。
目的是将不需要的杂质信号，噪音信号，无用的细胞信号等扣除，使收集到的都是有用信号。
流式细胞检测服务安全操作及保养规程
流式细胞检测服务安全操作及保养规程流式细胞仪是一种常用于细胞和微生物学研究的仪器。
由于其高分辨率和高灵敏度，越来越多的实验室选择使用流式细胞仪进行细胞分析和排序。
然而，流式细胞仪需要经常维护和保养，以确保其正常运行和获得准确的结果。
本文将介绍流式细胞检测服务的安全操作和保养规程。
安全操作1. 禁止直接接触样本流式细胞仪中的样本可能含有病原体或有害物质，因此最好避免直接接触样本。
在操作前，请佩戴手套和口罩。
2. 使用防护措施在操作流式细胞仪时，应注意使用防护措施，如佩戴防护眼镜、手套和口罩。
如果意外溅洒了样本或试剂，请立即用大量水冲洗受影响的区域。
3. 清洁工作区在每次使用流式细胞仪后，应及时清洁工作区，以防止潜在的污染。
使用酒精或消毒液擦拭工作区表面。
4. 注意电气安全在插拔电源线和其他电气部件时，务必注意先拔掉电源线。
在更换零部件时，要使用符合安全标准的工具。
5. 遵守细胞培养实验室的规则流式细胞检测服务通常在细胞培养实验室进行，因此应遵守实验室的规则和标准操作程序。
在细胞培养前，请先了解实验室的操作规程。
保养规程1. 定期检查系统保持流式细胞仪的正常运行，需要定期对其进行检查。
这包括检查光源、光学透镜、过滤器、激光、探头、定标等。
如果出现问题，请及时联系售后服务。
2. 定期清洁为了确保流式细胞仪的精度和可靠性，应定期对其进行清洁和消毒。
在清洁过程中，应使用无菌水、酒精或消毒液。
清洁应按照制造商的指示进行。
3. 定期更换耗材流式细胞仪需要定期更换各种耗材，如样本管、石英反射板、过滤器、校准微球和荧光探头等。
更换耗材应按照制造商的指示进行。
4. 避光保存流式细胞仪的灵敏度和可靠性都受光线影响，因此必须避光保存。
在保存和运输流式细胞仪时，应使用防光袋或盒子。
使用前，请检查仪器是否暴露在光线下。
5. 定期校准为了保证流式细胞仪的准确度和可重复性，应定期进行校准。
校准包括流速校准、信号放大器增益校准、定标和荧光补偿等。
流式细胞仪标本制备的操作步骤与注意事项
流式细胞仪标本制备的操作步骤与注意事项(一)原理活细胞表面保留有较完整的抗原或受体，先用特异性鼠源性单克隆抗体与细胞表面相应抗原结合，再用荧光标记的第二抗体结合，根据所测定的荧光强度和阳性百分率即可知相应抗原的密度和分布。
(二)操作步骤制备活性高的细胞悬液(培养细胞系、外周血单个核细胞、胸腺细胞、脾细胞等均可用于本法)↓用10％FCS RPMI1640调整细胞浓度为5×10６～１×10７／ml↓取40μl细胞悬液加入预先有特异性McAb(5～50μl)的小玻璃管或塑料离心管，再加50μl 1∶20(用DPBS稀释)灭活正常兔血清↓4℃30min用洗涤液洗涤2次，每次加洗涤液2ml左右1000rpm×5min↓弃上清，加入50μl工作浓度的羊抗鼠(或兔抗鼠)荧光标记物，充分振摇↓4℃30min用洗涤液洗涤2次，每次加液2ml左右1000rpm×5min↓加适量固定液(如为FCM制备标本，一般加入1ml固定液，如制片后在荧光显微镜下观察，视细胞浓度加入100～500μl固定液)↓FCM检测或制片后荧光显微镜下观察(标本在试管中可保存5～7天)(三)试剂和器材1.各种特异性单克隆抗体。
2.荧光标记的羊抗鼠或兔抗鼠第二抗体，灭活正常兔血清。
3.10％FCS RPMI1640, DPBS、洗涤液、固定液(见附录)。
4.玻璃管、塑料管、离心机、荧光显微镜等。
(四)注意事项1.整个操作在4℃下进行，洗涤液中加有比常规防腐剂量高10倍的NaNO３，上述实验条件是防止一抗结合细胞膜抗原后发生交联、脱落。
