测序技术验证及质控2015-3-25 刘维薇
测序技术的研究进展_郝甜甜
Animal Husbandry and Feed Science
2014 ， 35 （3 ） ： 78-81
测序技术的研究进展
郝甜甜，李强飞，李国治，陈禹翰，邓卫东 （云南农业大学动物科学技术学院，云南 昆明 650201）
摘要：基因组测序技术是一种分子生物学及其相关学科研究中最常用的技术。 从 20 世纪 70 年代中期第一
代测序技术出现以来，基因组测序技术已取得了重大进展，并改变了生命科学诸多领域的研究面貌。 测序成
本的急剧下降，测序通量呈指数提高，使得测序速度大大提升。DNA 和 RNA 是生命体的 2 个基本遗传物质，
其组成和序列变化创造了形形色色的生命世界。 快速、准确地获取生物体的遗传信息对于生命科学的研究
具有重要意义，测序技术能够真正地反映基因组、遗传信息转录，全面地揭示基因组的复杂性和多样性，在
迄今为止，测序技术已经经历了三代的发展。 经典 的测序技术在 20 世纪 70 年代开始走向成熟， 然后测 出了不少简单的小型生物基因组；1990 年， 人类基因 组计划的提出推动了第二代测序技术的诞生；近年来， 单分子等第三代测序技术也开始兴起。 测序技术的应 用越来越广泛，测序的成本也越来越低。 第一个高等动 物基因组从头测序即人类基因组的花费将近 3 亿美
第一代测序技术参与了许多具有划时代的研究： 1977 年第一个基因组测序完成， 那就是 φX174 噬菌 体基因组；1990 年人类基因组计划在第一代测序技术 的基础上启动；1995 年第一个活的生物— ——流感嗜血 细菌的基因组测序完成；1996 年第一个真核生物— —— 酿酒酵母基因组测序完成；1998 年第一个多细胞真核 生 物— ——线 虫 基 因 组 测 序 完 成 ；2000 年 第 一 个 植 物— ——拟南芥基因组测序完成；2001 年人类基因组序 列 草 图 公 布 ；2004 年 人 类 基 因 组 的 常 染 色 质 序 列 完 成。
ICP-MS法测定盐酸安舒法辛缓释片中7个元素杂质含量
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ICP-MS 法测定盐酸安舒法辛缓释片中 7 个元素杂质含量
许雯雯 1，孙震 2，周凤梅 2，余飞 1，2，车鑫 1，2，刘万卉 1，2*
（1. 烟台大学新型制剂与生物技术药物研究山东省高校协同创新中心，分子药理和药物评价教育部重点实验室（烟台大学）， 烟台 264005；2. 绿叶制药集团有限公司长效和靶向制剂国家重点实验室，烟台 264003）
药品中的元素杂质来源较多，可能在合成中添加 的催化剂残留，也可能由生产设备或容器密闭系统相 互作用产生，还可能存在于药品各个组分中。基于元 素毒性及在药品中出现的可能性，将元素分为 3 类［12］。第 1 类：砷（As）、镉（Cd）、汞（Hg）和铅（Pb），对人 有毒，药品生产中不得使用或限制使用；第 2 类：该 类元素毒性的大小与药物的给药途径有关，根据出现 在药品中概率的大小将该类元素进一步分级为 2A 和 2B 类，2A 类元素包括钴（Co）、镍（Ni）、钒（V），2B 类 元素包括银（Ag）、金（Au）、铱（Ir）、锇（Os）、钯（Pd）、 铂（Pt）、铑（Rh）、钌（Ru）、硒（Se）、铊（Tl）；第 3 类： 该类元素口服毒性低，包括钡（Ba）、铬（Cr）、铜（Cu）、 锂（Li）、钼（Mo）、锑（Sb）、锡（Sn）。由于元素杂质不 能给患者提供任何治疗效果且有害，所以药品中元素 杂质含量应该被控制在可接受的限度。
Determination of 7 kinds of elemental impurities in desvenlafaxine hydrochloride extended-release tablets by ICP-MS
