RT-PCR试剂盒说明书
天根 一步法逆转录PCR试剂盒说明书
通用型一步法RT-PCR试剂盒说明书前言本试剂盒适用于对各种动、植物、病毒RNA进行PCR 检测。
用户可根据被分析基因，配合一对引物，或同时采用Taqman 荧光探针，先将提取的RNA反转录(reverse transcription).成cDNA，再经过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)技术对特异性片段进行扩增，进行电泳或实时荧光分析。
一步法RT-PCR可使RT及PCR过程在单管中完成，比分开进行RT及PCR更方便。
由于不需要在RT完成后打开反应管，尽可能地避免了样品间的相互污染。
规格20人份适用仪器适用于各种普通PCR仪器和实时荧光PCR仪器。
试剂盒组成试剂准备根据下表配制反应液：振荡混匀后，按每管 40 μl(可根据需要调整)分装，备用。
PCR扩增将均一化后的RNA提取样本10 μl加入各反应管，混匀、离心后，置普通PCR仪器或实时荧光PCR仪器上进行扩增及实时检测。
结果判断扩增产物可直接进行电泳检测；实时荧光检测可根据相应仪器的配套软件进行结果分析。
保存及有效期-20℃保存，有效期为6个月。
注意事项1. 开始检测前请仔细阅读本说明书全文。
2. 整个检测过程中，反应体系的配制、样本处理及加样、PCR扩增（荧光检测）应分区进行以避免污染。
3. 操作人员应戴口罩，经常更换一次性手套，以避免RNA酶的污染；实验中所用器具均应经过除RNA酶处理。
4. 试剂盒组成中的试剂使用前应充分融化并混匀。
5. 进行实时荧光分析时，应使用透光性能较好的一次性薄壁离心管；.荧光探针应避光保存，加入缓冲液中后，应尽快进行扩增。
6. 注意适当处理检测中遗留的样品、扩增产物及可能被污染的试剂。
生产企业：上海蓝创生物科技发展有限公司。
肠道病毒(CA16) 核酸测定试剂盒（荧光 PCR 法）说明书
肠道病毒（CA16）核酸测定试剂盒（荧光PCR 法）说明书【产品名称】通用名称：肠道病毒(CA16) 核酸测定试剂盒（荧光PCR 法）说明书英文名称：CA16 Real Time RT-PCR Kit【包装规格】48人份/盒【用途】本试剂由国家疾病预防控制中心病毒病预防控制所脊灰实验室、浙江省疾病预防控制中心病毒所共同研发，杭州博日科技有限公司生产。
试剂通过对样本中肠道病毒（CA16）的特异性RNA 核酸片段进行定性检测，可用于临床对可疑感染患者的病原学鉴别的辅助诊断。
【检验原理】本试剂盒采用Thermus thermophilus HB8 株来源的rTth DNA 聚合酶，该酶在二价锰离子（Mn2+）存在下具有很强的逆转录活性，利用该特性，结合荧光探针技术，一步法逆转录扩增样本中肠道病毒（CA16）的特异性RNA 。
可用于临床及科研对CA16的辅助诊断和抗病毒药物的疗效观察。
【主要组成成份】 试剂盒组成数量 组份 A 液600ul×1 含有rTth DNA 聚合酶和dNTP 等的溶液 CA16引物探针 72ul×1 含有引物、探针的溶合液 核酸扩增试剂 B 液60ul×1 阴性对照200ul×1 CA16 RNA 阴性的ddH 2O 临界阳性对照 200ul×1 CA16 RNA 阳性的低浓度灭活病毒 对照品 强阳性对照200ul×1 CA16 RNA 阳性的高浓度灭活病毒 其他DEPC 水 1.0ml×1【储存条件及有效期】1） 试剂盒必须在冷冻条件下运输。
2） 试剂盒保存：请在-20℃保存，融解后须上下颠倒混匀方可使用。
使用后重新-20℃保存，通常冻融10 以内不会影响实验，但也请尽量避免反复冻融。
如果一次使用量较少，可以在融解后分装成几管，每次取一管使用。
如果短期内需多次使用，可在4℃保存，但须在2 个月内用完。
注意必须避光保存。
一步法RT-PCR试剂盒使用说明书
一步法RT-PCR 检测试剂盒 (一步法RT-PCR 扩增试剂盒)(目录号HS0612-2)产品包装保存条件-20℃产品简介本试剂盒是专为一步法RT-PCR 实验研制，逆转录和PCR 在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，在避免污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。
本试剂盒包括全新高效逆转录酶、快速热启动DNA 聚合酶，同时包含适用于逆转录和PCR 扩增的反应缓冲液和实验中所必需的反应组分。
经过重组表达的SuperRT 逆转录酶RNase H 活性缺失，减少了逆转录反应中RNA 的降解，更容易获得全长的cDNA 。
该逆转酶逆转录效率高，可对少量 RNA 模板进行良好的逆转录反应。
SuperRT 逆转录酶与RNA 亲合性高，能通读GC 含量高，二级结构复杂的RNA 模板，获得高产量的cDNA 。
PCR 反应使用的DNA 聚合酶具有扩增效率高、延伸速度快的优良性能。
独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。
使用该试剂盒能够方便快捷的在同一个反应管内完成逆转录和PCR 扩增反应。
使用本试剂盒扩增得到的目的产物3′端附有一个″A ″碱基，可直接用于T/A 克隆。
北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.产品特点1. 效率高，可以高效转录GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。
