DNA提取法
提取dna方法
提取dna方法
DNA提取的方法主要有以下几种：
1. 物理法：包括机械粉碎、超声波处理和玻璃片研磨等。
这些方法可以破坏细胞结构，释放出DNA。
2. 化学法：包括碱变性法和尿素变性法等。
这些方法通过改变DNA的理化性质使其解链，从而易于被提取出来。
3. 生物酶法：包括蛋白酶K法和纤维素酶法等。
这些方法利用特定的酶来降解蛋白质和纤维素等物质，从而释放出DNA。
4. 基因工程法：通过构建表达载体并导入宿主细胞中，使目的基因在宿主细胞内得到表达，从而产生可溶性或不可溶性的DNA片段。
5. 其他方法：包括电泳分离法和超速离心法等。
这些方法可以通过分离和纯化DNA片段来实现对DNA的提取。
需要注意的是，不同的方法和材料可能存在不同的风险和注意事项，因此在提取DNA时应该遵循正确的操作规程，确保安全和有效。
提取dna的方法及原理
提取dna的方法及原理提取DNA的方法及原理DNA提取是生物学和遗传学研究中的一项基础操作，它是获取DNA样本的过程。
DNA提取的方法有很多种，下面将介绍几种常用的DNA提取方法及其原理。
1. 高盐法高盐法是一种简单且常用的DNA提取方法。
其原理是利用高盐溶液中DNA与其他细胞组分（如蛋白质）之间的亲和性差异。
在高盐环境下，DNA更容易溶解而不与蛋白质结合，从而实现DNA的提取。
具体步骤包括细胞破碎、加入高盐溶液、离心分离DNA和去除蛋白质等。
2. 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种经典的DNA提取方法。
其原理是利用酚和氯仿两种溶剂的密度差异，将DNA从细胞中分离出来。
具体步骤包括细胞破碎、加入酚/氯仿混合液、离心分离DNA和去除蛋白质等。
3. 硅胶柱法硅胶柱法是一种高纯度DNA提取方法。
其原理是利用硅胶柱上的硅胶颗粒与DNA之间的亲和性差异。
DNA样本在经过一系列处理后，通过硅胶柱，DNA能够与硅胶颗粒结合，而杂质则被洗脱。
最后，通过洗脱DNA，即可获得高纯度的DNA。
硅胶柱法的优点是提取纯度高、操作简单，适用于分子生物学研究和临床诊断。
4. 磁珠法磁珠法是一种高效、快速的DNA提取方法。
其原理是利用带有亲和基团的磁珠与DNA之间的亲和性，实现DNA的选择性吸附和洗脱。
具体步骤包括磁珠悬浮液制备、样本加入、磁珠与DNA结合、磁珠分离、洗脱DNA等。
除了上述常用的DNA提取方法外，还有其他一些特殊的DNA提取方法，如酶解法、离心法、凝胶切割法等。
这些方法在不同的实验和应用中具有各自的特点和优势。
总结起来，DNA提取的方法多种多样，选择适合的方法取决于实验目的、样本类型和实验条件等。
无论采用哪种方法，都需要严格控制实验操作，以确保提取到高质量的DNA样本。
DNA提取的成功与否直接影响到后续的实验结果，因此在进行DNA提取时，需要注意样本的保存、细胞破碎的方式、溶解液的选择等因素，以获得可靠且高纯度的DNA。
DNA和RNA提取方法及原理
DNA和RNA提取方法及原理DNA提取方法及原理：1.酚/氯仿法：酚/氯仿法是最常用的DNA提取方法之一、其原理是通过酚类物质将细胞质膜破坏，使DNA从细胞内溶解出来，然后利用氯仿的重度稠化剂作用，将DNA上层的蛋白质、脂类等杂质与下层的DNA分离。
2.盐溶液法：盐溶液法是一种温和的DNA提取方法，适用于多种植物和动物样品。
其原理是将样品细胞裂解后，加入高浓度盐溶液中，通过离心分离出DNA上层液相。
3.硅胶柱法：硅胶柱法是一种高效纯化DNA的方法，可去除杂质并提高DNA的纯度。
该方法利用硅胶柱对DNA进行吸附，去除杂质，然后通过洗脱得到纯净的DNA。
这种方法常用于分离较小的DNA片段。
4.酶解法：酶解法是一种特异性较高的DNA提取方法，通过特定的酶切酶对细胞膜进行消化，将DNA释放出来。
常用的酶解酶有蛋白酶K和蛋白酶E等。
RNA提取方法及原理：1.酚酸法：酚酸法是最常用的RNA提取方法之一、它基于RNA和DNA的相对稳定性差异，利用酚酸破坏细胞膜、沉淀RNA，然后利用酚酸与蛋白质和DNA 形成复合物，分离RNA。
2.硅胶柱法：硅胶柱法也适用于RNA提取。
与DNA的硅胶柱法不同的是，RNA在硅胶柱上结合后会进行一系列的洗脱步骤，除去污染物。
该方法能有效去除DNA、蛋白质、盐和其他杂质。
3.离心收集法：离心收集法是一种简便、快速的RNA提取方法。
根据RNA在水相中的溶解性，通过离心将细胞裂解液中的RNA分离出来，然后加入酒精沉淀纯化。
4.硅酸盐法：硅酸盐法是一种特异性较高的RNA提取方法，通过利用试剂中的硅酸盐吸附RNA，并在洗涤步骤中去除杂质，从而得到纯净的RNA。
dna提取
dna提取
DNA提取是指从生物体中分离出DNA分子的过程。
DNA 提取是分子生物学和遗传学实验过程的关键步骤，用于研究DNA的结构、功能和遗传变异。
以下是一个常用的DNA提取方法的步骤：
1. 收集样本：根据实验需求，选择合适的生物体样本，如细胞、血液、组织等。