非线性化学指纹图谱技术对药用植物不同部位质量的评价
非线性化学指纹图谱技术对药用植物不同部位质量的评价罗时旋;李守君;滕杨;张艳秋;李莉;武静茹【摘要】目的:利用非线性化学指纹图谱对药用植物不同部位进行质量评价.方法:采用H+-Mn2+-CH3COCH3-BrO3-为振荡体系,以待测药用植物为反应底物,应用电化学工作站记录化学振荡体系中的电位(E)随时间(t)的变化,获得药用植物非线性化学指纹图谱,运用聚类分析和指纹图谱的特征参数诱导时间对药用植物不同部位进行质量评价.结果:绝大多数药用植物不同部位的非线性化学指纹图谱差别显著,特征参数明显不同,只有棉团铁线莲的根和叶,毛景天的茎和叶在化学成份和含量的积累上有一定的亲缘性,在临床入药时可考虑扩大他们的药用部位.结论:非线性化学指纹图谱技术是一种很好地评价药用植物不同部位质量的方法.【期刊名称】《黑龙江医药科学》【年(卷),期】2016(039)001【总页数】4页(P28-30,32)【关键词】非线性化学指纹图谱;药用植物不同部位;质量评价【作者】罗时旋;李守君;滕杨;张艳秋;李莉;武静茹【作者单位】佳木斯大学附属第二医院药剂科,黑龙江佳木斯154002;佳木斯大学药学院,黑龙江佳木斯154007;佳木斯大学药学院,黑龙江佳木斯154007;佳木斯大学附属第二医院药剂科,黑龙江佳木斯154002;佳木斯大学附属第二医院药剂科,黑龙江佳木斯154002;佳木斯大学附属第二医院药剂科,黑龙江佳木斯154002【正文语种】中文【中图分类】R285.1草药是一个复杂的多组分体系，其药效是多种成分协同作用的结果[1]。
传统指纹图谱技术并不能体现草药的这一整体特征，中药非线性化学指纹图谱技术作为草药指纹图谱的一个新的组成部分,较好地解决了草药体系综合因素的表征问题, 是一项较为理想的技术[2~5]。
目前临床中使用的草药往往取自植物某一部位，非药用部位常被丢弃，造成药用植物资源极大浪费。
同一基源的中药，因其药用部位的不同，不仅导致其药力的差异，而且还导致其性味归经的大相径庭，这也是中医选择有效部位入药的原因所在，但有些植物的不同部位常含有相同或相似的有效成分和生理活性，只是含量多少和药效强弱的差异[6]。
219316061_基于主成分分析的大蒜药用质量评价
胡小霞，邓丽娟，刘睿婷，等. 基于主成分分析的大蒜药用质量评价[J]. 食品工业科技，2023，44（12）：293−299. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022080237HU Xiaoxia, DENG Lijuan, LIU Ruiting, et al. Evaluation of Medicinal Quality of Garlic Based on Principal Component Analysis[J].Science and Technology of Food Industry, 2023, 44(12): 293−299. (in Chinese with English abstract). doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2022080237· 分析检测 ·基于主成分分析的大蒜药用质量评价胡小霞1，邓丽娟2，刘睿婷3,4，史荣梅3,5,*（1.乌鲁木齐海关技术中心，新疆乌鲁木齐 830063；2.天康生物制药有限公司，新疆乌鲁木齐 830026；3.新疆医科大学药学院，新疆乌鲁木齐 830011；4.新疆胡蒜研究院（有限公司），新疆乌鲁木齐 830013；5.新疆大蒜药用研究重点实验室，新疆乌鲁木齐 830013）摘 要：通过比较分析大蒜的药用品质，建立大蒜药用质量评价体系。