2. 耐热性及稳定性强。
3. 操作简单迅速,最大限度的避免污染。
4. 独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。
使用方法1）一般PCR实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为20 ~ 30秒，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2）延伸时间根据所扩增的片段大小设定，本产品中所包含的DNA Polymerase的扩增效率为1 kb/30s。
3）可根据扩增产物的下游应用设定循环数。
天根 一步法逆转录PCR试剂盒说明书
通用型一步法RT-PCR试剂盒说明书前言本试剂盒适用于对各种动、植物、病毒RNA进行PCR 检测。
用户可根据被分析基因，配合一对引物，或同时采用Taqman 荧光探针，先将提取的RNA反转录(reverse transcription).成cDNA，再经过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)技术对特异性片段进行扩增，进行电泳或实时荧光分析。
一步法RT-PCR可使RT及PCR过程在单管中完成，比分开进行RT及PCR更方便。
由于不需要在RT完成后打开反应管，尽可能地避免了样品间的相互污染。
规格20人份适用仪器适用于各种普通PCR仪器和实时荧光PCR仪器。
试剂盒组成试剂准备根据下表配制反应液：振荡混匀后，按每管 40 μl(可根据需要调整)分装，备用。
PCR扩增将均一化后的RNA提取样本10 μl加入各反应管，混匀、离心后，置普通PCR仪器或实时荧光PCR仪器上进行扩增及实时检测。
结果判断扩增产物可直接进行电泳检测；实时荧光检测可根据相应仪器的配套软件进行结果分析。
保存及有效期-20℃保存，有效期为6个月。
注意事项1. 开始检测前请仔细阅读本说明书全文。
2. 整个检测过程中，反应体系的配制、样本处理及加样、PCR扩增（荧光检测）应分区进行以避免污染。
3. 操作人员应戴口罩，经常更换一次性手套，以避免RNA酶的污染；实验中所用器具均应经过除RNA酶处理。
4. 试剂盒组成中的试剂使用前应充分融化并混匀。
5. 进行实时荧光分析时，应使用透光性能较好的一次性薄壁离心管；.荧光探针应避光保存，加入缓冲液中后，应尽快进行扩增。
6. 注意适当处理检测中遗留的样品、扩增产物及可能被污染的试剂。
生产企业：上海蓝创生物科技发展有限公司。
一步法RT-PCR说明书
TaKaRa PrimeScript TM One Step RT-PCR Kit Ver.2
试剂盒使用说明书
该试剂盒采用一步（One step）RT-PCR法。
RNA→cDNA →PCR反应操作在同一反应体系中连续进行，反应中途不需添加任何试剂。
实验操作
1.配制RT-PCR反应液，以n个反应管为例。
首先，配制如下混合体系，混匀后分加到n个PCR反应管中。
RNase Free dH2O 20μI X (n+1)
2x1 Step Buffer 25μI X (n+1)
PrimeScript 1 Step Enzyme Mix 2μI X (n+1)
其次，向PCR反应管中加入欲检测病原的扩增引物（即上下游引物）和样品抽提RNA。
上游引物1μI
下游引物1μI
样品RNA 1μI
总体系：50 μI
2．进行RT-PCR反应
50℃30 min
94℃ 2 min
94℃30 sec
50～65℃（以相应的引物而定） 30 sec 30 循环 72℃ 1 min
72℃ 10 min
试剂盒自带有确保试剂有效性的阳性对照RNA以及相应的扩增引物（Positive Control RNA, Control F-1 Primer, Control R-1 Primer）,扩增产物为462bp。
扩增后如果试剂盒阳性对照电泳结果为阳性说明试剂盒所有试剂有效，RT-PCR反应液体系没问题。
takara反转录试剂盒说明书
Code No. RR047A 研究用PrimeScript™RT reagent Kitwith gDNA Eraser(Perfect Real Time)说明书目录内容页码●制品说明1●制品内容 1 ●试剂盒外必备材料 1 ●保存 1 ●特长 2 ●使用注意 2 ●操作方法 2 ● Real Time PCR 4 ●实验例 6 ●附录7 ●关联产品8●制品说明为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件，但Total RNA中常常混有基因组DNA，并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增，因此会造成解析结果不准确。
为了避免这种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组DNA得不到扩增。
但是，此方法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因，同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本方法。
在这种情况下，我们常常需要对Total RNA样品进行DNase I处理，以除去残存的基因组DNA。