2. 细胞破碎：使用细胞裂解缓冲液和机械力（如搅拌、振荡或均质器）破碎细胞膜，释放DNA。
3. 蛋白质消化：加入蛋白酶K等蛋白质消化酶，将细胞内的蛋白质降解或去除。
4. DNA沉淀：加入盐和异丙醇，混合后静置，使DNA形
成白色沉淀。
5. 清洗沉淀：使用70%的乙醇洗涤DNA沉淀，去除杂质。
6. 干燥和溶解：将洗涤后的DNA沉淀风干，然后使用缓冲液溶解DNA。
7. 检测和测量：使用分子生物学技术，如凝胶电泳或分光
光度计等，对提取的DNA进行质量和浓度检测。
需要注意的是，不同的生物体和样本类型可能需要不同的DNA提取方法和试剂盒。
在进行DNA提取实验前，最好
参考相关文献或向专家咨询，以确定最适合的方法。
提取dna的方法
提取dna的方法提取DNA的方法是从一种物质中检索出DNA分子的过程，包括酶切、基因工程等。
DNA提取方法有核酸沉淀法、缓冲溶液法、植物提取法、实验室提取法等。
下面将对这些方法进行详细介绍。
1、核酸沉淀法：核酸沉淀法是一种常用的DNA提取方法，它的原理是通过pH调节使DNA沉淀，然后将DNA从溶液中收集。
步骤如下：首先，将样品用盐水或蛋白酶/胰蛋白酶消化；其次，加入超纯水、EDTA缓冲液和NaCl，调节pH至5.5；然后，加入乙醇，溶解DNA并沉淀；最后，在0℃-4℃维持1小时，收集沉淀的DNA。
2、缓冲溶液法：缓冲溶液法是通过改变溶液的pH值来提取DNA的一种方法，它利用DNA的结合能力和电性作用力，将DNA结合到某种特定的溶剂上，然后从溶剂中提取出来。
步骤如下：首先，将样品加入缓冲溶液，消化；其次，加入非离子表面活性剂，使DNA脱水；然后，加入离子表面活性剂，将DNA与其他组分分离；最后，用低温冷藏保存，以便收集DNA。
3、植物提取法：植物提取法是通过一系列物理和化学步骤，从植物细胞中提取DNA的一种方法。
步骤如下：首先，将植物细胞磨碎，用盐水悬浮；其次，加入碱性溶液，使细胞膜脱落；然后，加入非离子表面活性剂，溶解脱落的细胞膜，将DNA沉淀；最后，加入乙醇，将DNA沉淀，冷却保存，然后收集DNA。
4、实验室提取法：实验室提取法是一种基于细菌的实验室方法，它利用发酵的细菌细胞中的DNA进行提取。
步骤如下：首先，将细菌细胞加入特定的溶剂液中，使细胞膜脱落；其次，加入特定的酶和蛋白酶，将细胞内的DNA 溶解；然后，加入非离子表面活性剂，将溶解的DNA沉淀；最后，用乙醇沉淀DNA，将沉淀的DNA精细收集。
以上就是提取DNA的方法，主要有核酸沉淀法、缓冲溶液法、植物提取法和实验室提取法四种方法，它们都具有不同的优点和缺点，因此，在实际应用中，应该根据样品的不同，选择适当的提取方法。
各种DNA提取方法
各种DNA提取方法提取方法提取方法提取方法一，基因组DNA提取方法制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。
在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。
主要是CTAB方法，其他的方法还有1物理方式:玻璃珠法超声波法研磨法冻融法。
2化学方式：异硫氰酸胍法碱裂解法3生物方式:酶法。
根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等试验步骤：1、贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。
2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次，离心收集。
试验步骤2再重新作一边。
3、加入5mlDNA提取缓冲液，(10mmol/%SDS)混匀。
4、加入25ul 蛋白酶K使终浓度达到100ug/ml 混匀，50℃水浴3h 5、用等体积的酚抽提一次，2500rpm离心收集水相，用等体积的（酚，氯仿，异戊醇）混合物抽提一次，2500r/min离心收集水相6、用等体积的氯仿，异戊醇抽提一次。
加入等体积的5mol/L的LiCL混匀，冰浴，10min.。
7、2500rpm离心10min.转上清于一离心管中。
加入等体积的异丙醇。
室温10min。
2500rpm离心10min。
弃上清。
8、加入倍体积3mol/L乙酸钠与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。
-20℃20min。
9、12000r/min室温离心5min。
弃上清。
将DNA 溶于适量TE中。
二，外周血DNA提取技术分离外周血白细胞提取方法：试验步骤：1、取人肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm 离心10min。
2、小心吸取上层血浆，分装到3个离心管中。
3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min。
4、2500rpm离心10min，弃上清。
