确定小鼠动情周期的三种方法
动情期和动情间期雌性小鼠GR和TH的免疫活性及血清CORT水平的比较
动情期和动情间期雌性小鼠GR和TH的免疫活性及血清CORT水平的比较程广超;杨斌;王建礼;桂长莉【摘要】受到卵巢雌激素和孕激素波动的影响,动情周期会影响雌性动物的行为和情绪.然而,关于引起这些行为改变的神经内分泌机制还需要进一步研究.通过阴道脱落细胞染色法确定小鼠动情周期的各个阶段.用酶联免疫吸附法检测动情期和动情间期血清雌二醇(E2)和皮质酮(CORT)水平,用免疫组织化学方法检测脑区糖皮质激素受体(GR)和酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元的表达.结果发现,与动情间期雌鼠相比,动情期雌鼠血清E2浓度升高(P<0.05),但CORT水平没有变化;海马CA1区和齿状回(DG)GR-IR神经元表达增加(P<0.05),下丘脑室旁核(PVN)和中脑腹侧被盖区(VTA)的TH-IR神经元表达增加(P<0.05).结果说明,雌性小鼠在动情期和动情间期GR和儿茶酚胺能神经元活动不同,这些差异可能是动情周期引起行为变化的一个重要因素.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2018(039)008【总页数】5页(P50-54)【关键词】动情周期;应激;海马;儿茶酚胺;雌性小鼠【作者】程广超;杨斌;王建礼;桂长莉【作者单位】北方民族大学生物科学与工程学院 ,宁夏银川750021;北方民族大学生物科学与工程学院 ,宁夏银川750021;北方民族大学生物科学与工程学院 ,宁夏银川750021;北方民族大学生物科学与工程学院 ,宁夏银川750021【正文语种】中文【中图分类】S853.1雌性动物的动情周期分为动情前期(proestrus)、动情期(estrus)、动情后期(metestrus) 和动情间期(diestrus)，相应地外周血雌激素和孕激素水平也有一个周期的变化，二者在动情前期处于高峰水平[1]。
受到卵巢雌激素和孕激素波动的影响，动情周期会影响雌性动物的行为和情绪。
例如，雌性动物的性行为会随动情周期变化，处于动情前期雌性大鼠的气味对雄性最具吸引力，在动情间期最缺乏吸引力；小家鼠(Mus musculus)的配偶选择也依赖于动情状态[2]。
小鼠发情周期观察与最佳超排时期的确定
２０北京农学院学报第２０卷１材料与方法１．１实验动物以ＩＣＲ系ＳＰＦ性成熟小鼠（购自北京实验动物中心）为实验动物。
雌鼠体重２９～３２ｇ，雄鼠体重３３～３５ｇ，雌雄分笼饲养在室温、自然光照、自由饮水的条件下，采用全价繁殖颗粒饲料饲养。
经７ｄ的适应性饲养后，按常规方法对雌鼠进行超数排卵处理。
１．２实验方法１．２．１阴道涂片法判断小鼠发情周期及外阴部特点的观察采用阴道涂片方法［２］对小鼠进行发情周期观察。
首先将小鼠保定，翻提起尾巴露出阴道口，观察外阴的变化并记录其特点。
然后右手持滴管吸少量生理盐水滴入阴道口，当稍放松尾部及腰部时，生理盐水即被吸入阴道，稍候三指轻压腰部，黏液随生理盐水流出，吸入滴管中，滴到载玻片上。
待稍干后用酒精（９５％）固定５ｍｉｎ，然后用伊红染液染色１５ｍｉｎ，随后冲片，干燥，镜检。
１．２．２外部观察法确定小鼠发情时期根据阴道涂片结果及小鼠在不同发情周期所表现出的外阴部特点，依次将其分为发情前期（实验１组）、发情期（实验２组）、发情后期（实验３组）、问情期（实验４组）４个实验组别。
发情周期未观察小鼠作为对照组。
１．２．３小鼠超数排卵［３３雌性小鼠于１９：００腹腔注射ＰＭＳＧ（天津实验动物中心，批号：０４３２９）１０ＩＵ／只，间隔４８ｈ腹腔注射ｈＣＧ（国营南京动物激素厂，批号：９８０１０９）１０ＩＵ／只，注射ｈＣＧ后即与公鼠按１：１合笼。
次日８：ｏＯ检查阴栓，凡阴门处有阴道栓，合笼后４７ｈ脱臼处死小鼠，获取２一细胞胚胎。
１．３数据统计采用卡方检验。
２实验结果２．１小鼠阴道涂片上皮细胞变化及外阴部特点观察‘２３见表１和图１、图２。
