实验东方田鼠病原体学等级及检测方法(征求意见稿)
实验动物学复习题答案(更新)
实验动物学复习题答案（完整版改）实验动物：指经人工培育，对其携带的微生物实行控制，遗传背景明确，来源清楚，用于科学研究、教学、生产、检定及其他科学实验的动物。
实验用动物：广义指一切用于科学实验的动物，也包括试验动物。
动物实验：为科研、教学、药物检定等目的，对实验动物进行物理、化学、生物等因素处理，观察其反应，获得实验数据，解决科研中问题的过程。
实验动物学：研究动物实验和实验动物的科学。
以实验动物为研究对象，专门研究实验动物的饲养繁殖及育种、实验动物的标准化、实验动物的质量监测、野生动物的实验动物化及其开发应用以及动物实验技术的科学。
实验动物环境：是指人工控制的, 供实验动物繁殖、生长的特定场所及有关条件, 即围绕实验动物所有事物的总和。
实验动物设施：界定实验动物生存空间、维持其所需的建筑物和设备等。
AEIR:生物科学研究四个基本条件：animal、equipment、information、reagent（试剂）根据对微生物、寄生虫的控制程度将实验动物划分为4个等级：普通级动物、清洁动物、无特定病原体动物、无菌动物。
普通级动物是微生物和寄生虫控制级别最低的按动物；要求不携带所规定的人兽共患病病原和动物烈性传染病病原，以及人兽共患寄生虫。
清洁动物是根据我国国情而设立的等级动物，除普通级动物应排除的病原和寄生虫外，不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原和寄生虫。
无特定病原体动物通常被称为SPF动物，除清洁动物应排除的病原和寄生虫外，不携带主要潜在感染或条件致病和对科学按干扰大的病原和寄生虫。
无菌动物指无可检出一切生命体的动物。
导致人兽共患病的主要病原体1、病毒—淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、狂犬病病毒、猕猴疱疹病毒1型（B病毒）、汉坦病毒（流行性出血热病毒）。
2、细菌—沙门菌、布鲁杆菌、志贺菌、结核分歧杆菌、钩端螺旋体。
3、真菌—皮肤病原真菌。
4、寄生虫—弓形虫。
1988年, 原国家科委颁布了《实验动物管理条例》, 标志着我国实验动物工作走上了行政法规管理的轨道。
ICH-GCP E6(R2)中文版
E6(R2)人用药品注册技术要求国际协调会ICH协调指导原则ICH指导委员会2016年11月9日当前版本：第四阶段中文编译：中国GCP联盟 & 临床研究大汇E6(R1)译者序公元1996年，ICH-GCP正式发布R1版，彼时之中国，了解GCP的人仅限于当时中国卫生部培养的数百名医学专家，规范的临床试验法规与体系还在起草中。
1998年3月卫生部而发布了中国第一部GCP（试行），同年5月实施；1998年国务院机构改革成立了国家药品监督管理局，1999年9月1日实施的《药品临床试验管理规范》（局令13号，已废止），在整整4年之后的2003年9月1日，我国的GCP，《药物临床试验质量管理规范》（局令第3号）颁布实施并持续至今。
受制于起步阶段的能力所限，我们的GCP法规只有70条款共计12998字，而对比ICH-GCP则有383条款共计27936单词。
R1版的ICH-GCP，2003年国家药监局中国药品生物制品检定所获权组织专家翻译，才有过中文版（未曾公开发布），陆续有过多个版本的企业/组织发布版本，而以国家药品审评中心（CDE）发布的官译稿件，时间却很明确，是在2016年8月5日才得以发布（如下图）。
可以说，无论是标准的水平高低还是时代的步伐快慢，我们都曾落后了太多太多。
人生如梦，岁月如歌，春去秋来，夏行冬至。
二十载岁月匆匆而过。
2016年11月30日，ICH正式颁布了GCP的增补件R2，标志着全球药物临床试验进入到了一个崭新的时代，无独有偶，仅仅过去了2天，2016年12月2日，中国国家食品药品监督管理总局发布了《药物临床试验质量管理规范》的第二次征求意见稿，大量新内容参考了ICH-GCP R1甚至R2，意见稿直接以超30000字的信息量向全中国全世界展现它的雄心：今天的和未来的中国药物临床试验，在经历了蹒跚学步与青春期的躁动之后，正大幅度的向着国际先进水平看齐。
天行健，君子当自强不息，“中关村玖泰药物临床试验技术创新联盟/中国药物临床试验机构联盟”携手“临床研究大汇”，有志于协助我国临床研究行业在这次革新中及时跟上时代潮流，我们在R2发布后的7日内，参考借鉴CDE的R1中文版，完成了中文版的翻译与校对工作，在此时正式向全球华语用户推送，由于时间紧，我们的工作可能有不足之处，在此虚心并诚恳的接受所有批评意见。
东方田鼠和小鼠感染日本血吸虫后组织与血清蛋白组分差异比较研究
东方田鼠和小鼠感染日本血吸虫后组织与血清蛋白组分差异比较研究成钢;王京仁;王兴平;李淑红【摘要】To observe and compare the differences of protein fractions of tissue and serum at different time points after cercariae infecting Microtus fortis and mice. The liver, spleen, lung and serum were collecting from cercariae infecting Microtus fortis at different time points (0, 7, 12, 45 days post-infection) and mice (0, 7, 12, 45 days post-infection) respectively. The individual soluble proteins were separated by SDS-PAGE and stained with kaomasi blue R-Z50. The band sizes and their differences were analyzed. Results showed that the 150 ku proteins fractions in liver was more obvious and high expressed after 7, 12 days post-infection in mice than in Microtus fortis; the 40 to 50 ku proteins fractions of spleen was high-expressed after