第十二章 植物组织培养室的构建及培养基、植物材料消毒液
植物组织培养技术1-任务一 植物组织培养实验室的构建
任务一、植物组织培养实验室的构建
主要内容
任务一、植物组织培养实验室的构建 任务二、培养基及其配制 任务三、植物组织培养快繁 任务四、植物脱毒技术
任务五、常见园林植物的脱毒与快速繁殖
《植物组织培养技术》教学课件
任务一 植物组织培养实验室（车间）的构建
子任务一 实验室的设计与要求 子任务二 主要仪器设备和器皿用具
《植物组织培养技术》教学课件
子任务一 实验室的设计与要求
❖ 5、辅助实验室 ❖ (2)生化分析实验室 ❖ 以培养细胞产物为主要目的实验室，应建立相应的分析化验实验室，随时
对培养物成分进行取样检查。以大型次生代谢物生产为主要目的组织培养， 还需要有效分离实验室。
《植物组织培养技术》教学课件
《植物组织培养技术》教学课件
和培养物的转移； ❖ 组织培养的核心工作在此完成。 ❖ 要求：干爽安静、清洁明亮，宜小不宜大。 ❖ 设备：无菌操作室安装有紫外灯和空调，工作台和搁架，还有超净工作台
和整套灭菌接种仪器、药品等。
一般新建实验室的无菌室在使用之前应进行灭菌处 理，处理方法是甲醛和高锰酸钾熏蒸，并需定期灭 菌处理，还可用紫外线照射1-2h/周，或每次使用前 照射10-30min。
《植物组织培养技术》教学课件
子任务一 实验室的设计与要求
❖ （三）基本组成
《植物组织培养技术》教学课件
《植物组织培养技术》教学课件
《植物组织培养技术》教学课件
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《植物组织培养技术》教学课件
任务一 植物组织培养实验室（车间）的构建
《植物组织培养技术》教学课件
1植物组织培养实验室的构建
1植物组织培养实验室的构建引言：植物组织培养实验室是一个能够提供最优化环境以促进植物生长和繁殖的重要设施。
它是一个多功能的实验室，包含各种设备和材料，可用于植物无菌培养、植物细胞和组织培养、诱导和快速繁殖、遗传转化、基因工程等研究。
本文将详细介绍植物组织培养实验室构建所需的关键要素和步骤。
一、基础设施的建设：1.实验室环境：植物组织培养实验室应建在相对封闭、无尘、无菌的环境中，以确保无菌培养的成功。
2.实验室空间：实验室应有足够的空间容纳各种植物培养设备和工作台，同时设有储藏室存放培养基和试剂等物品。
3.空气处理系统：安装空气净化系统，通过合适的过滤器去除空气中的微生物和颗粒，保持实验室的无菌环境。
4.温度和湿度控制：安装温度和湿度控制设备，保持恒定的温湿度条件有利于植物生长和繁殖。
通常，实验室温度控制在20-25°C，湿度控制在60-70%之间。
二、常用设备及仪器的配置：1.生物安全柜：生物安全柜是进行无菌操作和暴露于植物组织培养物的标准操作。
实验室需要配置一台II级生物安全柜，以确保实验者和培养物的安全。
2.恒温培养箱：用于提供恒定的温度和湿度条件。
可根据需要配置多台，同时实验最佳温度选择可依研究对象的特殊要求进行调整。
3.高效洁净工作台：用于进行植物材料的取样和处理，确保操作时的无菌性。
根据需要可配置多台。
4.无菌操作台：用于进行植物组织培养物的分离和培养，保持培养物的无菌状态。
5.显微镜：用于观测植物细胞组织的结构和形态，进行植物培养过程的监测和操作。
6.高速离心机：用于沉淀植物细胞和组织，在分离和培养过程中常常需要进行细胞分离和培养基的制备。
7.培养箱：用于保存培养基和试剂等物品，保持其干燥和无菌状态。
三、试剂和培养基的准备：1.培养基种类：根据研究目的和需要，准备不同种类的培养基，包括无菌试管培养基、无菌培养碟、液体培养基等，以适应不同组织培养和繁殖的需求。
2.培养基配方：根据研究需求和组织培养的目的，准备不同种类的培养基配方，包括基本培养基、选择培养基、植物生长调节剂的添加等。
第十二章植物组织培养室的构建及培养基植物材料消毒液
4、储存室（区）
•存放配制后的培养基 •或未用完的培养基
第十二章植物组织培养室的构建及培 养基植物材料消毒液
5、灭菌室
即消毒室，是培养基、玻璃器皿、塑料 器皿和其他物品消毒灭菌的地方
第十二章植物组织培养室的构建及培 养基植物材料消毒液
6、操作室
思考题 1、一个正规的组织培养实验室应具备哪些房间？ 2、组织培养常用的设备有哪些？各有何用途？ 3、组织培养的环境条件有哪些？
第十二章植物组织培养室的构建及培 养基植物材料消毒液
第十二章植物组织培养室的构建及培 养基植物材料消毒液
培养基的成分 培养基的制备 培养基的选择
第十二章植物组织培养室的构建及培 养基植物材料消毒液
4、超净工作台 •陈列于操作室（接种室）中 •类型：垂直式和水平式 •作用：无菌操作
第十二章植物组织培养室的构建及培 养基植物材料消毒液
5、pH计 •陈列于制备室中 •作用：测定培养基及酶液的pH值
第十二章植物组织培养室的构建及培 养基植物材料消毒液
6、显微镜 •陈列于观察室中 •类型：
倒置显微镜 普通显微镜 荧光显微镜 解剖显微镜
培养基的制备是组培的核心工作，外植体 之所以能沿着不同的组培途径生长、分化、成 苗都取决于选用不同成分的培养基来调节控制 的。
第十二章植物组织培养室的构建及培 养基植物材料消毒液
培养基的成分
其它添加物
无机营养成分
培养基组成
有机营养成分
固化剂
植物生长调节剂
无机营养成分+有机营养成分=第基十二本章植培物组织养培养基室的构建及培 养基植物材料消毒液
第十二章植物组织培养室的构建及培 养基植物材料消毒液
植物组织培养实验室的构建