以水分、灰分、水溶性浸出物、大蒜素含量、蒜氨酸含量、大蒜辣素含量和蒜酶活力为指标，分析甘肃民乐、江苏邳州、山东金乡、河南郑州、重庆巫溪和新疆且末、拜城、种马场、虎头镇、大有镇、新地乡等11个产地大蒜的药用品质特征及差异，并通过相关性分析、主成分分析和聚类分析对大蒜质量进行综合评价。
结果表明，不同产地大蒜的上述指标都具有显著性差异。
相关性分析表明，蒜酶活力与水分呈极显著正相关性（P <0.01），蒜氨酸含量与灰分和大蒜辣素含量呈显著正相关性（P <0.05）。
基于荧光定量PCR的37种HPV亚型的检测与鉴定方法的评估
基于荧光定量PCR的37种HPV亚型的检测与鉴定方法的评估引言：人类乳头状瘤病毒（Human Papillomavirus，简称HPV）是一类DNA病毒，目前已鉴定出超过170种亚型，其中包括高危型和低危型HPV。
高危型HPV感染与宫颈癌等妇科恶性肿瘤的发生密切相关，因此准确鉴定并进行检测是预防和治疗相关疾病的重要手段之一。
本文旨在评估基于荧光定量PCR的37种HPV亚型的检测与鉴定方法，为提高这一技术的准确性和可靠性提供参考。
方法：本研究使用了一种基于荧光定量PCR的方法来检测和鉴定37种HPV亚型。
首先，我们提取了临床样本中的DNA，并通过PCR扩增得到HPV DNA片段。
接着，我们利用特定的引物和探针来进行逐个HPV亚型的扩增和检测。
在扩增过程中，我们将引物和探针与荧光染料相结合，通过荧光信号进行实时检测和测量。
最后，通过分析荧光信号的存在与否、峰值大小和相对数量等参数，判断样本中是否存在特定的HPV亚型。
结果：我们对100个已知的HPV阳性样本进行了测试，其中涵盖了37种不同的亚型。
根据实时荧光PCR检测结果，我们成功鉴定出了这些亚型中的大部分。
在37种亚型中，有20种亚型的荧光信号明显强于阴性对照组，证实了该方法的高特异性。
同时，我们还观察到了不同亚型之间的信号强度差异，这有助于进一步确定感染的亚型类型。
讨论：基于荧光定量PCR的37种HPV亚型检测与鉴定方法在本研究中表现出良好的特异性和敏感性。
通过自行设计的引物和探针，我们能够鉴定出大部分已知的亚型，并观察到亚型之间的信号差异。
然而，我们也注意到一些亚型的检测信号相对较弱，可能是由于引物与目标DNA的不完全匹配导致的。
因此，在进一步研究中，我们将考虑优化引物和探针的设计，提高亚型的检测灵敏度。
结论：本研究评估了一种基于荧光定量PCR的37种HPV亚型的检测与鉴定方法，证明了该方法的可行性和有效性。
通过对临床样本的测试，我们成功鉴定并区分了多种HPV亚型。
植物基因组测序及质量评估方法进展
植物基因组测序及质量评估方法进展植物基因组测序是研究植物基因组结构和功能的重要手段。
近年来，随着测序技术的不断发展和进步，越来越多的植物基因组被测序并进行了质量评估。
这些进展为我们深入了解植物基因组的构成和功能提供了基础。
一、植物基因组测序方法的发展1. Sanger测序法Sanger测序法是最早被广泛应用于植物基因组测序的方法。
其原理是通过DNA聚合酶在DNA模板上合成互补链，并在每个dNTP（脱氧核苷酸三磷酸盐）加入后停止扩增链的长度。
通过提取和分离这些扩增链，可以根据终止扩增链的dNTP种类推断出基因序列。
尽管Sanger测序法具有高准确性和较长读长的优势，但是其测序速度较慢且费用较高，限制了其在大规模植物基因组测序中的应用。
2. 下一代测序技术随着高通量测序技术（也称为下一代测序技术）的出现，植物基因组测序的速度和成本都得到了极大改善。
常用的下一代测序技术有454生物科学公司的pyrosequencing技术、Illumina公司的Solexa技术和Ion Torrent System。
这些技术通过将DNA片段固定到固相材料或测序芯片上，并通过反复加入碱基并检测测序结果的方法实现高通量测序。
下一代测序技术具有高产量、较低成本的特点，逐渐取代了Sanger测序法，成为植物基因组测序的主要方法。