2.洗涤要充分，以避免游离抗体封闭二抗与细胞膜上一抗相结合，出现假阴性。
3.加适量正常兔血清可封闭某些细胞表面免疫球蛋白Fc受体，降低和防止非特异性染色。
4.细胞活性要好，否则易发生非特异性荧光染色。
附:1. DPBS (×10, 贮存液)NaCl 80gKCl 2g 蒸馏水加至1000mlNa２HPO４11.5g 临用时用蒸馏水1∶10稀释KH２PO４2g2.洗涤液DPBS900mlFCS 50ml (终浓度5％)4％NaNO３终浓度0.2％)3.固定液DPBS1000ml葡萄糖20g (终浓度2％)甲醛10mlNaNO３0.2g (终浓度0.02％)流式细胞术常规检测时的样品制备(一)直接免疫荧光标记法取一定量细胞(约1X106细胞／ml)，在每一管中分别加入50μl的HAB，并充分混匀，于室温中静置1分钟以上(),再直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应(如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入)，。
仪器操作规程-BD流式细胞仪基本上机操作流程操作注意事项及...
仪器操作规程-BD 流式细胞仪（基本上机操作流程、操作注意事项及样品要求）一、标准操作规程开机程序：z开启细胞仪电源。
z开启计算机。
z确认鞘流液筒有八分满的FACS Flow，确实旋紧(鞘液筒容量为4L)。
z将废液倒掉，并在废液筒中加入200 ml 家用漂白水(废液筒容量为4L)。
z将减压阀方向调在加压（Pressurize）位置。
z排除液流管路与过滤器中的气泡。
z取下样品管，执行 PRIME 功能两次。
z使用1ml PBS，HIGH RUN 两分钟。
z可开始分析样品。
关机程序：z将样品支持架左移，样品管中加入3 ml 10%次氯酸钠，让仪器的真空系统抽取约 1 ml 的液体。
z将样品支持架回正，按 HI RUN，清洗管路5分钟。
z按 Standby，取下样品管，执行 PRIME功能两次。
z样品管中加入 3 ml 超纯水，重复上述步骤1-3。
z注意最后只留约1 ml 超纯水在试管中。
z倒掉废液，并在废液桶中加入200 ml漂白水。
z按 STANDBY 10分钟，使风扇冷却雷射后，关闭细胞仪。
.z退出软件“File”Æ“Quit”(如有对话选项，选择“Don‘t save”)。
确认退出计算机中所有BD 应用软件，所有数据数据已储存备份。
z关闭计算机。
“Special”Æ“Shutdown”。
CELLQuest 软件的简要操作步骤Acquisition获取数据1.打开获取模板（ACQ文件）制作新模板：•选择点图或直方图工具，在窗口拖出大小合适的方框，•出现点图或直方图对话框，选择：Acquisition获取X Parameter横轴参数：如FSCY Parameter纵轴参数：如SSCGate设门：如G1=R1OK-出现相应的点图或直方图•图形设置完毕，选择SA VE AS，保存为ACQ文件2.联机Acquire-Connect to cytometer，出现Acquisition Control窗口3.打开获取条件窗口，调出实验获取条件（Instrument Setting）•Cytometer-Detectors/V oltage，Threshold，Compensation•Cytometer- Instrument Setting-Open打开实验获取条件-Set-Done实验获取条件的调整：Acquisition Control-5Setup-上样-Acquire-进行实验获取条件的调整1)F SC、SSC电压2)FSC阈值（Threshold）：减少碎片3)设门：FSC/SSC点图设门（R1）；荧光（FL）点图（如FL1/FL2）或直方图（如FL1）取门G1=R1（选中图形-Plot-Format Plot-Gate：G1=R1）4)阴性对照管，调整荧光电压（FL1、FL2、FL3、FL4 V oltage），阴性群体在左下角，确定十字位置5)多色实验的补偿管，调整荧光间补偿（Compensation）6)Cytometer- Instrument Setting-Save保存实验获取条件（InstrSet）-Done4.