而DNase I处理通常要进行复杂的纯化操作，同时会造成RNA的降解和损失。
PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA进行Real Time RT-PCR反应的专用反转录试剂。
Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA Eraser，通过42℃，2 min即可除去基因组DNA。
同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分，经过gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行15 min的反转录反应合成cDNA，因此，20 min内即可迅速完成从基因组DNA去除到cDNA合成的全过程。
使用本制品合成的cDNA适用于SYBR® Green分析法和TaqMan®探针分析法，可以根据实验目的，选择与SYBR Premix Ex Taq™ II（Tli RNaseH Plus）（Code No. RR820Q/A/B）、Probe qPCR Mix（Code No. RR391S/A/B）组合使用。
东盛生物 RT-PCR Kit（逆转录试剂盒） 说明书
0.6 μl RNasin , M-MLV ； 按下列条件进行反转录反应 42℃ 温浴 60 min（随即引物 37℃ 温浴 60 min） ； 5 终止反应 70℃ 温浴 5 min 终止反应，置冰上进行后续实验或-20℃ 保存。 6 用 RNase-free ddH2O 将反应体系稀释到 50 μl ，取 2-5 μl 进行 PCR 扩增反应。
20 次逆转录反应，R1012 可进行 100 次逆转
录反应（20 μl 标准 PCR 反应体系，每次使用 M-MLV 1 μl）。
M-MLV 储存液 20 mM Tris-HCl (pH 7.5) 200 mM NaCl 0.1 mM EDTA 1 mபைடு நூலகம் DTT 0.01% NP-40 50% glycerol 5xfirst-strand buffer 成分 250 mM Tris-HCl (pH 8.3 at 25 ℃) 375 mM KCl 15 mM MgCl2 50 mM DTT 保存条件 各组分均-20℃保存，避免反复冻融。
●
在逆转录反应中经常加入 RNase 抑制剂以增加 cDNA 合成的长度和产量。RNase 抑制剂要在第一链合成反应中，在缓冲
液和还原剂（如 DTT）存在的条件下加入，因为 cDNA 合成前的过程会使抑制剂变性，从而释放结合的可以降解 RNA 的 RNase。蛋白 RNase 抑制剂仅防止 RNase A，B，C 对 RNA 的降解，并不能防止皮肤上的 RNase，因此尽管使用了这些抑 制剂，也要小心不要从手指上引入 RNase。
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------广州东盛生物科技有限公司 电话：020-87791356 传真：020-87791381 网址：
北京四正柏生物科技有限公司 两步法 RT-PCR 试剂盒 产品说明书 MRT6103-20
两步法RT-PCR试剂盒产品编号规格MRT6103-2020rxn保存条件及效期:-20℃恒温保存一年。
产品描述：本产品是高灵敏度的RT-PCR反应系统，可以从极低量的总RNA或poly(A)mRNA中高效率的合成第一链cDNA，并能够通读GC含量高、二级结构复杂的RNA模板。
该试剂盒使用重组表达的M-MμlV Reverse Transcriptase(RTase)，通过定点突变去除了RNase H的活性(RNase H－)，并增加了该酶与模板－引物的亲和力，具有更好的热稳定性，因此其DNA聚合酶的活性和持续合成能力均高于野生型M-MμlV RTase，合成的cDNA产量更多、更长。
本试剂盒中的2×HiFiTaq PCR Mix含PCR反应所需的HiFiTaq DNA Polymerase、dNTPs、Mg2+、反应缓冲液和稳定剂等成分并对体系进行了优化，能有效扩增的10kb以下片段，同时使用更快速简便。
产品组分:组分MRT6103-20RTase(200U/μl)20μl5×RTase buffer*200μlRNase inhibitor(RNasin)16μlOligo(dT)18(50M)20μlRandom Primer(50M)20μl10mM dNTP Mix30μl2×HiFiTaq PCR StarMix500μlDNase/RNase-free ddH2O1ml*5×RTase buffer：250mM Tris-HCl(pH8.3),375mM KCl,15mM MgCl2,50mM DTT注意事项：1.实验过程中请注意避免RNase污染。
2.除酶以外的各种试剂，使用之前请完全溶解并充分混匀，以防因盐离子浓度不均影响实验结果。
3.RNA模板的完整性对cDNA合成效率起着决定性作用，因此请选择可靠的RNA提取/纯化方法。
4.由于所有的RNA提取方法都不能完全去除基因组DNA，所以应根据后续实验的需求，选择是否需要在反转录反应前去除残留基因组DNA。
小反刍兽疫病毒RT-PCR检测试剂盒说明书(50头份)
