微生物实验设计-病原性球菌的鉴定
微生物检验学之病原性球菌及检验
病原性球菌及检验一、葡萄球菌属（一）生物学特性1.形态与结构本属菌革兰染色阳性，呈圆球形，直径0.5～1.5μm，不规则成堆排列，形似葡萄串状，在脓汁、肉浸液培养物中，可见单个，成对或短链排列。
无鞭毛和芽胞，某些菌株能形成荚膜。
2.培养特性需氧或兼性厌氧，营养要求不高，通常在肉浸液及肉浸液琼脂或加入血液的培养基上生长良好。
最适pH为7.4，最适温度为35～37℃。
在普通琼脂平板上经35℃24～48h培养，可形成圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐并且不透明的菌落，直径为2～3mm。
可产生不同的脂溶性色素，如金黄色、白色、柠檬色色素。
在血琼脂平板上，几乎所有的葡萄球菌可产生α、β、γ和δ溶血素。
在液体培养基（普通肉浸液）中生长迅速呈均匀混浊状。
3.生化反应本属菌触酶试验阳性，对糖的发酵反应不规则，多数能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖，产酸不产气。
多数致病性葡萄球菌能分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶。
4.抗原葡萄球菌水解后，用沉淀法可获得两种抗原，即蛋白抗原和多糖抗原。
（1）蛋白抗原：为完全抗原，有种属特异性，无型特异性。
存在于葡萄球菌的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白。
（2）多糖抗原：是半抗原，具有型特异性，有三种：①A型多糖抗原；②B型多糖抗原；③C型多糖抗原。
5.分类（1）《伯杰系统细菌学手册》（1986）据DNA相关性表型特征等将葡萄球菌分为19个种。
继之，各国学者又相继从人和动物中检出数种凝固酶阴性葡萄球菌新种，共27种。
（2）古典分类法：根据其在固体培养基上产生的不同色素分为金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和柠檬色葡萄球菌。
1965年，国际葡萄球菌和微球菌分类委员会将葡萄球菌分为凝固酶阳性葡萄球菌与凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）。
CNS常包括表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌。
凝固酶阳性葡萄球菌包括金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌和家畜葡萄球菌。
6.抵抗力对理化因素抵抗力强，耐热、耐干燥、耐高盐，是抵抗力最强的无芽胞细菌。
医学微生物实验实验四病原性球菌
相关研究和应用前景
研究方向
• 球菌的耐药性研究 • 球菌的毒力机制研究
应用前景
• 新型抗菌药物的开发 • 快速检测方法的改进
实验的意义和价值
促进健康
通过研究病原性球菌，能够更好地了解和应对 与之相关的疾病，促进人们的健康。
拓展科学知识
通过实验，可以进一步了解微生物领域的知识， 为科学研究的发展做出贡献。
3 柯氏试验
通过培养基的反应性来鉴别链球菌。
2 大肠杆菌鉴别试验
利用培养基鉴别肺炎球菌。
病原性球菌的检测方法
1
涂片法
将样品涂在玻璃片上，使用显微镜观察病原性球菌的形态特征。
2
H2 S产生试验
利用培养基观察球菌对H2S的产生情况。
3
SIM管法
通过尿素和铁盐培养基观察球菌的反应。
病原性球菌实验结果分析
形态观察
观察菌落的形态特征，如颜色、 形状和质地。
病原性球菌的特征和疾病
球菌种类 金黄色葡萄球菌 肺炎球菌 链球菌
特征 黄色菌落，产生金黄色素 多形态，革兰阴性 成链状排列
相关疾病 皮肤感染、食物中毒等 肺炎、脑膜炎等 咽炎、扁桃体炎等
