消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全详解演示文稿
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第章消毒灭菌与病原微生物试验室生物安全ppt课件
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第一节 物理消毒灭菌法
一．热力灭菌法 二．辐射杀菌法
三．滤过除菌法
四．超声波消毒法
五．干燥与低温抑菌法
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一、热力灭菌法 干热灭菌法
焚烧、烧灼、干烤（160~170℃经2h）、 红外线
湿热灭菌法 湿热比干热灭菌方法效果好。
巴氏消毒法、煮沸法、流动蒸气消毒法、 间歇蒸气灭菌法、高压蒸气灭菌法（在 103.4kPa（1.05kg/cm2）蒸气压下，温度 达到121.3℃，维持15~20min）
（4）酚类消毒剂：烷基化氯酚>烷基化酚、间苯二酚 >卤化酚、乙酚>甲酚，常用煤酚皂溶液（来苏儿）， 常用于脚池、车辆消毒池、地面消毒。
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常见化学消毒剂
（5）过氧化物类消毒剂：过氧乙酸、过氧化氢、臭 氧等，常用于浸泡、喷雾、熏蒸消毒 （6）含碘消毒剂：碘酊、碘伏（碘与表面活性剂等 的不定型结合物能逐渐释放碘以长时间杀菌） ， 常用于消毒皮肤、伤口等。 （7）醇类消毒剂：乙醇、丙醇、丁醇、戊醇等。常 用于皮肤消毒。 （8）其它消毒剂：如高锰酸钾（熏蒸、浸泡、喷 洒）、氢氧化钠（畜舍、地面、用具、脚池）、 石灰乳（墙壁、地面）等。
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粘膜的消毒
3%过氧化氢；泌尿生殖道0.1%-0.5%氯 己定溶液，或1g/ml高锰酸钾。 病人排泄物与分泌物的消毒灭菌 病人污染物品的消毒 饮水的消毒 环境的消毒
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第四节 影响消毒灭菌效果的因素
消毒剂的性质、浓度与作用时间 微生物的种类与数量
Thank you!2019 Nhomakorabea-
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第3章 消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全
酚类：石炭酸、来苏、 酚类：石炭酸、来苏、氯己定 醇类： 乙醇、 醇类：70%~75%乙醇、50%~80%异丙醇 乙醇 异丙醇 醛类：甲醛、 醛类：甲醛、戊二醛 重金属盐类：升汞、 硝酸银 重金属盐类：升汞、1%硝酸银 过氧化物类：过氧化氢、过氧乙酸、 过氧化物类：过氧化氢、过氧乙酸、二氧化氯 含氯消毒剂：次氯酸钠、 含氯消毒剂：次氯酸钠、次氯酸钙 含碘化合物：碘酊、 含碘化合物：碘酊、碘伏 烷化剂：环氧乙烷、甲醛、 烷化剂：环氧乙烷、甲醛、戊二醛 表面活性剂：苯扎溴铵、 表面活性剂：苯扎溴铵、氯己定 染料： 染料：龙胆紫 高锰酸钾
第四类是指在通常情况下不会引起人或动物 第四类是指在通常情况下不会引起人或动物 疾病的微生物。 疾病的微生物。
病原微生物实验室生物安全防护水平 安全防护水平（ 三、病原微生物实验室生物安全防护水平（BSL）分级 ）
级别 安全装备 处理对象 对人体、动植物或环境危害较低， 对人体、动植物或环境危害较低，不具有对 健康成人、动植物致病的致病因子。 健康成人、动植物致病的致病因子。 对人体、 对人体、动植物或环境具有中等危害或具有 潜在危险的致病因子，对健康成人、 潜在危险的致病因子，对健康成人、动植物 和环境不会造成严重危害， 和环境不会造成严重危害，具有有效的预防 和治疗措施。 和治疗措施。 对人体、动植物或环境具有高度危险性， 对人体、动植物或环境具有高度危险性，主 要通过气溶胶使人类传染上严重的甚至是致 命的疾病， 命的疾病，或对动植物和环境具有高度危害 的致病因子。通常有预防治疗措施。 的致病因子。通常有预防治疗措施。