5、加入10ml 溶血液，摇匀，冰浴15min。
6、3000rpm离心10min，弃上清。
7、倒置离心管，去掉残液。
8、得白细胞，－80℃冻存。
提取dna的方法及原理
提取dna的方法及原理提取DNA的方法及原理DNA是生物体中的遗传物质，它携带着生物体的遗传信息。
提取DNA是研究基因组学、遗传学等领域的重要基础工作。
本文将介绍几种常用的DNA提取方法及其原理。
1. CTAB法CTAB法是一种经典的DNA提取方法。
其原理是利用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）与DNA结合形成离子对，然后通过盐溶液的浓度差异，使DNA从溶液中沉淀出来。
该方法适用于提取植物细胞中的DNA。
2. 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种常用的DNA提取方法。
其原理是利用DNA在酚相中溶解，而其他细胞组分则在氯仿相中溶解，通过酚/氯仿两相的分离，从而将DNA分离出来。
该方法适用于提取动物细胞和细菌等样品中的DNA。
3. 硅胶柱法硅胶柱法是一种高效、纯化度较高的DNA提取方法。
其原理是利用硅胶柱上的硅胶颗粒与DNA之间的亲和性，将DNA吸附在硅胶颗粒上，然后通过洗涤、离心等步骤，将DNA从硅胶颗粒上洗脱下来。
该方法适用于提取各种样品中的DNA。
4. 磁珠法磁珠法是一种基于磁性颗粒的DNA提取方法。
其原理是将带有亲和基团的磁性颗粒与DNA结合，然后通过磁力的作用，将颗粒和DNA一起沉淀下来，最后通过洗涤等步骤，将DNA从颗粒上洗脱下来。
该方法具有快速、高效的特点，适用于高通量的DNA提取。
以上是几种常用的DNA提取方法及其原理。
不同的方法适用于不同类型的样品和实验需求。
在实际操作中，可以根据具体情况选择合适的方法进行DNA提取。
同时，为了保证提取到的DNA质量和纯度，还需要注意提取过程中的一些关键步骤，如细胞破碎、蛋白质酶处理、DNA沉淀等。
DNA的提取是基因研究和遗传学研究的重要步骤，通过合适的提取方法可以获取到高质量的DNA样品，为后续的实验和分析提供可靠的基础。
随着技术的不断进步，提取方法也在不断改进和优化，为科学研究提供更多的可能性。
DNA提取的几种方法
DNA提取的几种方法DNA提取的几种方法(1).浓盐法利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M氯纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA钠盐沉淀出来.也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.以稀盐酸溶液提取DNA时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA的分离。
在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.(2).阴离子去污剂法：用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA.由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA.(3).苯酚抽提法：苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。
离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA。
此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。
此法的特点是使提取的DNA保持天然状态.(4).水抽提法：利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66%٠；80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.提取DNA主要有SDS和CTAB法，其实提取效果的好坏主要看提取的对象是什么样的材料，在提取之前一定要好好分析材料的特性，然后在设计实验步骤。
常见的dna提取方法及优缺点
常见的DNA提取方法及优缺点1. 概述DNA提取是分子生物学和遗传学研究中的一个重要步骤。
通过提取DNA，可以进一步研究细胞或生物个体的基因组组成和遗传信息。
本文将介绍三种常见的DNA提取方法，并分析它们的优缺点。
2. 酚-氯仿法（Phenol-Chloroform Extraction）酚-氯仿法是DNA提取的传统方法之一。
其主要步骤包括细胞或组织的裂解、DNA与酚-氯仿混合、离心分离DNA上层水相、以异丙醇沉淀DNA等。
优点•能够提取高质量的DNA，适用于进一步的分子生物学实验和定量分析。
•可以从各种生物样品（如细胞、组织、血液等）中提取DNA。