病原性球菌的实验判断
1 甘露醇耐性试验
用甘露醇培养基判断金黄色葡萄球菌。
医学微生物实验实验四病 原性球菌
这个介绍病原性球菌的医学微生物实验将带您了解球菌的分类和特征，病原 性球菌对人类健康的影响，以及与常见球菌相关的疾病。
病原性球菌的分离与鉴定
样本采集
收集可能含有病原性球菌的样 本，如血液、尿液或分泌物。
培养与分离
将样本在含有适宜培养基的培 养皿中培养，分离出病原性球 菌。
微生物检验学 实验七 病原性球菌的检验
A群溶血性链球菌 S
-
无乳链球菌
R
+
肺炎链球菌和草绿色链球菌的鉴别
菌种
镜下形态
菌落形态
Optochin
肺炎链球菌
矛头状、成对、有荚膜
稍大、扁平、湿润、脐 状
S
草绿色链球菌
圆形、成链、无荚膜
较小、凸起、稍干、圆 形
R
【注意事项】
触酶试验中3％H2O2溶液要新鲜配制，并且不宜用 血琼脂平板上生长的菌落。 凝固酶试验通常用玻片法为筛选试验、如遇凝固酶 试验结果不典型可以用试管法鉴定。 观察胆汁-七叶苷试验结果时，要求至少1/2斜面变 黑才能判断为阳性。
【实验方法】 1、染色镜检 2、分离培养 3、生化反应 葡萄球菌属
触酶试验 凝固酶试验 新生霉素敏感试验
4
链球菌属和肠球菌属
触酶试验 链球菌属
杆菌肽敏感试验 CAMP试验 Optochin敏感试验 肠球菌属 胆汁-七叶苷试验 65g/L NaCl耐受生长试验
胆汁七 生化反应
CAMP试验
主要性状
菌落色素 溶血 血浆凝固酶 触酶 甘露醇发酵 新生霉素
3种葡萄球菌的生化反应结果
金黄色葡萄球菌
金黄色 ＋（β溶血）
＋ ＋ ＋ S
表皮葡萄球菌
白色 － － ＋ － S
腐生葡萄球菌
白色或柠檬色 － － ＋ － R
链球菌属和肠球菌属
A群溶血性链球菌和无乳链球菌的鉴别
菌种
杆菌肽
CAMP
10
实验7 病原性球菌的检验
临床微生物学及检验
医学检验学院 病原生物学教研室
【实验目的】
1.掌握葡萄球菌属、链球菌属和肠球菌属的 菌落形态、染色特点和基本生化反应。
微生物实验设计-病原性球菌的鉴定
医学微生物学实验设计姓名：***学号：**********班级：10级临床十一班病原性球菌的鉴定姚淑宝（石河子大学医学院石河子832000）摘要：球菌是细菌中的一大类，其中对人类有致病性的球菌包括分属葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属和奈瑟菌属的一些细菌。
本次实验设计以掌握病原性球菌的形态和培养特性，熟悉病原性球菌的分离和鉴定程序为目的。
对脓汁中的葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌进行鉴别。
一、鉴定思想本次鉴定试验，先将脓汁标本直接镜检，再分离培养，观察镜下菌体的形态特征以及形成菌落的形态特征确定待测菌的菌属。
然后，对可疑菌落纯培养，通过不同生化反应对同一菌属中的不同细菌进行区别。
（具体见图1-1）分离纯化葡萄球菌属奈瑟菌属血浆凝固酶试验胆汁溶菌试验麦芽糖发酵试验二、鉴定方法（一）直接镜检将脓汁标本涂片进行革兰染色，然后在显微镜下观察细菌菌体的形态、排列、染色性并作出初步诊断。
葡萄球菌属：革兰染色阳性，球形，无芽胞、无鞭毛，呈葡萄串状排列。
链球菌属：革兰染色阳性，球形或椭圆形，无芽胞、无鞭毛，呈链状或成双排列。
肺炎链球菌具有荚膜双球的典型形态。
奈瑟菌属：革兰染色阴性，无芽胞、无鞭毛，常成双排列。
脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌大多于中性粒细胞内外分布。
通过直接镜检可以确定脓汁标本中细菌的菌属。
在确定菌属的基础下再对脓汁标本中的细菌分离纯化，然后挑取可以菌落通过再次涂片染色镜检、致病物质检查、生化反应、血清学鉴定等方法进行菌属内的区别。