表１小鼠阴道涂片上皮细胞变化及外阴部特点图１不同发情时期阴道上皮细胞变化２．２不同发情周期小鼠超排效果由表２可知，（１）不同发情周期超排成功率，实验１组、２组和４组极显著高于３组和对照组（Ｐ＜ｏ．０１）。
（２）平均图２不同发情时期外阴部特征每组可用胚胎率，实验ｌ组、２组、４组与对照组无显著差异（Ｐ＞ｏ．０５），但与实验３组差异极显著（Ｐ＜ｏ．０１）。
小鼠交配繁殖常识及注意事项-fby-sl之欧阳术创编
小鼠交配繁殖常识及注意事项小鼠是最常见的实验动物，很多实验室买回小鼠后都涉及到繁殖的问题。
下面来给大家介绍一下小鼠后续交配繁殖的常识及注意事项。
·交配小鼠体成熟一般多为60～90天，是适宜的配种日龄。
一般发情后2～3小时即可排卵，排卵期3～4天，但在排卵期仅数小时内才允许公鼠交配。
雌鼠交配后，在阴道口形成一个白色的阴道栓，是公鼠的精液、母鼠的阴道分泌物和阴道上皮混合遇空气后变硬的结果，可防止精子倒流，提高受孕率。
阴道栓常视为交配成功的标志。
阴道栓在交配后12～24小时自动脱落。
雌鼠产后12～24小时可发情，此时交配可造成产后妊娠（边哺乳边怀孕）。
有时，由于延迟着床，此妊娠期要比一般妊娠期长，可达31～35天。
此外雌鼠与不育雄鼠交配或用机械方法刺激宫颈可产生假性妊娠（pseudopregnancy），一般可维持10～12 天，有时长达3周。
·妊娠妊娠期19～21天，妊娠期的长短与小鼠品系及个体、环境因素、排卵数量、受精卵种植率、胎次等有关。
·分娩小鼠的分娩多在夜间进行。
产前不安，不停地整理产窝，约4分钟产仔一只，1分钟后胎盘产出，母鼠将胎盘嚼食。
整个过程约经1小时。
有时可出现因受精卵种植延迟导致的产后3～5天又产仔的现象。
小鼠每胎产仔6～15只，产仔数取决于品系、胎次、饲养条件、营养条件等。
第2～6胎产仔数较多，一般7胎后产仔数逐渐下降。
·哺乳哺乳期18～23天，小鼠带仔数一般为8～10只，因母鼠营养状况、体质状况、生产能力等因素的不同而变化。
母鼠哺乳仔数太多可导致仔鼠发育不均。
如带仔数不足时可将其它多余的同龄仔鼠放入寄奶代乳，但放入前应使其感染新窝的气味，以免被代乳母鼠咬死。
留种仔鼠可适当延长哺乳期到23天。
·繁殖时限小鼠性活动可维持1年左右，作为种鼠使用时间一般为6～8个月,之后其繁殖能力下降,仔鼠质量越来越差，因此应予淘汰。
近交系小鼠一般连续生产5～6胎，即可淘汰。
小鼠动情周期的检查
2. 涂片 将带有阴道内含物的细棉签等在载玻片 上均匀的转动做成涂片，然后将涂片放在空 气中自然干燥（以载玻片上发白为准）。
3. 染色 用碱性美蓝溶液染色8-10min左右，用 蒸馏水冲洗剩余的溶液（注意：应从涂片边 缘慢慢冲洗，切不要把细胞冲洗掉），并使 之干燥。
4.结果观察
在显微镜下观察阴道涂片的组织学变化，确定动 情周期变化的不同阶段。
未成熟的大、小白鼠尚无自然的动情周期， 但当注射绒毛膜促性腺激素(hCG)后,则可使其提 前出现。
实验用品
显微镜、棉签、滴管、小勺、载玻片、 盖玻片、生理盐水、碱性美蓝溶液（配制： 美蓝0.3g，溶于95%的乙醇30ml中，再加 蒸馏水至100ml，另加10%NaOH溶液0.1ml） 等。
实验动物
性成熟雌性小白鼠若干只。
方法与步骤
1.小鼠阴道内液体取法 （有以下三种方法）： （1）冲洗法 将装有生理盐水的滴管轻轻 插入到动物阴道内，按压滴管橡皮头，将生理 盐水打入阴道，然后吸出，如此2-3次。最后 将滴管内的阴道冲洗液滴在载玻片上。 （2）沾取法 将消毒的细棉签用生理盐水 润湿，轻轻插入动物阴道内0.5cm，慢慢转动 一下取出。 （3）刮取法 用光滑的玻璃小勺或牛角制 的小刮片慢慢插入阴道内，在阴道壁轻轻刮取 一点阴道内含物。
表 小白鼠性周期阴道分泌物涂片变化
阶段 动情 前期 动情期 动情 后期 动情 间期 持续 时间/h 9-18 6-12 30-48 36-42 卵巢变化 卵泡加速 生长 卵泡成熟、 排卵 黄体生成 黄体退化 涂片可见 大量有核上皮细胞，少量 角化细胞 满视野角化上皮细胞，少 量有核上皮细胞 角化上皮细胞及白细胞 大量白细胞及少量黏液
