正相色谱与反相
高效液相色谱法及其在药物分析中的应用
高效液相色谱法及其在药物分析中的应用以液体为流动相的色谱法称为液相色谱法。
用常压输送流动相的方法为经典液相色谱法，这种色谱法的柱效能低、分离周期长。
高效液相色谱法（highperformanceliquidchromatography，简称HPLC）是在经典液相色谱的基础上发展起来的一种色谱方法。
与经典的液相色谱法相比，高效液相色谱法具有下列主要优点：①应用了颗粒极细（一般为10µm以下）、规则均匀的固定相，传质阻抗小，柱效高，分离效率高；②采用高压输液泵输送流动相，流速快，一般试样的分析需数分钟，复杂试样分析在数十分钟内即可完成；③广泛使用了高灵敏检测器，大大提高了灵敏度。
目前，已经发展了多种不同的固定相，有多种不同的分离模式，使高效液相色谱法的应用范围不断扩大。
下面介绍高效液相色谱法的有关知识，新的方法和技术以及在药物分析中的应用。
一、分类高效液相色谱法按分离机理的不同可分为以下几类：（一）吸附色谱法（adsorptionchromatography）以吸附剂为固定相的色谱方法称为吸附色谱法。
使用最多的吸附色谱固定相是硅胶，流动相一般使用一种或多种有机溶剂的混合溶剂。
在吸附色谱中，不同的组分因和固定相吸附力的不同而被分离。
组分的极性越大、固定相的吸附力越强，则保留时间越长。
流动相的极性越大，洗脱力越强，则组分的保留时间越短。
（二）液-液分配色谱法（liquid-liquidchromatography)液-液分配色谱的固定相和流动相是互不相溶的两种溶剂，分离时，组分溶入两相，不同的组分因分配系数（K)的不同而被分离。
目前广泛使用的化学键合固定相是将固定液的官能团键合在载体上而制成的，使用化学键合固定相的色谱方法（简称键合相色谱法）可以用分配色谱的原理加以解释。
键合相色谱法在HPLC中占有极其重要的地位，是应用最广的色谱法。
按照固定相和流动相极性的不同，分配色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法两类。
正相色谱和反相色谱
正相色谱和反相色谱正相色谱（Normal Phase Chromatography）正相色谱是一种将物质分离的方法，是一种基于极性差异的液相色谱法。
所谓正相色谱，是因为在正相色谱柱中，填充物通常是一些极性较高的固体相，例如硅胶（silica gel）和氧化铝（alumina）等。
正相色谱柱可以分离无电荷的极性化合物，例如一些羟基化合物和醇类分子。
在正相色谱中，毒理学家可以分离和鉴定一些有机物。
反相色谱（Reverse Phase Chromatography）反相色谱是一种将物质分离的方法，是一种基于亲疏水性质差异的液相色谱法。
所谓反相色谱，是因为在反相色谱柱中，填充物通常是由一个疏水的固体相组成，例如碳颗粒、聚合物等。
反相色谱柱可以分离各种极性分子，例如对有机药物、蛋白质、核酸等进行分离和纯化。
毒理学家可以使用反相色谱技术进行药物开发和毒性评估。
正相色谱和反相色谱之间的不同在正相色谱中，爱保者可以利用样品和固相之间的极性差异来分离和纯化物质。
正相色谱通常用于分离和纯化极性药物和天然产物，如氨基酸，多肽和糖。
在反相色谱中，爱保者利用样品和固相之间的非极性差异来分离和纯化化合物。
反相色谱通常用于分离和纯化疏水药物和天然产物，如脂肪酸，核酸和激素。
正相色谱和反相色谱在毒理学中的应用正相色谱和反相色谱都广泛应用于毒理学，尤其是药物开发和毒性评估。
毒理学家可以利用这些技术来分离和纯化化合物。
毒理学家应用表面增强拉曼光谱（surface-enhanced Raman spectroscopy，SERS）联用反相色谱分离和纯化天然产物，从而破解其分子结构。
结论正相色谱和反相色谱是两种最常用的色谱技术之一，它们是一种高效的分离和纯化化合物的方法。
在毒理学研究和药物开发中，正相色谱和反相色谱可广泛应用。
我们期待在今后研究中看到更多正相色谱和反相色谱的应用，以便更好地了解各种疾病和药物与人体的相互作用。
亲水作用(Hilic)色谱简介,以及和正相色谱相、反相色谱比较
亲水作用（H i l i c）色谱，有时被称为“含水正相色谱”，有时又被称为“反反相色谱”，简单来说，是极性的固定相和极性的流动相组成，参考表1，在固定相方面，看似和正相色谱一样，那么，同一款色谱柱是否既可以用于正相色谱，又可以用于H i l i c色谱？在流动相方面，和反相色谱接近，那两种模式保留行为和流动相对保留的影响规律有什么差异？你对H i l i c色谱是否也疑惑重重？接下来让我们一起揭开亲水作用（H i l i c）色谱的神秘面纱吧。
表1 反相、正相、Hilic色谱对比一、Hilic简介1.1流动相在大多数的Hilic分离中，采用的流动相为含有少量水/缓冲液与有机相混合（典型的是乙腈），水的比例为3%-40%之间。