二、植物基因组质量评估方法1. 序列质量评估方法在进行植物基因组测序后，需要评估测序数据的质量以确保数据的准确性和可靠性。
其中，序列质量评估是必不可少的环节。
常用的序列质量评估方法包括基于序列读长、GC含量、错误率、质量值等指标进行统计和分析。
这些指标能够反映序列的准确性和质量程度。
此外，使用基因组比对、插入大小的分析、错误纠错等策略也可以有效评估序列的质量。
2. 基因预测与注释方法基因组测序后，我们需要对测序结果进行基因预测和注释，以了解植物基因组的基本结构和功能。
目前，基因预测主要依赖于生物信息学的计算方法，包括基于相似性搜索、模式识别和统计学方法。
浅谈计量工作的标准化管理
杨威,刘萍(1.黑龙江省计量检定测试院,哈尔滨150036;2.哈尔滨市标准化研究院,哈尔滨150010)摘要:计量是利用科学技术和监督管理手段实现量值统一和准确的一项事业。
为此,计量工作的标准化管理就尤为重要。
标准化是中国为发展科学技术,应对加入世贸的挑战所实施的“人才、专利、标准”三大战略之一。
标准化管理的实质是使管理对象的形式、功能、技术要求具有一致性,以消除不必要的多样化而造成的混乱。
关键词:计量;标准化;管理中图分类号:F252文献标识码:A 文章编号:1005-913X (2013)04-0126-01收稿日期:2013-02-28作者简介:杨威(1963-),女,辽宁海城人,高级工程师,研究方向:电学计量;刘萍(1965-),女,哈尔宾人,高级工程师,研究方向:质量标准化。
计量工作是面向用户最直接的窗口,是反映计量管理水平,资质、信誉等方面最直观的标尺。
同时,计量标准化是保证服务质量的重要手段。
计量管理是一项系统工程,各个环节都要有标准,不仅有技术标准,而且还要有管理标准,工作标准等,因此需要建立一套完整的标准化管理体系。
一、计量工作的内涵计量工作是经济发展中重要的技术基础,在科技进步和现代化建设中有着无可替代的重要作用,是生产、科研和人民生活的基础保证。
随着社会主义市场经济的建立,现代计量已发展成为集计量技术、计量法制、计量组织和计量经济诸方面为一身,寓法制、科技、管理为一体的现代管理学科。
市场经济的建立,为计量工作注入了新的活力。
经济贸易全球化和国际化,一个国家的计量水平决定了其科学技术发展。
因此,计量检测水平高低已经成为衡量国家和企业市场竞争能力的重要因素。
二、标准化管理的内容及特性所谓标准化管理,就是在管理活动中,通过对具体事物、工作环节、构成要素、状态等方面明确提出定量化和定性化的实施标准,引导和控制管理目标、行为、质量、和服务社会方式等统一于所限定的约束范围和应遵循的规范准则之中,使之定向地向获得最佳的运行状态、工作效率和社会服务效益的良性转化的过程。
抗生素耐药基因检出方法改进和准确度评价
抗生素耐药基因检出方法改进和准确度评价抗生素耐药是当今世界所面临的一大挑战，导致了许多以往可以轻松治疗的感染性疾病重新变得具有致命性。
因此，提高抗生素耐药基因检出方法的准确度和效率对于控制和预防细菌耐药至关重要。
本文将讨论目前存在的抗生素耐药基因检出方法的改进以及评估其准确度的方法。
目前常用的抗生素耐药基因检出方法包括聚合酶链反应（PCR）和基因测序。
PCR是一种快速且灵敏的检测方法，能够定量检测耐药基因的存在。
但是，PCR方法在特异性和准确性方面存在一定的局限性。
由于细菌基因组的多样性，PCR方法可能会产生假阳性或假阴性结果。
为了解决这个问题，科学家们提出了一些改进方法。
首先，引入了新的引物设计策略。
在设计引物时，应尽量选择高度特异的引物序列，避免与非目标基因的互补，以降低假阳性率。
此外，引物的长度和GC含量也是影响特异性和准确性的重要因素。
较长的引物序列和适宜的GC含量有助于提高特异性。
其次，在PCR反应后引入了核酸杂交技术。
核酸杂交可以通过使耐药基因和标签探针序列互补结合来检测目标基因的存在。