cercariae infecting Microlus fortis % the same fractional protein of lung in Microtus fortis showed conspicuous change than other time points; the immunoglobulin in serum of mice was increased significantly after cercariae infecting. There were differences of protein fractions in tissue and serum at different time points after cercariae infecting Microtus fortis and mice. The 150 ku proteins fractions in liver and serum of Microtus fortis was characterized and higher expressed than other animals. It might be an important effective molecule against Schistosoma japonicum infection in Microtus fortis.%探讨东方田鼠和小鼠感染日本血吸虫前后不同时点组织与血清中蛋白质电泳谱的变化.分别提取东方田鼠感染日本血吸虫(0、7、12、25 d)和小鼠感染日本血吸虫(0、7、12、45 d)后的肝脏、脾脏、肺脏蛋白及血清进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,对结果比较分析并进行组织病理形态学观察.结果显示,小鼠感染日本血吸虫第7和12天后肝脏150 ku附近蛋白质条带较东方田鼠表达量明显增高;东方田鼠在感染日本血吸虫后40～50 ku 附近蛋白质条带较正常东方田鼠表达明显上调；感染第7天后肺脏40 ku附近蛋白质条带较其他时间点变化明显；小鼠感染日本血吸虫第7、12和45天后血清中IgG类蛋白质表达量较东方田鼠显著增高.东方田鼠和小鼠在日本血吸虫感染后不同时点间的组织及血清蛋白组分存在差异,东方田鼠肝脏和血清中150 ku附近蛋白条带较其他动物特异,蛋白质表达丰度高,该蛋白可能与东方田鼠抗日本血吸虫相关.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2012(039)007【总页数】4页(P99-102)【关键词】东方田鼠;日本血吸虫;蛋白组分;血清蛋白【作者】成钢;王京仁;王兴平;李淑红【作者单位】湖南文理学院动物学湖南省高校重点实验室,环洞庭湖生物资源保育与利用研究中心,湖南常德415000;湖南文理学院动物学湖南省高校重点实验室,环洞庭湖生物资源保育与利用研究中心,湖南常德415000;湖南文理学院动物学湖南省高校重点实验室,环洞庭湖生物资源保育与利用研究中心,湖南常德415000;湖南文理学院动物学湖南省高校重点实验室,环洞庭湖生物资源保育与利用研究中心,湖南常德415000【正文语种】中文【中图分类】S852.3东方田鼠（Microtus fortis，Mf）是一种栖居于中国长江流域的啮齿类动物，流行病学调查和人工感染试验均证明其对日本血吸虫（Schistosoma japonicum，Sj）感染具有天然抗性，且这种抗性能稳定遗传（朱国正等，1991）。
实验动物标准大全
部分：实验用羊
DB11/T 1460.3-2017
实验动物 遗传质量控制 第 3 部分：
实验用羊
DB11/T 1461.3-2017
6
实验动物 病理学诊断规范 第 3 部
分：实验用羊
DB11/T 1462.3-2017
羊
实验动物 配合饲料 第 3 部分：实验
用羊
DB11/T 1463.3-2017
实验动物 环境条件 第 3 部分：实验
T/CALAS 5-2017 实验动物 动物实验报告指南(附实施指南)
T/CALAS 6-2017 实验动物 动物实验偏倚风险评估指南(附实施指南)
T/CALAS 7-2017 实验动物 动物实验生物安全通用要求(附实施指南)
T/CALAS 8-2017 实验动物 树鼩微生物学等级及监测(附实施指南)
部分：实验用牛
DB11/TΒιβλιοθήκη 1460.2-2017实验动物 遗传质量控制 第 2 部分：
实验用牛
DB11/T 1461.2-2017
6
实验动物 病理学诊断规范 第 2 部
分：实验用牛
DB11/T 1462.2-2017
牛
实验动物 配合饲料 第 2 部分：实验
用牛
DB11/T 1463.2-2017
实验动物 环境条件 第 2 部分：实验
江苏
普通级鸡 1 普通级实验用鸡 饲养管理规范 DB32/T 2130-2012
江苏
犬
2 实验用史宾格犬 第 1~2 部分
DB32/T 2913.1~2-2016(2 个)
江苏
实验动物 生物安全型小鼠、大鼠独
立通风笼具通用技术要求
DB23/T 2057.1-2017
国务院批准畜牧兽医医疗卫生津贴新调
动保资讯毒材料调查和处置等工作要求通知如下。
1）农业部指定中国兽医药品监察所（国家动物病原微生物菌毒种保藏中心）、中国农业科学院兰州兽医研究所（国家口蹄疫参考实验室）作为我国亚洲I型口蹄疫病毒材料指定保藏机构。
请中国兽医药品监察所会同中国农业科学院兰州兽医研究所，研究提出亚洲I型口蹄疫抗原储备规模、储备方式、抗原质量监控和管理方案，以及储备单位推荐名单，于2016年1月31日前报我部兽医局。
2）各有关疫苗生产企业以及各省级动物疫病预防控制机构、兽医科研单位、大专院校应全面清查保藏亚洲I型口蹄疫活病毒的情况，详细记录保存地点、数量等情况并总结疫苗生产过程中的生物安全管理情况，提出转交指定保藏机构保藏的计划或销毁计划。
疫苗生产企业于2016年1月15日前，其他单位于2016年3月15日前向所在地省级兽医部门报告。
各省级兽医部门应督促辖区内各有关疫苗企业、单位及时提交报告，汇总后分别于2016年1月31日、2016年3月31日前报我部兽医局，同时抄送中国兽医药品监察所、中国动物疫病预防控制中心。
3）请中国农业科学院兰州兽医研究所检索查阅国内有关单位、专家曾经在国内外发表过的涉及亚洲I型口蹄疫病毒实验活动的论文、基因银行（Gen-Bank）的毒株信息等，于2016年3月15日前将论文作者、毒株信息提交人、所在单位、所涉及实验时间、实验主要内容、论文链接等信息统计汇总报我部兽医局。