药品柜
冰箱
天
平
磁 力 搅 拌 器
恒温水浴锅
2、洗涤室（区）
功能：完成各种器具的洗涤、干 燥、保存、材料预处理，同时兼 顾试管苗出瓶等。 要求：需安装一个较大的水池， 水泥制作，白瓷砖砌内外表面， 池底放一张橡胶垫，以减少玻璃 器皿的破损。下水道应畅通，以 免妨碍工作。 设备：玻璃器皿、塑料器皿、周 转箱、洗涤刷、洗瓶机、洗涤剂、 晾干台等。
3、培养基制作与灭菌室（区）
要求：20 m2左右，明亮，通风。配置大型 工作台1张。 功能：培养基配制、分装、 高压灭菌，无 菌水的制备以及其它物品的高压灭菌等。 设备：高压灭菌器、电炉、不锈钢锅、培 养基分注器、物品橱1-3个，用以放置线绳、 封口材料等。此外还应有烘箱、天平、酸度 计、盆与桶等。
洗 涤 室
接 种 室
培 养 室
灭 菌 室
驯 化 室
植物组织培养实验室 的组成
分体式-研究性质实验室，分开的若干房间将 准备室分解为药品贮藏室、培养基配制与洗涤室 和灭菌室等，功能明确，便于管理，但不适于大 规模生产。
通间式-规模化实验室，一般设计成大的通间 ，试验操作的各个环节在同一房间内按程序完成 。便于程序化操作与管理，减少各环节间的衔接 时间，提高工作效率。还便于培养基配制、分装 和灭菌的自动化操作程序设计，减少规模化生产 的人工劳动，更便于无菌条件的控制和标准化操 作体系的建立。
9、天平
植物组织培养实验室需要不同精度的天平。 感量0.001g的天平（分析天平）和感量0.0001g 的天平（电子天平）用于称量微量元素和一些 较高精确度的实验用品。 感量0.01g和0.1g的天平，用于大量元素母液配 制和一些用量较大的药品的称量。 陈列于 中
植物组织培养培养基的配制与灭菌
★★★★★实验二植物组织培养培养基的配制与灭菌一、实验目的1.培养基能够提供植物生长、繁殖所必须的各类营养物质，以及生长因子，是开展植物组织培养研究的基础和前提。
植物的种类不同，研究的目的不同，所需要的培养基的种类也各不相同。
2.学习并掌握植物组织常用培养基的组成、配制与灭菌方法。
二、实验用具和药品1. 实验用具：电子天平（1/10、1/1000）、烧杯（100ml、1000ml）、量筒（50ml、100ml）三角瓶或培养瓶、移液管、药匙、玻棒、pH试纸、吸耳球、牛皮纸、皮筋等。
2. 药品：蔗糖、琼脂、0.1mol/L NaOH、 0.1mol/L HCl、各种培养基母液、激素母液三、实验内容与步骤（一）分组配制培养基。
各类培养基组成如下：1. 水琼培养基。
2. MS0培养基。
3. 1/2MS培养基。
4. MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L。
5. MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L。
6. MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 2.0mg/L。
7. MS+KT 0.5mg/L+6-BA0.5mg/L。
8. MS+NAA 1.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L。
（二）湿热灭菌培养基1.称取规定数量的琼脂，加水到培养基最终容积的3/4，水浴或电炉使之加热溶解。
2.根据配方要求，把按顺序量取的各种母液以及称取的蔗糖，都加入煮好的琼脂中，然后加水定容。
3.用0.1mol/L的NaOH或者HCl调pH。
4.分装培养基，包好或盖好，标明编号。
5.121℃(103kPa)灭菌15-20min。
（三）作好植物组织培养的各项准备工作1. 制备无菌水：121℃(103kPa)灭菌40min 。
2. 配制 0.1%HgCl2溶液（放置棕色瓶中）。
3. 准备接种用培养皿、金属器械等用具。
四、注意事项1. 实验中所用的各种容器一定要洗净、烘干。
2. 用电子天平称量药品时，一定要用称量纸，对于有腐蚀性的药品，应将其放置在小烧杯中称量。
植物组织培养实验室构建
植物组织培养实验室构建概述植物组织培养实验室是进行植物细胞培养、愈伤组织培养、植物遗传转化等实验的重要场所。
建立一个高效的植物组织培养实验室对于开展植物生物技术研究至关重要。
本文将介绍植物组织培养实验室的构建步骤及相关设备和操作流程。
步骤1. 确定实验室位置植物组织培养实验室应设置在通风良好、光线充足的环境中，并且远离其他实验室以避免交叉污染。
实验室的位置选择也应考虑到未来扩建或改造的可能性。
2. 设计实验室布局实验室布局应合理，设备摆放应符合操作流程，同时要考虑实验室的通风、安全和卫生条件。
实验台、培养室、设备间等区域的划分要清晰明了。
3. 购置必要设备植物组织培养实验室需要配备必要的设备，包括无菌工作台、培养箱、显微镜、离心机、恒温培养箱等。
设备的选择应考虑实验需求和预算。
4. 保障实验室安全实验室安全是第一位的，必须确保实验室的电路、水源等设备安全可靠，设备操作人员应接受相关安全培训，并且定期进行检查和维护。
5. 制定实验操作规程建立完善的实验操作规程是保证实验结果准确可靠的关键。
制定实验操作规程时应考虑到每个操作步骤的细节，包括消毒步骤、培养条件控制等。
6. 建立实验室管理制度建立实验室管理制度有利于实验室的日常管理和运行。
管理制度包括实验室卫生、设备维护、实验记录等方面，确保实验室的正常运转。
操作流程1.准备工作–检查实验室设备是否正常运转。
–准备培养基、试剂和实验器具。