这种方法能够进一步提高特异性，并减少假阳性和假阴性结果。
此外，引入了下一代测序技术在抗生素耐药基因检测中的应用。
相比传统的Sanger测序，下一代测序具有更高的测序深度和覆盖率，能够检测到低频突变和新的耐药突变。
同时，下一代测序还可以实现多样性的全基因组测序，提供更全面的信息，有助于确定耐药基因的种类和变异。
除了改进抗生素耐药基因检出方法，准确性的评价也是十分重要的。
评估抗生素耐药基因检测方法的准确度可以通过对已知阳性和阴性样本进行比较来完成。
在评估过程中需要考虑以下几个因素：首先，样本的选择和处理需要符合实际情况，以保证结果的真实性。
其次，样本的数量和种类应足够多样化，以确保方法的适应性和准确性。
最后，比较结果需要使用准确的统计学方法进行分析，以得出可靠的结论。
此外，使用外部质量控制体系也是验证抗生素耐药基因检测方法准确度的重要方式。
测序方法验证12个STR基因座的基因型
测序方法验证12个STR基因座的基因型李成涛;赵珍敏;柳燕;李莉【期刊名称】《法医学杂志》【年(卷),期】2009(025)002【摘要】目的用测序方法验证12个STR基因座的基因型.方法根据各STR基因座的特异性序列,对CSF1PO、FGA、TH01、TPOX、VWA、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51和D21S11 12个STR基因座设计了PCR引物并对标准品9947A和突变样本进行PCR产物测序.结果标准品9947A和突变样本的测序结果均与其基因分型结果一致.结论建立的测序方法准确、灵敏,可以用于STR基因型的确认.【总页数】4页(P115-117,122)【作者】李成涛;赵珍敏;柳燕;李莉【作者单位】司法部司法鉴定科学技术研究所上海市法医学重点实验室,上海200063;复旦大学生命科学学院,上海200433;司法部司法鉴定科学技术研究所上海市法医学重点实验室,上海200063;司法部司法鉴定科学技术研究所上海市法医学重点实验室,上海200063;司法部司法鉴定科学技术研究所上海市法医学重点实验室,上海200063【正文语种】中文【中图分类】DF795.2【相关文献】1.焦磷酸测序技术检测乙型肝炎病毒多个基因型耐药突变方法的建立及初步评价[J], 覃霞;徐文胜;杭晓峰;王东;倪武;朱樑2.ICP-MS法测定水质12种元素方法确认与验证 [J], 魏瑞丽3.转基因玉米双抗12-5转化体特异性PCR方法验证结果分析 [J], 王颢潜; 肖芳; 杨蕾; 缪青梅; 张旭冬; 张秀杰4.汽车12V蓄电池20h率容量计算及储备容量验证方法 [J], 李文龙5.从一组测序数据比对看微生物分子机制溯源分析方法对食品原料验证的重要贡献[J], 马冀因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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已知150多种，患病 率15％ ～2O％ ，
多基因遗传病 人类的大多数疾病 如代谢病、心血管 疾病和精神分裂症 等属多基因遗传病 。
第1代测序技术在国外临床上应用现状
临床 应用
商业化检测 试剂盒
CAP认可 独立实验室
2002年美国FDA批准AB和Celera 公司联合申请的ViroSeq HIV-1基因测序系统的 临床应用许可。
GS 454
技术原理 聚合酶/焦磷酸酶
单运数据产量 0.4～0.6Gb
覆盖人基因组
0.2×
平均读长（bp）
400
样品准备
2天
运行时间
10小时
精确度
99％
单次运行价格
7万元
SOLiD 连接酶 50Gb
17× 50 7天 8天
99.94％ 3.5万元
SOLEXA 聚合酶 20Gb
6× 100×2 9小时 9.5天 98.5％ 2.5万元
Amphibians
Reptiles Other animals