（二）分离纯化用分区划线法将脓汁中的细菌接种在血琼脂平板培养基或巧克力色培养基上并在5%二氧化碳、37℃的条件下培养18~48小时。
观察菌落的形态。
葡萄球菌属：在血平板上形成圆形凸起、表面光滑、润湿、边缘整齐、不透明的菌落。
形成金黄色、白色和柠檬色脂溶性色素，多数金黄色葡萄球菌菌落周围有β溶血现象。
链球菌属：在血平板上形成灰白色、圆形凸起、半透明或不半透明的细小菌落。
微生物实验 病原性球菌-2+肠道杆菌病例
正常胸部CT
两肺下叶、右肺中叶斑片状模糊影
思考：为了进一步指导临床用药，还需进行哪些试验？
6. 增菌实验（肉膏汤接种）Biblioteka 纯培养药敏实验-纸片扩散法
测量抑菌圈的直径
药物敏感实验
葡萄球菌
金黄色葡萄球菌K-B法判定标准
药物
红霉素 克林霉素 头孢西丁 新生霉素
浓度
抑菌圈直径(mm)
敏感
中介
耐药
15ug >=23 12--22 <=13
2ug >=21 13--20 <=14
30ug >=22
<=21
30ug >=16 13--16 <=13
三、小结
1.直接涂片、革兰染色、镜检
痰 液
挑取可疑菌落
2.血平板进行分离培养
3.观察菌落性状、溶血性、色素
直径2mm左右、圆形、隆起、表面光 滑、湿润、边缘整齐，黄色菌落， 周围形成透明溶血环（β溶血）
4.菌落涂片、染色、镜检
5.生化反应：触酶试验
6.致病性测定：血浆凝固酶试验 甘露醇发酵试验
7.増菌试验
药敏试验
四、病例讨论
某患者，女，45岁。于前日参加聚餐，昨日感觉腹部不适，今晨起有 发热、腹痛、水样腹泻，至下午就诊已腹泻5次，最后两次量不多，但有 黏液样物质带有血色。实验室检测：粪便检查发现有脓细胞5个，红细胞8 个；血液检测WBC14.5×109/L（4-10x109/L）。
实验八 痰液标本中病原性细菌的分离鉴定-2
【目的要求】
1、掌握痰液标本中病原性细菌的分离与鉴定程序。 2、熟悉分离与鉴定的实验方法。
一、上节课实验结果
痰液标本革兰染色的结果及初步推断
病原性球菌的检查.(2)doc
病原性球菌检查（二） 实验目的1掌握病原性球菌培养物性状。
2掌握血浆凝固酶试验原理方法。
3掌握密集接种法，熟悉药物（如抗生素）抑菌杀菌原理并了解纸片法、试管法的试验方法及应用。
实验材料1、菌种：金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌6~8小时肉汤培养物。
2、培养基：普通琼脂平板、肉汤培养基。
3、药品：青霉素溶液（50u/ml ）、抗生素滤纸片。
4、器具：恒温箱、接种环、酒精灯、试管、无菌棉拭、无菌小镊子、无菌吸管、玻片、血浆。
实验内容一、病原性球菌的培养物观察肉眼观察葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌在血琼脂平板上的生长情况及脑膜炎球菌在巧克力（色）琼脂平板上的生长情况，比较菌落的形态特征。
（1）葡萄球菌：在血琼脂平板上培养18~24小时，形成圆表凸起，表面光滑、湿润、边缘整齐，菌落不透明。
金黄色葡萄球菌金黄色，可产生透明溶血环；表皮葡萄球菌白色、无溶血环，腐生葡萄球菌白色或柠檬色，无溶血环。
（2）链球菌：在血琼脂平板上培养18~24小时，形成灰白色、圆形凸起、半透明或不透明的细小菌落。
甲型溶血性链球菌不完全溶血，在菌落周围形成草绿色溶血环，乙型溶血性链球菌完全溶血、形成透明溶血环，丙型链球菌不发生形成圆形、光滑隆起透明似露珠的菌落。
在血琼脂平板上不发生溶血溶血、无溶血环。
（3）肺炎球菌：血琼脂平板上培养18~24小时，形成细小、灰白色、扁平、半透明的菌落，周围有草绿色溶血环，其与甲型溶血性链球菌相似，培养2~3天后，因菌体发生自溶，菌落中央下陷呈“脐状”。
（4）脑膜炎球菌：在巧克力（色）琼脂平板上加5%CO237℃培养24小时， 形成圆形光滑隆起透明似露珠的菌落，无溶血环。