4）2016年5月底前，除指定保藏机构、口蹄疫疫苗定点生产企业以及我部指定的亚洲I型口蹄疫抗原储备单位外，其他保藏有亚洲I型口蹄疫活病毒和抗原的兽医科研单位、大专院校、动物疫病预防控制机构、疫苗企业，应在所在地省级兽医部门监督下，按照所提计划，将所保藏的亚洲I型口蹄疫活病毒和阳性血清交指定保藏机构，或全部销毁，并通过所在地省级兽医部门将转交或销毁情况报我部兽医局。
5）请中国兽医药品监察所组织有关疫苗生产企业，对现有口蹄疫O型-亚洲I型二价灭活疫苗、O 型-亚洲I型-A型三价灭活疫苗研究提出去除亚洲I型组分的工作计划、已生产含有亚洲I型口蹄疫组分成品疫苗的处置方案，于1月31日前报我部兽医局。
水生实验动物质量监测
1. 分支杆菌病 病原：海分支杆菌、脓肿分支杆菌、龟分 支杆菌、偶发分支杆菌、草分支杆菌和嗜 血分支杆菌等。 临床症状和病变：溃疡、出血、头部周围 充血、鱼鳞凸起、鱼鳍磨损、皮肤或鳃苍 白等。内脏器官白色结节。 显微观察：肉芽肿 诊断：抗酸染色、PCR确诊。
2. 滑动细菌（细菌性鳃病、环境性鳃病） 病原：黄杆菌属、屈桡杆菌等菌属；淡水 鱼主要感染柱状黄杆菌和嗜鳃黄杆菌。 临床症状和病变：呼吸困难，鱼鳍和鱼尾 表现特征性鱼鳍腐蚀，白色。 显微观察：上皮增生，次级鳃瓣融合，有 的坏色，病变部位可见大量细菌。 诊断：观察到细菌。
14
志贺 菌、 结核 杆菌 等
鼠痘病 毒、汉 坦病毒、 仙台病 毒和小 鼠肝炎 病毒等
兔瘟、 B病毒、 体外 仙台 逆转 寄生 病毒 录病 虫、 等 毒等 弓形 体等
弓形 弓形体、 体、 溶组织阿 米巴等 兔脑 原虫、 球虫 等
数量 16 （项）
9
14
8
9
7
6
5
实验动物的微生物学、寄生虫学质量监测
实 验 动 物 营 养 和 饲 料 （12）
实验动物配合饲料通用质量标准 GB14924.1 实验动物配合饲料卫生标准 GB14924.2 实验动物小鼠、大鼠配合饲料 GB14924.3 实验动物兔配合饲料 GB14924.4 实验动物豚鼠配合饲料 GB14924.5 实验动物地鼠配合饲料 GB14924.6 实验动物犬配合饲料 GB14924.7 实验动物猴配合饲料 GB14924.8 实验动物配合饲料常规营养成分的测定 GB/T14924.9 实验动物配合饲料氨基酸的测定 GB/T14924.10 实验动物配合饲料矿物质和微量元素的测定 GB/T 14924.12 实验动物配合饲料维生素的测定 GB/T 14924.11
实验用羊驼 寄生虫和微生物学等级及监测
实验用羊驼寄生虫和微生物学等级及监测1 范围本文件规定了实验用羊驼寄生虫学和微生物学等级及监测的术语和定义、等级分类、检测要求、检测程序、检测方法、检测规则、结果判定、判定结论、报告。
本文件适用于实验用羊驼寄生虫和微生物等级监测。
2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 14922.1 实验动物寄生虫学等级及监测GB/T 14922.2 实验动物微生物学等级及监测GB/T 14926.46 实验动物钩端螺旋体检测方法GB/T 14926.8 动物实验支原体检测方法GB/T 18089 蓝舌病病毒分离、鉴定及血清中和抗体检测技术GB/T 18448.1 实验动物体外寄生虫检测方法GB/T 18448.2 实验动物弓形虫检测方法GB/T 18448.6 实验动物蠕虫检测方法GB/T 18448.10 实验动物肠道鞭毛虫和纤毛虫检测方法GB/T 18641 伪狂犬病诊断技术GB/T 18646 动物布鲁氏菌病诊断技术GB/T 18647 动物球虫病诊断技术GB/T 18653 胎儿弯曲杆菌的分离鉴定方法GB/T 18935 口蹄疫诊断技术GB/T 23239 伊氏锥虫病诊断技术GB/T 27637 副结核分枝杆菌实时荧光PCR 检测方法GB/T 27982 小反刍兽疫诊断技术NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范NY/T 561 动物炭疽诊断技术NY/T 1466 动物棘球蚴病诊断技术NY/T 1949 隐孢子虫卵囊检测技术改良抗酸染色法SN/T 3499 新孢子虫病检疫技术规范SN/T 1087 Q 热检疫技术规范3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
3.1实验用羊驼 experimental alpaca经人工饲育，对其携带的病原微生物和寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚，用于科学研究、教学、生产、检定以及其他科学实验的羊驼。
国家科委、卫生部、农业部、国家医药管理局关于“九五”期间实验动物发展的若干意见
国家科委、卫生部、农业部、国家医药管理局关于“九五”期间实验动物发展的若干意见文章属性•【制定机关】国家科学技术委员会(已撤销),卫生部(已撤销),农业部(已撤销),国家中医药管理局•【公布日期】1997.09.08•【文号】•【施行日期】1997.09.08•【效力等级】部门规范性文件•【时效性】现行有效•【主题分类】基础研究与科研基地正文国家科委、卫生部、农业部、国家医药管理局关于“九五”期间实验动物发展的若干意见各省、自治区、直辖市、计划单列市科委，新疆生产建设兵团科委，国务院有关部门，中国科学院：为了贯彻落实《科研条件发展“九五”计划和2010年远景目标纲要》，进一步推动全国科研条件建设，根据全国科研条件工作会议精神，我们在广泛征求地方、部门及有关单位意见的基础上，对《关于“九五”期间实验动物发展的若干意见》(讨论稿)作了进一步修改，现将《关于“九五”期间实验动物发展的若干意见》印发给你们，请结合地方，部门的实际认真贯彻，做好落实。
国家科委卫生部农业部国家医药管理局一九九七年九月八日关于“九五”期间实验动物发展的若干意见实验动物是医学、生命科学研究的基础和重要支撑条件。
医药、化工、农业、轻工、环保、航天、商检、军工等许多领域的科学研究和生产应用，都离不开实验动物。
在现代科学带动下，实验动物已发展成为一门综合性的新兴学科，其发展程度是反映一个国家生命科学发展水平的重要标志。
当今和未来高科技竞争加剧，现代医学及生物高科技已经成为时代竞争的焦点和制高点。
因此，实验动物科学倍受世界各国的重视，发达国家都投入大量资金，促进实验动物的发展。
我国的实验动物整体上处于初级阶段，发展水平较低，远不能适应现代科技高速发展的需要。