2.植物组织采集–从健康植物中采集需要的组织。
–进行消毒处理。
3.组织培养–将组织放入无菌条件下的培养基中进行培养。
–控制培养条件，如温度、光照等。
4.植物遗传转化–遗传工程操作，将外源基因导入植物组织中。
–过筛、筛选转化株。
5.结果分析–观察转化效果，记录实验数据。
–分析实验结果，撰写实验报告。
结论建立一个高效的植物组织培养实验室需要全面考虑实验室的位置选择、布局设计、设备购置等方面。
制定操作规程、建立管理制度是保证实验室运行的基础。
1 植物组织培养实验室的构建
医用手提式灭菌锅
不锈钢立式灭菌锅
3、超净工作台
陈列于操作室（接种室）内
类型：垂直式和水平式
作用：无菌操作
（二）药品贮存和配制仪器设备
1、冰箱
作用：低温保存材料，存 放药品、培养基母液、激 素、酶制剂。
2、天平
陈列于制备室中
作用：称取大量元素、微 量元素、酶制剂
3、酸度计
注意！ 实际应用中要通过试验筛选。
基本培养基对西洋杜鹃增殖的影响
三、培养基的配制
（一）培养基母液的配制
1.基本培养基母液 类型：四液式（钙盐最后加入）、三液式、 五液式（钙盐和铁盐单独配制）。 成分：大量元素、微量元素、铁盐、 有机成 分。 贮藏：2~4冰箱内贮藏。 倍数：10X、100X。 标记：名称、配制倍数、日期等。
取容器（搪瓷缸），加入1/3~2/3左右的蒸馏水，加热至沸腾； 称取定量的琼脂和蔗糖加入上述煮沸的水中并不断搅拌， 直到完全溶解。 用移液管量取所需量的母液加入一只干净的烧杯中， 待琼脂完全溶解后加入 用NaOH或稀HCl调节pH值 高压灭菌，（121℃，15 min~20min） 冷却，取出，备用
植物组织培养材料移到田间前，通常 先移到温室进行练苗，待生根成活后， 再移到大田。
二、仪器和设备
（一）无菌操作设备 １、烘箱：
作用：干燥洗后的器皿
高温干热灭菌 测定培养物的干重时烘干培 养材料。
2、灭菌锅
类型：普通医用消毒锅 大的高压灭菌锅
作用：培养基、水和各种用具的消毒
（四）培养设备 1.空调
作用：控制培养温度
2.加湿器和去湿机
控制培养室内湿度状况
3.定时器
育种课件第12章 植物细胞工程与育种
植物细胞工程（plant cell engineering）是以 植物组织和细胞培养技术为基础发展起来的一门学科。 它以细胞为基本单位，在体外（in vitro）条件下进行 培养、繁殖或人为地使细胞某些生物学特性按人们的意 愿生产某种物质的过程。
Control of in vitro culture
（4）花蕾和花药的预处理 对于有些物种，培养前对 花药和花蕾进行预处理，能显著提高培养效果。
Vegetative Generative
3 to 5°C
Microspore
Similar nuclei
3 to 5°C
Tobacco
10 5
5°C for 72 h Control
0 0 3 7 12 Days in Culture
2.7 单倍体细胞培养与植物育种 单倍体是高度不育的，需要进行加倍处
理才能应用。秋水仙素是常用的染色体加倍 药剂，可以用1%的秋水仙素对正处于对数 生长期的悬浮细胞进行处理，一般24h左右。 也可在固体培养基中加适当浓度的秋水仙素。
A品种 × B品种
↓
F1杂交种 ↓
小孢子培养或花药培养
单倍体培养
- less competition among microspores - no diploid anther walls - greater potential haploid plant production
Anther/Microspore Culture
2.2 单倍体育种的优点
（1）后代的快速纯合 在异花授粉作物中， 可用单倍体产生加倍单倍体（DH系），从中 筛选纯合自交系用于杂交制种。 （2）提高选择效率 如某一性状受一对基因 控制，F1采用花药或花粉培养，产生的后代 中AA个体占1/2，比常规杂交育种提高一倍。
植物组织培养实验室设计方案
植物组织培养实验室设计方案一、引言植物组织培养实验室是进行植物细胞、组织和器官培养的重要场所，为研究植物生长、发育和遗传转化提供了必要的条件。
本文将详细介绍植物组织培养实验室的设计方案，包括实验室的布局、设备选型、环境控制和安全管理等方面。
二、实验室布局1. 实验室总体布局植物组织培养实验室的总体布局应根据实验需求合理规划。
一般来说，实验室应包括培养室、净化室、设备室、储物室和办公区等功能区域。
各功能区域之间应设置合理的通道，以便实验人员的工作流程。
2. 培养室布局培养室是进行植物组织培养的核心区域，应具备良好的环境控制和卫生条件。
培养室内应设置培养箱、生物安全柜、显微镜等实验设备，并配备培养基制备区、洗涤区和工作台等工作区域。
3. 净化室布局净化室是为了保证植物组织培养过程中的无菌条件而设置的区域。
净化室内应设置洁净工作台、超净台、紫外线灯等设备，并配备无菌操作区、洗手间和净化材料存放区等功能区域。
4. 设备室和储物室布局设备室和储物室是为了存放实验室所需的设备和耗材而设置的区域。
设备室内应设置不同类型的实验设备，如离心机、PCR仪、冰箱等，并配备设备操作区和设备维护区等功能区域。
储物室内应设置不同类型的储物柜和货架，以便存放实验所需的试剂、培养基和其他耗材。
5. 办公区布局办公区是为实验室工作人员提供办公和休息场所的区域。
办公区应设置工作台、电脑、文件柜等设备，并配备会议区、休息区和卫生间等功能区域。
三、设备选型1. 培养箱培养箱是植物组织培养实验室中必备的设备之一，用于提供适宜的温度、湿度和光照条件。