数据获取前的设定•Acquire-Acquisition & Storage-设定获取细胞数（10000-All）-OK•Acquire-Parameter Discription对话框选择：Folder设定存储数据文件的文件夹File设定数据文件的名字：文件前缀（Prefix）-自定义；文件后缀（Surfix）-管号5.顺序上样，获取数据文件：Acquisition Control- Setup-上样-Acquire-仪器获取足够细胞后，自动保存数据文件（data file）Analysis数据分析1.做FSC/SSC点图，圈细胞R1•选择点图工具，在窗口拖出大小合适的方框，•出现点图对话框，选择：Analysis分析Select File选择第一管数据文件X Parameter横轴参数-FSCY Parameter纵轴参数-SSCGate设门-No Gate•OK-出现FSC/SSC点图-选择设门工具，圈细胞R12.做阴性对照管门内细胞的FL1/FL2点图，设十字，区分阴性和阳性界限•选择点图，在窗口拖出大小合适的方框，•出现点图对话框，选择：Analysis分析Select File选择第一管数据文件（阴性对照管）X Parameter横轴参数-FL1Y Parameter纵轴参数-FL2Gate设门-G1=R1•OK-出现FL1/FL2点图-选择十字工具-沿阴性群体设十字3.做各实验管门内细胞的FL1/FL2点图，拷贝阴性对照管的十字•选择点图，在窗口拖出大小合适的方框，•出现点图对话框，选择：Analysis分析Select File选择实验管数据文件X Parameter横轴参数-FL1Y Parameter纵轴参数-FL2Gate设门-G1=R1•OK-出现FL1/FL2点图-点中阴性对照管FL1/FL2点图上的十字-Edit-Copy-点中实验管FL1/FL2点图-Edit-Paste4.做各实验管FL1/FL2点图的十字统计：点中实验管FL1/FL2点图-Stat-Quadrant Stat-出现统计结果-点中统计结果框-Stat-Edit Quadrant Stat-选择输出结果（如Percent of gated门内细胞阳性百分率）5.选择文字工具（A），在报告上添加文字说明，报告实验结果6.Save As保存分析结果（ANA文件），Print打印分析结果二、送样要求样品不能有肉眼可见的团块或絮状物，如果有团块需要经过200目纱网过滤方可上机。
流式细胞仪验证安全操作及保养规程
流式细胞仪验证安全操作及保养规程1.安全操作注意事项在使用流式细胞仪前，需要了解一些重要的安全操作注意事项。
1.1.操作前准备在开始使用流式细胞仪进行实验前，需要进行以下几项准备：•检查仪器是否处于正常工作状态，确认仪器所有部件处于正确位置且完好无损。
•验证仪器是否与正确的电源相连，且电压是否符合要求。
•在使用前请仔细阅读仪器使用手册和操控手册，了解仪器的使用方法和注意事项。
1.2.操作时的注意事项在使用流式细胞仪时，需要注意以下事项：•在操作中，请戴手套、口罩、护目镜等防护用品以保障实验安全。
•在操作过程中请谨慎处理所有实验物品，包括悬浮细胞、试剂、化学物质等，以防止潜在的危险性。