•提取的DNA可以长期保存，并可用于构建DNA文库。
•操作复杂，需要多个步骤和化学试剂。
•酚-氯仿是一种有毒物质，对操作人员和环境有一定的危害。
•提取时间较长，通常需要几小时。
3. 硅胶柱法（Silica Membrane DNA Extraction）硅胶柱法是一种快速和高效的DNA提取方法，使用了硅胶膜作为DNA的吸附载体。
其主要步骤包括裂解细胞或组织、与硅胶柱上的硅胶膜相互作用、洗脱纯化DNA等。
优点•提供高品质和高纯度的DNA，适用于PCR、测序等高灵敏度实验。
•操作简便，减少了操作步骤和所需的化学试剂。
•提取时间短，通常只需要几十分钟。
•对于某些样品，如血液、组织较多的样品，硅胶柱法可能会出现DNA吸附容量不足的问题。
•需要购买硅胶柱等专业设备和试剂。
4. 盐溶液法（Salt Precipitation）盐溶液法是一种简单和经济的DNA提取方法，利用高盐溶液沉淀DNA。
其主要步骤包括细胞或组织裂解、加入盐溶液、离心沉淀DNA、洗脱纯化DNA等。
优点•操作简单，只需要少量的化学试剂和设备。
•节约时间，通常只需要30分钟左右。
•适用于小规模和初级实验室。
缺点•提取的DNA质量和纯度较低，不适用于一些高灵敏度的实验。
•不适用于样品量较大的情况，容易出现沉淀量不足的问题。
DNA和RNA提取方法及原理
DNA和RNA提取方法及原理DNA提取方法：1.酚/氯仿方法：这是最早应用的DNA提取方法之一，适用于绝大多数生物样本。
原理是利用酚酸抽提DNA，酚酸能溶解细胞膜和蛋白质，而DNA在酚相沉淀。
然后用氯仿提取，分离DNA与酚相中的蛋白质和RNA。
最后通过乙醇沉淀纯化DNA。
这种方法可以得到高质量的DNA，但操作过程相对繁琐。
2.硅胶基质法：硅胶基质可吸附DNA，该方法使用硅胶膜或硅胶粉末来固定DNA，通过洗涤去除杂质，最后用洗脱液从硅胶上洗脱DNA。
这种方法具有简便和高纯度的优点，适用于大规模提取DNA。
3.盐酸法：盐酸法以酸性条件下使DNA变为不溶性沉淀物的原理，通过加入盐酸将DNA沉淀下来，然后经过洗涤和乙醇沉淀纯化。
这种方法适用于提取纯度要求不高的DNA。
RNA提取方法：1.酚酸提取法：这是最常用的RNA提取方法之一、原理类似于DNA的酚/氯仿法，通过酚酸将核酸与蛋白质和其他杂质分离。
然后通过氯仿脱脂，去除酚相中的蛋白质，并且获得RNA水相。
最后通过乙醇沉淀纯化RNA。
这种方法适用于大多数样品，得到的RNA纯度较高。
2.硅胶基质法：与DNA提取类似，它也适用于RNA的提取。
通过硅胶膜或硅胶粉末结合RNA并洗脱，用洗脱液分离RNA与杂质。
这种方法适用于大规模提取RNA。
3.氯仿法：这是一种较为简便的RNA提取方法，它通过氯仿脱脂去除脂质和其他杂质，并且能够同时去除DNA。
最后用乙醇沉淀纯化RNA。
这种方法适用于需要较快速提取RNA的情况。
DNA和RNA提取的基本原理都是通过分离和纯化DNA或RNA与其他杂质的物质。
酚酸提取法和硅胶基质法同属于酚酸法，都是通过酚酸和氯仿来分离DNA或RNA与蛋白质和其他杂质。
其中酚酸能溶解细胞膜和蛋白质，并且DNA或RNA在酚相中沉淀，而蛋白质和RNA在氯仿相中溶解。
然后通过洗脱和纯化步骤，从酚酸相中提取DNA或RNA。
盐酸法与酚酸法不同，它是通过酸性条件下使DNA变为不溶性沉淀物来分离DNA与其他杂质。
各种检材DNA的提取
酚-氯仿法——注意事项
酚-氯仿法是目前最常用、最可靠的方法之一，无论 是血液还是血痕标本均适用 所提取的DNA纯度高，可满足各种分子生物学检测技 术的需要
但该法操作较为繁琐、耗时长，影响了其在实践工作 中的广泛应用。
（三）碱性裂解法
碱性裂解法是指在强碱作用下，使构成细胞的蛋白质 成分谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、酪氨酸残基等迅 速发生电离，从而快速破坏蛋白质的一级结构。 检材在强碱性pH条件及一定温度状况下能迅速破碎细 胞膜及核膜，使核酸酶变性及DNA释放。
Chelex-100法——步骤
取适量血痕检材置1.5ml EP管中，加入1ml 灭菌无菌 水浸泡20min，>10000rpm离心3min，用1000ul进样器 小心地吸去上清液。 加5％chelex-100 200u1，于水浴锅中56℃水浴30min， 振荡混匀。 沸水中煮10min，取出后立即置于冰上3min，>10000 rpm离心1min。上清液即为DNA提取液，可在2-6℃保 存1个月，在-20℃长期保存。
酚-氯仿法——步骤
取适量血痕检材置于1.5ml EP管中，加入1ml 无菌水 浸泡20min，>10000rpm离心3min，弃去上清。 加入500μ l STE液悬浮沉淀物，加入20μ l 10 % SDS 及10 mg/ ml 蛋白酶K 4 μ l ，54℃水浴消化3小时
离心取上清液至另一EP管中，加入500μ l苯酚/氯仿/ 异戊醇混合物，振荡到出现絮状物，>10000rpm离心 3min。