水的比例不低于3%是由于Hilic色谱的保留机理决定的，普遍认为Hilic色谱流动相中的水会被吸附到极性固定相的表面形成水膜，然后分析物在水膜和流动相之间进行液液分配作用，加上极性官能团和固定相之间的氢键作用力，离子官能团之间的静电作用力等，实现被分析物的保留。
水膜的作用非常重要，所以Hilic流动相中至少含有3%的水。
当水的比例大于40%时，保留一般很弱（k≈0）。
1.2固定相应用于Hilic色谱的固定相有：纯硅胶柱、氨基柱、二醇基柱、酰胺基柱等。
纯硅胶柱有固定相不易流失的优点，在使用CAD、ELSD和LC-MS检测器时，最受欢迎；氨基柱，在Hilic 色谱中的应用，特别适合碳水化合物（糖类）分离；二醇基柱，亲水性很好，可以提供不同的选择性。
二、Hilic和正相色谱相比2.1固定相的区别同样是Silica，NH2，Diol柱，与用于正相色谱中的色谱柱不同，专为Hilic色谱设计的色谱柱，可以用于水/有机物的流动相中，换句话说，Hilic色谱对固定相的耐水性要求更高，否则会因固定相的水解，出现基线噪音大、色谱柱寿命短等问题。
所以用于正相色谱中的色谱柱，不一定能用于Hilic色谱。
反相色谱切换为正相色谱操作步骤
反相色谱切换为正相色谱操作步骤
a先将色谱柱用相应的溶剂冲洗干净，然后将色谱柱拆下来密封保存。
用双通将进样器与检测器连接。
b将贮液瓶内装入300ml的二次蒸馏水，将流速渐次提高到2.0ml/min冲洗系统1.5小时。
注意观查泵压。
c将流速渐次降到0ml/min，把二次蒸馏水更换为甲醇（HPLC），将流速渐次提高到2.0ml/min冲洗系统1小时。
d用相同的方法将甲醇依次更改为异丙醇、四氢呋喃（HPLC），冲洗系统各1小时。
e最后将四氢呋喃更换为预先配制好的流动相：异丙醇/正己烷＝15/85（V/V）混合液冲洗系统1小时(根据不同样品更换不同的流动相)。
同时将柱塞杆清洗系统内的10％异丙醇换为流动相，保持每分钟50-60滴的速度清洗柱塞杆。
然后将双通更换为Si60 250mm*4.6mm*5um色谱柱，待色谱柱平衡好以后分析样品。
正相色谱一定要确保系统内无水。
品管科
傅忠
2006-7-2。
反相色谱
反相色谱资料reversed phase chromatography 根据流动相和固定相相对极性不同，液相色谱分为正相色谱和反相色谱。
流动相极性大于固定相极性的情况，称为反相色谱。
非极性键合相色谱可作反相色谱。
反相色谱法是以表面非极性载体为固定相，面以比固定相极性强的溶剂为流动相的一种液相色谱分离模式．反相色谱固定相大多是硅胶表面键合疏水基团，基于样品中的不同组分和疏水基团之间疏水作用的不同而分离．亲核试剂的亲和能力。
如F阴离子、Cl阴离子、Br阴离子、I阴离子的碱性依次递减；在非质子溶剂中，F阴离子、Cl阴离子、Br阴离子、I阴离子的亲核能力递减；然而在质子性溶剂中却递增。
1、吸光度。
乙腈HPLC级的小.。
乙腈和甲醇的市销HPLC级和优级的吸收光谱中，乙腈HPLC吸收最小（特别是在短波长上小）。
所谓HPLC级是除去具有吸收UV的杂质，在规定的波长上吸光度限制在规格值以内。
在UV检测时，产生的噪声小，因此在进行UV短波长上的高灵敏度分析时乙腈HPLC级最适宜。
另外，在UV检测中的梯度基线上也是乙腈HPLC级产生鬼峰少，虽然，其他与水相溶性高的有机溶剂有各种各样，但很难能找到比乙腈HPLC级吸收更小的。
另外，甲醇的HPLC级和优级，虽然所得的光谱相差不大，但是优级不能保证吸光度，有可能产生偏差，价格也相差不大，所以尽量使用HPLC 级。
5、峰形。
用时出现差异。
像水杨酸化合物（在邻位上具有羧基或甲氧基的苯酚化合物）等，用乙腈类时拖尾大，用甲醇类可抑制。
可是，一般情况下，聚合物类反相柱，与硅胶柱相比，更具有峰形宽的倾向，特别是用聚苯乙烯分析柱芳香族化合物等时常见。
这在流动相是甲醇时非常显著，而用乙腈时不明显。
为此，用聚合物类反相用柱时建议采用后者（乙腈类），这是因为乙腈使凝胶膨润。
正相色谱vs反相色谱
正相色谱vs反相色谱点击次数：986 发布时间：2009-11-9现代高效液相色谱中,分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择.但是色谱填料的选择范围很宽,要做合适的选择,必须对此有一定的认识和了解.1,正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica),以及其他具有极性官能团,如胺基团 (NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料.由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他团的极性较强,因此,分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小,即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱. 