木质纤维素生物质的酶法糖化

七、步骤:
1 对所有含有纤维素的被消化的样品执行LAP “生物物质中的总固体的测 定”。注：所有已发生了一些水预处理木质纤维原料绝不能在风干之前进行酶消 化，因为微观生物量结构可能会发生不可逆转的孔隙崩溃的导致从纤维素中释放 的血糖酶降低。
2 称取样品，其数量相当于0.1克纤维素或0.15克总在105oC干重生物量主要 成分（样品的纤维素含量初步认定为经由LAP-002测定的葡萄糖量，减去目前任 何淀粉贡献，LAP-016），并添加到20毫升的玻璃小闪烁瓶。
本实验描述，天然纤维素酶糖化或预处理木质纤维素生 物质为葡萄糖，以确定可能的最大消化率,一个在商业内部 最高水平制备及水解纤维素酶所使用时间最长不超过一周。
一、范围 ：
本过程适用于木质纤维生物质。如果生物质中可能含一些淀粉，以干重量百 分比去计算纤维素总葡聚糖时必须纠正为以淀粉含量减去总干重量葡萄糖的百分 比；
三、意义和使பைடு நூலகம்：
1 The maximum extent of digestibility is used in conjunction with other assays to determine the appropriate enzyme loading for the saccharification of biomass
所有分析的进行要按照一个适当的、具体的实验室质量保证计划（二次分 配）。
二、术语：
生物质的预处理：生物质被化学或热量改变结构组成； 纤维素酶：一种酶的制备显示有三个纤维素阶段：远藤- 1 ,4 -β -的D -葡聚糖酶，外切- 1 ,4 -β -葡萄糖苷酶和β -的D -葡萄糖苷酶，它们在不 同纤维素制备中出现活动程度不同。
2 This procedure can also be used to measure the efficacy of a given pretreatment based on a maximum enzyme loading
1 最大程度的消化率是用于与其他实验结合，以确定 生物质糖化适当的酶量；
4 计算需要蒸馏水的量，添加下面的步骤中指定的酶后每一瓶的总体积为 10.00ml。每一瓶加适当体积的水。所有的溶液剂和生物量被假定比重为 1.000g/ml。因此，如果0.200g的生物质被添加到小瓶中，假定占据0.200mL然后 9.733ml的液体被加入。
木质纤维素生物质的酶法糖化
木质纤维素生物质的酶法糖化
一、简介：
This procedure describes the enzymatic saccharification of cellulose from native or pretreated lignocellulosic biomass to glucose in order to determine the maximum extent of digestibility possible. A saturating level of a commercially available or in-house produced cellulase preparation and hydrolysis times up to one week are used.
六、试剂:
1 四环素（10 mg / ml的70％乙醇）。 2 放线菌酮（10mg/ml蒸馏水）。 3 替代抗生素 - 叠氮化钠（20mg/ml蒸馏水） 4 柠檬酸钠缓冲液（0.1M，pH值4.80）。 5 纤维素酶的已知活性，FPU /ml。 6 β-葡萄糖苷酶的已知活性，pNPGU/ml. 7（如需要）木聚糖酶的已知蛋白浓度，毫克/毫升
2 空气干燥的生物质相对于糖化的样品，可能对转换的影响达到 最大。
五、仪器和材料 :
1 一个可适当摇动或静止的且可定为50 ° ± 1℃的恒温箱； 2 可以以任何固定的旋转速度旋转，可容纳闪烁瓶而且可在一个静态的恒温箱 中操纵的旋转器； 3 闪烁瓶架/盘； 4 pH计； 5 精确到1毫克或0.1毫克的分析天平； 6 带有适当膜的YSI分析仪或同等的葡萄糖定量方法，如高效液相色谱法； 7 200μ L和1000带尖的Eppendorf Pipetman的微升吸管； 8 配有内衬塑料的盖子的20 mL玻璃闪烁瓶
3 为每小瓶中，添加5.0毫升0.1M，pH值4.8的柠檬酸钠缓冲液。对每一个小 瓶，加入40微升（400微克）四环素和30微升（300微克）酮，以防止微生物在消 化过程中的生长。由于四环素和酮都造成生殖危害，可添加100ul 2％叠氮钠溶 液作为对四环素/酮组合交替（注：不使用叠氮化钠四环素/酮组合结合）。
2 此过程也可以用来衡量一个最大的酶量为基础的特 定预处理效果。；
四、干扰：
1 Test specimens not suitable for analysis by this procedure include acid- and alkaline-pretreated biomass samples that have not been washed. Unwashed pretreated biomass samples containing free acid or alkali may change solution pH to values outside the range of enzymatic activity; and the unwashed glucose in the biomass may influence the final result.
2 Air drying of biomass samples prior to saccharification may have an impact on the maximal conversions achieved.
1 此分析过程不适合的试验样品，包括还没有被酸和碱预处理洗 过的生物样本。没洗过的生物质预处理样本含有游离酸或碱，可能 会改变溶液的pH值，超出酶活性适用范围，以及在生物质中未洗的 葡萄糖可能会影响到最终的结果；