二、血浆凝固酶试验1、原理致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，使人或动物血浆发生凝固，因此，测定血浆凝固酶的有无是鉴定葡萄球菌致病性的重要依据。
2、方法及结果（1） 玻片法：①取干净玻片一块，用记号笔将玻片划成两格，其中一格加2接种环的生理盐水，另一格加1：2人血浆（或免血浆）1接种环。
医学微生物实验 - 实验四病原性球菌
2020/4/19
2020/4/19
2020/4/19
纸片法
• 材料：
• 1、菌种：葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾 杆菌、绿脓杆菌
• 2、培养基：普通琼脂平板 • 3、抗生素滤纸片：每片含药量：青霉
素1单位，其它抗生素为10微克
2020/4/19
绿 脓 杆 菌
2020/4/19
葡 萄 球பைடு நூலகம்菌
2020/4/19
大 肠 杆 菌
2020/4/19
2020/4/19
2020/4/19
2020/4/19
2020/4/19
葡 萄 球 菌
2020/4/19
链
球
不完全溶血
菌
2020/4/19
完全溶血 不溶血
2020/4/19
肺炎链球菌 草绿色溶血环
可疑败血症细菌鉴定
标本采集
增菌培养 平板划线分离 药敏鉴定
培养特征 涂片镜检
鉴定
2020/4/19
细菌检测及鉴定常用方法
• 镜检（ G+球菌） • 培养（ G+球菌） • 生化反应（ G-杆菌） • 血清学诊断 • 动物实验 • 核酸诊断等快速诊断
2020/4/19
病原性球菌实验内容
• 病原性球菌的形态观察 葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌
• 病原性球菌的培养特性 ✓ 普通平板菌落形态的观察 ✓ 血平板上溶血特性的观察
血浆凝固酶的种类及检测方法
结合血浆凝固酶 （纤维蛋白原受体）
游离血浆凝固酶 纤维蛋白原
2020/4/19
纤维蛋白原
颗粒状凝固
纤维蛋白 胶状凝固
药敏试验
（抗生素敏感试验）
2020/4/19
病原性球菌的检验
触酶试验 血浆凝固酶试验
(1)触酶试验
方法：用接种环挑取细菌，置于洁净载玻 片上，滴加3％H2O2溶液1～2滴，观察结 果。
结果判断、解释和报告：于半分钟内产生 大量气泡，为触酶试验阳性，而不产生气 泡者为阴性。
(2)血浆凝固酶试验
方法：取未稀释的新鲜人血浆和生理盐水各1滴 分别滴于载玻片上，挑取待检葡萄球菌菌落少许， 分别与生理盐水和血浆混合，立即观察结果。此 法用于测定结合型凝固酶。
球菌检验
成都医学院 临床微生物学教研室
【目 的】
1．掌握常见病原性球菌的分离培养与鉴定 方法。
2．熟悉葡萄球菌、链球菌的菌落特点、 菌体形态及染色性。
【器 材】
接种环、培养箱、酒精灯、载玻片、显微镜 等
【试 剂】
1．培养基 普通琼脂平板（1个/人） 2．试剂 革兰染液、3％H2O2、人血浆、生
理盐水
【标 本】
金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄 球菌
草绿色链球菌
【方 法】
第一次
1．标本涂片染色镜检 观察三种葡萄球菌 的镜下形态、染色性。
2．接种与培养 接种三种葡萄球菌于普通 琼脂平板上；37℃ 18~24h
第二次
3.菌落形态观察 4.菌落涂片染色
病原性球菌的检验
病原性球菌的检验一、葡萄球菌属Staphylococcus⏹广泛存在于自然界，多数是不致病的腐物寄生菌。
⏹致病性葡萄球菌可引起化脓性炎症、败血症、食物中毒等。
分类与分型1）金黄色葡萄球菌(S. aureus)：多数致病。
（2）表皮葡萄球菌(S. epidermidis)：偶可致病。