正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如:正乙烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等.2,反相色谱反相色谱填料常是以硅胶为基础,表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相. 反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水,缓冲液与甲醇,已腈等混合物. 样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出,而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留. 常用的反相填料有C18(ODS),C8(MOS),C4(B),C6H5(Phenyl)等.二,聚合物填料聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,其主要优点是在PH值为1～ 14均可使用. 相对与硅胶基质的C18填料,这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效. 现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料,色谱柱柱效较低. 三,其他无机填料其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化.由于其特殊的性质,一般仅限于特殊的用途.如石墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料.这种填料的分离不同与硅胶基质烷基键合相,石墨化碳的表面即是保留的基础,不再需其它的表面改性,该柱填料一般比烷基键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强,石墨化碳可用于分离某些几何导构体,又由于HPLC流动相中不会被溶解,这类柱可在任何PH与温度下使用.氧化铝也可用于HPLC, 氧化铝微粒刚性强,可制成稳定的色谱柱柱床,其优点是可在PH高达12的流动相中使用. 但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强,应用范围受到一定的限制,所以未能广泛应用, 新型氧化锆填料也可用于HPLC,商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱,应用PH范围1～14,温度可达100℃.由于氧化锆填料几年才开始研究,加之面临的实验难度,其重要用途与优势尚在进行中.怎样选择填料粒度目前,商品化的色谱料粒度从1um到超过30um均有销售,而目前分析分离主要用3um, 5um和10um填料,填料的粒度主要影响填充柱的两个参数,即柱效和背压.粒度越小,填充柱的柱效越高;小于3um的填料应用,在相同选择性条件下,提高柱效可提高分离度, 但不是唯一的因素.如果固定相选择是正确,但是分离度不够,那么选择更小粒度的填料是很有用的,3um填料填充柱的柱数比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%;然而, 3um的色相谱的背压却是5um的2倍.与此同时,柱效提高意味着在相同条件下可以选择更短的色谱柱,以缩短分析时间,另外,可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度,比如用乙腈代替甲醇,以降低色谱柱的压力.如何选择液相色谱仪发布日期：[2009-10-30] 共阅[241]次如何选择液相色谱仪一台品质优良的液相色谱系统应从以下几个方面考虑：一．主要技术指标优异首先是如何看指标。
高效液相色谱法的分类及原理
高效液相色谱法的分类及其分离原理高效液相色谱法分为：液-固色谱法、液-液色谱法、离子交换色谱法、凝胶色谱法。
1.液-固色谱法（液-固吸附色谱法）固定相是固体吸附剂，它是根据物质在固定相上的吸附作用不同来进行分配的。
①液-固色谱法的作用机制吸附剂：一些多孔的固体颗粒物质，其表面常存在分散的吸附中心点。
流动相中的溶质分子X（液相）被流动相S带入色谱柱后，在随载液流动的过程中，发生如下交换反应：X（液相）+nS（吸附）<==>X（吸附）+nS（液相）其作用机制是溶质分子X（液相）和溶剂分子S（液相）对吸附剂活性表面的竞争吸附。
吸附反应的平衡常数K为：K值较小：溶剂分子吸附力很强，被吸附的溶质分子很少，先流出色谱柱。
K值较大：表示该组分分子的吸附能力较强，后流出色谱柱。
发生在吸附剂表面上的吸附-解吸平衡，就是液-固色谱分离的基础。
②液-固色谱法的吸附剂和流动相常用的液-固色谱吸附剂：薄膜型硅胶、全多孔型硅胶、薄膜型氧化铝、全多孔型氧化铝、分子筛、聚酰胺等。