注意事项
1. 采取阴道（下口）内分泌物，不是肠道内容物（上 口）；
发情鉴定技术
动
物
繁
殖
产后发情
指分娩后的第一次发情。 各种雌性动物产后发情时间：
牛：一般在产后45-60天（平均50天），母牛在 25-30天往往出现一次排卵，但不表现发情症状 属安静发情。 羊：产后2-3个月。不哺乳的母羊在产后20天。 猪：产后3-6天这内出现发情，但不排卵，在仔 猪断乳后1周左右，出现正常的发情。 马：母马产后第一次发情，在分娩后6-12天开 始（平均第9天），称“配血驹”。 兔：产后第2天发情，即可配种，也称“血配”。
物
繁
殖
发期持续期
发情持续期是指雌性动物从发情开始 到发情结束所持续的时间，相当于发 情周期中的发情期。 各种动物的发情持续期为：
牛1～2d， 羊1～1.5d， 猪2～3d， 马4～7d。
动
物
繁
殖
发情周期的调节
雌性动物的发情周期，受神经、激素 控制的。 生殖系统、神经系统、内分泌系统之 间形成中枢神经—下丘脑—垂体一性 腺轴，由于这条轴的作用，动物的发 情周期才能周而复始的循环。其调节 过程下图
动
物
繁
殖
卵泡发育过程
原始卵泡
初级卵泡
次级卵泡
排卵后 黄体
成熟卵泡
动
物
繁
殖 排卵
卵泡中 成熟的卵子
卵泡破裂
卵子排出
动
物
繁
殖
排卵方式
自发性排卵
卵泡发育成熟后自动排卵，并形成具有功能性 的黄体，黄体的功能在发情周期中可以维持一 定时间。 牛、羊、猪、马等属于这种类型。
诱发性排卵
卵巢上有卵泡发育并成熟，但必须通过交配或 其他途径使子宫颈受到某些刺激才能排卵，并 形成功能性黄体。 兔、猫、骆驼等属于这种类型。
小鼠各发情周期卵巢Ghrelin的表达
而生长 卵泡 中阳性反应明显 ，如图 Ｄ 、
期黄体 中阳性反 应最强。可见 ，ｇ ｈ ｒ ｅ ｌ ｍ 对动物 生殖具 有重要
的影响。
关键字 ：Ｇ ｈ ｒ ｅ ｌ ｉ ｎ ；卵巢；动情周期 ；免 疫组化
Ｇ ｈ ｒ ｅ ｌ ｉ ｎ是 由 ２ ８个氨基酸组成 的 内源性 肽 ．属于促 生长
畜业技 术
资源 育繁
小 鼠各发情周期卵巢 Ｇ ｈ ｒ ｅ ｌ ｉ ｎ的表达
卢永娟 （ 甘肃省定西市安定区李家堡畜牧兽医站 ７ ４ ３ ０ ０ （ １ ）
摘 要 ： 本研 究 通 过 免 疫 组 织 化 学 技 术 及 Ｄ ＡＢ显 色技 术 检 测 泡 呈 弱 阳性 ， 如 图 Ａ； 发 情 期 生 长 卵 泡 巾 免疫 反 应 强 阳 性 ，
１ ． ３ 观 察 结果
３ 讨 论
木 研 究 发 现 ，小 鼠 卵 巢 整 个 发 情 周 期 部 有 ｇ ｈ ｒ ｅ ｌ ｉ ｎ的 表
达 ，并且星规 律性变 化。发情前期 生长 卵泡阳性免疫 反应 ． 发情期 开始存成熟 卵泡中表达 ，到发情后期 成熟 卵泡 巾阳性
反 应 明显 ，主要 集 中 于颗 粒 细 胞 及 卯 丘 ；在 问情 期 成 熟 卵 泡
果 样本 中 同时存在 多种病 原菌 ，所 有
病 原 菌 会 被 同 时 检 测 到 并 报 告 各 种 细
一 江苏 省太仓 市 浏河动物 防疫站
炎 的防治仍 以采 用抗 菌素进 行治 疗为 主 ，临床治 疗过 程 中由于盲 目使 用抗 生 素 ，致 使耐 药菌株 不 断产生 ，不 但
菌 的 比例 。 （ ２ ）高效 ：从样本 到结果 只需 ４ ～ ５ ｈ ，包括 支原体 。 （ ３ ）便捷 ： 可用 于分析 鲜乳及 添加 溴硝 丙 二醇 防 腐剂保 存 了 ３个 月 的牛乳样 本 ，样本
小鼠不同动情周期子宫内膜组织中 Bcl-2、Bax 和 Caspase-9蛋白的表达