Plants Land plants
Green Algae
Fungi Ascomycetes
Basidiomycetes
Other fungi
Protists Apicomplexans
Kinetoplasts
Other protists
第1代测序技术在国内临床应用现状
仪器
试剂 质控
平台
2008.04，ABI的3130 ／3130XL测序仪获得中 国SFDA颁布的医疗器械 生产许可证。
2009，上海申友获 得了中国第1张基于 测序平台的体外诊断 试剂生产许可证即“ 乙型肝炎病毒(HBV) 及耐药突变检测试剂 盒”。
EGFR等出现于卫生 部临检中心和上海市 临检中心等通过 ISO17043认可的能力 验证计划提供
基于外周血标本的临床检测
如唐氏综合征筛查和某些肿瘤易 感基因的检测 。
尚未获得临床许可、临床检 测的质量控制措施相对脱节
积极申报，指日可待。
3 Sanger测序技术临床应用方法学验证探索
2015/3/17
第2代测序技术
Sanger测序流程
检验前
检验后
检验中
方法学验证
验证前阶段
验证阶段
验证后阶段
5
2015/3/17
3
2015/3/17
Genome sequencing projects statistics
Organism
Prokaryotes
Archaea Bacteria Eukaryotes
Animals Mammals
Birds Fishes Insects Flatworms Roundworms
1000 Genomes Project
Personal Genome Project Cancer Genome Project
转录组测序/外显子测序
转录本结构研究：UTR鉴定、Intron边 界鉴定、可变剪切研究等。
非编码区域功能研究：non-coding RNA研究、microRNA前体研究等。
测序法作为检测基因突变的“金标准”被广泛接受。
在ISO15189以及美国病理学家协会（CAP）的相关实验室项目开展要求的基 础上，对乙型肝炎耐药基因测序工作进行方法学验证。
一、验证前阶段
实验标准的选择
标本类型的选择
实验的优化
• 不同的实验项目以及检测目的， 测序标准需要进行调整。
• 以基因分型为例， 着重于确认 或排除已知序列的差异，需要 关注的是已知位置的碱基变化， 若1kb的碱基相应的允许误差是 1％，那么对于用于临床诊断的 基因分型来说是不可接受的。
模板富集，打断 连接接头（polyA or 生物素）
芯片
磁珠
循环测序
Light intensity
连接酶合成测序(Solid, Solexa等）
time
焦磷酸测序(454)
大规模测序的成本迅速下降,花费1000美元测一个人的基因组的目标相信很快就可以实现。 个人化医疗的时代变为可能。
2nd Generation Performance
断
结核病(TB) 以测序基
肿瘤易感基因因等分析，可用于 早期发现某些肿瘤
筛查
如乳腺癌、结肠癌 的易感人群，早期
干预措施。
约8 000种 ，每年以约
单基因遗传病1度0递0种增的，速总
患病率为3 ％ ～5％ 。
K-ras基因、EGFR突
肿瘤靶向治疗变分析，判断肿瘤 患者靶向治疗中必 不可少。
乙型肝炎病毒耐药基因测序检测性能验证
2009年欧洲肝病学会（European Association for the Study of the Liver, EASL） 发布慢性乙型肝炎临床实践指南，建议针对那些乙型肝炎合并肝硬化患者应 给予长期服用核苷（酸）类似物。
伴随病毒耐药株的产生、不同突变位点导致药物敏感性差异等临床问题日益 凸显，核苷（酸）类似物耐药基因突变检测尤显重要。
Complete 979 67 912 22 4 2
1 1
2 2
10 8 1 1 6 1 1 4
Draft assembly 1067 13 1054 189 75 28 2 3 21 2 9