（3）腐生葡萄球菌(S. saprophyticus)：不致病。
（4）致病性菌株能产生黄色或柠檬色素。
（5）多数金黄色葡萄球菌可被相应噬菌体裂解，表皮葡萄球菌不敏感。
金黄色葡萄球菌的致病性⏹用噬菌体可将金葡萄菌分为4群23个型。
⏹肠毒素型食物中毒由Ⅲ和Ⅳ群金葡萄菌引起，Ⅱ群菌对抗生素产生耐药性的速度比Ⅰ和Ⅳ群缓慢很多。
⏹造成医院感染严重流行的是Ⅰ群中的52、52A、80和81型菌株。
⏹引起疱疹性和剥脱性皮炎的菌株经常是Ⅱ群71型。
金黄色葡萄球菌的流行病学⏹作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。
因而，食品受其污染的机会很多。
金黄色葡萄球菌及其检验⏹革兰氏阳性球状，排列呈葡萄串状。
无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，个别形成荚膜。
致病性葡萄球菌（金黄色葡萄球菌）菌体较小、约0.5~1um., 普通0.4~1.2um。
培养及生化特性1.在普通培养基上生长良好（需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃、pH7.4 ，对营养要求不高，加少量葡萄糖或血液生长更旺盛。
），在麦康凯琼脂平板不生长。
2. 血平板上生长更佳，致病菌株β溶血3. 产生金黄色色素4. 高度耐盐: 可在7.5~15%NaCl肉汤中生长。
5. 分解葡、乳、麦、蔗糖，产酸不产气，触酶阳性，致病菌株能分解甘露醇。
6. 金黄色葡萄球菌能产生的毒素和酶（致病因素P149）1）溶血毒素2）杀白细胞素3）血浆凝固酶：区分葡萄球菌是否具有致病性的重要标志。
4）脱氧核糖核酸酶：5）肠毒素6）溶纤维蛋白酶7）透明质酸酶抗原性1. 多糖抗原：具有群特异性，存在于细胞壁，借此可分群。
病原性球菌的鉴定流程
病原性球菌的鉴定流程一、样本采集。
这是鉴定病原性球菌的第一步啦。
就像要找到小坏蛋，得先知道从哪儿找起。
那这个样本采集的地方可就多了去了。
如果怀疑是皮肤感染，就从感染的皮肤那块取点东西，可能是脓呀或者皮屑啥的。
要是呼吸道有问题，那痰液就是个重要的样本来源呢。
还有如果是泌尿系统的毛病，尿液就派上用场啦。
采集样本的时候呀，可得小心点，要是不小心污染了样本，那后面的鉴定可就不准了。
比如说采尿液的时候，要保证尿道口周围干净得很，不然混进去别的细菌，就乱套了。
二、直接镜检。
样本采好了，接下来就把样本放在显微镜下瞅瞅。
这就像是在人群里找那个特别的脸。
对于病原性球菌，我们可以用革兰氏染色法来处理样本。
经过染色之后，病原性球菌就会显出它的庐山真面目啦。
如果是革兰阳性球菌呢，染完色就会呈现出蓝紫色，像一颗颗紫宝石似的。
要是革兰阴性球菌呢，就是红色的啦。
这个时候我们就能初步判断是不是球菌，是阳性还是阴性的，这对后面进一步确定是哪种病原性球菌可重要着呢。
三、分离培养。
光在显微镜下看还不够呢，我们得把这些球菌单独培养出来，让它们自己长成小菌落。
就像把一群小朋友分开，让他们各自玩耍，这样我们就能更清楚地观察它们的特点啦。
不同的病原性球菌喜欢的生长环境还不太一样呢。
比如说葡萄球菌，在普通的琼脂培养基上就能长得很好，而且长得还挺快，就像一群小贪吃鬼，很容易就把培养基里的营养物质吃光光，然后长成一个个小菌落。
而链球菌呢，对生长环境就有点挑剔啦，可能需要在血液琼脂培养基上才能茁壮成长。
四、生化试验。
菌落长出来了，我们还得对它们进行更多的测试，这就是生化试验啦。
这个生化试验就像是给这些球菌出一道道小难题，看看它们怎么回答。
比如检测它们能不能发酵某些糖类，不同的病原性球菌发酵糖类的能力是不一样的。
葡萄球菌可能对葡萄糖发酵得很厉害，产生很多酸和气体，但是链球菌对葡萄糖的发酵就没那么猛啦。
还有检测它们是不是能产生一些特殊的酶，像血浆凝固酶，这可是葡萄球菌的一个重要标志呢。