一般规律：对于固定相而言，非极性分子与极性吸附剂（如硅胶、氧化铜）之间的作用力很弱，分配比k较小，保留时间较短；但极性分子与极性吸附剂之间的作用力很强，分配比k大，保留时间长。
对流动相的基本要求：试样要能够溶于流动相中流动相粘度较小流动相不能影响试样的检测常用的流动相：甲醇、乙醚、苯、乙腈、乙酸乙酯、吡啶等。
③液-固色谱法的应用常用于分离极性不同的化合物、含有不同类型或不；数量官能团的有机化合物，以及有机化合物的不同的异构体；但液-固色谱法不宜用于分离同系物，因为液-固色谱对不同相对分子质量的同系物选择性不高。
2.液-液色谱法（液-液分配色谱法）将液体固定液涂渍在担体上作为固定相。
①液-液色谱法的作用机制溶质在两相间进行分配时，在固定液中溶解度较小的组分较难进入固定液，在色谱柱中向前迁移速度较快；在固定液中溶解度较大的组分容易进入固定液，在色谱柱中向前迁移速度较慢，从而达到分离的目的。
反相色谱柱
反相色谱柱
反相色谱柱（Reverse Phase Chromatography Column）就是指交换相相反的色谱柱，它与正相色谱柱最大的不同就是其固定相成分是疏水性的，相比之下，正相色谱柱的固定相成分是亲水性的。
反相色谱柱能够在样品分离中提供更高的选择性和特异性，因此在生化、医学或化学领域的样品分离中都得到了广泛的应用。
反相柱的工作原理
反相柱的固定相为一种亲油类材料，如碳氢化合物、疏水性聚合物等，通过与移动相中的亲水类化合物发生静电交换而实现手段分离。
由于反相色谱柱的固定相是疏水材料，因此它可以随着溶剂极性的变化而改变样品吸附和洗脱的性质。
反相柱的应用
反相柱在生物学、医学、化学和食品领域中应用广泛，是鉴别和分离化合物的最基本技术之一。
在生物学领域，反相柱用于分离复杂的蛋白质混合物，如血清等，在制药工业中，反相色谱柱被广泛应用于分离和纯化药物，如抗癌药物、抗生素等。
在食品分析中，反相柱用于分离和分析带有不同疏水性的化合物，如蛋白质、糖类和脂质。
反相柱的优点和缺点
反相色谱柱操作简单，效率高，分离效果好，可以分离各种极性的化合物。
与正相色谱柱相比，反相柱选择性更高。
但是它并不适用于极性很高的物质，如乙醇等，同时还需要注意的是它对于多肽和糖类等高8极性物质分离效果较差，因此在使用反相柱进行样品分离时，需要根据具体的样品特性选择合适的柱型。
总之，反相色谱柱作为一种重要的色谱柱类型，已经成为分离、分析和纯化化合物的著名分析技术，为科学界和工业界提供了不少便利，然而也需要我们在使用过程中切记仔细细致地进行操作，以获得更好的分离效果。
正相色谱法
正相色谱法正相色谱法流动相极性小于固定相。
在正相色谱中固定相是极性填料（如含水硅胶），而流动性是非极性或弱极性的溶剂（如烷烃）。
因此，样本中极性小的先流出，极性大的后流出，正相色谱法适于分析极性化合物。
反向色谱法反向色谱法流动相极性大与固定相，极性大的组分先流出色谱柱，极性小的后流出，适用于分析非极性化合物。
典型的反向键和相色谱是再ODS柱上，采用甲醇-水或乙腈-水作流动相，分离非极性或中等极性的化合物等。
反相键合相的意思是固定相的极性小于流动相的极性，固定相一般都是极性较小的键合相，根据相似相溶的原理，此类固定相对极性较小或非极性物质具有较好的保留，随着流动相极性的改变，各物质由于极性的差异而得到分离，而极性较大的物质在极性较大的流动相的冲洗下，溶与其中，很快流出色谱柱，不能得到较好分离。
毛细管开管柱：是在毛细管中完成电色谱分离分析的最简单形式。
毛细管具塞式填充柱：在CEC中最常用的柱。
填充柱较开管柱有更高的保留和柱容量。
现也采用混合模式的固定相，如强阳离子交换剂（SCX）或强阴离子交换剂（SAX）与反相固定相混合用于填充。
填充材料用于CEC填充材料最重要的特征是它必须带电以支持电渗流，同时它必须具有保留性质。
常规的硅基材料的主要缺点是电渗流依赖于流动相的pH，为了避免这种依赖关系，熔融毛细管填充阳离子或阴离子交换固定相已用于CEC 中。
SCX型材料含有磺酸基，用于在表面产生负电荷。
毛细管电色谱整体柱毛细管电色谱整体柱在CEC中已经引起相当重视。
通过原位聚合或熔凝在毛细管中形成的连续、整体、多孔的固定床层避免了塞子的制备，在CEC中的优越性是显然的。
按配置方法不同可以分为三类：聚合物连续床层电色谱柱、二氧化硅连续床层电色谱柱和以填充柱为基础的连续床层电色谱柱。
聚合物连续床层电色谱柱的制备通常是先配置单体、交联剂、造孔剂、电渗流产生剂、引发剂等化合物的混合溶液，再将溶液注入毛细管中，在适当条件下反应形成聚合物连续床层。
液相正反相
所谓正相，就是固定相极性大于流动相极性；反相，就是固定相极性小于流动相极性。
对于气相色谱来说，基本都是正相体系。
因为载气都是氮气之类的非极性物质。
对于液相，才有正相反相一说。
如C18柱一般极性小于常用的甲醇水等流动相的极性，故称为为反相体系，反相体系在液相里应用比较多。
如果是硅胶柱，采用正己烷之类的做流动相，固定相极性大于流动相极性，那就是正相体系。
正相和反相的区别主要指是填料(固定相)的不同。