小反刍兽疫病毒RT-PCR检测试剂盒说明书(50头份)【组分与用法】编号名称装量用法保存条件1 反应阳性对照品30 μl/管×1管直接使用-20°C保存2 RT-PCR反应液1050 μl/管×1管直接使用-20°C保存3 酶混合液50μl/管×1管直接使用-20°C保存【未提供但是需要准备的试剂和耗材】1 无RNase的纯水，购买或自己制备。
2 无RNase/DNase的PCR反应管、Tips和1.5 ml离心管等【作用与用途】用于检测各种临床样本（如鼻腔/口腔拭子、眼拭子、淋巴结、脾、肾、直肠、结肠、肺等）中是否含小反刍兽疫病毒核酸。
【用法与判定】1 样本处理可采用Roche、QIAGEN等公司生产的手工RNA纯化试剂盒或其他全自动核酸提取仪提取各类样本中的RNA。
如在2小时内检测则提取的RNA置于冰上保存，否则置于﹣80ºC冰箱保存。
2 扩增试剂准备配制反应体系前，务必使RT-PCR反应液完全溶解，并颠倒混匀几次，然后瞬时离心。
每份被检样品使用1个PCR管，每管中依次加入：RT-PCR反应液21μl，酶混合液1μl，被检样品中提取的RNA溶液3μl。
每次检测设置标准阳性对照和标准阴性对照（加3μl）。
标准阳性对照用反应阳性对照品作为模板，而标准阴性对照用无RNase的纯水作为模板。
3 RT-PCR反应加样后，将PCR管置于PCR仪内进行如下反应：50ºC，反转录30 min；然后94ºC, 2 min进行Taq酶的激活；接着进行35个循环的PCR扩增（扩增条件为94ºC, 20 sec，58ºC, 30 sec，72ºC, 30 sec）；最后进行72ºC, 7 min的延伸。
4 RT-PCR产物的电泳RT-PCR反应结束后，取RT-PCR产物5 μl在1.5%琼脂糖凝胶中电泳30 min。
一步法RT-PCR试剂盒使用说明书
一步法R T-P C R试剂盒使用说明书-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1一步法RT-PCR 检测试剂盒 (一步法RT-PCR 扩增试剂盒)(目录号HS0612-2)产品包装保存条件-20℃ 产品简介本试剂盒是专为一步法RT-PCR 实验研制，逆转录和PCR 在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，在避免污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。
本试剂盒包括全新高效逆转录酶、快速热启动DNA 聚合酶，同时包含适用于逆转录和PCR 扩增的反应缓冲液和实验中所必需的反应组分。
经过重组表达的SuperRT 逆转录酶RNase H 活性缺失，减少了逆转录反应中RNA 的降解，更容易获得全长的cDNA 。
该逆转酶逆转录效率高，可对少量 RNA 模板进行良好的逆转录反应。
SuperRT 逆转录酶与RNA 亲合性高，能通读GC 含量高，二级结构复杂的RNA 模板，获得高产量的cDNA 。
PCR 反应使用的DNA 聚合酶具有扩增效率高、延伸速度快的优良性能。
独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。
使用该试剂盒能够方便快捷的在同一个反应管内完成逆转录和PCR 扩增反应。
使用本试剂盒扩增得到的目的产物3′端附有一个″A ″碱基，可直接用于T/A 克隆。
北京厚生博泰科技有限公司 Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.产品特点1. 效率高，可以高效转录GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。
2. 耐热性及稳定性强。
3. 操作简单迅速,最大限度的避免污染。
4. 独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。
使用方法（注意：1 ng ~ 5 μg总RNA可建立20 μl反应体系，如果总RNA量大3. 涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
4. 将热循环仪预热到45℃，将PCR管置于热循环仪中，进行RT-PCR反应。
反应条件：注意：1）一般PCR实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为20 ~ 30秒，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
口蹄疫RT-PCR检测试剂盒使用说明
口蹄疫病毒 RT-PCR检测试剂盒使用说明书用途口蹄疫病毒( FMDV)反转录聚合酶链反应( RT-PCR)，用于检测疑似感染动物的水疱皮或水疱液中所有血清型的 FMDV，适用于 FMDV的检测、诊断和流行病学调查。
原理利用离心柱内硅基质膜提取 RNA，在反转录酶的作用下，以 RNA为模板，以引物为起点合成与 RNA模板互补的 cDNA链。
在 TaqDNA聚合酶的作用下，经高温变性、低温退火、中温延伸的循环，使特异 DNA片段的拷贝数放大一倍。
经过 35次循环，最终使扩增 DNA 片段放大了数百万倍。
将扩增 DNA片段进行电泳，经染色后，在紫外灯照射下，肉眼可见到 DNA片段的扩增带。
试剂1．试剂盒组成2．试剂盒保存期：6个月。