考虑到知识产权保护和我国加入世界贸易组织等因素，如果不提高实验动物科学水平和实验动物质量，我国有关的科研成果和开发的药品将无法得到国际认可，使国内许多领域，尤其是医药和生命科学的研究及实验动物事业的发展受到干扰和阻碍，面临严峻的挑战。
医学实验动物学总结和习题
名词解释：※※※重点1、科学研究的四大基本条件简称AEIR，是实验动物（Laboratory Animal）、设备（Equipment）、信息（Information）、试剂（Reagent）2、※※※“3R”即：替代(Replacement）、减少（Reduction)和优化（Refinement)，其核心是对作为人的替身或“替难者”善待、减少痛苦、降低用量，更重要的是通过“3R”研究进一步开拓人们进行科研的思路,使研究手段更加完善。
替代：应用微生物、细胞、组织、离体器官等替代动物活体实验，亦可用低等动物替代高等动物,甚至用化学分析技术、电子计算机模拟代替整体动物实验。
减少：选用恰当的实验动物进行规范化的动物实验、通过提高实验动物的质量及利用率，从而减少使用动物数量。
优化：使用新的有效的镇痛剂、麻醉剂或改进实验程序、优化实验操作，从而减少动物在实验过程中的痛苦。
3、实验动物科学(Laboratory animal science LAS)：是研究实验动物及其应用的一门科学，包括实验动物和动物实验。
4、实验动物(laboratory animal LA)：指经人工培育，对其携带的微生物进行控制，遗传背景明确，可用于科学实验、药品、生物制品的生产和检定及其它科学研究的动物。
人们运用现代手段和方法培育的具有新的生物学特性的动物品种（系）用于科学研究。
5、实验用动物：一切可用于实验的动物，包括实验动物、经济动物、野生动物。
6、动物实验:为科研、教学、药品检定等目的,对动物进行物理、化学和生物因素处理,观察其反应，获得实验数据，解决科研中的问题。
7、※※※人类疾病的动物模型：是指医学研究中建立的具有人类疾病模拟表现的动物实验对象和相关材料.8、※※实验动物标准化：对动物的质量，繁育条件，实验条件等方面规定的统一技术标准。
按遗传学控制标准即基因的纯合成度，实验动物分为同基因型近交系和F1代9、※※近交系(inbred strain）:经至少连续20代的全同胞兄妹交配培育而成,品系内所有个体都可追溯到起源于第20代或以后代数的一对共同祖先.近交系数达到98.6％以上,C3H (500多种).优点：增加基因纯合性，固定优良性状缺点：出现近交衰退特征：(1)基因纯合性（2）同基因性（3)长期遗传稳定性(4）表型一致性（5)遗传组成独特性（6)分布的广泛性（7）可识别性（8）繁殖力低,生活力弱10、※※※突变系（mutant strain）指正常染色体的基因发生了变异,动物具有一种或多种遗传缺陷。
一种区分田鼠型与非田鼠型鼠疫耶尔森菌的PCR-RFLP方法
鼠疫耶尔森菌（鼠疫菌）是严重自然疫源性疾病——鼠疫的病原菌，广泛分布于我国西北、西南等地区。
我国鼠疫自然疫源地划分为12个型别［1］。
其中，锡林郭勒高原布氏田鼠（Lasiopodomys brandtii）鼠疫疫源地、青藏高原青海田鼠（Lasiopodomys fuscus）鼠疫疫源地的鼠疫菌具有独特的生化、遗传特征，毒力明显低于其他疫源地鼠疫菌，对人及大型哺乳动物不致病［2］。
近年来，已将这类田鼠来源的鼠疫菌定义为一个新的生物型——田鼠型（Microtus）鼠疫菌［3］。
除我国外，蒙古、中亚等地区也有田鼠型鼠疫菌流行［2］，田鼠型鼠疫菌是由假结核耶尔森菌向鼠疫菌进化过程中的一个分支种群［4］。
目前区分田鼠型与非田鼠型鼠疫菌主要依靠基于生化反应的生物分型方法［3］，以及基于差异区段·论著·一种区分田鼠型与非田鼠型鼠疫耶尔森菌的PCR⁃RFLP方法郑霄1，夏连续1，海荣1，张志凯1，蔡虹1，尤鑫2，平静2，李伟11中国疾病预防控制中心传染病预防控制所，传染病预防控制国家重点实验室，北京102206；2北京市疾病预防控制中心摘要：目的建立一种快速区分鉴别田鼠型与非田鼠型鼠疫耶尔森菌（鼠疫菌）的分子分型方法。
方法设计特异引物对93株不同来源、不同生物型鼠疫菌的天冬氨酸酶基因（aspA）进行PCR扩增，用限制性内切酶Hpy CH4Ⅳ对扩增产物进行限制性片段长度多态性（RFLP）分析；直接测序法检测aspA基因多态性。
结果aspA基因扩增产物经Hpy CH4Ⅳ酶切后呈现2种基因型：田鼠型鼠疫菌（38株）均为101、126bp2个条带；非田鼠型鼠疫菌（55株）均为227bp单一条带。
测序结果证实酶切识别位点发生突变导致带型差异。
结论初步建立了鼠疫菌PCR⁃RFLP（聚合酶链反应-限制性片段长度多态性）法aspA基因分型方案，通过Hpy CH4Ⅳ酶切带型差异区分高毒力的非田鼠型菌株与低毒力的田鼠型菌株，适用于疫源地流行病学调查。
野生东方田鼠4种成纤维细胞培养上清对日本血吸虫童虫的体外杀伤效果
１．１ 动 物来 源 野 生东方 田鼠 ５对捕 白衡 阳市衡 东县 新塘镇 杨
实验 动物 与 比较 医 学 Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
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塘 河坝 ，经 鉴 定均 为 长 江 亚种 （Ｍｙ．ｃａｌａｍｏｒｕｍ）， 随 机分 组 ，１对 ／笼 ， 常规 方法 饲 养 于湖 南 文 理 学 院 生命与 环境科 学学 院动物 科学 专业 实验室 ，饲养 条件 与饲 料 同昆明小 鼠［ＳＣＸＫ（￣ ）２０１６—０００２］。雌 雄 合 笼 后 ， 计 算 妊 娠 天数 ，根 据 试 验 需 要 取 不 同 日龄 东方 田鼠作 为试验 用 鼠 。普通级 雄性 新西 兰 白 兔（１．５～２．０ ｋｇ）由中南大 学湘 雅 医学院实验动 物学部 提供 ［ＳＣＸＫ（湘）２０１７—０００２１。 日本血 吸 虫阳性 钉螺 购 自湖 南 省血 吸 虫病 防 治 所 。 １．２ 主要试 剂
【收稿 日期 】２０１８—０５。１０ 【基 金 项ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ目】湖 南文 理 学 院 大学 生 创 新创 业 研 究 项 目（ＺＣ１６２６、
ＹＢ１７１９）；湖南文理学 院芙蓉学 院大学生研究性学 习与创新性实验计划项 目（ＹＢ１７０３） ［作者简介】吴 侠（１９７７一），女，医师，从事妇儿保健医学研究。