小鼠不同动情周期子宫内膜组织中 Bcl-2、Bax 和 Caspase-9蛋白的表达左俐俊;任亚萍【摘要】Aim:To explore the expressions of Bcl-2,Bax,and Caspase-9 in endometrium at different stages of estrous cycle in maturemice.Methods:A total of 32 sexual maturity healthy mice were randomly allocated into 4 groups(n=8), and through the rats vaginal smear observation and types of the cells , the mouse′s estrous cycle stage was clearly deter-mined.Then immunohistochemistry was carried out to screen the protein of Bcl-2,Bax,and Caspase-9 in mice.Results:Bcl-2 was highly appeared in diestrus stage (P<0.05).Bax was also expressed in the estrous cycle but had no significant difference among different stages(P=0.796).Besides, Caspase-9 in each estrus stage of mainly expressed in the mucosa epithelial cytoplasm , lamina propria uterus gland cell cytoplasm ,and stromal cell cytoplasm ,and it was lowly expressed in the beginning of the estrous cycle (P<0.05).Conclusion:Bcl-2,Bax, and Caspase-9 regulate the proliferation and apop-tosis of endometrial cell cycle during estrous cycle .%目的：探讨Bcl-2、Bax和Caspase-9在性成熟期小鼠动情周期不同阶段子宫内膜组织中的表达及定位。
小鼠生物净化中的动情周期判定及超数排卵
［ 关键 词］小鼠； 动情 周期 ； 阴道 涂 片； 超数 排 卵 ［ 中图分类 号］ Ｑ９ ５ － ３ ３ ［ 文献标 识码 ］ Ｂ 【 文章编 号］１ ６ ７ ４ ５ ８ ｌ ７ （ ２ ０ ｌ ４ ） ０ １ — ０ ０ ５ ６ ． ０ ３
５ ８
实验动物与 比较医学 Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ Ａ ｎ ｉ ｍａ ｌ ａ ｎ ｄ Ｃ ｏ ｍ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ
Ｆ ｅ ｂ ． ２ ０ １ ４ ， ３ ４ （ １ ）
雌 性 小 鼠性 成 熟后 ， 生殖 器 官在 激 素 的诱 导下 发 生增 生及 至退化 的周 期性变 化为动 情周 期 。大 多 数 文 献认 为 小 鼠动 情 周期 一般 为 ４ ～ ５ ｄ ，并将 其划 分 为动 情 前 期 、动 情 期 、动 情 后 期 和 间情 期 四个 阶段 ［ １ ￣ 。 目前 ， 文献 上描述 较 多 的判 定小 鼠动情 周 期 的方 法有 外 阴直 接观 察法 、 阴道 栓观 察法和 阴道 脱 落细 胞涂 片法 三种 【 】 。但 实验 中发现 ， 小 鼠动情 周 期各 阶段 的外 阴变化 并如文 献描述 那么 典型而 且 仅 能判断 出小 鼠处 于动情前 期和动情期 （ 雌 鼠接受雄 鼠交 配 ） ， 对 于 需 要 体 外 受 精 的 实 验 并 不 完 全 适 用 。 阴 道 涂 片 法 判 定 小 鼠 的动 情 周 期 简 单 、 准 确 ，大 多数有 关小 鼠生殖 生理 的文献 也都提 及 了这 个 方 法 ，但 对操 作 方法 和 判定 标准 描 述不 够 详尽 。