正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。
1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。
2、反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。
反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。
反相与正相色谱法有什么区别
反相还是正相，是根据流动相相对于固定相的极性而言的。
流动相极性强于固定相的，称作反相色谱；流动相极性弱于固定相的，称作正相色谱。
反相色谱流动相的极性强，容易带着极性分子走，而留下非极性分子。
这主要用于非极性样品的分离。
正相色谱固定相极性强，容易把极性分子留下，故主要用于极性样品的分离。
如离子色谱。
实际应用好像没有太注意正相还是反相，倒是都很注意柱子能承受什么样极性的物质。
反相液相色谱柱不可以用强极性的纯水，都是要加入至少5%的有机溶剂来弱化水的极性。
正相的离子色谱柱则坚决不可以进入有机物质。
但是气相色谱实际也是一种正相色谱，却往往要求不可以有水进入。
高效液相色谱的正相与反相区分方式如下：
正相色谱：固定相极性大于流动相极性；反相色谱：固定相极性小于流动相极性。
高效液相色谱法又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
正相柱和反相柱的溶剂
正相柱和反相柱的溶剂
正相柱和反相柱在色谱层析中使用的溶剂是不同的。
在正相柱中，溶剂一般是非极性溶剂，如正己烷、二氯甲烷等。
这是因为正相柱是基于亲水性的分离原理，样品在正相柱上会与固定相之间的极性相互作用。
因此，需要使用非极性溶剂来提供足够的流动相极性，以促进样品在正相柱上的分离。
而在反相柱中，溶剂一般是极性溶剂，如乙腈、甲醇等。
这是因为反相柱是基于疏水性的分离原理，样品在反相柱上会与固定相之间的疏水相互作用。
因此，需要使用极性溶剂来提供足够的流动相极性，以促进样品在反相柱上的分离。
需要根据具体的分析对象和分析目的来选择合适的正相柱和反相柱，并确定适当的溶剂组合。
何谓化学键合相色谱,正相色谱和反相色谱
化学键合相色谱是一种分析化学方法，它利用化学键合相作为固定相，通过化学键合相与样品分子之间的化学作用来实现分离。
化学键合相色谱分为正相色谱和反相色谱两种类型。
正相色谱中，固定相是极性的，而流动相是非极性的，样品分子在固相和流动相之间根据极性差异进行分离。
反相色谱与之相反，固定相是非极性的，而流动相是极性的，样品分子根据溶解度差异进行分离。
1. 化学键合相色谱的定义化学键合相色谱是一种以化学键合相为固定相的色谱分离技术。
化学键合相是一种将固定相与填料表面通过化学键结合的材料，它能够提供更高的稳定性和选择性，并且适用于更广泛的分析对象。
化学键合相能够与样品分子进行特定的化学作用，从而实现样品分离。
2. 正相色谱正相色谱的固定相是极性的，如硅胶或乙醇胺等，而流动相是非极性的溶剂，例如正己烷或甲醇等。
在正相色谱中，样品分子根据其极性差异在固定相和流动相之间进行分离。
极性分子与固定相的作用力较强，因此在固定相中停留时间较长，而非极性分子则停留时间较短。
3. 反相色谱反相色谱的固定相是非极性的，如碳链或苯基等，而流动相是极性的溶剂，例如水或乙腈等。
在反相色谱中，样品分子根据其在固定相和流动相中的溶解度差异进行分离。
溶解度较大的分子在固定相中停留时间较长，而溶解度较小的分子则停留时间较短。
4. 化学键合相色谱的应用化学键合相色谱广泛应用于生物化学、药学、食品安全等领域。
正相色谱常用于酚类、羟基化合物、酮类等极性化合物的分离，反相色谱则常用于脂溶性化合物、脂肪族化合物的分离。
由于化学键合相色谱能够提供更高的选择性和分辨率，因此在复杂样品分析中具有较大的优势。
5. 化学键合相色谱的发展随着化学分析技术的不断发展，化学键合相色谱也在不断完善和创新。
新型的化学键合相材料和方法的引入，使化学键合相色谱具有更广泛的适用性和更高的分析效率。
未来，化学键合相色谱将会在更多领域得到应用，并且成为分析化学中不可或缺的重要方法之一。
正相色谱和反相色谱的英文