在选购培养箱时，应考虑温度范围、湿度控制精度和光照强度等因素。
2. 生物安全柜生物安全柜是用于保护实验人员和环境，防止实验样品的交叉污染的设备。
在选购生物安全柜时，应考虑安全级别、过滤效果和操作便捷性等因素。
3. 显微镜显微镜是进行植物组织培养过程中观察和操作的重要工具。
在选购显微镜时，应考虑放大倍数、分辨率和光源稳定性等因素。
植物组织培养室及培养用具的消毒与灭菌
植物组织培养室及培养用具的消毒与灭菌一、目的要求1、通过实验，培养学生良好的卫生观念，确立组织培养的无菌意识。
2、掌握组织培养室的消毒及灭菌方法。
3、掌握培养用具的干热灭菌的一般操作技术。
二、仪器与用具1、用具：喷雾器、工作服、口罩、手套等。
2、药品：2%新洁尔灭，高锰酸钾，甲醛，70%酒精。
三、方法步骤（一）植物组织培养室的灭菌1、地面、墙壁和工作台的灭菌：用2%新洁尔灭喷雾。
（1）配方：取新洁尔灭原液20ml，加水980ml，配成2%新洁尔灭溶液。
（2）方法：将配好的2%新洁尔灭溶液倒入喷雾器内，进行均匀喷雾。
（3）注意事项：①墙壁、角落、地面喷雾要均匀，不要遗漏；②注意安全，在喷房顶时，要特别小心，防止药液雾滴掉入眼睛。
2、无菌室和培养室的灭菌：用甲醛和高锰酸钾熏蒸，1年中熏蒸1-2次。
（1）配方：每立方米空间用甲醛10ml加高锰酸钾5g的配比液熏蒸。
（2）方法：首先房子要密封。
然后在房子中间放一口缸或大烧杯，将称好的高锰酸钾放入缸内，再把已称量的甲醛溶液慢慢倒入缸内，完毕，人迅速离开，并关上门，密封3天。
（3）注意事项：①操作前要戴好口罩及手套；②倒入甲醛时要小心，因为甲醛遇到高锰酸钾会迅速沸腾，并产生大量烟雾。
操作时人要迅速避开烟雾；③3天后，打开房间，搬走费液缸；一周后，方可进入操作。
3、在已经熏蒸过的房间内，用70%酒精纱布擦洗培养架、工作台。
4、用紫外灯照射20—30min。
5、使用前，再用70%酒精喷雾，使空间灰尘落下。
（二）培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）（1）洗涤：把组织培养基用的培养皿、三角瓶、试管等玻璃器皿进行彻底清洗。
自然晾干或烘箱干燥。
（2）包扎：用牛皮纸、报纸、纱布或锡箔纸把玻璃器皿和金属器械分别包扎好。
（3）装水：在高压灭菌锅内装入一定量的水（水要淹没电热丝）。
（切忌干烧！）（4）装物品：在灭菌锅内放入含培养基的培养瓶或三角瓶、装蒸馏水的玻璃瓶，以及包扎好的玻璃器皿和金属器械等。
植物组织培养实验室构建定案
实验室设计
在进行植物组织培养工作之前，首先应对工 作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的 了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或新 建、改建实验室。 实验室的大小取决于工作的目的和规模。我 们要建的是一个80平方米的研究型实验室
缓冲室
是进行无菌操作室前在此更衣换鞋的地方， 以减少进出时带入接种室杂菌。面积为3平方 米. 主要设备器具是，紫外灯（用以照射灭菌）、 鞋架、挂钩、医用白大褂。
接种室
主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的 转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及 一切需要进行无菌操作的技术程序。 要求干爽安静，清洁明亮。在适当位置吊装 紫外灯，用以照射灭菌。再安装一个空调， 使室温可控，这样可使门窗紧闭，减少与外 界空气对流。特别要考虑无菌条件
实验室设计原则
1.保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。 2.总体设计效果应做到工作方便、使用安全、 减少污染、节省能源、整齐美观。
组培实验室组成
储药室 准备室 缓冲室 接种室 培养室
储药室
用以储存药品的地方，面积为6平方米。 主要设备有；药品柜、冰柜（贮存母液、各 种易变质、易分解的化学药品以及植物材料)
酸 度 计
显微镜
显微镜
手提式高压灭菌锅
大型ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ作台
摇床
培养箱
接种器具消毒器
电蒸馏水器
设计图纸
实验室设计
1. 在设计组织培养实验室的各个房间时，应 按组织培养工艺流程来设计（培养基的配置、 灭菌、接种、培养），避免某些环节倒排， 引起日后工作混乱。 2.植物组织培养是在严格无菌的条件下进行 的。要做到无菌的条件，需要一定的设备、 器材和用具，同时还需要人工控制温度、光 照、湿度等培养条件。
植物组织培养技术的使用方法详解
植物组织培养技术的使用方法详解植物组织培养技术是一种重要的生物技术方法，通过在无菌条件下培养植物的组织和细胞，可以实现植物的繁殖、育种、遗传改良等多种目的。
本文将详细介绍植物组织培养技术的使用方法，涵盖了培养基的配制、组织的选取与处理、培养条件的控制等多个方面。
一、培养基的配制培养基是植物组织培养的基础，它提供了植物所需的养分和生长因子。
培养基的配制需要按照特定的配方和比例进行，主要包括基础培养基和添加剂两部分。
基础培养基是由无机盐、有机物、糖类、植物激素等组成的，可以根据实际需要选择配方。
添加剂包括胶凝剂、抗生素等，在培养组织时起到固定和抗菌的作用。
在配制培养基时需要注意严格的无菌操作，避免污染。