超 排 诱 导 时期和 增 加小 鼠的排 卵数 具 有指 导 意义 。
小鼠动情周期的检查
注意事项
1. 采取阴道（下口）内分泌物，不是肠道内容物（上 口）；
2. 制作涂片要均匀；
3. 自然干燥后，再染色8-10min；
4. 用蒸馏水冲洗剩余的美蓝溶液时，应从涂片边缘慢慢 冲洗； 5. 在镜下镜检（如用高倍镜，必须加盖薄片！！）。
2. 涂片 将带有阴道内含物的细棉签等在载玻片 上均匀的转动做成涂片，然后将涂片放在空 气中自然干燥（以载玻片上发白为准）。
3. 染色 用碱性美蓝溶液染色8-10min左右，用 蒸馏水冲洗剩余的溶液（注意：应从涂片边 缘慢慢冲洗，切不要把细胞冲洗掉），并使 之干燥。
4.结果观察
在显微镜下观察阴道涂片的组织学变化，确定动 情周期变化的不同阶段。
性成熟雌性小白鼠若干只。
方法与步骤
1.小鼠阴道内液体取法 （有以下三种方法）： （1）冲洗法 将装有生理盐水的滴管轻轻 插入到动物阴道内，按压滴管橡皮头，将生理 盐水打入阴道，然后吸出，如此2-3次。最后 将滴管内的阴道冲洗液滴在载玻片上。 （2）沾取法 将消毒的细棉签用生理盐水 润湿，轻轻插入动物阴道内0.5cm，慢慢转动 一下取出。 （3）刮取法 用光滑的玻璃小勺或牛角制 的小刮片慢慢插入阴道内，在阴道壁轻轻刮取 一点阴道内含物。
实验内容
小鼠动情（性）周期的检查
实验目的
1.学习从小鼠阴道内采集标 本的方法。 2.了解小鼠阴道内分泌物及 上皮的组织学随动情周期的不同 阶段所发生的变化。
原
理
哺乳类的雌性动物性成熟后，在下丘脑、垂 体、卵巢的调节下，卵巢发生周期变化：卵细胞 发育、排卵、黄体和白体和／与之相应的卵巢激 素周期性的变化。在激素的作用下，子宫及阴道 粘膜发生周期性的变化。这种周期性的变化被称 为动情周期。因此，根据阴道涂片的细胞学变化， 可以推断卵巢功能的状态。
发情周期的概念和类型
发情持续期
• 发情持续期也称为发情期，是母畜发情特 征表现最明显的时期。此时，母畜外生殖 器充血肿胀，子宫角和子宫体充血，肌层 收缩加强，腺体分泌增多，卵泡发育成熟， 雌激素分泌达到高峰。其后约1d，垂体分 泌的促黄体素达到排卵前高峰，随即发生 排卵。
（二）发情周期的类型
• 家畜的发情周期主要受神经内分泌所控制， 但也受外界环境条件的影响，由于各种家 畜所受的影响程度不同。表现也各异。基 本可分以下两种。
季节性发情周期
• 这一类动物只有在发情季节才能发情排卵。 在非发情季节，卵巢处于静止状态，不会 发情排卵，称之为乏情期。 • 1季节性多次发情：发情季节有多个发情 期（马，驴，绵羊及山羊等） • 2季节性单词发情：发情季节只有一型的动物，无发情季节之分，常年 均可发情，如猪，牛，湖羊以及小尾巴寒 羊等。
当然家畜的发情季节并不是固定不变的，随 着驯化程度的加深，饲养管理条件的改善， 控制光照等可使发情周期发生一定程度的 改变，甚至可以变成无季节性。
发情周期的概念和类型
（一）发情
• 母畜达到一定的年龄时，由卵巢上的卵泡 发育所引起的，受下丘脑-垂体-卵巢轴系调 控的一种生殖生理现象称为发情
发情周期
• 母畜自第一次发情后，如果没有配种或配 种后没有妊娠，则每间隔一定的时间便开 始下一次发情，如此周而复始地快哦明星 哦美好。直到性机能停止活动的年龄为止。
原生动物实验报告
动物实验（小鼠）的一般操作技术一目的和要求：通过实际操作，使学生掌握实验的一般操作方法，包括动物的抓去和固定、编号被毛的去除给药途径麻醉采血和处死等方法。
二实验内容：1 实验动物的抓取2 实验动物性别、发情和配种的鉴定3 实验动物编号的标记方法4实验动物被毛的去除术5 实验动物的给药途径和方法6 实验动物的麻醉7实验动物的采血8 实验动物的处死方法9 雄性不育小鼠的制备三实验的方法1 小鼠的抓取：抓取时先用手将鼠尾提起，放在实验台上，轻轻拉尾，用左手拇指和食指抓住小鼠两耳和头颈部皮肤，将鼠置于左手中心，用左手无名指和小指按住尾巴和后肢，即可做其他实验操作作用。