第二节 消毒灭菌的方法
一、物理消毒灭菌法
热力灭菌法 辐射杀菌法 滤过除菌法 干燥与低温抑菌法
（一）热力灭菌法
1.干热灭菌法 干热灭菌法 焚烧；烧灼；干烤； 焚烧；烧灼；干烤；红外线 2.湿热灭菌法 湿热灭菌法 巴氏消毒法（ 巴氏消毒法（pasteurization） ） 煮沸法 高压蒸汽灭菌法（ 高压蒸汽灭菌法（autoclaving） ）
消毒灭菌和首要微生物实验室的生物安全PPT讲稿
是指用化学或物理方法杀死物体上病原微生物的方法而对非 病原微生物并不严格要求全部杀死。
2、灭菌(sterilization)
是指杀死物体上所有病原性或非病原性微生物包括细菌的芽 孢和霉菌的孢子的方法。 灭菌后的物体内外均无活的微生物存在。
第一节 微生物控制的相关术语
（二）抑制或杀死微的名词术语
3、防腐(antisepsis)
• 水分约占微生物细胞组成的70-85%，
环境中缺水时（干燥的环境）引起微生 物细胞内蛋白质的变性和盐类浓度的增 高，抑制微生物的生长，甚至造成微生 物的死亡。
• 干燥用于食品保藏的方法可分为两类，
即自然干燥（熏干、晒干、冷冻干燥） 和人工干燥（常压干燥如热风、喷雾、 冻结、微波等；真空干燥如真空和冷冻 真空干燥）
三、辐射
辐射灭菌(Radiation Sterilization)是利用电磁辐射产生的电磁波 杀死大多数物质上的微生物的一种有效方法。
用于灭菌的电磁波有微波，紫外线(UV)、X-射线和γ-射线等
三、辐射
（一）紫外线
紫外辐射能作用于核酸，引起致死突变。紫外线 穿透能力很差，不能穿过玻璃、衣物、纸张等， 但能够在空气中传播，可用作物体表面或室内空 气的灭菌。经紫外辐射处理后，受损伤的微生物 细胞若再暴露于可见光中，一部分可恢复正常， 这称为光复活现象。
第一节 微生物控制的相关术语
（一）促进微生物生长的名词术语
1、复壮（rejuvenation):
是指采用适合原种生长的良好培养条件使发生衰退的 菌种恢复原来性壮的一种培养方法。 如将毒力下降的病原菌接种敏感的动植物
第一节 微生物控制的相关术语
（二）抑制或杀死微的名词术语 1、消毒(disinfection)
2、灭菌(sterilization)
是指杀死物体上所有病原性或非病原性微生物包括细菌的芽 孢和霉菌的孢子的方法。 灭菌后的物体内外均无活的微生物存在。
第一节 微生物控制的相关术语
（二）抑制或杀死微的名词术语
3、防腐(antisepsis)
• 水分约占微生物细胞组成的70-85%，
环境中缺水时（干燥的环境）引起微生 物细胞内蛋白质的变性和盐类浓度的增 高，抑制微生物的生长，甚至造成微生 物的死亡。
• 干燥用于食品保藏的方法可分为两类，
即自然干燥（熏干、晒干、冷冻干燥） 和人工干燥（常压干燥如热风、喷雾、 冻结、微波等；真空干燥如真空和冷冻 真空干燥）
三、辐射
辐射灭菌(Radiation Sterilization)是利用电磁辐射产生的电磁波 杀死大多数物质上的微生物的一种有效方法。
用于灭菌的电磁波有微波，紫外线(UV)、X-射线和γ-射线等
三、辐射
（一）紫外线
紫外辐射能作用于核酸，引起致死突变。紫外线 穿透能力很差，不能穿过玻璃、衣物、纸张等， 但能够在空气中传播，可用作物体表面或室内空 气的灭菌。经紫外辐射处理后，受损伤的微生物 细胞若再暴露于可见光中，一部分可恢复正常， 这称为光复活现象。
第一节 微生物控制的相关术语
（一）促进微生物生长的名词术语
1、复壮（rejuvenation):
是指采用适合原种生长的良好培养条件使发生衰退的 菌种恢复原来性壮的一种培养方法。 如将毒力下降的病原菌接种敏感的动植物
第一节 微生物控制的相关术语
（二）抑制或杀死微的名词术语 1、消毒(disinfection)
消毒灭菌与病原微生物实验室安全
• 高压灭菌几点注意事项：
二、物理消毒灭菌法： （二）电磁波辐射杀菌法：
第二节 消毒与灭菌
1、日光与紫外线：
紫外线波长在265-266nm杀菌能 力最强,它能干扰DNA复制,导致细菌 变异或死亡,但穿透力弱,故只能用于 房间空气和物品表面的消毒.