Store:4℃需要自备的器材1．仪器：分析天平、离心机、 PCR扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪(或紫外分析仪)、微波炉、组织研磨器、-20℃冰箱、可调移液器(2µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
2．耗材：眼科剪、眼科镊、称量纸、 20mL一次性注射器、生理盐水、琼脂糖、 500mL量筒、500 mL锥形瓶、经焦碳酸二乙酯( DEPC)水处理的灭菌 1.5mL离心管和吸头( 10 µL、200µL、1000 µL)、灭菌双蒸水。
使用注意事项1．所有接触病料的物品均应合理处理，以免污染实验室。
2．PCR整个试验分配液区、模模板提取区扩增区电泳区。
严禁器材和试剂倒流。
1所有试剂应在规定的温度储存， -20℃保存的各试剂使用前应放于室温完全融化，使用后立即放回 -20℃。
2染色液低毒，应于室温条件避光保存，操作时应戴上手套。
3注意防止试剂盒组分受污染。
使用前将红盖管8000 rpm离心15 s，使液体全部沉于管底，放于冰盒中，吸取液体时移液器吸头尽量在液体表面层吸取。
1不要使用超过有效期限的试剂，试剂盒之间的成分不要混用。
BioRT逆转录扩增（RT-PCR）试剂盒说明书（一步法）
b、按以下条件进行PCR反应94℃3m i n94℃30s25-35循环***37℃-65℃**30s72℃****45s-7min72℃5min注：*RT产物可增加至5μl 。
**退火温度根据引物Tm值调整，一般为Tm-5℃。
Control引物退火温度为55℃。
*** 当实验样品RNA特别稀少时，可将循环数增加至40-45循环。
**** 延伸时间根据PCR产物大小确定，一般1kb/min 。
Control引物延伸时间45s。
c、反应结束后，取3-5 μl PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，确认PCR反应产物。
如果此PCR产物需用于以后实验，应将PCR产物冷冻保存。
RNA control反应时，退火温度55度，30个循环，扩增片段大小为500bp。
使用提示1. RNA模板可以采用总RNA或mRNA，建议使用Biozol(BSC51M1)制备高质量RNA；2. RT实验应避免RNase污染，可采用以下措施：1）因人的皮肤表面和唾液都有RNase，因此实验中应戴一次性手套和口罩；2） RT实验应使用专门的仪器和耗材，建议在专门区域操作RNA；3） RT实验相关耗材应使用干热灭菌（180℃，60分钟）或用0.1％ DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时后在121℃高压灭菌30分钟；3. AMV逆转录酶，DNA聚合酶和RNase抑制剂在取用之前应离心后再吸取，吸取时动作要慢，使用后应尽快放回-20℃；4. dNTP应避免反复冻融以免失效；5. 引物的选择可根据具体情况，Oligo-dT适用于具有PolyA尾的RNA(一般是真核生物的mRNA)，Random Hexamer Primer适用于所有RNA(包括mRNA,rRNA,tRNA等)，尤其适用于有复杂二级结构的RNA，特异性引物适用于已知模板序列的RNA；6. PCR反应中MgCl2浓度可依据不同条件进行调整，当目的片段长度大于2kb时，我们建议增加MgCl2浓度，以0.5mM间隔梯度增加。
口蹄疫RT-PCR检测试剂盒使用说明
口蹄疫病毒 RT-PCR检测试剂盒使用说明书用途口蹄疫病毒( FMDV)反转录聚合酶链反应( RT-PCR)，用于检测疑似感染动物的水疱皮或水疱液中所有血清型的 FMDV，适用于 FMDV的检测、诊断和流行病学调查。
原理利用离心柱内硅基质膜提取 RNA，在反转录酶的作用下，以 RNA为模板，以引物为起点合成与 RNA模板互补的 cDNA链。
在 TaqDNA聚合酶的作用下，经高温变性、低温退火、中温延伸的循环，使特异 DNA片段的拷贝数放大一倍。
经过 35次循环，最终使扩增 DNA 片段放大了数百万倍。
将扩增 DNA片段进行电泳，经染色后，在紫外灯照射下，肉眼可见到 DNA片段的扩增带。
试剂1．试剂盒组成2．试剂盒保存期：6个月。
Store:4℃需要自备的器材1．仪器：分析天平、离心机、 PCR扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪(或紫外分析仪)、微波炉、组织研磨器、-20℃冰箱、可调移液器(2µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
2．耗材：眼科剪、眼科镊、称量纸、 20mL一次性注射器、生理盐水、琼脂糖、 500mL量筒、500 mL锥形瓶、经焦碳酸二乙酯( DEPC)水处理的灭菌 1.5mL离心管和吸头( 10 µL、200µL、1000 µL)、灭菌双蒸水。
使用注意事项1．所有接触病料的物品均应合理处理，以免污染实验室。
2．PCR整个试验分配液区、模模板提取区扩增区电泳区。
严禁器材和试剂倒流。
1所有试剂应在规定的温度储存， -20℃保存的各试剂使用前应放于室温完全融化，使用后立即放回 -20℃。
2染色液低毒，应于室温条件避光保存，操作时应戴上手套。
3注意防止试剂盒组分受污染。
使用前将红盖管8000 rpm离心15 s，使液体全部沉于管底，放于冰盒中，吸取液体时移液器吸头尽量在液体表面层吸取。
1不要使用超过有效期限的试剂，试剂盒之间的成分不要混用。