二、组织的选取与处理在组织培养前，需要选择适宜的组织作为材料。
一般来说，幼嫩的组织对培养成功率较高，如茎尖、嫩叶等。
同时，组织的起源也会影响培养结果，可以根据实际需要选择不同起源的组织。
选取好组织后，需要进行表面消毒处理，以杀灭表面的微生物。
消毒方法可以选择酒精灼烧、漂白粉浸泡等，具体时间和浓度需要根据材料的特性进行调整。
三、培养条件的控制培养条件的控制对植物组织培养的成功与否至关重要。
首先是温度的控制，不同植物材料对温度的要求不同，一般在20~25摄氏度之间较为适宜。
其次是光照的控制，大部分植物对光照的要求较高，可以选择光照培养箱或人工光源等方式提供合适的光照条件。
此外，还需要注意气体环境的控制，培养箱内的氧气和二氧化碳浓度需要适当调节，以促进植物的生长。
四、维持培养物的增殖与分化植物组织培养的最终目的是获得大量健康的植株。
为了维持培养物的增殖与分化，需要定期进行传代。
传代是将培养物转移到新的培养基上，以避免细胞老化和培养基中养分的耗尽。
在传代中，需要将组织分离并移至新培养基上，此时需要注意操作的轻柔和无菌性。
同时，还可以通过调整培养基的配方和生长调节剂的浓度，来促进植株生长和分化。
五、应用领域与前景展望植物组织培养技术在农业、园艺、药学等领域具有广泛的应用，可以用于新品种的选育、种子的繁殖、药用植物的生产等。
植物组织培养实验室的构建和操作技术
各种灭菌方法及其使用范围
干热灭菌 湿热灭菌 熏蒸灭菌 过滤灭菌 药剂灭菌 烧灼灭菌 辐射灭菌
玻璃器皿、器械 培养基、蒸馏水、器械、棉塞等 接种室、培养室 液体培养基、蒸馏水 培养材料 器械、瓶口、棉塞、包头纸 接种室。培养间
1）干热灭菌
适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。操作方 法：150℃ 、40min或120℃ 、120min， 如果发现芽孢杆菌，160℃ 、90～120min
对有材料的培养室，也可以采用乙二醇加热熏蒸
（三）无菌操作技术
污染来源
人为因素（工作人员本身）：工作服、帽、口罩、酒精擦手。
物品因素
器 培养皿：洗→热压
皿 玻璃器皿：洗→干热（干热箱）或晾干
和 接种用具：用CCL4布擦→湿布擦→
2）湿热灭菌
适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水 、棉塞、纸等。121℃ 维持20～30min 注意点：加足水、排尽气、气压降到0时， 才能开盖
3）过滤灭菌
培养基的灭菌一般用高压高温处理，但如果培 养基中某些成分遇到高温分解（如某些生长调节剂 GA3、玉米素等），就需要过滤灭菌。另外酶、 血清等也需要过滤灭菌
生化分析实验室
基本实验室布局平面图
搁 水槽 架
搁 4.0 架 m
电 炉
门
实 验 台
准备室
4.5m
冰箱 无菌台
药 品 及 无菌台 仪
器 无菌室
柜
缓冲室
搁
拉 窗
培养架
培养架
架 培养室
培
培
养
养
架
架
3.0m
3.5m
A Glimpse of Plant Tissue Culture
第一章 组培的基本条件及一般技术
植物组织培养培养基的配制步骤
植物组织培养培养基的配制步骤嘿，咱今儿个就来讲讲植物组织培养培养基的配制步骤，这可真是个有趣又神奇的事儿呢！你想想看，那些小小的植物组织，就像是一个个小生命等待着被唤醒和滋养。
要配制出适合它们生长的培养基，就像是给它们打造一个温馨舒适的家。
首先，咱得准备好各种材料。
就好比建房子得有砖头、水泥一样，培养基也需要各种“建筑材料”。
什么大量元素啦、微量元素啦、有机成分啦等等。
这些东西就像是房子的根基和框架，可不能马虎。
然后呢，把这些材料按照一定的比例混合起来。
这就像是做菜，调料放多了或少了味道可就不对啦！得精确地称量，小心翼翼地搅拌均匀，让它们完美融合。
接下来，调节酸碱度也是很关键的一步。
植物们也有自己喜欢的“居住环境”呢，太酸太碱可都不行。
就像咱人一样，喜欢不冷不热、舒舒服服的环境。
在这个过程中，可不能粗心大意哦！要是弄错了一点，那可能就会影响到植物组织的生长发育啦。
你说这像不像照顾一个小婴儿，得处处精心呵护呀。
再然后，把配好的培养基进行灭菌处理。
这就好比给家里来个彻底的大扫除，把那些有害的细菌、病毒啥的都消灭掉，给植物们一个干净、安全的生长空间。
等一切都准备好了，就可以把植物组织放进去啦。
看着它们在培养基里一点点生长、分化，那种感觉真的是太棒啦！就好像看着自己精心培育的花朵慢慢绽放一样。
哎呀呀，植物组织培养培养基的配制步骤虽然不复杂，但每一步都很重要呢！要是有一步没做好，可能就会前功尽弃呀。
所以啊，咱可得认真对待，就像对待自己最宝贝的东西一样。
总之呢，植物组织培养培养基的配制就是这么一回事儿，有趣又充满挑战。
只要咱用心去做，就一定能让那些小植物们茁壮成长，给我们带来惊喜呢！你说是不是呀？。
植物组织培养室及培养用具的消毒与灭菌
植物组织培养室及培养用具的消毒与灭菌一、目的要求1、通过实验，培养学生良好的卫生观念，确立组织培养的无菌意识。
2、掌握组织培养室的消毒及灭菌方法。
3、掌握培养用具的干热灭菌的一般操作技术。
二、仪器与用具1、用具：喷雾器、工作服、口罩、手套等。
2、药品：2%新洁尔灭，高锰酸钾，甲醛，70%酒精。
三、方法步骤（一）植物组织培养室的灭菌1、地面、墙壁和工作台的灭菌：用2%新洁尔灭喷雾。
（1）配方：取新洁尔灭原液20ml，加水980ml，配成2%新洁尔灭溶液。
（2）方法：将配好的2%新洁尔灭溶液倒入喷雾器内，进行均匀喷雾。
