提交细胞生物学实验教案

细胞生物学实验

Cell Biology Experiment

目录

1.显微镜的结构及细胞形态观察、大小测量和死活细胞鉴定

2.液泡系和线粒体的活体染色

3.叶绿体的分离与观察

4.DNA的细胞化学——Feulgen反应

5.多糖的显示——PAS反应

6.细胞内碱性蛋白和总体蛋白的原位显示

7.细胞骨架的光学显微观察和永久制片技术

8.植物原生质体的制备与融合

9.蚕豆根尖微核试验

10.膜的通透性

11.血细胞的分化和不同类型血细胞的观察

实验报告要求

1．注意页面四边留白，不要挤到页边！

2．抬头填写完整。

3．注意事项自己总结，不要抄袭！

4．组长检查后上交存档。

生物绘图注意事项

1．2H 以上绘图铅笔削尖、绘图橡皮、直尺

2．边看显微镜边按视野中实际情况绘图，以精确为主，不能艺术加工。

3．应找到最典型、最能说明绘图目的的物像来绘图。先轻勾出轮廓，检查无误后，再以准确清晰的线作最后描绘。

①实线表示轮廓，虚线表示被遮蔽但需表现的轮廓，线粗细应均匀有规律

②圆点的疏密表示明暗、凹凸（越暗的地方点越多）点点时笔尖直立，点大小、疏密要均匀、整齐、浑圆，不能像“，”。

4．用尺向右侧引出水平指示线，线右端平齐字注在右侧。图下方写上所画图的名称及放大倍数。图的右侧和下方需写文字说明，所以图应绘在绘图纸上偏左上方的位置。

5．一幅图只要详细画出部分结构，其余勾画出轮廓即可。

规范不规范

实验一普通显微镜的使用及细胞形态观察、大小测量和死活细胞鉴定

一、实验目的

1．熟悉普通光学显微镜的基本构造和性能，掌握使用方法。

2．了解细胞的一般形态和基本结构。

3．掌握显微测微尺的使用，对细胞大小有一直观认识。

4．了解鉴定死活细胞的方法。

二、实验原理

1．显微测微尺的使用

镜台测微尺：表示绝对长度，长1 mm，分成100小格，每小格为0.01mm。不被用来直接测量，而是用它来校正目镜测微尺，故其质量对所测微体影响极大。

目镜测微尺：是一块比目镜筒内径稍小的有标尺的圆形玻璃片，标尺长10毫米、分为100格。需要镜台测微尺校正为绝对长度再测定细胞大小。

2．死活细胞鉴定:台盼蓝是一种低毒的活体染色剂，只能透过质膜受损的细胞或死细胞。

三、实验用品

1．试验材料：

洋葱内表皮细胞口腔上皮细胞、

（人的口腔上皮细胞是扁平、

多边形的，形状不很规）

2．试剂

0.2%台盼蓝溶液

3．仪器

测微尺（2套）、普通光学显微镜、刀片、镊子、玻璃滴管、吸水纸、牙签。

四、试验方法

一、细胞死活的鉴定

0.2%台盼蓝染色5-10分钟后进行观察。

二、细胞大小测量

1）测量时，镜台微台尺换成样本，

2)目镜测微尺来测量细胞的大小

3)改变显微镜的放大倍率，则需对目镜测微尺重新进行标定。

三、细胞形态的观察

五、注意事项

取口腔黏膜上皮细胞注意的问题

1．口腔上皮细胞主要分布在口腔两侧颊部。用消毒牙签的钝端，在漱净的口腔任意一侧的颊部，轻轻刮几下。

2．取材前，口腔一定要用清水漱净，去除口腔内的食物残渣。

3．用方签在口腔壁上轻轻刮动，不要刮在牙缝里，因为牙齿上刮下来的是食物碎屑，不是口腔上皮细胞。

六、作业

1．绘制口腔黏膜上皮细胞及洋葱内表皮细胞图（2-3个细胞）

2．列表写出洋葱内表皮细胞长轴、短轴长度，并计算平均值。（取3个细胞）

3．取口腔黏膜上皮细胞注意的问题

4．生物绘图注意事项

实验二线粒体和液泡系的超活染色与观察

一、实验目的

1、了解细胞和细胞器的超活染色技术。

2、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡的形态、数量和分布,了解植物细胞液泡系的发育过程。

二、实验原理

活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。

体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的电化学特性起重要作用。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此就发生了吸引作用。但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，Janus green B和中性红两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。

线粒体是细胞内重要的细胞器，线粒体内膜上分布有细胞色素氧化酶，该酶能使詹姆斯

绿B保持在氧化状态，呈现蓝绿色从而使线粒体显色，而细胞质中的染料被还原成无色。液泡是细胞内浓缩产物的主要场所，有十分重要的功能。中性红是液泡的特殊染色剂，将液泡染成红色。在活细胞中，细胞质和细胞核不着色。如果细胞死亡，染料会弥散开来，使核着色。

三、实验用品

（一）器材

显微镜、恒温水浴锅、镊子、刀片、载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸等。

（二）试剂

1、Ringer 溶液生理盐水、缓冲液

氯化钠0.85g（变温动物用0.65g）；氯化钾 0.25g ；

氯化钙 0.03g ；蒸馏水100ml

2、10%、1/3000中性红溶液

称取0.5中性红溶于50ml Ringer溶液，稍加热（30-40度）使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。

临用前，取已配制的1%中性红溶液1ml，加入29mlRinger溶液混匀，装入棕色瓶备用。3．1%、1/5000詹姆斯绿B溶液

称取50mg詹姆斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加微热（30-40度）使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。取1%原液1ml加入49ml Ringer溶液，即成1/5000工作液，装入瓶中备用。最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。

（三）材料

人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞、小麦幼根根尖。

四、实验方法

(一) 线粒体的超活染色与观察

1、人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察

载玻片→ 37℃水浴锅的金属板→滴两滴詹纳斯绿B染液

牙签→从口腔粘膜刮取上皮细胞→放入载玻片染液→染色10-15分钟（注意不可使染液干燥, 必要时可再加滴染液）→盖上盖玻片用吸水纸吸去四周溢出的染液→观察

2.洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的超活染色

载玻片→撕取一小片洋葱鳞茎内表皮滴→一滴詹纳斯绿B染液→染色10-15分钟

吸去染液→加一滴Ringer液，注意使洋葱内表皮展平→盖上盖玻片→观察

（二）液泡系的超活染色与观察

刀片→小麦幼苗根尖→切一纵切面→中性红染色5-10分钟

吸去染液→加一滴Ringer液→盖上盖玻片→镊子轻轻下压盖玻片→观察

五．实验结果

在小麦根尖细胞制片中，可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡，这是初生的幼小液泡。然后，由生长点向延长区观察，在一些已分化长大的细胞内，液泡的染色较浅，体积增大，数目变少。在成熟区细胞中，一般只有一个淡红色的巨大液泡，占据细胞的绝大部分空间，将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处。

六．注意事项

1、詹姆斯绿B溶液现用现配，以保持它的充分氧化能力。

2、实验中速度要快，以免组织细胞死亡。

七、作业

1 ．画出你所观察到的线粒体和液泡的图像.

2 ．总结实验成功或失败的原因.

实验三叶绿体的分离与观察