SYBR一步法荧光定量PCR试剂盒使用说明书
一步法实时RTPCR 检测试剂盒（SYBR 一步法荧光定量PCR 试剂盒）(目录号HS0614)产品包装保存条件-20℃避光保存。
产品简介本产品是一步法Real-Time qRT-PCR 专用试剂盒。
所含的SYBR Green I 荧光染料可以与所有的双链DNA 相结合，使该产品可以用于多种不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。
使用本产品进行Real Time qRT-PCR 反应，逆转录和定量PCR 在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，避免了污染的同时提高了实验效率。
本试剂盒中包含全新高效逆转录酶，具有与RNA 高亲和性的特点，能通读GC 含量高、二级结构复杂的RNA 模板；所包含的经化学修饰的热启动DNA 聚合酶最大限度的减少PCR 扩增全程中的非特异性扩增产物的产生，极大提高了荧光定量PCR 反应的精确性；所包含的缓冲系统使以上两种酶同时发挥最大的功效，提高效率。
所含的ROX 染料调节PCR 反应过程中管与管之间的加样误差，适用于以ROX 作为校正染料的所有荧光定量PCR 仪。
北京厚生博泰科技有限公司 Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.产品特点1. 反转录和PCR在一个反应管中完成，方便快捷，最大限度的避免污染。
2. 与RNA具有高亲和性，能通读GC含量高、二级结构复杂的RNA模板。
3. 热启动酶有效抑制非特异性扩增，极大提高了荧光定量PCR反应的精确性。
产品应用基因表达分析；拷贝数分析。
使用方法1. 将RNA 模板、引物、2×UltraSYBR One Step RT-qPCR Buffe（r With ROX）、SuperEnzyme Mix 和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2. PCR 反应体系：•注意：通常引物浓度以0.2 uM可以得到较好结果，可以终浓度0.1 ~ 0.5 uM作为设定范围的参考。
RT-PCR试剂盒说明书
RT-PCR试剂盒说明书公司：TIANGENOrder:0Toll-free:800-990-6057/400-810-6057TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO.,LTD版本号：KR121221TIANScript RT KitTIANScript cDNA第一链合成试剂盒目录号：KR104产品内容：储存条件：-20℃保存。
产品介绍：TIANScript RT Kit（cDNA第一链合成试剂盒）是专为两步法RT-PCR第一步实验配制的，具有高灵敏度的RT-PCR反应系统，可以从极低量的总RNA或poly (A)+ RNA 合成第一链cDNA。
与PCR反应相结合，可用于检测稀有基因的表达、从极少量细胞中定量检测特定mRNA的表达水平、克隆特定基因的cDNA片段等。
产品特点：合理配备了与cDNA第一链合成反应相关的各种组分，该试剂盒中的TIANScript M-MLV具有高效的逆转录酶活性，对后续的PCR或定量PCR实验兼容性好，适合于各种PCR耐热聚合酶。
注意事项：1. 用于cDNA合成反应的溶液试剂尽量可能用DEPC进行处理，并在高压灭菌后使用。
有些试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤除菌处理。
2. RNA样品要避免基因组DNA污染。
3. 避免多次反复冻融RNA，使RNA保持在冰浴中处融化状态。
4. 试剂盒的各组成成分应在-20℃保存。
5. cDNA产物应置于-20℃保存。
操作步骤：1. 在冰浴的无核酸酶的离心管中加入如下反应混合物：1-5 μg总RNA或50-500 ng mRNA；2 μl oligo (dT)15或2 μl Random或2 pmol基因特异引物；2 μl Super Pure dNTPs mM each);补RNase-Free ddH2O定容至μl。
2. 70℃加热5min后迅速在冰上冷却 2 min。
简短离心收集反应液后加入以下各组分：4 μl 5×First-Strand Buffer (含有DTT)；μl RNasin。
禽流感通用型RT—PCR快速检测试剂盒
段长度 约为 ２ ９ ｐ 与预期 的结 果相 一致 ２ｂ ，
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利 用大 连宝 生物 公 司的 Ｄ Ａ回收试 剂 盒． Ｎ 从 琼 脂 糖凝 胶 中 回收 Ｐ Ｒ产物 克 隆 到 Ｄ Ｅ Ｔ载 Ｃ Ｇ Ｍ— 体 中。转化 Ｄ ｃ大肠 杆菌 ． Ｈ５ ｘ 挑选 阳性 克隆 ， 上 送 海联合 基 因公 司完成 Ｄ Ａ序列测 定 Ｎ １ 禽流 感 通 用型 一步 ＲＴ— ＣＲ 检 测试 剂 盒 的 ． ８ Ｐ 组 装
饲料广４ ０２ ２１ 年第 １ 期 ９
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微 生态专栏
ｍｉ ｒ ｃｏ㈣ ｌｇ ｏ）
禽流感通用型 Ｒ — Ｃ Ｔ Ｐ Ｒ快速检测试剂盒
程福 亮 梁 瑾 范群 平 陈甜甜 宿 志瑞 谷 巍
摘