病原性球菌的鉴定-精品医学课件
注意事项：1.溶液新鲜配制 2.不宜用血琼脂平板上的细菌。 3.做对照。
2.血浆凝固酶试验
原理：葡萄球菌可产生两种凝固酶：一种是结合凝固
酶，结合在细胞壁上，使血浆中的纤维蛋白原变成纤维 蛋白而附着于细菌表面，发生凝集，可用玻片法测出。 另一种是分泌至菌体外的游离凝固酶，作用类似凝血酶 原物质，可被血浆中的协同因子激活变为凝血酶原物质， 从而使血浆凝固，可用试管法测出。 应用：作为鉴定葡萄球菌致病性的重要指标，也是鉴别葡 萄球菌时常用的一个试验。
2.试管法：取3支10ml试管，各加0.5ml 4倍稀释的新鲜血 浆，在其中一支试管中加3-5个待检菌落，另两只试管 中分别加凝固酶阳性菌株和阴性菌株作对照，置37℃ 水浴中过夜，观察结果。此法用于检测游离型血浆凝 固酶。
凝固酶试验结果
3.甘露醇发酵试验
• 原理：致病性葡萄球菌多能发酵甘露醇产酸，使 培养基由紫色变为黄色。
（一）菌落特点、菌体形态及染色性 1.金黄色葡萄球菌
三、步骤和方法
（一）菌落特点、菌体形态及染色性
2.草链、乙链
3.肺炎链球菌
肺炎链球菌在血琼脂平板上菌落特征
4.肠球菌
（一）菌落特点、菌体形态及染色性
1.金黄色葡萄球菌
2.乙型链球菌
3.肠球菌
4.肺炎链球菌
• 革兰氏阳 性球菌鉴 定思路
18-24h。 结果：细菌生长，培养基变黑色为阳性，不变色为阴性。 应用：主要用于将肠球菌和D群链球菌与其它链球菌区别
开来。也可用于革兰阴性杆菌及厌氧菌的鉴别。
6. Optochin敏感试验（示教）
• 原理： Optochin可抑制肺炎链球菌的生长。 • 结果判定：抑菌圈直径≥14mm为阳性，反 之阴性。
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医学微生物学实验设计
姓名：***
学号：**********
班级：10级临床十一班
病原性球菌的鉴定
姚淑宝
（石河子大学医学院石河子832000）
摘要：球菌是细菌中的一大类，其中对人类有致病性的球菌包括分属葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属和奈瑟菌属的一些细菌。
本次实验设计以掌握病原性球菌的形态和培养特性，熟悉病原性球菌的分离和鉴定程序为目的。
对脓汁中的葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌进行鉴别。
一、鉴定思想
本次鉴定试验，先将脓汁标本直接镜检，再分离培养，观察镜下菌体的形态特征以及形成菌落的形态特征确定待测菌的菌属。
然后，对可疑菌落纯培养，通过不同生化反应对同一菌属中的不同细菌进行区别。
（具体见图1-1）
分离纯化
葡萄球菌属奈瑟菌属
血浆凝固酶试验胆汁溶菌试验麦芽糖发酵试验
二、鉴定方法
（一）直接镜检
将脓汁标本涂片进行革兰染色，然后在显微镜下观察细菌菌体的形态、排列、染色性并作出初步诊断。
葡萄球菌属：革兰染色阳性，球形，无芽胞、无鞭毛，呈葡萄串状排列。
链球菌属：革兰染色阳性，球形或椭圆形，无芽胞、无鞭毛，呈链状或成双排列。
肺炎链球菌具有荚膜双球的典型形态。
奈瑟菌属：革兰染色阴性，无芽胞、无鞭毛，常成双排列。
脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌大多于中性粒细胞内外分布。
通过直接镜检可以确定脓汁标本中细菌的菌属。
在确定菌属的基础下再对脓汁标本中的细菌分离纯化，然后挑取可以菌落通过再次涂片染色镜检、致病物质检查、生化反应、血清学鉴定等方法进行菌属内的区别。
（二）分离纯化
用分区划线法将脓汁中的细菌接种在血琼脂平板培养基或巧克力色培养基上并在5%二氧化碳、37℃的条件下培养18~48小时。
观察菌落的形态。