•在使用前，请认真了解所有细胞、细胞培养液和试剂的性质。
针对化学品，需要了解其化学性质和可能的安全危险。
•如果产生任何实验安全问题，请立即向实验室负责人汇报。
1.3.操作后的处理在完成实验后，需要及时清理和处理实验设备和试剂。
需要注意以下事项：•仔细处理所有试剂和化学物品残余，以避免造成污染和安全隐患。
•在使用后，请及时将实验设备清洗并消毒，以便下一次使用。
•对于所有的样品和试剂，在使用完毕后，需要按照规定的方法和处置方式进行处理。
2.保养规程为了保证流式细胞仪的稳定性和可靠性，需要定期对仪器进行保养和维护。
2.1.日常维护•定期清洗所有外部器具以保证外观清洁。
•在使用后请直接关闭流量阀门。
•室温下运输仪器时，需要等待至少4小时后才能进行使用。
2.2.周期保养•在使用过程中，请避免不当使用和暴力操作。
•每隔3个月，需要对仪器进行一次全面保养，检查每个器具的精确度以及指示符和测量系统的正常性能。
2.3.异常处理•如果在实验中出现任何异常或者问题，请立即联系厂家或者技术支持人员。
•如果需要维修，请按照说明书上的流程进行步骤。
任何私自处理都可能会导致更大的损害。
结论通过对流式细胞仪的安全操作和保养规程的详细说明，可以让我们更加清晰地了解如何安全、高效地进行实验操作。
流式细胞检测实验步骤
流式细胞检测实验步骤一、样品准备在进行流式细胞检测之前，需要准备好待检测的样品。
样品可以是细胞培养液、组织切片、血液等，具体根据实验需求而定。
对于血液样品，需要进行抗凝处理，防止细胞凝结。
对于组织切片，需要将其切成小片或粉末状，以便于后续处理。
二、细胞染色染色是流式细胞检测中的重要步骤，通过染色可以标记细胞表面的抗原或抗体，以便后续的检测和识别。
常用的染色方法包括免疫荧光染色、化学荧光染色等。
染色时需要选择适当的抗体或荧光染料，按照说明书进行操作，并控制好孵育时间和温度。
三、细胞洗涤洗涤是为了去除染色过程中细胞表面的多余抗体或染料，以便于后续的检测。
洗涤时需要使用适当的缓冲液，如PBS或HBSS等，轻柔地冲洗细胞，直到洗涤干净。
四、细胞固定对于一些需要检测活细胞的实验，需要进行细胞固定。
常用的固定方法包括用1%多聚甲醛或1%乙二胺四乙酸（EDTA）进行固定。
固定可以保持细胞的形态和功能，防止细胞在检测过程中发生变形或失活。
五、流式细胞仪检测流式细胞仪是进行流式细胞检测的主要设备，通过该设备可以快速准确地检测细胞表面的抗原、内部的酶等物质。
检测时需要将处理好的细胞通过流式细胞仪的喷嘴，在液流的作用下形成单个细胞悬液，经过激光束照射后产生散射光和荧光信号，这些信号被光电倍增管接收并转换为电信号，经过放大和滤波后送入计算机进行分析和处理。
六、结果分析流式细胞检测的结果通常以散点图或直方图的形式表示，通过分析这些图形可以得到细胞的表面抗原表达、细胞内酶的活性等信息。
对于表达相同抗原的细胞群可以进行聚类分析，以便更好地了解细胞的表型和功能。
此外，还可以使用统计分析方法对实验数据进行处理和比较，以得出更准确的结论。
七、质量控制为了保证流式细胞检测结果的准确性和可靠性，需要进行质量控制。
质控包括以下几个方面：确保流式细胞仪的性能稳定，定期进行校准和维护；使用已知阳性样本进行测试，验证实验方法的可靠性；控制好实验条件和操作过程，避免误差和干扰；对实验数据进行评估和审核，确保结果的准确性和可信度。
流式鉴定细胞表面标记物(完整版)详述
流式鉴定细胞表面标记物实验步骤【实验流程】一.前期样品准备二.上机前样品的处理三.流式细胞仪检测四.流式检测数据分析【具体步骤】一.前期样品装备1.MCF-7贴壁细胞的CD44+呈现低表达，可以不需要鉴定该细胞的CD44和CD24了。
但是可以接种一孔的MCF-7 DMSO组作为调节荧光染料PE泄露到FITC通道的补偿参考。