要 ： 建 立 一 种 简 单 、 速 、 敏 、 确 的 禽 流感 为 快 灵 准
图 １所 示 。
ｄ Ｔ ２５ Ｎ Ｐ（ ． ｍＭ） Ｒｎ ｓ （０ Ｕ ａｉ １０ ， Ｌ） ｎ
ＡＭＶ 反 转 录 酶
ｒａ ｔｑ
上游 引物
下 游 引 物 模 板 ＲＮＡ
Ｔｏａ ｔｌ
程序 ：
ａ
一— ｉ
第一 阶段 ． 反转 录 ４ ￣／５ ｎ ２Ｃ４ ｍｉ
～
图 １ 禽流感 Ｍ 基因 Ｒ Ａ Ｎ 的两步法 Ｒ — Ｃ Ｔ Ｐ Ｒ产 物鉴定电泳图
注：、 １ ２为 病料 Ｐ Ｒ 扩 增 结果 ； ： ２ ０ 。 Ｃ Ｍ ＤＬ ０ ０
ｂ 第 二 阶 段 ． 变 性 ９ ｑ／ｍ ｎ 预 ５Ｃ３ ｉ
ｃ第 三 阶 段 ，４Ｃ ３ ｓ５ ℃／０ ，２Ｃ４ ｓ３ ９ ｏ／０ ，５ ３ ｓ７ ｑ ／５ ，０
反转录试剂盒说明书
行业文档TaKaRa Code：DRR014APrimeScript™ RT-PCR Kit(50次量)目录内容页码●制品说明 1●制品内容 1●保 存 2●原 理 2●试剂盒特点 3●RNA样品制备 3●使用注意 4●反转录引物的选择 5●实验操作 5●实验例 7 ●Q&A8●制品说明PCR（Polymerase Chain Reaction；聚合酶链式反应）是一种体外扩增DNA的简单而有效的方法。
虽然原理上PCR法是扩增DNA，RNA不能直接被扩增，但是经过反转录酶的作用把RNA反转录成cDNA 后，PCR法便可应用于RNA的解析了。
迄今为止，此方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。
PrimeScript™ RT-PCR Kit是具有良好的延伸性能与高扩增效率的2 Step RT-PCR试剂盒。
反转录反应使用了TaKaRa独自开发的新型反转录酶PrimeScript™ RTase；PCR反应使用了扩增性能良好的Hot Start 型DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq TM HS。
本试剂盒具有以下优点：1.进行高效的RT-PCR扩增。
2.在标准的RNA反转录反应温度（42℃）下，便可使具有复杂结构的RNA进行良好的延伸，可以避免RNA在高温条件下的降解。
3.能有效抑制非特异性的PCR扩增。
4.使用本试剂盒扩增得到的目的产物3′端附有一个A碱基，可以直接克隆于T-Vector中。
本试剂盒含有反转录反应及PCR扩增反应所需的全部试剂。
●制品内容（50次量*1）1.PrimeScript™ RTase（for 2 Step）2.5×PrimeScript™ Buffer3.RNase Inhibitor（40 U/μl）4.dNTP Mixture（10 mM each）5.Oligo dT Primer（2.5 μM）6.Random 6 mers（20 μM）7.TaKaRa Ex Taq TM HS（5 U/μl）8.10×PCR BufferⅡ9.Control F-1 Primer*2（20 μM）10.Control R-1 Primer*3（20 μM）11.Positive Control RNA（2×105 copies/μl）12. RNase Free dH2O25 μl 200 μl 25 μl 150 μl 50 μl 50 μl 25 μl 250 μl 10 μl 10 μl 20 μl 1 ml*1 反转录反应20 μl 、PCR反应50 μl体系时可使用50次。
RT-PCR试剂盒说明书
R T-P C R试剂盒说明书-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1RT-PCR试剂盒说明书公司：TIANGENOrder:0Toll-free:800-990-6057/400-810-6057TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO.,LTD版本号：KR121221TIANScript RT KitTIANScript cDNA第一链合成试剂盒目录号：KR104储存条件：-20℃保存。
产品介绍：TIANScript RT Kit（cDNA第一链合成试剂盒）是专为两步法RT-PCR第一步实验配制的，具有高灵敏度的RT-PCR反应系统，可以从极低量的总RNA或poly (A)+ RNA合成第一链cDNA。
与PCR反应相结合，可用于检测稀有基因的表达、从极少量细胞中定量检测特定mRNA的表达水平、克隆特定基因的cDNA 片段等。
产品特点：合理配备了与cDNA第一链合成反应相关的各种组分，该试剂盒中的TIANScript M-MLV具有高效的逆转录酶活性，对后续的PCR或定量PCR实验兼容性好，适合于各种PCR耐热聚合酶。
注意事项：1. 用于cDNA合成反应的溶液试剂尽量可能用DEPC进行处理，并在高压灭菌后使用。
有些试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤除菌处理。
2. RNA样品要避免基因组DNA污染。
3. 避免多次反复冻融RNA，使RNA保持在冰浴中处融化状态。
4. 试剂盒的各组成成分应在-20℃保存。
5. cDNA产物应置于-20℃保存。