（3）注意事项：①墙壁、角落、地面喷雾要均匀，不要遗漏；②注意安全，在喷房顶时，要特别小心，防止药液雾滴掉入眼睛。
2、无菌室和培养室的灭菌：用甲醛和高锰酸钾熏蒸，1年中熏蒸1-2次。
（1）配方：每立方米空间用甲醛10ml加高锰酸钾5g的配比液熏蒸。
（2）方法：首先房子要密封。
然后在房子中间放一口缸或大烧杯，将称好的高锰酸钾放入缸内，再把已称量的甲醛溶液慢慢倒入缸内，完毕，人迅速离开，并关上门，密封3天。
（3）注意事项：①操作前要戴好口罩及手套；②倒入甲醛时要小心，因为甲醛遇到高锰酸钾会迅速沸腾，并产生大量烟雾。
操作时人要迅速避开烟雾；③3天后，打开房间，搬走费液缸；一周后，方可进入操作。
3、在已经熏蒸过的房间内，用70%酒精纱布擦洗培养架、工作台。
4、用紫外灯照射20—30min。
5、使用前，再用70%酒精喷雾，使空间灰尘落下。
（二）培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）（1）洗涤：把组织培养基用的培养皿、三角瓶、试管等玻璃器皿进行彻底清洗。
自然晾干或烘箱干燥。
（2）包扎：用牛皮纸、报纸、纱布或锡箔纸把玻璃器皿和金属器械分别包扎好。
（3）装水：在高压灭菌锅内装入一定量的水（水要淹没电热丝）。
（切忌干烧！）（4）装物品：在灭菌锅内放入含培养基的培养瓶或三角瓶、装蒸馏水的玻璃瓶，以及包扎好的玻璃器皿和金属器械等。
植物组培培养基及其配制
植物组培培养基及其配制培养基好比土壤，是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。
因此，在组织培养基的各个环节中，应着重掌握培养基，了解它的组成和配制方法。
一、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。
1.无机营养物无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素中，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。
磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。
钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。
而钙、钠、镁的需要则较少。
培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。
微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。
培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。
2.碳源培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。
因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。
培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。
蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起重要作用。
3.维生素在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。
培养基中的维生素属于B 族维生素，其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。
4.有机附加物包括人工合成或天然的有机附加物。
最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。
另外，琼脂也是最常用的有机附加物，它主要是作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，以利于各种外植体的培养。
5.生长调节物质常用的生长调节物质大致包括以下三类：(1)植物生长素类。
如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。
(2)细胞分裂素。
如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。
(3)赤霉素。
组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸(GA3)。
二、常用培养基配方及其特点1.常用培养基配方组织培养是否成功，在很大程度上取决于对培养基的选择。
植物组织培养实验室的构建
植物组织培养实验室的构建
1.实验室的布局设计
2.无菌植物转运间
无菌植物转运间是植物组织培养实验室的重要区域，用于处理和转运
无菌组织。
这个区域的设计要求是可以进行无菌操作，同时能够提供充足
的照明和通风条件。
3.培养室
培养室是进行植物细胞、组织和器官培养的核心区域。
这个区域应具
备无菌条件，包括空气过滤装置、紫外线照射灯等设备，确保培养过程中
的无菌环境。
4.标本室
标本室是用于存放植物标本和培养品种的区域。
这个区域应具备恒温、恒湿的环境条件，以保证标本的保存和培养品种的安全。
5.显微镜室
显微镜室是用于观察培养过程中的细胞和组织的区域。
这个区域应具
备适当的照明条件和显微镜设备，以便进行观察和分析。
6.药品存储室