2 实验动物性别、发情和配种的鉴定：1抓取小鼠后，观察动物肛门与生殖器之间的距离。
距离远的为雄性，距离性别鉴定：○近的为雌性。
成熟的雄性小鼠可看到小鼠睾丸的轮廓, 雌性肛门与生殖器之间有一无毛2 动物仰卧保定，观察乳头。
雄性乳头不能明显，雌性乳头明显。
小沟。
○发情鉴定（阴道分泌物检查）材料：生理盐水，蒸馏水，显微镜，载玻片，细棉签，性成熟小鼠原理：哺乳类雌性动物性成熟后出现情动周期，啮齿类动物在动情周期不同阶段，阴道膜发生典型的变化。
操作: . 用左手拇指和食指固定小鼠的颈部，将小鼠倒放在手掌上，用左手小指固定小鼠尾巴，然后用适宜大小的移液器吸取20至30ul生理盐水于小鼠阴道内反复抽吸5次。
2. 将抽吸得到的液体滴在用多聚赖氨酸预先处理过（防止脱片）的载玻片上，用移液器吸头将其均匀涂抹开。
3. 涂片自然干燥后，用甲醇固定3分钟。
4. 待其干燥后，先用瑞氏染液染色5至8分钟，冲洗后立即吉姆萨染液染色5至8分钟，用水漂洗后自然干燥，待检。
5. 显微镜下观察阴道涂片的变化，见下图。
附：小鼠发情周期阴道细胞的变化小白鼠性周期4～5天，发情持续时间大约9～12小时或20小时，排卵是在发情开始后2～3小时。
配种鉴定：○1 阴道栓法○2 涂片检查法。
实验室小鼠如何检查交配和妊娠？
实验室小鼠如何检查交配和妊娠？
1●验栓
一般雌鼠交配后10-12小时，在阴道口可见1个白色、绿豆大小的阴道栓，以防止精液倒流，提高受孕率。
检栓可以作为交配的标志，通常选择前一天下午或晚上合笼，第二天早上检查阴栓。
但是见栓仅仅意味着有交配的行为，不能作为受孕的标志。
2●摸胎法
如果已经发现腹部隆起建议采用摸胎法，小鼠怀孕后10-12天才可触摸到胎儿，而大鼠只需要9—10天。
如果是肥胖，腹部是软软的脂肪；如果有怀孕可以摸到黄豆粒大小的胚胎，操作过程需要注意手法轻柔，用力触摸可能会造成胚胎溶解、妊娠终止。
如果配种1.5个月仍未观察到怀孕迹象，需要检查生殖器是否有问题，若没有问题再更替雄鼠或雌鼠，继续观察怀孕情况；如果后续还未怀孕，可采取体外受精的方式进行人工干预。
如何确定大小鼠是否交配成功
如何确定大小鼠是否交配成功
想知道小动物何时交配是困难的，因为交配一般发生在晚上，一种简单而准确的方法是通过检查阴道栓来确定动物交配成功的时间，继而得到怀孕时间和分娩时间。
1.小鼠的阴道栓
发情的雌性小鼠会
接受公鼠的配种，公
鼠的精液中有腺体
分泌物成分，可形成
一个明显的乳白色
栓塞，进行阴道检查
时容易看到，有时栓
塞较小，可用钝头铁
丝进行检测。
2.大鼠的阴道栓
大鼠在配种后不久，阴道栓塞会收缩
成大小3mm x 5mm奶油色圆锥体，因
为太小了，易于丢失。
所以要将大鼠
放入带有承粪盘、金属底网的鼠盒里，
盒里不要放垫料。
配种后，第二天早
晨在纸上找到1块或碎裂成数块的栓
塞，说明已交配成功。
注意：雌鼠一般只在发情时接受交配，
因此出现阴道栓说明交配成功，并且
受孕的可能性很大，但并不能保证绝
对受孕。
小白鼠动情周期和受孕方法的介绍
小白鼠动情周期和受孕方法的介绍
刘颖;王凤英
【期刊名称】《大连医科大学学报》
【年(卷),期】1989(000)003
【摘要】利用小白鼠进行生殖生理的研究比较经济方便。
小白鼠繁殖力强,成活率高,容易饲养,实验操作简便,且其动情周期短,便于观察,可以缩短实验周期,提高效率。
本文介绍雌性小白鼠生殖系统的解剖位置、生殖器周期性变化及受孕方法。
【总页数】3页(P79-80,74)
【作者】刘颖;王凤英
【作者单位】[1]兰州市卫校;[2]大连医学院生理教研室;进修教师
【正文语种】中文
【中图分类】R
【相关文献】
1.不同方法确定动情周期及动情期生殖器官结构 [J], 覃海章;肖胜军;华英杰;卢德杰;米超;赵玮;章一帆;任亚萍
2.两种大鼠受孕方法及两种判断受孕方法比较 [J], 毕晓洁;李兴;杨国珍;潘卫
3.大运动量游泳对小白鼠动情周期的影响 [J], 屠霞芬
4.动情周期中小白鼠子宫蛋白酶的变化 [J], 张新胜;张文学;等