正相色谱和反相色谱的英文全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：IntroductionChromatography is a widely used technique in the field of chemistry for separating and analyzing mixtures of chemicals. Two of the most common types of chromatography are reverse phase chromatography and normal phase chromatography. In this article, we will discuss the principles and applications of these two techniques.第二篇示例：Reverse phase chromatography (RPC) and normal phase chromatography (NPC) are two common techniques used in chromatography for the separation and analysis of compounds. Both methods involve the use of a stationary phase and a mobile phase to separate compounds based on their interactions with the stationary phase.第三篇示例：Normal phase chromatography and reversed-phase chromatography are two commonly used techniques in the field of chromatography. Both techniques involve the separation of components in a sample based on their interactions with a stationary phase and a mobile phase. In this article, we will discuss the principles, differences, and applications of these two chromatographic techniques.第四篇示例：The choice between normal phase and reverse phase chromatography depends on the physicochemical properties of the compounds to be separated. In general, non-polar compounds are better separated using reverse phase chromatography, while polar compounds are better separated using normal phase chromatography. However, there are exceptions to this rule, and the choice of chromatography type should be based on the specific characteristics of the compounds under investigation.。
仪器分析名词解释解答
1．色谱分离度：相邻两组分在色谱柱内分离效能的指标，定义为相邻两色谱峰保留值之差与两组分色谱峰缝底宽度之和一半的比值2．死体积：色谱柱在填充后柱内固定相颗粒间所剩留的空间、色谱仪中管路和连接头间的空间以及检测器的空间总和。
3．程序升温：按一定的加热速率，温度做线性或非线性上升。
4．梯度洗脱：又称为梯度淋洗或程序洗脱。
在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。
5．极限扩散电流6．指示电极：电极电位与被测离子活度有关，又称待测离子电极或工作电极。
7．半波电位：扩散电流等于极限扩散电流一半时的汞电极的电位。
8．浓差极化：电解时，电极表面因浓度变化引起的极化现象。
9．生色团 ;在饱和碳氢化合物中引入含ה键的不饱和基团，将这种化合物的最大吸收峰波长移至紫外及可见光范围内，这种基团叫生色团10．助色团：含有n电子的能使吸收峰波长向长波方向移动的杂原子基团。
11．化学位移：由屏蔽作用引起的共振时磁感应强度的移动现象。
12．锐线光源：能发射出谱线半宽度很窄的发射线光源。
13．基团频率：同一类型的化学基团，在红外光谱中的吸收频率总是出现在一个较窄的范围内，这种吸收谱带的频率称为基团频率14．贫然火焰：火焰温度低，助燃气量大于化学计算量，氧化性火焰。
15．富燃火焰：燃气量大于化学计算量，还原性火焰。
16．基态：原子核外电子离核较近的处于最低能量状态17．激发态：当原子获得足够的能量后，就会使外层电子从低能级跃迁至高能级，这种状态称为激发态。
18．激发电位：原子的外层电子由低能级激发到高能级时所需要的能量称为激发电位。
19．电离电位：使原子电离所需要的最低能量称为电离电位。
20．离子线：离子外层电子跃迁时发射的谱线称为离子线。
21．共振线：由激发态向基态跃迁所发射的谱线。
共振线具有最小的激发电位，为该元素最强的谱线。