但是一般情况下，PE染料难以染上，故可人为破坏细胞作为阳性对照组，比如加药C60或者用冰冻使细胞死亡。
2.MDA-MB-231贴壁细胞高表达CD44+，接种一孔的MDA-MB-231 DMSO组作为调节荧光染料FITC泄露到PE通道的补偿参考。
3.调整细胞浓度使细胞第二天可以铺满即可。
所以前期样品准备可以按照下表：注：画“——”为调补偿专用，其余为实验组，为避免细胞数目不够，实验组可以设置两个复孔。
若是检测悬浮球，也可以按照以上的组别进行设置，。
二.上机前样品的处理(一)实验步骤1.消化：收集旧培养基并离心，用于终止贴壁细胞的消化。
贴壁细胞用200uL 0.25%胰蛋白酶消化，消化5分钟，然后加2mL离心过的培养基终止消化。
2.离心：800r/min ,离心5min，弃掉上清液。
3.重悬：加2mL PBS重悬，涡旋成单细胞悬液。
将该细胞悬液转移到流式样品管中，离心，弃去上清液。
加300uLPBS重悬细胞。
4.调补偿组加抗体：要设置同型对照和单染，标记FITC-ISO+PE-ISO组，FITC组，PE组。
每组加相应的抗体5~10ｕL。
5.实验组加抗体：每个实验组都要设置同型对照，标记FITC-ISO+PE-ISO组，FITC +PE组。
每组加相应的抗体5~10ｕL。
6.加细胞悬液：分别吸取对应细胞悬液50uL于流式管中（此时细胞数至少为1×106/mL以上）。
常温避光孵育20min。
7.孵育完成后，加2 mL PBS重悬细胞，1000r/min,离心5min。
8.离心后垂直倒掉上清液,再加200uL PBS重悬细胞，进行上机检测。
血液病流式细胞前处理流程
血液病流式细胞前处理流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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流式检测上机前细胞处理流程与注意事项
流式检测上机前细胞处理流程与注意事项流式检测细胞周期与凋亡样品处理流程1.胰蛋白酶消化法收集细胞，做成单细胞悬液2.1000r/min离心5min，收集沉淀。
3.沉淀用PBS洗2次，1000r/min离心5min，收集沉淀。
4.细胞沉淀用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬，4℃过夜。
即可送检。
备注：1.每个细胞样品细胞量需达到106（细胞沉淀要打散，避免细胞聚集），细胞量少可能测不出结果，或结果不太准确。
2.样品可在-20℃保存一个月流式检测细胞DNA倍体样品处理流程1.胰蛋白酶消化法收集细胞，做成单细胞悬液2.1000r/min离心5min，收集沉淀。
3. 沉淀用PBS洗2次，加入相应种属的淋巴细胞或鸡红细胞做为内参，内参与预检测细胞的比例为1：34. 1000r/min离心5min，收集沉淀。
5. 细胞沉淀用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬，4℃过夜。
即可送检。
备注：1.每个细胞样品细胞量需达到106（细胞沉淀要打散，避免细胞聚集），细胞量少可能测不出结果，或结果不太准确。
2.样品可在-20℃保存一个月检测胞内蛋白上机前细胞处理流程1.收集实验处理好的细胞，用PBS洗2次，2%多聚甲醛固定15min。
2.离心弃掉多聚甲醛，再用70%的冰乙醇固定过夜（4℃）。
3.离心弃掉乙醇，PBS洗一遍，加破膜剂0.5%TritonX-100 50ul/106个细胞15min。