5.外源性雌孕激素联合给药诱导雌性大鼠人工动情周期的方法学探讨 [J], 刘坤; 王玉杰; 李亚琼; 张浩; 张胜男; 魏盛
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小鼠表型鉴定
小鼠表型鉴定
小鼠发育阶段特点
出生为红色（若要换窝，要带一点周围的木屑，否则鼠妈不认识）→生后4-5天开始长毛→生后7天剪脚趾和剪尾巴做基因型鉴定→生后10天开眼→生后20天断奶→生后40天可以合笼→怀孕20天后产崽。
小鼠性别判断：雌鼠的后腹部左右两侧有明显的乳头。
小鼠发情判断：雌鼠一般出生后40天开始发情，发情时肛门（或阴道口）为红色。
之后一直处于可以生育阶段。
一般繁殖合笼为一雄配二三雌，一般不将两只雄鼠和一只雌鼠放在一起，因为两只雄鼠会打架。
在做完基因型鉴定之后要尽快把不需要的小鼠处死，因为小鼠太多雌鼠会奶水不足，当雌鼠奶水不足时，会吃掉鼠崽。
小鼠基因型鉴定
配方：
Buffer A
0.5M EDTA(PH8.0) 100uL
10mol/L NaOH 625uL
双蒸水定容到250mL
室温储存
Buffer B
Tribase 40mM
浓盐酸调PH 到3.0
室温储存
步骤：
1．小鼠出生7天后剪尾巴（一小点就行），若出生30天后剪耳朵；
2．75uL Buffer A 100℃煮40min，每20min摇一次；
3．225uL Buffer B 12000r/min 3min，上清为DNA，跑PCR鉴
定。
各种动物的发情鉴定
各种动物的发情鉴定第四节发情鉴定发情鉴定(Fstrus diagnosis)是动物繁殖工作中一项重要枝术环节。
通过发情鉴定，可以判断动物的发情阶段，预测排卵时间，以便确定配种适期，及时进行配种或人工授精，从而达到提高受胎率的目的，还可以发现动物发情是否正常，以便发现问题，及时解决。
动物的发情是在生殖激素的调节下，生殖器官和性行为等发生的一系列变化。
这种变化包括外部表现和内部变化，外部表现是可以直接观察到的，而内部变化是指生殖器官的变化，其中卵巢上卵泡发育的变化是发情的本质变化。
因此，在进行发情鉴定时，不仅要观察动物的外部表现，更重要的是要掌握卵泡发育状况的内在本质特征，同时还应考虑影响发情的各种因素。
只有进行综合的科学分析，才能微出较准确的判断。
各种动物的发情特征，有其共性，也有特异性。
因此，在发情鉴定时，既要注意共性方面，还要注意各种动物的自身特点。
一、发情鉴定方法发情鉴定的方法有多种，在实际应用时，要根据各种动物的特点，采用重点与一般相结合的原则。
但无论采用何种方法，在发情鉴定前，均应了解动物的繁殖历史和发情过程。
(一)外部观察法此法是各种动物发情鉴定最常用的方法，主要观察动物的外部表现和精神状态，从而判断其是否发情或发情程度。
发情动物常表现为精神不安，鸣叫，食欲减退，外阴部充血肿胀、湿润，有粘液流出，对周围的环境和雄性动物的反应敏感。
不同的动物往往还有特殊的表现，如母牛爬跨；母猪闹圈；母马扬头嘶鸣，阴唇不断外翻露阴蒂；母驴“叭哒嘴”等。
上述特征表现随发情进程由弱到强，再由强到弱，发情结束后消失。
(二)试情法此法根据雌性动物在性欲及性行为上对雄性动物的反应判断其发情程度。
发情时，通常表现为愿意接近雄性，弓腰举尾，后肢开张，频频排尿，有求配动作等，而不发情或发情结束后则表现为远离雄性，当强性牵引接近时，往往会出现躲避行为甚至踢、咬等抗拒行为。
专用试情的雄性动物，一般选用体质健壮，性欲旺盛，无恶癖的非种用雄性动物。
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第２４卷第３期２００７年６月
实验动物科学
ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＡＮＩＭＡＬＳＣＩＥＮＣＥ
Ｖ０１．２４Ｎｏ．３
Ｊｕｎｅ２００７
确定小鼠动情周期的三种方法
李靖１李炫诚２吴云霞２。
（１．武警湖北总队医院急诊科，武汉４３００６０）（２．华中科技大学同济医学院药学院，武汉４３００３０）