第二节 消毒与灭菌
2、电离辐射
包括β和γ射线，电离射线具有较高的能量，对各种细菌均有致 死作用，机制是干扰DNA合成、破坏细胞膜、引起酶系统紊乱 等，主要用于一次性医用塑料制品消毒，食品、药品等消毒灭 菌，而不破坏其营养。
种类
2.中效消毒剂 乙醇 碘酊 碘伏
常用浓度
70%-75% 20g碘/L75%乙醇 1-2mg游离/L
用途
作用机制
医疗器械、皮肤
蛋白质变性凝
皮肤、黏膜、物表面皮肤、 固、干扰代谢
黏膜、物表面
ห้องสมุดไป่ตู้
3.低效消毒剂
苯扎溴铵（新洁尔灭）0.4%-1.6%溶液 氯已定（洗必泰）
高锰酸钾
0.5%-4.0%
1-10g/L
核心是防感染和防扩散！
二、病原微生物的分类
根据传染性和危害程度，病原微生物分为四类：
第一类是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微 生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。
第二类是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易 直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微 生物。
第三类是指能够引起人或动物疾病，但一般情况下对人、 动物或环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后 很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。
第四类是指在通常情况下不会引起人或动物疾病的微 生物。
病原微生物实验室生物安全防护水平（BSL）分级
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焚烧
适用： 废弃的物品 动物尸体
焚烧炉
干烤 用干烤灭菌箱，适用于高温下不变质，不
损坏，不蒸发的物品。
171℃ 1h 160 ℃ 2h 121 ℃ 16h
烤箱
烧灼
用火焰灭菌，适用于微生物学实验室的 接种环、试管口等的灭菌
红外线辐射
是一种 0.77-1000微米波长的电磁波, 红外 线为热效应杀菌, 红外线加热速度快，但为表面 照射，物体受热不均。用红外线烤箱灭菌，多用 于医疗器械的灭菌。
杀细菌繁殖体，真菌和大部分病毒
含碘消毒剂：
碘伏、碘酊 氧化作用，但有刺激性
醇类消毒剂 乙醇、异丙醇 脱细胞膜的脂类，并使菌体蛋白变性 70-75%乙醇作用最强
（三）低效消毒剂：
杀多数细菌繁殖体，不能杀芽孢和结核杆菌以及 一些真菌和病毒
新洁尔灭
皮肤、粘膜、地面、物品表面（不与阴离子表面活性剂合用）
洗必泰
皮肤、粘膜、地面、物品表面（不与阴离子表面活性剂合用）
高锰酸钾
氧化作用 皮肤、粘膜、蔬菜、水果的消毒
第二节 消毒灭菌的运用
（一）、医疗器械物品的消毒灭菌
1、高危器械物品 用时需进入无菌组织的物品。所有这些物品 都应该灭菌。
2、中危器械物品 用时不进入无菌组织但接触黏膜的器械。采 用消毒即可。
清洁（cleaning）：是指通过除去尘埃和一 切污秽以减少微生物数量的过程。
无菌（asepsis）：无菌是无活菌的意思， 多是灭菌的结果。
无菌操作技术:防止细菌进入人体或其它物 品的操作技术。
第一节 消毒灭菌的方法
➢ 物理方法 ➢ 化学方法
一、物理消毒灭菌法