22．灵敏线、由较低级的激发态（第一激发态）直接跃迁至基态的谱线称为第一共振线，一般也是元素的最灵敏线。
正相色谱和反相色谱
正相色谱和反相色谱引言正相色谱和反相色谱是两种常用的液相色谱技术，被广泛应用于分析化学、生物化学以及制药等领域。
这两种技术在色谱柱填料和流动相的选择上存在着反向的原理，因此在分离和分析样品时具有不同的特点和优势。
本文将详细介绍正相色谱和反相色谱的原理、应用和比较。
一、正相色谱的原理与应用1. 原理正相色谱是一种以极性填料和非极性流动相进行的色谱技术。
在正相色谱柱中，填料通常是由含有阳离子基团（如羟基、氨基等）的材料组成，这些填料具有较高的极性。
而流动相则是一种非极性溶剂，如烷烃或醚类溶剂。
样品分子在正相色谱柱中通过与填料表面的相互作用来分离。
在非极性流动相的作用下，样品中的较极性分子将与填料表面发生相互作用，滞留时间较长，而较非极性分子则滞留时间较短。
2. 应用正相色谱主要应用于分离和定量分析极性化合物。
由于填料的选择通常是具有阳离子基团的材料，因此它们能与极性化合物发生相互作用，从而实现其分离。
正相色谱在分析生物样品中的极性分子（如氨基酸、核苷酸等）以及天然产物中的极性成分具有广泛的应用。
二、反相色谱的原理与应用1. 原理反相色谱是一种以非极性填料和极性流动相进行的色谱技术。
在反相色谱柱中，填料通常是由疏水性材料组成，如碳链或含有碳链的硅胶材料。
而流动相则是一种极性溶剂，如水-有机溶剂混合物。
样品分子在反相色谱柱中通过与填料表面的相互作用来分离。
在极性流动相的作用下，样品中的非极性分子将与填料表面发生相互作用，滞留时间较长，而极性分子则滞留时间较短。
2. 应用反相色谱广泛应用于定性和定量分析非极性化合物。
由于填料的选择通常是疏水性材料，因此它们能与非极性化合物发生相互作用，实现其分离和分析。
反相色谱在分析药物、农药、环境样品以及石油化工中的非极性化合物具有重要的应用。
三、正相色谱与反相色谱的比较1. 原理对比正相色谱和反相色谱的原理正好相反，在色谱柱填料和流动相的选择上存在着反向的原则。
正相色谱中采用极性填料和非极性流动相，而反相色谱则相反。
液相相关
一、正相色谱：固定相极性大于流动相极性反相色谱：固定相极性小于流动相极性，洗脱顺序取决于溶质分子的疏水性，疏水性强的保留时间长！在正相色谱体系中组分的出峰次序为：极性弱的组分，在流动相中溶解度较大，因此k值小，先出峰。
极性强的组分，在固定相中的溶解度较大，因此k值大，后出峰。
在反相色谱中组分的出峰次序为：极性弱的组分在固定相上的溶解度大，k值大，后出峰，相反极性强的组分在流动相中溶解度大，k值小，所以先出峰。
流动相的比例，是有根据的。
主要看你流动相的组成成分，一般来说，如果要分离的成分出峰时间较快，那么流动相中有机相就相对要少！总之只要能使样品峰的分离度（大于1.5）、理论塔板数(根据实际情况而定)、峰拖尾因子(0.95~1.05之间)达到要求的比例就行。
建议朋友有问题，可到分析测试百科网去提问，基本上问题都能得到解答，百度上搜下就有。
流动相用0.45μm微孔滤膜过滤后超声脱气15min，标准品是纯溶液的话不需要过滤，待测样品为生物样品是需要经过处理的（沉淀蛋白，萃取，高速离心），离心之后取上清液直接进样，不能过滤HPLC 的流动相的选择要看你使用的色谱柱固定相的种类，如果用C18等非极性键合相的色谱柱，流动相需要选定极性的例如甲醇、乙腈、水等；如果选用的硅胶或者二醇基等极性键合相的色谱柱，则需要选择非极性的流动相，例如正己烷、正庚烷等等；8 流动相为什么要预先脱气?常用的脱气方法有哪几种?解流动相中溶解气体存在以下几个方面的害处，气泡进入检测器，引起光吸收成电信号的变化，基线突然跳动，干扰检测;溶解在溶剂中的气体进入色谱柱时，可能与流动相或固定相发生化学反应;溶解气体还会引起某些样品的氧化降解.对分离和分析结果带来误差。
因此，使用前必须进行脱气处理。
常用的脱气法有以下几种：(1)加热脱气法;(2)抽吸脱气法;(3)吹氦脱气法;(4)超声波振荡脱气法。
9 按固定相孔径大小分类，液相色谱固定相有哪几类?各有什么特性及适用范围?解从固定相的孔隙深度考虑，液相色谱固定相分为表面多孔型(薄壳型)和全多孔型(全孔型)两类。
正相溶剂和反相溶剂
正相溶剂和反相溶剂
正相溶剂和反相溶剂是指在色谱分析中常用的两种不同极性的溶剂。
正相溶剂通常是极性较强，如水、乙醇等，而反相溶剂则是非极性或极性较弱，如正己烷、丙酮等。
在色谱分析中，正相色谱（RP）通常使用正相溶剂作为流动相，而反相色谱（RP）则使用反相溶剂。
正相色谱主要用于
分离极性化合物，而反相色谱则用于分离非极性化合物。
正相溶剂在色谱分离中能够与被分离物分子形成氢键、离子键等极性相互作用，因此具有极强的极性。
正相溶剂常用于分离亲水性小分子化合物和生命分子（如核苷酸、氨基酸、肽等）。
反相溶剂中则缺乏极性基团，与样品分子之间没有强烈的极性相互作用。
因此，对非极性分子分离效果较好。
反相溶剂中的亲疏水性相互作用主要是由游离电子对和分子间静电力等相互作用形成的。