4.直接在0.5%TritonX-100中加一抗室温孵育30min，离心，用PBS洗一次，加荧光标记二抗（需进口二抗,国内的效价比较低效果不好），总体系为100ul，总体系中应含0.25%（体积分数）的TritonX-100，室温孵育30min。
5.也可以直接加FITC直标的一抗。
6.离心，用PBS洗一次，用2%的多聚甲醛固定，4℃存放待测。
备注：1. 市面上的多聚甲醛多为4%的，可用PBS稀释。
如果用两步标记，应做不加一抗，只加二抗的对照管2. 未染色的新鲜标本贮存方法如下：10%二甲基亚砜，90%小牛血清，5×106～1×107细胞在-70℃过夜，然后置液氮中可长期保存。
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流式检测细胞周期与凋亡样品处理流程
1.胰蛋白酶消化法收集细胞，做成单细胞悬液
2.1000r/min离心5min，收集沉淀。
3.沉淀用PBS洗2次，1000r/min离心5min，收集沉淀。
4.细胞沉淀用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬，4℃过夜。
即可送检。
备注：1.每个细胞样品细胞量需达到106（细胞沉淀要打散，避免细胞聚集），细胞量少可能测不出结果，或结果不太准确。
2.样品可在-20℃保存一个月
流式检测细胞DNA倍体样品处理流程
1.胰蛋白酶消化法收集细胞，做成单细胞悬液
2.1000r/min离心5min，收集沉淀。
3. 沉淀用PBS洗2次，加入相应种属的淋巴细胞或鸡红细胞做为内参，内参与
预检测细胞的比例为1：3
4. 1000r/min离心5min，收集沉淀。
5. 细胞沉淀用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬，4℃过夜。
即可送检。
备注：1.每个细胞样品细胞量需达到106（细胞沉淀要打散，避免细胞聚集），细胞量少可能测不出结果，或结果不太准确。
2.样品可在-20℃保存一个月
检测胞内蛋白上机前细胞处理流程
1.收集实验处理好的细胞，用PBS洗2次，2%多聚甲醛固定15min。
2.离心弃掉多聚甲醛，再用70%的冰乙醇固定过夜（4℃）。
3.离心弃掉乙醇，PBS洗一遍，加破膜剂0.5%TritonX-100 50ul/106个细胞
15min。
4.直接在0.5%TritonX-100中加一抗室温孵育30min，离心，用PBS洗一次，
加荧光标记二抗（需进口二抗,国内的效价比较低效果不好），总体系为100ul，总体系中应含0.25%（体积分数）的TritonX-100，室温孵育30min。
5.也可以直接加FITC直标的一抗。
6.离心，用PBS洗一次，用2%的多聚甲醛固定，4℃存放待测。
备注：1. 市面上的多聚甲醛多为4%的，可用PBS稀释。
如果用两步标记，应做不加一抗，只加二抗的对照管
2. 未染色的新鲜标本贮存方法如下：10%二甲基亚砜，90%小牛血清，5
×106～1×107细胞在-70℃过夜，然后置液氮中可长期保存。
3.免疫染色未经固定的标本在4℃可保存48h。
若需存放时间较长、或标本
具有传染性，应该用固定剂固定。
常用的固定剂配方是：的多聚甲醛和
PBS或0.8%的生理盐水配成p H7.2的固定液；固定方法是：将经免疫
荧光染色的细胞离心沉淀，再加入固定液混匀，放在4℃温度保存。
一
般来说，经固定处理的标本保存1周至1个月，多数样品的阳性细胞群
体比例及荧光强度增色能保持在正常范围之内。
4.每个细胞样品细胞量需达到106，细胞量少可能测不出结果，或结果不
太准确
检测细胞转染率上机前细胞处理流程
1.用胰蛋白酶消化法收集转染后的细胞，用PBS洗2次。
2.直接用2%多聚甲醛固定，4℃存放，待测。
备注：每个细胞样品细胞量需达到106，细胞量少可能测不出结果，或结果不太准确。