（一）热力灭菌法（干热+湿热） 1. 干热灭菌法
煮沸法
煮沸温度为100℃，一般细菌繁殖体5分钟就 杀死了，芽胞需要1-2小时才可被杀灭。
流动蒸气消毒法
利用一个大气压下100℃的水蒸气进行消毒， 细菌繁殖体15-30分钟杀灭。蒸笼具有类似的原 理。
间歇蒸气灭菌法
利用反复多次的流动蒸气间歇加热以达到灭菌 消毒的目的。
高压蒸气灭菌法
一种最有效的灭菌方法。灭菌的温度取决于 蒸气的压力。在103.4kPa蒸气下，温度达到 121.3℃，维持15-20分钟，可杀灭包括细菌芽 胞在内的所有微生物。
人受红外线照射较长，会感觉眼睛疲劳及头 疼；长期照射会造成眼内损伤。因此，工 作人 员应戴防护镜。
2. 湿热灭菌法
巴氏消毒法(pasteurization):
巴氏消毒法用较低温度杀灭液体中的病原菌或 特定微生物，而保持物品中所需的不耐热成分不 被破坏的消毒方法。
主要应用于乳制品的消毒。方法有两种：①加 热到61.1-62.8℃30分钟 ②71.7℃15-30秒。
微波能杀灭各种微生物；可在1-5分钟内杀死各种 细菌。
微波长期照射可引起眼睛的晶状体混浊、睾丸损 伤和神经功能紊乱等全身性反应，因此必须关好门 后才开始操作。
（三）滤过除菌法
1.滤菌器 (filter）----直径是0.45um以下。
2.空气除菌采用生物洁净技术
层流室
超净工作台
（四）其他物理方法
紫外线灯管
2. 电离辐射 常用γ射线(钴-60)和β射线。
原理：
干扰代谢和DNA合成，破坏细胞膜、酶，产生 H2O2、游离羟基杀菌。
特点： 具有较高的能量与穿透力，可在常温下对
不耐热的物品灭菌，故又称“冷灭菌”。
运用： 可用于消毒不耐热的塑料注射器和导管等，
亦能用于食品、药品、生物制品等的消毒灭 菌。
高效消毒剂
原理
适用范围
含氯消毒剂 （次氯酸钠、漂白粉）
产生氯气、次氯酸 新生态氧
排泄物、物体表面、饮 用水等
过氧化物消毒剂 （过氧化氢、过氧乙酸） （二氧化氯）
醛类消毒剂 （戊二醛、甲醛）
氧化作用
物体表面、皮肤
空气净化剂
对细菌蛋白和核酸的 高效空气过滤器消毒
烷化作用
（对人有毒）
环氧乙烷
与醛类相同
（二）中效消毒剂：
（三）手和皮肤的消毒
用肥皂和流动水经常并正确洗手 病原微生物污染时应用消毒剂消毒。 乙醇，碘伏
（四）黏膜的消毒
口腔粘膜可用3%的双氧水，腔道冲洗用 1/1000的高菌 50g/L的次氯酸钠、漂白粉处理小时
（六）病人污染物品的消毒
（七）饮水的消毒 氯气或是漂白粉消毒
3. 微波（microwave）
微波是一种波长为1- 1000mm 的电磁波， 频率较高；
一般认为其杀菌机理除热效应以外;还有电 磁共振效应。可穿透玻璃、塑料薄膜与陶瓷等物 质，但不能穿透金属；
微波照射多用于食品加工。
在医院中可用于检验室用品、非金属器械、无 菌病室的食品、食具、药杯、及其它用品的消毒。
高压蒸汽灭菌器
（二）辐射杀菌法
1.紫外线（265-266nm）
原理：其主要作用于DNA，使一条DNA链上相邻 的两个胸腺嘧啶共价结合成二聚体，干扰DNA的复 制与转录。
特点：紫外线的穿透力弱 适用范围：因此一般用于手术室、传染病房、细菌 实验室的空气消毒。 注意：紫外线对人体皮肤、眼睛有损伤作用，应注 意防护。
1、干燥与低温抑菌法 盐或糖腌食物，冰箱冷冻食物
2、超声波灭菌法
每秒钟超过20,000次振动的 声波不被人耳感受，称为超 声波。利用在菌体内的空化 作用、机械裂解杀菌。尤其 是革兰阴性菌更为敏感，但 不彻底，常有残留。