药品存储室是用于存放培养所需的培养基、激素和药品等的区域。
这
个区域应具备适宜的温度和湿度，以保证药品的质量和有效性。
7.设备和材料
8.实验人员培训和安全措施
总结
植物组织培养实验室的构建涉及到实验室的布局设计、设备和材料的选购以及实验人员的培训等多个方面。
只有在良好的实验室环境下进行研究，才能保证实验结果的准确性和可靠性。
因此，植物组织培养实验室的构建应充分考虑实验需求和安全要求，确保实验过程的顺利开展。
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乙烯（Eth） 脱落酸（ABA） 油菜素内酯（BR）
（1）生长素(AUX)：
作用：顶端分泌，诱导细胞分裂，促进生根。 用量：mg/L
种类：
吲哚乙酸：IAA（indo acetic acid） 萘乙酸 ：NAA（naphthalene acetic acid）
吲哚丁酸：IBA（indolebutyri acid） 2,4-二氯苯氧乙酸：2,4-D (2,4-dichlorophenoxybutyric acid)
第二章
植物组织培养实验室的构建 及植物组织培养基
植物组织培养实验室的构建
主要内容： 一、植物组织培养实验室设计 二、仪器和设备
三、玻璃器皿和用具
四、培养条件
一、实验室设计
标准组织培养室包括
洗涤室（区）
制备室（区）
灭菌室（区） 储放室（区） 操作室（区） 培养室（区）
观察室（区）
药品室（区）
１、洗涤室（区）
3、植物生长调节物质
在培养基的各成分中，植物激素是植物培养基的 关键物质，它以很微小的量影响着再生植株的形态 建成。 基本培养基 保证培养物的生存和最 低的生理活性 植物激素 定向的诱导外植体的生长分化
国际植物生理协会公布的植物激素包括：
生长素(AUX) 细胞分裂素 ( CTK ) 赤霉素（GA）
Growth medium is optimised for regeneration of plantlets
The explant is completely covered with green shoots, and roots are developing on the lower surface
4、储存室（区）
•存放配制后的培养基 •或未用完的培养基
5、灭菌室
即消毒室，是培养基、玻璃器皿、塑料 器皿和其他物品消毒灭菌的地方
6、操作室
•也称接种室，是开展组织培养研究包括接种、继代、细胞融合等 的场所。主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管 苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程 序。 •接种室宜小不宜大，一般7～8平米，要求地面、天花板及四壁尽 可能密闭光滑，易于清洁和消毒。配置拉动门，以减少开关门时 的空气扰动。
主要有 VBl ( 盐酸硫胺素 ) 、 VB6 ( 盐酸吡哆醇 ) 、
Vpp(烟酸)、Vc（抗坏血酸）、有时还使用VH(生物素)、
VB11(叶酸)、VB12（钴胺素)等。
一般用量为 0.1—1.0mg／L。有时用量较高。VB1 对愈伤 组织的产生和生活力有重要作用， VB6 能促进根的生长， Vpp 与植物代谢和胚的发育有一定关系。 Vc 有防止组织变褐 的作用。
Growth medium is optimised for regeneration of plantlets
The explant is completely covered with green shoots, and roots are developing on the lower surface
肌醇 (myo—inosltol)又叫环己六醇，在糖类的相互转化中起 重要作用。通常可由磷酸葡萄糖转化而成，还可进一步生成 果胶物质，用于构建细胞壁。肌醇与6分子磷酸残基相结合 形成植酸，植酸与钙、镁等阳离子结合成植酸钙镁，植酸
可进一步形成磷脂，参与细胞膜的构建。
使用浓度一般为100 mg/L，适当使用肌醇，能促进愈 伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、 分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。
用法：溶于95%酒精或者NaOH
生长素作用强弱顺序：
2,4-D NAA
IBA IAA 强
弱
2，4-D常用于诱导愈伤组织，IBA和NAA常用于生根
不同营养条件对植物组织培养的影响-AUX
Growth medium is optimised for regeneration of plantlets
The explant is completely covered with green shoots, and roots are developing on the lower surface
No NAA
Poor shoot development and no roots
NAA reduced to 0.1 mg. l-1
1.无机营养成分：
1、无机营养成分
1)大量元素：指浓度大于0.5mmol／L的元素。 （C、H、O、N、P、K、Mg、S和Ca） 氮：由硝酸盐和铵盐提供 铵盐过高会引发玻璃化苗
2) 微量元素：指小于 0.5mmol ／ L 的元素。（ Fe ， Cu， Zn，B， Mo， Mn等）
微量元素的主要作用是作为酶的辅助因子或激活剂参与代谢的调节。 Fe由螯合物的形式提供:Na2.EDTA