操作步骤：1. 在冰浴的无核酸酶的离心管中加入如下反应混合物：1-5 μg总RNA或50-500 ng mRNA；2 μl oligo (dT)15或2 μl Random或2 pmol基因特异引物；2 μl Super Pure dNTPs mM each);补RNase-Free ddH2O定容至μl。
大连宝生物RT-PCR说明书RR820A
Code No. RR820A 研究用SYBR®Premix Ex Taq TM II(Tli RNaseH Plus)说明书v201405Da目录内容页码●制品说明 1 ●试剂盒原理 1 ●制品内容 2 ●试剂盒外必备主要试剂和仪器 2 ●保存 2 ●使用注意 3 ●操作方法 3 ●实验条件的选择8 ●附录9 ●质量标准11 ●关联产品11●制品说明本制品是采用SYBR® Green I*嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂。
制品中含有Real Time PCR 反应的最适浓度SYBR® Green I，是一种2×浓度的Premix Type试剂，进行实验时，PCR反应液的配制十分方便简单。
本制品中还添加了Tli RNaseH(耐热性RNaseH)，以cDNA作为模板进行PCR反应时，可以最大限度抑制由于cDNA中残存mRNA对PCR反应造成的阻害作用。
本制品Buffer经过改良，使反应特异性比SYBR®Premix Ex Taq(Tli RNaseH Plus)（Code No.RR420A）更高。
能抑制非特异性反应，可以在宽广的范围内进行更加准确的定量。
本Buffer和Hot Start法用DNA 聚合酶TaKaRa Ex Taq HS组合使用，可以进行重复性好、可信度高的Real Time PCR解析。
特长：1. 适用于Real Time PCR反应，可以快速、准确地对目的基因进行检测、定量。
2. 在2×浓度的Premix中，预先混有SYBR® Green I，PCR反应液配制时，只需加入模板、引物、灭菌蒸馏水便可进行Real Time PCR反应，操作简单方便。
3. DNA聚合酶使用了TaKaRa Ex Taq HS，可以进行Hot Start法PCR反应，再与Takara Bio公司独自开发的Buffer系统相结合，具有高扩增效率，高扩增灵敏度之特点。
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RT-PCR试剂盒说明书
公司：TIANGEN
Order:0
Toll-free:800-990-6057/400-810-6057
TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO.,LTD
版本号：KR121221
TIANScript RT Kit
TIANScript cDNA第一链合成试剂盒
目录号：KR104
储存条件：-20℃保存。
产品介绍：
TIANScript RT Kit（cDNA第一链合成试剂盒）是专为两步法RT-PCR第一步实验配制的，具有高灵敏度的RT-PCR反应系统，可以从极低量的总RNA或poly (A)+ RNA合成第一链cDNA。
与PCR反应相结合，可用于检测稀有基因的表达、从极少量细胞中定量检测特定mRNA的表达水平、克隆特定基因的cDNA 片段等。
产品特点：
合理配备了与cDNA第一链合成反应相关的各种组分，该试剂盒中的TIANScript M-MLV具有高效的逆转录酶活性，对后续的PCR或定量PCR实验兼容性好，适合于各种PCR耐热聚合酶。
注意事项：
1. 用于cDNA合成反应的溶液试剂尽量可能用DEPC进行处理，并在高压灭菌后使用。
有些试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤除菌处理。
2. RNA样品要避免基因组DNA污染。
3. 避免多次反复冻融RNA，使RNA保持在冰浴中处融化状态。
4. 试剂盒的各组成成分应在-20℃保存。
5. cDNA产物应置于-20℃保存。
操作步骤：
1. 在冰浴的无核酸酶的离心管中加入如下反应混合物：
1-5 μg总RNA或50-500 ng mRNA；
2 μl oligo (dT)15或2 μl Random或2 pmol基因特异引物；
2 μl Super Pure dNTPs mM each);
补RNase-Free ddH2O定容至μl。
2. 70℃加热5min后迅速在冰上冷却2 min。
简短离心收集反应液后加入以下各组分：
4 μl 5×First-Strand Buffer (含有DTT)；μl RNasin。
3. 加1 μl（200U）TIANScript M-MLV，轻轻用移液器混匀。
如果用随机引物，请将离心管置25℃温浴10 min。
4. 42℃温浴50 min。
5. 95℃加热5 min终止反应，置冰上进行后续实验或冰冻保存。
如果需要RNase H处理，进行步骤6。
否则，进行步骤7。
6. 加RNase H 1 μl (2 U)，37℃温浴20 min以降解RNA。
然后95℃加热5 min 使酶失活。
7. 用RNase-Free ddH2O将反应体系稀释到50 μl，取2-5 μl进行PCR扩增反应。
PCR反应：
应吸取10%的第一链反应液（2 μl）进行PCR反应；即使加入更多量的第一链反应液也不能增加其扩增的产物量，反而可能会抑制正常的PCR反应。
2. 94℃加热变性2min。
3. 设置15到40个PCR循环。
退火与延伸条件依引物和模板而定。