二、化学消毒灭菌法
（一）高效消毒剂: 可杀灭芽孢在内的微生物
适用不耐高温，但必须进入人体内部的器械：内窥 镜、塑料外科器械
3、低危器械物品 只接触未损伤皮肤，不接触黏膜和无菌组织 的物品。一般用后清洗、消毒即可。
4、快速周转的医疗器械 瞬时灭菌，高效消毒剂处理，微波灭 菌等
（二）、室内空气消毒灭菌
1.物理消毒法 ①紫外线照射最常用； ②滤过除菌：
2．化学消毒法 包括化学消毒剂喷雾和熏蒸： ①过氧乙酸喷雾、熏蒸； ②过氧化氢喷雾； ③二氧化氯溶液喷洒； ④中草药点燃烟熏。
消毒灭菌与病原微生物实验室 生物安全详解演示文稿
（优选）消毒灭菌与病原微生 物实验室生物安全
消毒灭菌常用术语
灭菌（sterilization）：杀灭物体上所有微 生物的方法。
消毒（disinfection）：杀死物体上或环境中 的病原微生物的方法。
防腐（antisepsis）：防止或抑制皮肤表面细 菌生长繁殖的方法。
适用： 废弃的物品 动物尸体
焚烧炉
干烤 用干烤灭菌箱，适用于高温下不变质，不
损坏，不蒸发的物品。
171℃ 1h 160 ℃ 2h 121 ℃ 16h
烤箱
烧灼
用火焰灭菌，适用于微生物学实验室的 接种环、试管口等的灭菌
红外线辐射
是一种 0.77-1000微米波长的电磁波, 红外 线为热效应杀菌, 红外线加热速度快，但为表面 照射，物体受热不均。用红外线烤箱灭菌，多用 于医疗器械的灭菌。
杀细菌繁殖体，真菌和大部分病毒
含碘消毒剂：
碘伏、碘酊 氧化作用，但有刺激性
醇类消毒剂 乙醇、异丙醇 脱细胞膜的脂类，并使菌体蛋白变性 70-75%乙醇作用最强
（三）低效消毒剂：
杀多数细菌繁殖体，不能杀芽孢和结核杆菌以及 一些真菌和病毒
新洁尔灭
皮肤、粘膜、地面、物品表面（不与阴离子表面活性剂合用）
洗必泰
皮肤、粘膜、地面、物品表面（不与阴离子表面活性剂合用）
高锰酸钾
氧化作用 皮肤、粘膜、蔬菜、水果的消毒
第二节 消毒灭菌的运用
（一）、医疗器械物品的消毒灭菌
1、高危器械物品 用时需进入无菌组织的物品。所有这些物品 都应该灭菌。
2、中危器械物品 用时不进入无菌组织但接触黏膜的器械。采 用消毒即可。
清洁（cleaning）：是指通过除去尘埃和一 切污秽以减少微生物数量的过程。
无菌（asepsis）：无菌是无活菌的意思， 多是灭菌的结果。
无菌操作技术:防止细菌进入人体或其它物 品的操作技术。
第一节 消毒灭菌的方法
➢ 物理方法 ➢ 化学方法
一、物理消毒灭菌法
（一）热力灭菌法（干热+湿热） 1. 干热灭菌法
煮沸法
煮沸温度为100℃，一般细菌繁殖体5分钟就 杀死了，芽胞需要1-2小时才可被杀灭。
流动蒸气消毒法
利用一个大气压下100℃的水蒸气进行消毒， 细菌繁殖体15-30分钟杀灭。蒸笼具有类似的原 理。
间歇蒸气灭菌法
利用反复多次的流动蒸气间歇加热以达到灭菌 消毒的目的。
高压蒸气灭菌法
一种最有效的灭菌方法。灭菌的温度取决于 蒸气的压力。在103.4kPa蒸气下，温度达到 121.3℃，维持15-20分钟，可杀灭包括细菌芽 胞在内的所有微生物。
人受红外线照射较长，会感觉眼睛疲劳及头 疼；长期照射会造成眼内损伤。因此，工 作人 员应戴防护镜。
2. 湿热灭菌法
巴氏消毒法(pasteurization):
巴氏消毒法用较低温度杀灭液体中的病原菌或 特定微生物，而保持物品中所需的不耐热成分不 被破坏的消毒方法。
主要应用于乳制品的消毒。方法有两种：①加 热到61.1-62.8℃30分钟 ②71.7℃15-30秒。