吴 侠 ·，成 钢 ｚ，黎 欢 ｚ，李海 霞２，汤志宏 ２ （１．南部 战区空军参谋部 门诊部妇儿科，广州 ５１００７１； ２．湖南文理学院生命 与环境科学学院动物健康 养殖研究所 ，常德 ４１５０００）
［摘要】 目的 为了明确野生东方田鼠 ４种成纤维细胞培 养上清对体外培养的 日本血吸虫童虫的 杀伤效果。方法 以对数生长期 的野生东方田鼠胚胎 、皮肤 、肺脏及腹腔成纤维细胞培养上清液 （实验组）与血吸虫童虫共培养，以ＤＭＥＭ 培养基为空白对照，以含体积分数 ２０％的东方田鼠血 清为阳性对照 ，９６ ｈ内观察与 ４种细胞培养上清共培养的童虫状态，统计死亡率。结果 与野生 东方田鼠腹腔与肺脏成纤维细胞培养上清共培养 ７２ ｈ后 ，童 虫出现死亡特征 ，表现为表膜皱缩 ， 缢痕明显；９６ ｈ后 ，虫体 内容物模糊并溢出，与阳性对照组童虫死亡特征略有不同；野生 东方田 鼠皮肤 、胚胎 、腹腔和肺脏组织成纤维细胞培养上清共培养 ９６ ｈ的血 吸虫童 虫死亡率分别为
《中国药典》2020版—鼠源性病毒检查法国家标准修公示稿
（3）引物序列、探针序列见表1。
表18种病毒引物序列及探针序列
病毒
引物、探针序列
淋巴细胞脉络丛脑膜炎
病毒
上游引物：5’-CATCTGATGTAAAACCCTGCAACT-3’
下游引物：5’-TGCGCTTTTATTTGGAAATTCA-3’
鼠源性病毒检查法
4.荧光定量PCR（Q-PCR）检测法
本法将提取的供试品RNA，反转录成cDNA后，或用提取的供试品DNA，针对8种外源性鼠源病毒设计特异性引物探针，进行荧光定量PCR检测特异性扩增信号，从而测定供试品中外源性鼠源病毒核酸序列，以检查供试品的外源性鼠源病毒污染。
（1）RNA/DNA提取试剂：RNA/DNA的提取可使用酚-氯仿法、磁珠法、离心柱法等。提取试剂中应含裂解液、洗涤液、洗脱液等，按试剂说明书要求配制。
脱脚病病毒
上游引物：5’-TGACTCATTCCTGTAATACCACTTCTAATAC-3’
下游引物：5’-ACTGCTACATTTGCCTCGACAA-3’
探针：5’-（FAM）-TCCATTCCTAATCATAGTCCCGCGTGTCT-（TAMRA）-3’
仙台病毒
上游引物：5’-GAAAGAGATGGCTACATTGTT-3’
探针：5’-（FAM）-CCTCCTCAACGCCTGTGTCCACTGA-（TAMRA）-3’
出血热病毒
上游引物：5’-GTAGACTCCCTAAAGAGCTACTAT-3’
下游引物：5’-TTCATGGGCATTGATTTCCC-3’
探针：5’-（FAM）-CAACGATGGCAACTATGGAGGA-（TAMRA）-3’
GMP指南-无菌
4.2.1 无菌操作区............................................................................................................52 4.2.2 气锁........................................................................................................................ 53 4.2.3 无菌准备区和辅助区............................................................................................59 4.3.4 传递区域................................................................................................................60 4.2.5 仓贮区....................................................................................................................60 4.3 建筑设计与房间装饰.......................................................................................................60 4.3.1 建筑设计................................................................................................................60 4.3.2 房间装饰................................................................................................................62 5. 公用系统....................................................................................................................................63 5.1 概论 .................................................................................................................................63 5.1 空调净化系统（HVAC）.................................................................................................63 5.2 水系统.............................................................................................................................. 69 5.3 气体系统..........................................................................................................................71 5.3.1 压缩空气...............................................................................................................71 5.3.2 氮气....................................................................................................................... 73 5.4 无菌产品生产的电力系统.............................................................................................. 