天然复合物：其成分比较复杂，大多含氨基酸、
激素、酶等一些复杂化合物。它对细胞和组
织的增殖与分化有明显的促进作用，但对器 所以一般应尽量避免使用。
官的分化作用不明显。它的成分大多不清楚，
• 1)椰乳 是椰子的液体胚乳。 • 2)香蕉 主要在兰花的组织培养中应用，对发育有促进作用。
• 3)马铃薯(potato) 去 • 4)水解酪蛋白 • 5)其他 酵母提取液(YE)(0.01%-0.05%)
不同营养条件对植物组织培养的影响-sucrose
Growth medium is optimised for regeneration of plantlets The explant is completely covered with green shoots, and roots are developing on the lower surface
No BAP
Profuse development of roots and a reduced number of shoots. Undifferentiated callus is developing at the edges of the explant
（2）细胞分裂素(CTK):
作用：根尖分泌，促进细胞分裂, 诱导芽的分化，延缓组
织衰落。
种类： 6-BA(6-苄基腺嘌呤) Kt (kinetin 激动素) Zt (zeatin 玉米素) TDZ（Thidiazuron ） 用法：溶于0.5 MHCl和NaOH
不同营养条件对植物组织培养的影响-CTK
氨基酸(AA)：是很好的有机氮源，可直接被细胞 吸收利用。最常用的是甘氨酸，其 他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、 天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等。 有时应用水解乳蛋白或水解酪蛋白，它们 含有约20种氨基酸的混合物，用量在10000mg/L之间。由于它们营养丰富，极易引起 污染。如在培养中无特别需要，以不用为宜。
Shoots developed on upper surface of explant. No roots or callus. (2MS)
2、有机营养成分
碳源：最常用的是蔗糖，提供碳源；维持培养基渗透压。
葡萄糖和果糖也是较好的碳源，可支持许多组织很好的生长。
麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖在组织培养中也有应用。 蔗糖使用浓度在 2%—3%，常用 3%，即配制一升培养基称取 因蔗糖对胚状体的发育起重要作用。
30g蔗糖，有时可用2.5%，但在胚培养时采用4%-15%的高浓度，
维生素：维生素(vitamin) 这类化合物在植物细胞里主要是以各
种 辅酶 的形式参与多种代谢活动，对生长、分化等有很好的
促进作用。 虽然大多数的植物细胞在培养中都能合成所必需的维生 素，但在数量上，还明显不足，通常需加入一至数种维生素， 以便获得最良好的生长。
No sucrose (0%)
Very few shoots have developed on the explant. No roots and no callus.
Sucrose reduced to 1%
Shoots developed on edges of upper surface, and some root development has occured
7、培养室
•培养室：培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室 的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。 其设计以充分利用空间和节省能源为原则。高度比培养架略高 为宜，周围墙壁要求有绝热防火的性能。
培养室：
植物组织培养材料移到田间前， 先移到驯化室进行炼苗，带生根成活后， 再移到田间苗圃。
无机盐供应不足时，植物会出现缺素症状。
＊当某些营养元素的供应不足时，愈伤组织所表现出 来的症状如下：
氮：某些组织表现出一种花色素苷的颜色；不能形成导管； 氮，钾或磷：细胞过度生长，形成层组织减退； 硫：非常明显的褪绿； 铁：细胞分裂停止； 硼：细胞分裂停滞，细胞伸长；
锰或钼：影响细胞伸长。
不同营养条件对植物组织培养的影响-MS Salts
Sucrose increased to 5%
Shoots have developed over the surface of the explant, along with roots from the lower surface. The result is comparable with the control medium
玻璃器皿和塑料器皿
１、洗 包括用自来水、洗液、洗涤剂
清洗
２、干 包括自然晾干和烘箱干燥
2、药品室
存放常用的化学试剂
无机盐类、有机物、生长调节剂等
3、制备室
完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、配制、 培养基分装等。 主要设备： 药品柜、防尘橱（放置培养容器）、 冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配 制用玻璃仪器. •培养基的配制 •生理生化测定