Hcy测定试剂盒设计方案

1 产品概述、处方及规格

1.1产品概述

本试剂通过测定人体液中同型半胱氨酸（Hcy）的浓度，主要是用于诊断心肌功能疾病。

产品测定原理：

同型半胱氨酸被转化为游离型后，通过与共价底物反应，循环放大，同时产生腺苷。腺苷立即水解成氨和次黄嘌呤，氨在谷氨酸脱氢酶的作用下，使β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原性（NADH）转化为NAD+，样本中的同型半胱氨酸的浓度与NADH的变化成正比。

1.2产品处方

1.2.1 试剂为液体双试剂。校准品可使用朗道、罗氏等复合定标液。

1.2.2 产品所用主要原材料为S-腺苷甲硫氨酸（SAM）、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原性（NADH）、三（2羧乙基）磷氯化氢（TCEP）、α- 酮戊二酸、Hcy甲基转移酶（HMTase）、谷氨酸脱氢酶（GLDH）S-腺苷同型半胱氨酸（SAH）水解酶及腺苷脱氨酶（ADA）等。根据文献资料选用适当的缓冲液和稳定剂。

1.3 产品规格

产品包装规格制定要考虑不同适用机型和不同客户需求，根据以往经验，拟制定规格：

R1-8 ml、R2-2 ml；R1-16 ml、R2-4ml；R1-20 ml、R2-5ml；R1-32 ml、R2-8ml；R1-40 ml、R2-10 ml；

R1-2×40 ml、R2-2×10 ml；R1-4×40 ml、R2-4×10 ml；R1-2×40 ml、R2-20 ml；R1-4×40 ml、R2-2×20 ml；R1-8×40 ml、R2-8×10 ml；R1-80 ml、R2-20 ml；R1-2×80 ml、R2-2×20 ml；

R1-4×80 ml、R2-4×20 ml；R1-8×80 ml、R2-8×20 ml ；R1-60 ml、R2-15 ml；R1-2×60 ml、R2-2×15 ml；R1-3×60 ml、R2-3×15ml；R1-8×50 ml、R2-2×50ml；R1-6×70 ml、R2-3×35ml；

R1-5×40 ml、R2-50ml；R1-4×50 ml、R2-50ml；R1-3×60 ml、R2-45ml；R1-8×20 ml、R2-8×5 ml。

2 产品质量标准

根据《临床化学体外诊断试剂（盒）通用技术要求》，应对试剂外观、净含量、试剂空白、灵敏度、准确度、批内精密性、批间精密性、线性范围和稳定性等做出要求和规定。

应参考已上市产品并满足临床使用要求。

2.1外观

R1、R2均为无色至浅黄色透明液体。

2.2净含量

不少于标示值。

2.3试剂空白

2.3.1试剂空白吸光度变化率

以蒸馏水为检测样本时，每分钟吸光度变化值(△A/min)的绝对值应不大于0.100A。

2.3.2试剂空白吸光度

以蒸馏水为检测样本时，吸光度应不小于0.800A。

2.4准确度

以质控血清（如Roche公司生产的质控血清）为检测样本时，测定值在质控血清规定的可接受范围内。或用比对试验，相关系数r≥0.975,每个浓度点的相对偏差R≤20%。

2.5线性范围

Hcy试剂在线性范围0-50umol/L内，

a)回归系数r应不小于0.990;

b)线性偏差应不大于15%。

2.6 分析灵敏度

Hcy含量为10umol/L时，测定吸光度变化率(减掉试剂空白吸光度变化率) △A≥0.002Abs/min。

2.7重复性

2.7.1测量精密度

同一个试剂盒分别测定高低两个样本值所得的结果，变异系数CV≤8.0%。

2.7.2批间差

连续三批生产的不同批号的试剂测定同一样本，相对偏差R≤20%。

2.8 稳定性

Hcy试剂贮存于2℃－8℃、避光环境中，有效期为12个月。

3研制要求

3.1对试剂所用原料进行选择，试剂配方进行优化，确定所用原料的浓度，在保证产品质量的前提下尽量降低成本。

3.2 对反应体系进行研究，选择最佳加样方案，兼顾反应的灵敏度和线性范围，并适合在全自动生化分析仪上应用。

3.3 对生产工艺进行研究，以使研制的产品能够顺利进入生产程序。

3.4 对试剂的分析性能进行评估，对产品质量标准中的各项进行实验评价并确定最终要求，据此拟定注册产品标准。

3.5 实验确定该项目的正常参考值。

3.6 稳定性研究：试制至少三批样品，在实际储存条件下保存至成品有效期后，检测各项性能指标是否仍能达到产品质量标准的要求。

3.7 进行临床研究，确定临床适用性和符合性。

4 生产工艺流程（见附页）

5 生产过程及工艺条件

5.1.1 称量

5.1.1.1根据产品处方计算待配溶液所需各试剂成分量，用适当的称、量工具按顺序依次准确称量或量

取各试剂成分。

5.1.1.2称量过程要求控制称量试剂成分的正确性和精确性，需根据所要称、量试剂的量选用适当的称、

量工具。称量过程应有复核人复核。

5.1.2 配制

在配液桶中加入预定体积90%左右的纯化水，然后依次加入准确称量的各试剂成分，注意在加入

下一成分前，之前加入的试剂成分要已搅拌溶解。所有试剂成分加完并溶解后，用纯化水定容至预定

体积。

5.1.3 过滤

5.1.3.1试剂配制完成后，用≤10um孔径的滤膜过滤。根据液量多少，可采用蠕动泵过滤，液量过少时采用针头过滤器过滤。

5.1.3.2为减少酶或其他较大分子生物成分损失，可在加入这些成分之前进行过滤。

5.1.3.3过滤过程要避免溶液受污染，与溶液接触的器具应尽量专用，不能专用应保证洗涤彻底，以免造成试剂间的交叉污染。

5.1.4 配液检验

配制完成的液体静置2小时以上，即可通知质检部取样进行性能检测，检测合格的试剂方可进入分装程序。

如配液量很少，配制后即分装，此步检验可省却。

5.2 分装

可用蠕动泵调整液量后分装，也可采用称重法、量取体积法分装。

5.2.1 装量控制

分装程序要求对装量进行控制，不得低于标示装量。分装过程中对装量进行抽检，为避免损失溶液和增加污染机会，建议采用称重法进行装量检验。

5.2.2 分装后检验

分装完成后，通知质检部取样检验。检验合格的试剂方可进入下一生产程序。

如分装和包装程序连续进行，在溶液配制后已进行检验的前提下，此步检验可省却。

5.3 组装

5.3.1 组装程序

5.3.1.1领取半成品、包装盒、瓶签、盒签、说明书。

5.3.1.2标签打印

在通用瓶签和盒签上打印相应内容：

瓶签在绿色区域内打印产品名称和半成品规格；

盒签在绿色区域内打印产品名称和试剂盒包装规格，并将注册号和产品注册标准部分打印完整。

5.3.1.3贴签

瓶签贴到半成品瓶身指定位置，端正、居中；

盒签贴于包装盒正面，端正，居中。

5.3.1.4 叠说明书

将说明书横向对折两次后再纵向对折一次，折好后的说明书边缘应整齐。

5.3.1.5装盒

将包装盒折好，依次放入半成品组分和说明书，各组分位置应整齐有序。

5.3.2 成品检验

试剂组装好后，通知质检部抽样检验。质检部检验合格后按批生产量发合格证给生产部，生产部将合格证贴于包装盒指定位置，即可进行成品入库。

6 主要设备一览表