74 6 仪器设备.....................................................................................................................................75 6.1 设备的选型与设计...........................................................................................................78 6.1.1 净化、清洗和灭菌的要求....................................................................................78 6.1.2 材质、外观和安全设计要求................................................................................78 6.1.3 结构设计要求........................................................................................................79 6.1.4 在线监测、控制和验证的要求............................................................................79 6.1.5 对公用工程的要求................................................................................................79 6.2 仪器、仪表......................................................................................................................80 6.2.1 仪器、仪表和计量................................................................................................80 6.2.2 仪器、仪表的设计、性能、定位........................................................................80 6.2.3 仪器仪表的周期校准............................................................................................82 6.2.4 仪器仪表校准的内容............................................................................................83 6.3 设备维修...........................................................................................................................83
不同性别东方田鼠组织器官中乙醇脱氢酶分析
收稿日期：2022-09-09基金项目：黑龙江省自然科学基金项目（ss2021c006；LH2020C071）作者简介：万祥旭（1999-），男，黑龙江鹤岗人，在读硕士研究生，研究方向为动物学，（电话）131****2295（电子信箱）*****************；通信作者，金志民（1972-），男，黑龙江庆安人，教授，博士，主要从事动物学研究，（电子信箱）**************。
万祥旭，周宝丽，黄笑然，等.不同性别东方田鼠组织器官中乙醇脱氢酶分析［J ］.湖北农业科学，2024，63（1）：122-124．东方田鼠（Microtus fortis ）属于哺乳纲啮齿目仓鼠科田鼠属，典型穴居类型鼠，无冬眠习性，昼夜出洞，活动频率存在季节性差异，夏季的夜间活动性高于白昼，黎明前高于黄昏。
种群数量在部分地区波动剧烈。
其喜食庄稼、种子且啃食树木，作物成熟后迁移至田间盗食，是重要的农林害鼠之一，同时也是乙型森林脑炎病毒、钩端螺旋体主要宿主之一［1］。
乙醇脱氢酶于1937年首次在酿酒酵母中发现并分离，是一类具有广泛底物特异性的含锌金属酶，每个亚基会有两个锌原子，具有一组同工酶，最适温度为37℃。
其广泛存在于动物肝脏中，并与乙醛脱氢酶共同构成参与乙醇代谢的乙醇脱氢酶氧化体系［2，3］。
乙醇脱氢酶为二聚体，是生物体内短链醇代谢的关键酶，乙醇脱氢酶以NAD 为辅酶，通过锌离子与底物乙醇结合，催化醇反应释放产物醛：CH 3CH 2OH+NAD +→CH 3CHO+NADH+H +。
有关东方田鼠的研究报道较多［4-6］，但鲜见东方田鼠乙醇脱氢酶的研究，东方田鼠食性偏向于谷、瓜类作物和荸荠、薯等球茎类易发酵作物，乙醇脱氢酶主要作为分解摄入的发酵食物或者细菌在消化道中产生的醇类，同时在其他类型醇的分解代谢过程中也起到一定作用。
因此，东方田鼠体内乙醇脱氢酶活性可直观反映出该鼠的野外抗逆性。
本研究通过PAGE 电泳对不同性别东方田鼠组织器官中乙醇脱氢酶比较分析，为农林害鼠的防治提供基础生理生化数据。
试验动物微生物学等级及监测
试验动物微生物学等级及监测第一篇：试验动物微生物学等级及监测实验动物微生物学等级及监测GB 14922.2-2001前言本标准的全部技术内容为强制性。