摘要：目的为选择确定小鼠动情期的最准确和方便的方法，取成熟雌性昆明小鼠，每日晨取阴道脱落细胞及宫颈黏液做涂片，置显微镜下观察，分别用宫颈黏液结晶法、阴道脱落细胞学检查法、阴道脱落角化细胞计数法三种不同方法来确定小鼠动情期。
结果显示：三种方法均可以确定小鼠动情期，但三种方法比较，宫颈黏液结晶法特异性差；阴道脱落细胞学方法较为准确，但有假阴性现象；角化细胞计数法直观方便，结果最为客观准确。
关键词：动情周期；宫颈黏液；阴道脱落细胞
中图分类号：Ｑ９５．３３文献标识码：Ｂ文章编号：１００６—６１７９｛２００７）０３．００６３．０２
雌性小鼠性成熟后，生殖器官发生增生、退化的周期性变化为动情周期。
一般分为四期：动情前期、动情期、动情后期和动情间期。
动情期是性欲冲动和接受交配的时间，本期末雌鼠排卵，此期间卵泡迅速生长，雌激素分泌达高峰，阴道涂片表现多数的多角形无核角化上皮细胞，宫颈黏液结晶可见典型羊齿状。
妇科、产科和计划生育等很多医学科学研究中，常需要准确确定实验动物的动情期以决定是否合笼，在动物体外受精中需要准确确定动情期以确保获得成熟卵子以利于受精。
据文献记录，动情期的确定方法有多种，主要有宫颈黏液结晶观察法和阴道脱落细胞学检查方法¨ｑ。
能否准确确定动情期直接影响到实验进程和实验结果的精确度和可靠性。
本文对确定动情周期的三种方法做了比较研究，旨在建立准确、简单而可靠的方法以供推广应用。
消毒棉签、注射器、９５％乙醇、医用生理盐水、苦味酸、苏木素一伊红（Ｈａｅｍａｔｏｘｙｌｉｎｅｏｓｉｎ，ＨＥ）染色试剂购自北京中山公司。
１．３主要仪器
显微镜（ＯＬＹＭＰＵＳＣＨＫ，Ｊａｐａｎ），数码相机（ＬＥＩＣＡ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。
１．４小鼠动情期的观察方法
宫颈黏液结晶法：每日晨暴露小鼠阴道后，用圆头滴管吸少许生理盐水滴入阴道口，轻轻回．吸一滴做涂片，９５％乙醇固定，待涂片干燥后显微镜下观察，连续观察７ｄ。
阴道脱落细胞学检查法和角化细胞计数法：暴露阴道后，用蘸有少许生理盐水的无菌小棉签在阴道侧壁上１／３处轻轻刮取（或轻涂）分泌物少许，薄而均匀地涂于玻片上，用９５％乙醇固定，ＨＥ染色后显微镜下观察计数，每Ｅｌ晨涂片，连续观察７ｄ。
１材料与方法２结果
１．１实验动物
选用普通级昆明小鼠１０只，健康，雌性，未交配过，约８～１２周，由同济医学院实验动物学部提供。
置于室温１８℃～２２℃、相对湿度７０％～８５％的动物
房内，１２ｈ光照，自由摄食、饮水。
将小鼠喂养至体
重（３０±２）ｇ，每Ｅｔ晨７：００～８：００检查雌鼠阴道。
１．２实验材料及试剂
收稿日期：２００６—０３．２０
作者简介：李靖，男，主治医师。
＊通讯作者：吴云霞，博士毕业，讲师。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｙｘ７４１９＠ｙａｈｏｏ．ｔｏｍ．ｃｎ２．１宫颈黏液结晶法
动情前期为云雾状结晶；动情期为典型羊齿状结晶，主梗直而粗；动情后期树枝形态较模糊，分枝少而稀疏呈金鱼草状；动情间期为椭圆体或菱形物，透光度大（图１，见文后图版Ⅱ中）。
２．２阴道脱落细胞学检查法
阴道脱落细胞主要有三种，为白细胞、有核上皮
确定小鼠动情周期的三种方法
作者：李靖， 李炫诚， 吴云霞， LI Jing， LI Xuan-cheng， WU Yun-xia
作者单位：李靖,LI Jing(武警湖北总队医院急诊科,武汉,430060)， 李炫诚,吴云霞,LI Xuan-
cheng,WU Yun-xia(华中科技大学同济医学院药学院,武汉,430030)
刊名：
实验动物科学
英文刊名：LABORATORY ANIMAL SCIENCE
年，卷(期)：2007,24(3)
被引用次数：7次
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本文链接：/Periodical_sydwkxygl200703019.aspx。