各种检材DNA的提取
夏
水
秀
一、DNA的提取方法
dna提取方法
dna提取方法DNA提取方法。
DNA提取是分子生物学实验中的一项重要步骤，它是从生物样本中分离出DNA分子的过程。
DNA提取的目的是为了获得足够纯度和浓度的DNA样本，以便进行后续的实验操作，比如PCR扩增、测序等。
在实际操作中，DNA提取的方法有很多种，下面将介绍几种常用的DNA提取方法。
1. 酚/氯仿提取法。
酚/氯仿提取法是最早的DNA提取方法之一，它利用酚和氯仿两种有机溶剂的密度差异来分离DNA。
首先，将生物样本经过细胞裂解，然后加入酚/氯仿混合溶液，混合均匀后离心，DNA会在上清液中，而蛋白质和其他杂质则会沉淀在底部。
接着将上清液转移到新的离心管中，加入等体积的异丙醇，再次离心，DNA会沉淀在离心管底部。
最后将上清液倒掉，用70%乙醇洗涤DNA沉淀，最后溶解于适量的缓冲液中。
酚/氯仿提取法简单易行，适用于各种类型的生物样本。
2. 离心柱法。
离心柱法是一种基于硅胶膜或硅胶颗粒的DNA提取方法，它利用DNA与硅胶的亲和性来实现DNA的分离纯化。
首先，将样本加入裂解缓冲液，然后加入蛋白酶和蛋白酶K进行细胞裂解。
接着将裂解液加入离心柱中，经过离心后，DNA会在离心柱上残留，而其他杂质则会通过离心柱底部的滤膜排除。
然后用洗涤缓冲液洗涤离心柱，最后用去离子水或低盐缓冲液洗脱DNA。
离心柱法操作简便，能够快速、高效地获得纯度较高的DNA样本。
3. 硝酸盐法。
硝酸盐法是一种利用硝酸盐沉淀DNA的提取方法。
首先，将生物样本进行细胞裂解，然后加入等体积的乙醇和适量的硝酸盐溶液，混合后DNA会沉淀出来。
接着用乙醇洗涤DNA沉淀，最后溶解于适量的缓冲液中。
硝酸盐法操作简单，适用于大规模DNA提取。
4. 磁珠法。
磁珠法是一种利用磁珠颗粒与DNA的亲和性来实现DNA的分离纯化的方法。
首先，将生物样本进行细胞裂解，然后加入磁珠颗粒，DNA会在磁场的作用下与磁珠结合，然后用磁场将DNA与磁珠分离出来。
接着用洗涤缓冲液洗涤磁珠，最后用去离子水或低盐缓冲液洗脱DNA。
DNA提取方法
一些DNA提取方法1、溶菌酶法：收集对数生长期的菌液5ml, 置于10 000 rpm离心5min; 弃上清, 用500μl TE重悬于115ml 离心管中, 加10μl 10mg/ml溶菌酶, 37℃保温20min, 再加215ul 20mg/ml蛋白酶K混匀, 37℃保温1h; 再加等体积的酚、氯仿、异戊醇(25∶24∶1) , 置于10 000 rpm离心5min; 取上清液加2倍体积的无水乙醇和1 /10体积的NaAc (pH = 416) , 于- 20℃下静置10min后于12 000 rpm离心10min; 所得的DNA 沉淀用70%的乙醇洗2 次, 自然风干后溶于40μl 的TE (含20ug/mlRNase) , 55℃处理15min, 于- 20℃保存备用。
2、改良的CTA B法：收集对数生长期的菌液5ml, 置于10000 rpm离心5min; 弃上清, 用500μl TE重悬于115ml离心管中, 加100μl 10% SDS溶液, 215μl 20mg/ml蛋白酶K, 37℃保温1h,再加75μlNaCl和75μl 2 ×CTA B混匀, 65℃保温30min, 再加等体积的酚、氯仿、异戊醇( 25∶24∶1) , 置于10000 rpm离心5min; 以下步骤同溶菌酶法。
3、超声破碎提取法：收集对数生长期的菌液5ml, 置于10 000 rpm离心5min; 弃上清, 用3ml裂解缓冲液(110mol/L NaCl, 50mmol/L EDTA, 50mmol/L Tris·Cl) , 加30μl 10mg/ml溶菌酶冰水浴30min后超声处理, 超声条件: 250W每次工作5 s, 间隙5 s, 重复20次, 再加等体积的酚、氯仿、异戊醇(25∶24∶1) , 置于10 000 rpm 离心5min; 以下步骤同溶菌酶法。
4、（1）破壁、蛋白质和核酸分离：向装有0.05~0.2g 样品的5 mL EP 管中加500~2000 μL 裂解液，充分混匀，立即放入沸水浴中并开始计时5~20 min（细胞壁薄且壁外没有荚膜或多糖的微生物，沸水浴时间一般5~10 min；对于那些细胞壁厚或有特殊胞外结构的微生物及杂质含量高的样品，沸水浴时间一般15~20 min），每隔2~3 min 颠倒EP 管3 次；随后立即转入60 ℃水浴中水浴1 h 或更长，每隔15 min 颠倒EP 管3 次；接着转入72 ℃水浴中水浴1 h 或更长，每隔15 min 颠倒EP 管3 次。
组织dna提取方法
组织dna提取方法
组织DNA提取的方法具体有以下几种常用的方法：
1. 高盐法（CTAB法）：该方法利用CTAB（羧甲基四甲基溴化铵）与DNA结合的能力，将DNA从细胞和细胞碎片中提取出来。
该方法适用于多细胞植物和真菌的组织。