本标准是在GB 14922-1994《实验动物微生物学和寄生虫学监测等级（啮齿类和兔类）》的基础上，与寄生虫学监测等级的有关内容分开，形成的独立标准。
本标准对实验动物等级进行了重新设定，与寄生虫学等级对应，将实验小鼠和大鼠的微生物学等级分为清洁级、无特定病原体级（SPF）和无菌级，取消了普通级。
豚鼠、地鼠和兔仍保留四级。
犬和猴分为普通级和SPF级。
相应增加了犬和猴的微生物学监测项目。
本标准对取样数量作了重新规定。
根据生产繁殖单元大小决定取样数量，改变了过去按动物等级取样的做法。
兔、犬、猴等较大动物可以活体取样，不必处死动物，因此取样数量也没有减少。
本标准对必须检测和必要时检测作了限定性说明：“必须检测项目：是指在进行实验动物质量评价时必须检测的项目。
必要时检测项目：是指从国外引进实验动物、怀疑有本病流行、申请实验动物生产许可证和实验动物质量合格证时必须检测的项目”。
本标准从3个方面对监测项目进行了调整：删除原标准列出、但实际检出率极低或很少检出的项目（如：实验小鼠、大鼠不检测多杀巴斯德杆菌）；增加近年来在动物生产中出现的一些病原微生物（如：嗜肺巴斯德杆菌由清洁级调为SPF级必须检测项目），使不同动物各等级检测项目更加合理。
本标准及其相关配套标准自实施之日起，代替GB 14922-1994。
本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。
本标准起草单位：中国实验动物学会。
本标准主要起草人：贺争鸣、田克恭、李红、黄韧、屈霞琴、范薇。
本标准于1994年1月首次发布。
中华人民共和国国家标准实验动物微生物学等级及监测GB 14922.2-2001代替GB 14922-1994 1 范围本标准规定了实验动物微生物学等级及监测，包括：实验动物微生物学的等级分类、检测要求、检测程序、检测规则、结果判定和报告等。
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ICSDBXX上海市地方标准DBx×∕T××-20xx 实验东方田鼠病原体学等级及检测方法LabOratOry MiCTOtUS fortis- PathOgen StandardS and MOnitOring（征求意见稿）20XX-XX-XX 发布20XX-XX-XX 实施上海市市场监督管理局发布館................................................................................ I I ...................................................................................................................................................................... ɪ2弓贈件. (1)3术语和定义 (1)4病原体等级分类 (2)5醐要# (2)6翻酿 (4)7翻脈 (4)8龍删IJ (5)9槪雕 (6)10 酷 (6)附录A （规范性附录）实验尔方田鼠泰泽病原体PCR检测方法 (7)附录B （规范性附录）实验东方田鼠小鼠肺支原体PCR检测方法 (9)附录C （规范性附录）实验尔方田鼠汉坦PCR检测方法 (11)附录D （规范性附录）实验尔方田鼠淋巴脉络丛病毐PcR检测方法 (13)附录E （规范性附录）实验尔方田鼠仙台PCR检测方法 (15)附录F （规范性附录）实验东方田鼠小鼠肺炎PCR检测方法 (19)附录G （规范性附录）实验永方田鼠呼肠孤病毐3型PCR检测方法 (21)附录H （规范性附录）实验尔方田鼠诺如病毐PCR检测方法 (23)前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则编写。
木标准附录为资料性附录。
本标准由上海市科学技术委β会提出并组织丈施。
木标准由上海市实验动物标准化技术委β会归U。
本标准起草单位：上海实验动物研究中心。
本标准主要起草人：谢建芸、魏晓锋、冯洁、王胜昌、林金杏、商诚1范围本标准规定了实验尔方田鼠微生物学和寄生虫学等级及监测.包括实验尔方田鼠微生物学和寄生虫学等级分类、检测指标、检测程序、检测方法、检测规则、结果判定和报告等要求。
木标准适用于实验尔方田鼠微生物学和寄生虫写等级分类、质S检测和管理。
2引用文件木标准的应用泥引用下列文件.使用本标准时，浠注意应引用下列文件的嚴新版本。
凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于木标准。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于木标准。
GB/T 14926.1实验动物沙门菌检测方法GB/T 14926.4实验动物皮肤病原真菌检测方法GB/T 14926.5丈验动物多杀巴斯德杆菌检测方法GBZr 14926.6实验动物支气管鲍特杆菌检测方法GB/T 14926.9实验动物鼠棒状杆菌检测方法GB/T 14926.12实验动物喑肺巴斯德杆菌检测方法GB/T 14926.13炙验动物肺炎克甫伯杆菌检测方法GB/T 14926.14丈验动物金黄色葡萄球菌检测方法GB/T 14926.17实验动物绿脓杆菌检测方法GB/T 14926.42实验动物细菌学检测标本采集GB/T 14926.43实验动物染色法、培养基和试剂GB/T 14926.44实验动物念珠状链忏菌检测方法GB/T 14926.52⅛验动物免疫荧光试验GB/T 14926.53丈验动物凝集丈验GB/T 18448.1实验动物体外寄生虫检测方法GB/T 18448.2丈验动物弓形虫检测方法GBrr 18448.3丈验动物兔脑原虫检测方法GB/T 18448.4文验动物P氏肺孢子虫检测方法GB/T 18448.6实验动物结虫检测方法GBZr 18448.10丈验动物肠道鞭毛虫和纤毛虫检测方法3术讲和定义本术讲和定义只用于本标准。
3.1变验4i方田鼠LabOratOly MiCrOtlISf()rtis经人工饲养.对其携带的微生物和寄生虫进行控制，來源渚楚或遗传背误明确，用子生产、科学研究和实验教学的尔方田鼠。
3.2聚合酶链式反应POIymCraSe Chain Reaction, PCR聚合酶链式反½ (PCR)是一种用于放大扩墦特定的DNA片段的分子生物学技术，主要用子扩增位十两段已知序列之间的DNA区段。