葡萄球菌属：在血平板上形成圆形凸起、表面光滑、润湿、边缘整齐、不透明的菌落。
形成金黄色、白色和柠檬色脂溶性色素，多数金黄色葡萄球菌菌落周围有β溶血现象。
链球菌属：在血平板上形成灰白色、圆形凸起、半透明或不半透明的细小菌落。
不同类群有不同的溶血现象，包括α、β、γ三种。
肺炎链球菌在血平板上形成灰白色、略扁平、半透明的细小菌落，菌落周围有α溶血现象。
培养时间超过48小时，菌落中央会出现脐状下陷。
奈瑟菌属：脑膜炎奈瑟菌在巧克力琼脂平板上，形成无色、圆形、凸起、光滑、透明似露滴状菌落，培养时间超过48小时常死亡。
淋病奈瑟菌在巧克力琼脂平板上培养48小时，形成灰白色、圆形、凸起、表面湿润有光泽的细小菌落。
通过在血平板上形成的菌落的不同，可以做出进一步诊断。
并可挑取可疑菌落再次镜检，无杂菌后进行纯培养再通过生化反应鉴别。
（三）生化反应
1、血浆凝固酶试验
血浆凝固酶是致病性葡萄球菌产生的，可使含有肝素或枸椽酸钠抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的酶类物质，是判断葡萄球菌致病性的最重要指标。
游离凝固酶用试管法检测，结合凝固酶用玻片法测试。
通过血浆凝固酶试验可以对葡萄球菌属的纯培养物做出鉴别。
【材料】
被测菌培养物；加抗凝剂的1:2稀释的人或兔血浆；载玻片、接种环、小试管等。
【方法】
试管法：在盛有血浆0.5ml的试管中，接种被测菌培养物，置于温箱内1~4小时后，观
察血浆状态。
流动性变差或出现凝固为阳性。
玻片法：去加抗凝的血浆滴于载玻片上，在血琼脂平板上取被测菌落与血浆混匀。
观察，如果出现乳白色颗粒即为试验阳性。
反之，均匀无颗粒者，为试验阴性。
【结果】
试验阳性说明可疑菌落为金黄色葡萄球菌菌落，试验阴性说明可疑菌落为白色葡萄球菌。
2、胆汁溶菌试验
胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌，可能是由于胆汁降低细胞膜表面的张力，使细胞膜破损或使菌体裂解；或者是由于胆汁加速了肺炎链球菌本身自溶过程，促使细菌发生自溶。
利用这一现象可以对链球菌属的纯培养物做出鉴别。
【材料】
10%去氧胆酸钠或纯牛胆汁、被测菌培养物；小试管、接种环等。
【方法】
平板法：取10％去氧胆酸钠溶液一接种环，滴加于被测菌的菌落上，置35℃30min后观察结果。
菌落消失为实验阳性，反之为阴性。
试管法：被测菌培养物2支，各0.9ml，分别加入l0％去氧胆酸钠溶液和生理盐水（对照管）0.1ml，摇匀后置35℃水浴10～30min，观察结果。
加胆盐的培养物变透明，而对照管仍混浊判为阳性。
【结果】
试验阳性说明被测菌为肺炎链球菌。
3、麦芽糖发酵试验
该实验通过将细菌标本接种于内含倒置小管的单糖发酵管中，用溴甲酚紫作指示剂，培养后观察发酵管内指示剂的颜色变化及倒置小管的产气情况，判断细菌对不同单糖分解利用能力。
大多数的脑膜炎奈瑟菌能分解利用麦芽糖产酸不产气而淋病奈瑟菌则不行，利用这一原理可以对奈瑟菌属的纯培养物进行鉴别。
【材料】
单糖发酵管（麦芽糖）、指示剂、被测菌培养物等。
【方法】
以无菌操作，用接种环移取被测菌培养物少许，接种于内含倒置小管的麦芽糖糖发酵管中，用溴甲酚紫作指示剂。
接种后，置36±1.0°C培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡。
【结果】
若麦芽糖发酵管中仍为紫色，表明细菌不分解该糖，试验阴性，被测菌为淋病奈瑟菌；若液体发酵管中液体变为黄色，表明细菌分解该糖，试验阳性，被测菌为脑膜炎奈瑟菌。
[参考文献]
1.李凡刘晶星. 医学微生物学. 第7版. 北京：人民卫生出版社，2012
2.吴万贵邢建新. 病原微生物学与免疫学实验教程. 石河子：石河子大学医学院病原生物学与免疫学教研室，2012。