大量制备单克隆抗体

抗CPV-2a单克隆抗体的制备
纯化的犬细小病毒(CPV)2a型分离株免疫Balb/c 小鼠,运用淋巴细
胞杂交瘤技术，间接 ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,采用有限稀释
法对阳性杂交瘤细胞进行3次亚克隆，得到4株稳定分泌单克隆抗体 的杂交瘤细胞，单抗细胞注射小鼠腹腔收集腹水；亚类鉴定试剂盒
确定单抗细胞亚类；测定收集小鼠腹水的抗体效价。
注射器抽取腹水， 得到大量单克隆抗体
腹水的杂交瘤细胞
Advantages


Disadvantages

可得到大量的腹水单抗
获的抗体浓度高 操作简便、经济

腹水中常混有小鼠的各种杂 蛋白（包括Ig），提纯困难 有污染动物病毒的危险 鼠源性单抗有抗原性，在人 体内产生人抗鼠抗体，降低 治疗效果又诱发变态反应

腹腔有自然吞噬作用，避免 组织污染造成的杂交瘤细胞 生长不良 腹腔本身为杂交瘤细胞良好 培养坏境，使其始终处于对 数生长期


体外诱生法 将杂交瘤细胞置于 培养瓶进行培养
一段时间
收集培养上清液
得到单克隆抗体
离心去除细胞及其碎片
Advantages

Disadvantages

减少鼠类动物疾病给产物带 来的污染 ; 避免鼠的其它抗体 的存在 过程可以工程化和自动控制 , 提高了重演性 可以采用单元操作法培养 , 随 着规模增大, 降低生产成本
化代谢 OPTICELL 培养系统过程、控制抗体表达周期、
促进抗体表达和转运、翻译后加工等方面取得了较大进
展
谢谢大家
单克隆抗体的大量制备
1 2 3
体内诱生法（IN ANIMALS） 体外诱生法（IN CELLS） 研究进展（RESEARCH PROGRESS）
体内诱生法
预处理：腹腔注射0.5ml液 态石蜡或降植烷 1~2周后
取Balb/c雌性 经产鼠若干只
接种10天左右 腹腔内接种1ml对数生长 期的杂交瘤细胞悬浮液
得到的单克隆抗体有限，不 能超过特定的细胞浓度
Fra Baidu bibliotek

每天要换培养液，且细胞对 剪切力和环境非常敏感
会积累有毒的代谢产物



血清培养干扰抗体活性，影 响抗体分离，增加成本
牛初乳免疫球蛋白IgG单克隆抗体的制备
利用标准 IgG蛋白作为免疫原，免疫 6周龄 Balb/c 雌性小鼠，运用
淋巴细胞杂交瘤技术，通过间接 ELISA法筛选，采用有限稀释法，经 过 3次克隆筛选，获得2株稳定分泌抗 IgG蛋白的杂交瘤细胞株，单抗 细胞注射小鼠腹腔收集腹水；亚类鉴定试剂盒确定单抗细胞亚类；测 定收集小鼠腹水的抗体效价。
体内诱生法
1 随着分子生物学的飞跃发展，人—鼠嵌合抗体、人源化 抗体、完全人源性单克隆抗体应运而生 2 嵌合单克隆抗体和由转基因小鼠、噬菌体展示技术、核 糖体展示技术及共价展示技术所制备的单克隆抗体取得 了激荡人心的丰硕成果
体外诱生法
1 细胞培养用生物反应器有很大的发展：空纤维固定术、
徽胶囊术、空气升液器、生物反应大量培养术、恒化器 培养、OPTICELL培养系统 2 细胞表达抗体的研究在抗细胞凋亡、促细胞增殖、优