在待扩墦的DNA片段两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物.经变性、退火和延伸若千个循环后，DNA扩增2»倍。
4实验尔方田鼠微生物学和寄生虫学等级分类实验尔方田鼠微生物学和寄生虫学等级分为普通级和无特殊病原体级。
4.1普通级吹:验/ji方田鼠.COnVCntiOnaI (CV) MiCrotHSfortis 不携带所规定的人啓共患病病原和/K方田鼠烈性传染病病原。
4.2无特定病原体级$验尔方田鼠SPCCifiC PathOgCn FrCe (SPF) MiCrOtIls fOrtiS除普通级尔方田鼠应排除的痫原外，不携带尔方田鼠主要潜在感染或条件致病以及对科学丈验干扰大的病原。
5检测指标5.1外观指标外观健康、行为体征正常。
5.2病原体学指标各等级实验尔方IIJ鼠应排除的病原菌、病苒和寄生虫指标见表1、表2、表3。
休外寄主虫（：肢动物）ECtOParaSiteS 弓形虫 TOXOPIasma gondii仝部蟠虫all HClminthS片氏肺孢子虫 PneUmOCyStiSCarinii 免脑原虫 EneePhaliliZoOa CIIniCuli 鞭毛虫 FlagenateS 纤毛虫CilliateS 注：眷为必须检测项b|，耍求阴性：O 为必要时检测项目，要求阴性5.3检测项目分类 5.3.1必须检测项目等级寄生虫 检测要求 ⅛s在进行实验尔方田鼠质Sif•价时必须检測的项目。
5.3.2必要时检测项目中话•生产许可证、引进种源和疑有本病流行时必须增加险测的项目。
6检测程序6.1受检的丈验/K方田鼠应按细菌、真菌、痫帝和寄生虫要求联合取样检测。
6.2检测程序见阁1。
阁1检测程序检测报告7检测方法7.1沙门菌按GBAr 14926.1的规定检测7.2皮肤病原真菌按GBΛΓ 14926.4的规定检测7.3多杀巴斯德杆菌按GBzT 14926.5的规定检测7.4支气管鲍特杆菌按GBAr 14926.6的规定检测7.5鼠棒状杆菌按GBfI- 14926.9的规定检测7.6嗜肺巴斯德杆菌按GBfr 14926.12的规定检测7.7肺炎克宙伯杆菌按GBAr 14926.13的规定检测7.8金黄色葡萄球菌按GBZT 14926.14的规定检测7.9绿脓杆菌按GBZT 14926.17的规定检测7.10念珠状链杆菌按GBAr 14926.44的规定检测7.11体外寄生虫按GBAr 18448.1的规定检测。
7.12弓形虫按GITT 18448.2的规定检测。
7.13兔脑原虫按GBArl8448.3的规定检测。
7.14 k氏肺孢子虫按GBZT 18448.4的规定检测。
7.15蠕虫按GB/T 18448.6的规定检测。
7.16鞭毛虫按GBfr 18448.10的规定检测。
7.17纤毛虫按GBTT 18448.10的规定检测。
7.18泰泽病原体、肺支原体、汉坦病毐淋、巴细胞脉络丛脑膜炎病毐、仙台病毐、小鼠肺炎病苒、呼肠孤病毐In型、语如病毐选用PCR方法进行，具体方法见附录A-H。
8检测规则8.1检测频率每3个月至少检测一次。
8.2采样耍求8.2.1选择8w以上成年实验尔方ID鼠用于检测。
8.2.2采样数S:同一实验尔方田鼠生产繁殖承元或种群.根据动物多少.确定取枰数⅛. 具体见表4。
8.3样木采集83.1采样要求8.3.1.1样本采集的部位取决于所检病原休在宿主体内外的特异定植部位或病变部位，对十寄居于呼吸道的病原休，通常采集气管分泌物或气管中段：定位于肠道的病原体，采集回盲部内容物：定植十皮肤的病原体.采集皮肤样品：在血液中可以检测到的病原体.可以采集血液样品：对有特定定植部位的病原体.采集特定部位的组织。
83.1.2样本应保持新鲜，采枰后立即进行细菌接种或提取核酸用子病原体PCR扩增。
不能立即接种的组织、拭子样品等须置子无菌试管4Γ保存或存子运输培养基中：不能立即提取核酸的样品.应冻存于-8Or冰箱或液瓿中保存。
8.3.2采样方法83.2.1血液、皮肤、气管分泌物、回盲部内容物按GB/T 14926.42 进行。
83.2.2组织采用安乐死术处死实验尔方田鼠.仰卧并固定子解剖板上，剪除胸部、腹部鼠毛，用酒精泊毒皮肤后解剖，暴谣胸腔和腹腔，用解剖工具剪取相应器官或组织，放子灭菌V型管中用十提取核酸.进行PCR检测。
9结果判定在检测的实验尔方田鼠中，如有1只实验/K方田鼠的1项指标不符合该等级标准要求，则判定该批次实验尔方田鼠不符合该等级标准。
10报告根据检测结果，出具检测报告。
报告应包括检测项H、检测方法、检测结果、检测结论等内容。
附录A(规范性附录)实验尔方田鼠泰泽痫原体PCR检测方法1材料1.1主要试剂除特别说明外.所有实验用试剂均为分析纯：¾验用水为去离子水。
DNA抽提试剂：细菌基因组DNA提取试剂盒或其他等效方法。
PCR试剂：2 × Taq Plus MaStCr MiX (Dye Plus)试剂盒或其他等效产品。
泰泽病原体引物序列如F:外引物上游序列Pl: 5’。
AACAGGATTAGATACCC-3’，下游序列P2: 5’-TGACGGGCGGTGTGTACAA-3’，扩增产物为625 bp：内引物上游序列P3：5’-GTGCTAGGTGrrGGGAAG-3’，下游序列P4: 5,-TACTTTACGTAGCCTGTCAA- 3’，扩增产物为196 bp。
引物加灭菌去离子水配制成10μmol∕L, ∙20Γ保存。
1.2主要仪器PCR仪、高速离心机、电泳仪、紫外分光光度计、凝胶成像仪。
2方法2.1采样及标本处理剖检动物，暴谣腹腔，取0.2g病变肝脏、回盲部闪容物或粪便.悬浮十ImL PBS (pH7.4)中85Og离心5 min,取上淸，制成细菌悬液用于DNA提取。
标本若需长期保存，须S于-20*C。
2.2细菌DNA的提取具体操作按说明书进行。
DNA标木经紫外分光光度计测定浓度.通过OD260/280比值判断质S (OD260/280比值在1.6-1.8之间为合格)。
制备好的DNA应尽快进行下一步PCR反应，若暂时不能进行PCR反应，应贸十-20'C保存备用2.3 PCR体系总体积50μL包括：2×Taq PIUS MaStCr MiX (Dye PIUS)25 μLPl (10 μmol∕L)2μL(规范性附录) 实验尔方田鼠泰泽痫原体PCR 检测方法 P2 (10μmoI∕L)2μL DNA 模板5μL 水 16 μL上述反应液的配制在冰上操作.每次反应设S阳性对照、阴性对照和空白对照。