12 12 9 3
76 60 10 6 24 11
2 10
de novo 测序
In progress
1018
基于边合成边测序
Pacific Biosciences公 司的SMRT技术
基于边合成边测序的 思想 以SMRT芯片为测序 载体进行测序反
Oxford Nanopore Technologies公司纳米 孔单分子技术
基于电信号测序的技 术
各测序技术比较
第一代
通量
读长(bp)
准确性（%）
成本（美元/MB ）
POLONATOR 连接酶 20G 17 × ~30×2 7天 1周 99% ~40% off
第三代测序技术-单分子测序
无需模板扩增
HeliScope-连接接头后芯片循环核苷酸荧光信号检测测序； (单分子合成测序） Pacific-DNA聚合酶动力过程及核苷酸荧光信号检测测序；(单分子实时合成测序） 纳米孔电流信号检测测序。
38 980 169
59 18 1 6 7 2 11
1
1 14
44 38
6
38 26
8
4
24 7
5
12
total
3064
118 2946 380
138 48 3 9 29 4 21
1
1 26
58 49
9
124 94
19
11
54 19
8 26 19
全基因组重测序/基因组结构变异 Human Genome Project
样品间差异表达分析
miRNAs聚类和表达谱分析等
宏基因组学（Meta-Genomics）
宏基因组学 （也称元基因组学、环境 基因组学、生态基因组学）以环境样 品中的微生物群体基因组为研究对象 ，以测序分析和功能基因筛选为研究 手段，研究微生物多样性、 种群结构 、进化关系、功能活性、相互协作关 系及与环境之间关系的新方法。
同年，FDA也批准拜耳公司旗下TRUEGENE HIV-1 Genotyping Kit and OpenGene 基因测序系统。
越来越多的测序试剂经FDA认可而应用于临床检测……
Quest Diagnostics，LabCorp……全美最大的独立医学实验室，进行测序的临床检 测。
美国盐湖城的Myriad基因实验室，专门以测序为技术平台的独立医学实验室。
a-溶血素
单链DNA
纳米膜
第3代DNA测序过程可能引入 突变或者改变样品中核酸分子的比例关系。 2.二代测序的读长普遍偏短，在进行数据拼接时会遇到麻烦。
单分子实时测序和纳米孔为标志的第三代测序技术
Helicos公司的单分子 测序仪
临床分子诊断新技术及其质量控制学习班 15-3-25
2015/3/17
1 测序技术的发展 2 测序技术在临床诊断的应用 3 Sanger测序临床应用方法学验证探索及其实例分析 4 实验室认可体系的要求
1 测序技术的发展
测
序
技
术
Sanger 测序
高通量测序
单分子测序
的
（第一代，始 于1980年）
（第二代， 始于2005年）
测序原理
3730XL
0.2M
800-1000
99.99
2500
双脱氧链终止DNA测序法
第二代
454
400M
400-500
99
40
合成测序法（焦磷酸测序）
Solexa
Gall 8-10G
75
99
200G
100
SOLID
SOLIDTM3
30G
25
98
SOLIDTM4 100G
50
Polxnalor
4-5G
对特定环境微生物种群全基因组DNA 研究，可以从整体上对样品群落进行 分析，不受微生物是否能培养的限制 ，而且研究对象从单一基因组到一个 基因组集合，也摆脱了对于传统基因 组研究的物种限制，开辟了微生物群 体基因组学研究的新路径。
ChIP测序
ChIP-Seq是继ChIP-Chip之后蛋白/ 核酸相互作用研究领域的又一技术 突破。通过对染色质免疫共沉淀（ ChIP）获得的DNA片段进行大规模 测序，可获得数百万条序列标签， 并能把所研究蛋白的DNA结合位点 精确定位到基因组上。