总体而言，色谱分析中使用正相或反相溶剂要根据样品的性质来选择。
正相溶剂适用于一些亲水性小分子化合物和生命分子，而反相溶剂则适用于非极性化合物。
在选择溶剂时需根据样品的性质、试剂响应和分离效果进行考虑。
正相液相色谱
正相液相色谱
正相液相色谱（normal phase liquid chromatography）是一种常用的色谱分析技术。
它主要基于不同物质在正相液相中的亲疏水性差异进行分离和定量。
在正相液相色谱中，固定相一般选用极性较高的材料，如硅胶或氧化铝等，而移动相则选用极性较低的溶剂，如正己烷或甲苯等。
正相液相色谱的分离原理是通过样品中各组分与固定相之间的相互作用来实现的。
在正相液相色谱中，极性物质会更加亲附在固定相上，移动速度较慢；而非极性物质则不易与固定相发生相互作用，移动速度较快。
通过调节移动相组成或固定相的性质，可以实现对不同样品中各组分的选择性分离。
正相液相色谱广泛应用于有机物的分离和分析，特别适用于极性化合物、天然产物和药物等的分离。
它具有操作简便、分离效果好、分析速度快等优点，被广泛应用于化学、生物、医药等领域中的分析和质量控制工作中。
需要注意的是，正相液相色谱与反相液相色谱（reversed phase liquid chromatography）是两种不同的色谱技术。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
正相色谱
液-液色谱有正相和反相之分。
如果采用极性固定相和相对非极性流动相，就称为正相；如果采用相对非极性固定相和极性流动相，则称为反相。
由于极性化合物更容易被极性固定相所保留，所以正相液-液色谱系统一般可用于分离极性化合物。
相反，反相液-液色谱系统一般可用于分离非极性或弱极性化合物。
正相色谱的流出顺序是极性小的先流出，极性大的后流出；反相色谱的流出顺序正好相反。
另外，其他有些色谱如柱色谱也有正反相之分。
正反相色谱区别：
色谱柱的安装：
1、首先应确认柱和仪器的接头以及管路是否匹配。
为减少死体积，进样阀、柱子、检测器之间的连接管路内径尽可能使用内径较小的管线，同时控制进样器、色谱柱和检测器之间连接管线的长度。
安装色谱柱之前，确认流路系统中的溶剂是否正常。
对分析较复杂的样品建议安装保护柱。
2、为了使色谱柱与仪器系统达最佳的连接效果，应尽量使用与色谱柱接口相匹配的螺帽和锥形接头，如原来的接头长期匹配其他类型的色谱柱，建议在连接新色谱柱前应检查匹配情况，避免造成色谱柱的损坏或因色谱柱不匹配造成的漏液。
3、使用PEEK 材料的通用接头，只需用手拧紧不需要特定扳手，使用压力为5000psi；使用温度不得超过100℃。
流动相平衡：
1、在进行样品检测前，至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。
流动相一定要使用色谱级别的溶剂。
如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避免细菌产生。
2、流动相使用前需用微孔滤膜过滤,消除流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。
缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避免溶解度变化造成产生新的沉淀。
不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱，以免柱性能损坏（添加5％的有机溶剂冲洗色谱柱，同时可以达到对缓冲盐清洗的作用。
还可以使色谱柱更容易平衡）。
3、流动相需脱气后使用，可避免因气泡导致的泵和检测器的工作不正常。
如果测试时使用的流动相与色谱柱保存使用的流动相有较大区别，应该使用过度分布的形式进行平衡。
避免由于流动相的突然变化造成柱压增加过大或流动相缓冲盐结晶造成对色谱柱和仪器系统的损坏。
正相色谱柱比反相色谱柱需要更长的平衡时间。
样品制备与操作：
1、样品应当尽可能溶解在能与流动相相互溶的溶剂中。
除特殊指明外，如使用强溶剂溶解样品柱子的分辨率将可能降低。
2、样品溶液在进样前应使用针头式过滤器对样品预先过滤。
频繁改变流动相组成，会加速降低柱效。
3、色谱柱由高压匀浆法装填，能承受较高压力。
为获得最佳分离效果，使用时请不要超过200kgf，而且避免压力突然上升或变化，否则会造成硅胶填料的破坏，减少色谱柱的使用寿命。
除特殊要求外最高操作温度不要超过60℃。
保存色谱柱：
1、如果流动相含有酸或无机盐，应当先用去离子水（20倍柱体积）冲洗干净。
然后用用100％乙腈或甲醇保存色谱柱。
最后用柱子的接头密封，并放在稳定的环境中存放。
2、应避免色谱柱受到直接的机械冲击或摔落，避免造成色谱柱性能的降低。
色谱柱的再生：
1、用相当于20倍柱体积的溶剂按下列顺序冲洗柱子，建议按柱子的箭头方向冲洗，尽可能不反冲：冲洗时使用的的参考溶剂顺序是水、甲醇、氯仿、异丙醇、甲醇。