2. 硅胶柱提取法：该方法通过将DNA溶解在Buffer AE（加醋酸和EDTA）中，然后使用硅胶柱将DNA与其他杂质分离。
硅胶柱提取法适用于多种样品类型，如细胞、组织和血液等。
3. 磁珠提取法：该方法利用具有亲和性的磁性珠子，结合特定的核酸结合剂，使DNA与磁珠结合。
然后利用磁力将磁珠与DNA分离，实现DNA的提取。
该方法适用于多种样本类型，如血液、唾液和组织等。
4. 酚/氯仿提取法：该方法通过加入酚/氯仿提取液，使DNA从细胞和细胞碎片中溶解，并通过酚和氯仿的加入和离心分离纯化DNA。
这种方法适用于多种样品类型，如细菌、真菌、植物和动物组织等。
需要根据实际样品类型的不同选择合适的提取方法，不同方法的选择也可能会根据研究目的和所需DNA的质量和纯度要求而有所不同。
dna提取方法
dna提取方法
DNA提取是分离和纯化细胞内的DNA分子的过程。
以下是常用的DNA提取方法：
1. 经典的酚-氯仿提取法：将细胞裂解并溶于酚-氯仿溶液中，通过离心分离DNA上清液和蛋白质/ RNA/酚相，然后分别用异丙醇沉淀和洗涤 DNA，最后用缓冲液溶解 DNA。
2. 盐溶解法：将细胞裂解并使用盐水缓冲溶解 DNA，然后离心去除蛋白质和碎细胞碎片。
最后，通过异丙醇沉淀 DNA，洗涤和溶解 DNA。
3. 磁珠法：利用表面修饰的磁珠、离心和磁场来分离和纯化DNA。
磁珠上会吸附 DNA，然后用缓冲液洗涤和溶解 DNA。
4. 硅胶柱法：利用硅胶膜在碱性条件下与 DNA 结合，然后用缓冲液洗涤和溶解 DNA。
5. 腐蚀酶法：通过腐蚀细胞壁和细胞膜来释放细胞内 DNA，然后离心去除细胞渣。
最后，通过异丙醇沉淀 DNA，洗涤并溶解 DNA。
这些方法都可以从不同来源（如细菌、动植物组织和血液）中提取 DNA，以便分析、克隆或测序。
提取的 DNA 可用于分子生物学研究、犯罪鉴定、基因组学研究等各种应用。
提取dna的方法及步骤
提取dna的方法及步骤提取DNA的方法及步骤DNA（脱氧核糖核酸）是构成生物遗传信息的基本单位，因此，准确提取DNA样本是进行遗传研究、基因工程和犯罪侦查等领域的重要步骤。
以下将介绍几种常见的DNA提取方法及其步骤。
方法一：酚氯仿法酚氯仿法是一种常用的DNA提取方法，其步骤如下：1. 收集样本：可以是人体组织、血液、细胞培养物等。
确保样本新鲜，并避免受到污染。
2. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
3. 酚氯仿提取：将沉淀加入酚氯仿混合液中，轻轻混匀，并离心以分离DNA。
4. 沉淀DNA：将上清液转移到新的离心管中，加入冷乙醇沉淀DNA。
5. 洗涤：用70%乙醇洗涤沉淀的DNA，以去除杂质。
6. 干燥：将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。
方法二：盐析法盐析法是一种简单易行的DNA提取方法，其步骤如下：1. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
2. 盐析提取：加入高盐缓冲液使DNA与其他核酸和蛋白质分离。
3. 沉淀DNA：将上清液转移到新的离心管中，加入冷乙醇沉淀DNA。
4. 洗涤：用70%乙醇洗涤沉淀的DNA，以去除杂质。
5. 干燥：将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。
方法三：硅胶柱法硅胶柱法是一种高纯度DNA提取方法，其步骤如下：1. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
2. 硅胶柱处理：将细胞沉淀加入硅胶柱中，经过洗涤和离心，将DNA吸附在硅胶柱上。
3. 洗涤：用洗涤缓冲液洗涤硅胶柱，以去除杂质。
4. DNA洗脱：加入低盐缓冲液，使DNA从硅胶柱上洗脱出来。
5. 洗涤：用70%乙醇洗涤洗脱后的DNA，以去除杂质。
6. 干燥：将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。
方法四：酶解法酶解法是一种特异性较高的DNA提取方法，其步骤如下：1. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
DNA提取方法
DNA提取方法
DNA提取是从细胞或组织中获取DNA分子的过程。
有许多不同的DNA提取方法，以下是其中一些常见的方法:
1. 高盐法：将细胞或组织经过离心分离，然后用高盐浓度的缓冲液溶解细胞膜，使DNA分子释放出来。
接着，使用无机盐如乙酸钠沉淀DNA，最后用酒精洗涤和干燥。
2. 碱裂解法：将细胞或组织用碱性溶液处理，使DNA脱氧核糖核酸分子解旋并释放出来。
然后用酸性溶液中和溶液，并用酒精沉淀DNA。
3. 酚/氯仿法：将细胞或组织用酚酸溶液破坏细胞膜，并用氯仿提取DNA。
然后用酒精洗涤和干燥。
这些方法只是DNA提取方法的一部分，针对不同的样品和实验目的，还有其他的DNA 提取方法可供选择。