微波能杀灭各种微生物；可在1-5分钟内杀死各种 细菌。
微波长期照射可引起眼睛的晶状体混浊、睾丸损 伤和神经功能紊乱等全身性反应，因此必须关好门 后才开始操作。
（三）滤过除菌法
1.滤菌器 (filter）----直径是0.45um以下。
2.空气除菌采用生物洁净技术
层流室
超净工作台
（四）其他物理方法
紫外线灯管
2. 电离辐射 常用γ射线(钴-60)和β射线。
原理：
干扰代谢和DNA合成，破坏细胞膜、酶，产生 H2O2、游离羟基杀菌。
特点： 具有较高的能量与穿透力，可在常温下对
不耐热的物品灭菌，故又称“冷灭菌”。
运用： 可用于消毒不耐热的塑料注射器和导管等，
亦能用于食品、药品、生物制品等的消毒灭 菌。
高效消毒剂
原理
适用范围
含氯消毒剂 （次氯酸钠、漂白粉）
产生氯气、次氯酸 新生态氧
排泄物、物体表面、饮 用水等
过氧化物消毒剂 （过氧化氢、过氧乙酸） （二氧化氯）
醛类消毒剂 （戊二醛、甲醛）
氧化作用
物体表面、皮肤
空气净化剂
对细菌蛋白和核酸的 高效空气过滤器消毒
烷化作用
（对人有毒）
环氧乙烷
与醛类相同
（二）中效消毒剂：
（三）手和皮肤的消毒
用肥皂和流动水经常并正确洗手 病原微生物污染时应用消毒剂消毒。 乙醇，碘伏
（四）黏膜的消毒
口腔粘膜可用3%的双氧水，腔道冲洗用 1/1000的高菌 50g/L的次氯酸钠、漂白粉处理小时
（六）病人污染物品的消毒
（七）饮水的消毒 氯气或是漂白粉消毒
3. 微波（microwave）
微波是一种波长为1- 1000mm 的电磁波， 频率较高；
一般认为其杀菌机理除热效应以外;还有电 磁共振效应。可穿透玻璃、塑料薄膜与陶瓷等物 质，但不能穿透金属；
微波照射多用于食品加工。
在医院中可用于检验室用品、非金属器械、无 菌病室的食品、食具、药杯、及其它用品的消毒。
高压蒸汽灭菌器
（二）辐射杀菌法
1.紫外线（265-266nm）
原理：其主要作用于DNA，使一条DNA链上相邻 的两个胸腺嘧啶共价结合成二聚体，干扰DNA的复 制与转录。
特点：紫外线的穿透力弱 适用范围：因此一般用于手术室、传染病房、细菌 实验室的空气消毒。 注意：紫外线对人体皮肤、眼睛有损伤作用，应注 意防护。
1、干燥与低温抑菌法 盐或糖腌食物，冰箱冷冻食物
2、超声波灭菌法
每秒钟超过20,000次振动的 声波不被人耳感受，称为超 声波。利用在菌体内的空化 作用、机械裂解杀菌。尤其 是革兰阴性菌更为敏感，但 不彻底，常有残留。
二、化学消毒灭菌法
（一）高效消毒剂: 可杀灭芽孢在内的微生物
适用不耐高温，但必须进入人体内部的器械：内窥 镜、塑料外科器械
3、低危器械物品 只接触未损伤皮肤，不接触黏膜和无菌组织 的物品。一般用后清洗、消毒即可。
4、快速周转的医疗器械 瞬时灭菌，高效消毒剂处理，微波灭 菌等
（二）、室内空气消毒灭菌
1.物理消毒法 ①紫外线照射最常用； ②滤过除菌：
2．化学消毒法 包括化学消毒剂喷雾和熏蒸： ①过氧乙酸喷雾、熏蒸； ②过氧化氢喷雾； ③二氧化氯溶液喷洒； ④中草药点燃烟熏。
消毒灭菌与病原微生物实验室 生物安全详解演示文稿
（优选）消毒灭菌与病原微生 物实验室生物安全
消毒灭菌常用术语
灭菌（sterilization）：杀灭物体上所有微 生物的方法。
消毒（disinfection）：杀死物体上或环境中 的病原微生物的方法。
防腐（antisepsis）：防止或抑制皮肤表面细 菌生长繁殖的方法。