实验三E花环

重 悬
00.5%戊二醛１滴 美兰１滴
固定 染色
个人滴片
结果判断： 凡淋巴细胞周围吸附3个或3个以上SRBC即E花环形成阳性细胞
T淋巴细胞 E花环 PBMC SRBC
E花环实验
淋巴细胞转化实验
Ｔ细胞在有丝分裂原（PHA等）或特异性抗原 刺激下，产生一系列的变化， 如细胞体积变大， 胞浆增多，出现空泡，核染色质疏松，细胞核仁
CD２分 子 粘附分子 增细胞间的粘附作用
信号传递分子
Ｔ细胞活化的第二（旁路）途径。
E花环试验检测人Ｔ细胞表面CD2分子
平衡
离心2000rpm 20分钟
血浆与Hanks液 单个核细胞 淋巴细胞分离液 RBC、
粒细胞
E花环试验检测人Ｔ细胞表面CD2分子
吸出分离液界面 白色膜状 (单个核细胞层)
单个核细胞层
洗细胞
加Hanks液 混匀 离心 1000rpm 10分钟 弃上清 洗2次
E花环试验检测人Ｔ细胞表面CD2分子
E花环
2%小牛血清的Hanks液
PBMC 1%SRBC 吹打混匀 37℃水浴 10分钟 500rpm 5分钟 4℃冰箱 1小时
0.1-0.2ml
0.1-0.2ml
E花环试验检测人Ｔ细胞表面CD2分子
PHA（植物血凝素）
PWM（美洲商陆） LPS（脂多糖） SPA（葡萄球菌蛋白A）
＋
＋ － －
－
＋ － ＋
＋
＋ －Leabharlann Baidu－
－
－ ＋ －
淋巴细胞转化实验
显微镜下观察
3H-TdR掺入实验
静止淋巴细胞
淋巴母细胞
静止淋巴细胞
淋巴母细胞
细胞类型 细胞大小 染色质 细 胞 核 核仁 有丝分裂 增多 细 胞 浆 着色 空泡 伪足
分离淋巴细胞 肝素抗凝血1ml + Hanks液1ml 对倍稀释、混匀
沿试管壁缓慢加入淋巴细胞分离液之上
稀释抗凝血 淋巴细胞分离液
E花环试验检测人Ｔ细胞表面CD2分子
E花环试验检测人Ｔ细胞表面CD2分子
人Ｔ细胞膜上具有能与绵羊红细胞(SRBC)上
LFA-3（淋巴细胞功能相关抗原－3）结合的受体 （Ｅ受体，即CD2分子）。SRBC与Ｔ细胞在含有 血清的平衡盐水中结合，形成以Ｔ细胞为中心，四 周环绕SRBC，状如环瑰花环细胞集团，故称Ｅ花 环试验。
淋巴母细胞型 12—22μm 较大、疏松、 略偏 清晰、可见1-4 +或— ++ 嗜碱 大小不等的空 泡 + 或—
过度期细胞型 12—16μm 疏松 有或无 — + 嗜碱 少见 + 或—
休止期细胞型 6—8μm 密集 无 — — 无着色 — —
实 验 三
一、E花环实验 1、分离PBMC 2、Ea花环实验 中组操作 小组操作
3、观察E花环
二、淋巴细胞转化实验
滴片个人操作
结果示教
E花环试验检测人Ｔ细胞表面CD2分子
外周血单个核细胞（PBMC）的分离-P235
• 密度梯度离心法 聚蔗糖—泛影葡胺 Ficoll-Hypaque: 1.077±0.001 PBMC :1.075 RBC, 多形核白细胞：＞1.092
明显等，由淋巴细胞转变成母细胞。
淋巴细胞转化实验
丝裂原(mitogen)
亦称有丝分裂原，可致细胞发生有丝分裂。多为植物 糖蛋白或细菌产物，对淋巴细胞有非特异的多克隆刺激作 用，使静止的T细胞活化、增殖转化为淋巴母细胞。
人 T细胞 ConA（刀豆蛋白A） ＋ B细胞 － T细胞 ＋ 小鼠 B细胞 －