此外，商业化的DNA提取试剂盒也可以简化DNA提取过程。
基因组dna的提取
基因组dna的提取基因组DNA提取是指从生物体中分离出基因组DNA序列的过程。
提取基因组DNA的方法有多种，常用的有：一、离心法1、吸取法：利用某种化学溶剂，将原始细胞迅速破解，使细胞内的大部分物质溶解，然后将细胞中的染色体离心收集；2、膜破碎法：将原始细胞置于某种膜系统（如绝对乙醇或蛋白酶体系）中，使细胞形变造成破碎，膜系统可以有效提取出细胞内的染色体；3、超音速冲击法：利用超音速脉冲对细胞外的水进行冲击，使水的光圈扩散，从而使细胞瞬间破碎，将染色体释放到溶液之中。
二、连锁反应法1、PCR法：利用复性DNA引物，连同重复序列的特异性引物，在反转录试剂的有序作用下，可以将外源DNA 装入原核细胞内；2、QPCR法：利用反转录酶作用反转录得到DNA 并与特定序列特异性引物结合，由此凝聚出一个碱基序列，可以在任何体系里广泛检测基因；3、单核苷酸多态性（SNP）分析法：利用基因序列中碱基位点多态性突变进行基因组DNA 提取分析。
三、物理力学方法1、电精提法：通过外加电场，使基因组DNA在液体中电性扩散，最终达到提取的目的；2、毛细管电泳法：将基因组DNA 溶解后，将溶质加入到毛细管内，产生电力场在毛细管内运动，由此实现基因组DNA 的提取。
四、免疫原性法1、免疫原性抗体提取法：使用具有特定抗原性的免疫原性抗体将细胞中抗原性蛋白结合起来，再通过离心法收集；2、竞争抗体抗体提取法：先在细胞中抗原性蛋白与竞争抗体（未指定抗原性）结合，然后再进行离心收集，从而获得的抗原性蛋白；3、抗体标记抗体提取法：先将抗原性蛋白结合抗体标记抗体，然后通过离心法获取抗原性蛋白。
以上就是基因组DNA提取的常见方法。
基因组DNA提取在基因研究、生物学研究等领域有着重要的作用，所以不能忽视其重要性。
DNA提取方法
总DNA提取1 溶菌酶+蛋白酶K法：取500uL经预处理的菌悬液于1．5 mL无菌离心管中，加20mg／mL溶菌酶25uL，37℃温浴，45 min；再加入50uL，10％SDS和15uL l0 mg／mL蛋白酶K，55℃水浴1 h并适时摇动混匀；之后，再依次用等体积酚、苯酚：氯仿：异戊醇(25：24：1)混合液、氯仿进行抽提，收集上清；再加入l／l0体积的3 mol／L醋酸钠及2倍体积的预冷无水乙醇，混匀后予一20℃静置30 min以上；离心弃上清，沉淀用75％乙醇洗涤、干燥；最后溶于l00uL无菌双蒸水中，并加入终浓度为20 mg／mL的RNA酶A，37℃放置30 min，然后于一20℃保存，备用。
2改进CTAB法：取500uL经预处理的菌悬液于1．5 mL无菌离心管中，加入20 mg／mL 溶菌酶l2uL和1uL RNase(1 mg／mL)，冰浴1 h，并间隔l0 min混匀1次；取出置于一20℃下静置20min后，放人68℃中水浴10 min，加入10％SDS 53uL，继续于68℃下水浴l5 min；接着加入5 mol／LNaCl 87 uL，CTAB／NaCl(1％CTAB，0．73 mol／LNaCl)69uL再于68℃下水浴l5 min；取出后，于一20℃下静置30 min；之后，用等体积的氯仿／异戊醇(24：1)进行抽提取上清，重复该步骤l次；然后加入1／l0体积的3 mol／L醋酸钠及2倍体积的预冷的无水乙醇，并于一20℃静置30min，然后离心弃上清；沉淀用70％乙醇进行洗涤，干燥后，沉淀溶于100uL无菌双蒸水中并加入RNase使其终浓度为20ug／mL，于37℃消化30 min，最后于-20℃保存，备用。
3试剂盒法：称取200 m9粪便样品用于DNA提取，具体步骤见QIAamp DNA Stool Mini Kit 试剂盒说明书。
所得DNA溶于l00uL无菌双蒸水中，于-20℃保存。
提取dna的方法
提取dna的方法提取DNA的方法。
DNA提取是分子生物学实验中的重要步骤，它是分析DNA序列、进行PCR扩增、测序等实验的基础。
本文将介绍几种常用的DNA提取方法，希望能为您的实验提供帮助。
首先，我们来介绍常用的有机溶剂法提取DNA的方法。
这种方法的基本原理是利用有机溶剂（如酚-氯仿）与细胞裂解液中的蛋白质和核酸形成两相体系，从而将DNA分离出来。
具体操作步骤包括，细胞裂解、蛋白质沉淀、DNA沉淀、洗涤和溶解。
有机溶剂法提取DNA的优点是操作简单、成本低廉，适用于大批量样品的提取。
但缺点是提取效率较低，且可能造成DNA的降解。
其次，我们介绍硅胶柱法提取DNA的方法。
硅胶柱法利用硅胶膜上的硅基团与DNA间的亲和作用，将DNA从细胞裂解液中吸附到硅胶膜上，再经过洗涤和洗脱步骤，最终得到纯净的DNA。
硅胶柱法提取DNA的优点是提取效率高、纯度好，适用于测序、酶切等需要高质量DNA的实验。
但缺点是操作繁琐、耗时较长，且成本较高。
最后，我们介绍磁珠法提取DNA的方法。
磁珠法利用表面修饰的磁珠与DNA间的亲和作用，将DNA特异性地吸附到磁珠上，然后利用磁场将磁珠与其他杂质分离，最终得到纯净的DNA。
磁珠法提取DNA的优点是操作简便、提取效率高、适用于自动化操作，且可以高通量提取多个样品的DNA。
但缺点是对磁珠的选择和操作技巧要求较高，且成本较高。
综上所述，有机溶剂法、硅胶柱法和磁珠法是常用的DNA提取方法，它们各有优缺点，可以根据实验的需要选择合适的方法。
在进行DNA提取实验时，需要注意细胞裂解条件、溶解温度、洗涤步骤等操作细节，以确保提取到高质量的DNA。
希望本文能为您在实验中提取DNA提供一些帮助，祝您实验顺利！。
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植物总基因组DNA提取纯化方法综述DNA 提取是植物分子生物学研究的基础技术。
目前植物分子的DNA 提取,已经发展了多种方法,成功地从植物叶片、愈伤组织、组培苗、果实、韧皮部等组织器官中提取出DNA。
但是有些情况下,不同植物甚至是同一种类植物组织材料的来源、部位、形态等外在性质的不同以及化学成分、组织结构等内在特点的差异,在提取基因组植物分子DNA 时需要选择不同的方法或作一些特殊的处理。
从富含多糖、多酚、单宁、色素及其他次生代谢物质的木本植物中提取的方法难度就相对大于大多数的禾谷类及蔬菜类植物。
从这些植物中分离出的DNA 由于多酚被氧化成棕褐色,多糖、单宁等物质与DNA 会结合成粘稠的胶状物,获得的DNA 常出现产量低、质量差、易降解,影响了DNA 质量和纯度,不能被限制性内切酶酶切,严重的甚至不能作为模板进行PCR 扩增。
针对这一现象,已有许多学者对植物特别是顽拗型木本植物的基因组DNA 提取纯化进行了改良和发展。
笔者就植物DNA 提取各个环节,如样本的采集与保存、提取缓冲液成分的作用、DNA 提取纯化方法等进行归纳,同时对DNA 提取过程中的常见问题、原因及应对策略作简要的分析。
1 植物样品的采集与保存植物组织材料的采集与保存对提取DNA 的产量和质量有很大影响。
通常应尽可能采集新鲜、幼嫩的组织材料,采集的过程中应尽可能使组织材料保持水分,在取样时立即用浸湿的纱布包裹采集的组织材料,放置在密闭的冰盒中,这样可使组织材料3～5 d 仍然保持新鲜。
野外远距离采集样本时,在可能的条件下冷冻保存(如放置于液氮中) ;当不具备冷冻条件时, 最好用盛有无水CaSO4 的瓶子分别保存, 使其迅速干燥, 这种方法可将材料保存数月,返回后应尽快进行DNA 的提取工作。
对具有大量次生代谢物(如丹宁、酚类、醌类等) 的植物材料, 应尽可能采集幼嫩组织外, 最好进行冷冻保存并在短时间内进行DNA 提取。
植物组织材料的化学保存法,如乙醇、丙二醇处理法,通常会导致DNA 剧烈降解, 因此,不作为推荐的保存方法。
对于采集回来的样品如要长期保存,应经液氮处理后贮存在- 80 ℃冰箱或直接储放于液氮中,且在与提取缓冲液接触前,应防止冰冻的样品在空气中融化,否则酚类易被氧化。
2 提取缓冲液随着现代分子生物学的发展, DNA 分离技术也层出不穷, DNA 已经可以从诸如化石、木乃伊等极端材料中分离出来, 也可以从痕量材料获得DNA。
无论是什么材料, 针对不同的来源和特点, 调整设计相应的提取缓冲液及不同的技术方案是十分重要的。
在实际应用中可针对不同的情况对具体实验方案的各个部分进行不同组合。
缓冲液的成分应根据分离对象的不同而变化,缓冲液的pH值、保护剂和表面活性剂都要根据不同样品进行优化。
十二烷基磺酸钠(SDS) 是一种阳离子强表面活性剂, 通常与蛋白酶K和抗氧化剂、螯合剂一起使用; 而十六烷基三甲基溴化铵(CTAB) 是一种在高盐下能与核酸结合形成可溶、稳定的复合物, 低盐浓度下可沉淀的表面活性剂。
乙二胺四乙酸(EDTA) 可用于抑制金属离子依赖性的酶(螯合Mg2+ 、Ca2+ ) 的活性。
牛血清白蛋白(BSA) 可使一些降解酶的表面变性。
还原型巯基成分如β2巯基乙醇、谷胱苷肽、半胱氨酸、二硫苏糖醇等一些硫醇类物质,通常可用于保护DNA 免受醌类物质、二硫化物、多酚氧化酶等物质的损害。
加入聚乙烯吡咯烷酮(PVP) 也可减少酚类、醌类及丹宁类物质的影响。
还有其他一些非通用添加物,如抗坏血酸、维生素C 可用于降低醌类物质的影响, 精胺及其他多胺可用于降低核酶的影响,氰化物可用于降低重金属氧化酶的影响。
另外还有在提取液中加入活性炭、硫代硫酸钠、亚硫酸钠、重过亚硫酸钠、硼砂等物质防止多酚类物质氧化的报道3DNA提取方法3. 1 传统的DNA提取方法传统的DNA 提取与纯化,如CTAB 法、SDS 法是在裂解细胞的基础上,多次苯酚氯仿等有机溶剂抽提使蛋白质变性沉淀于有机相,而核酸保留在水相,达到分离核酸的目的;加入RNA 酶除去核酸中的RNA; 然后加入异丙醇、乙醇等沉淀DNA;用70 %乙醇漂洗沉淀,除去分离过程中残留的有机溶剂和盐离子,以免影响核酸溶解和抑制后续步骤的酶促反应,最后用TE 溶解DNA 备用。
CTAB 是一种阳离子去污剂,能与核酸形成复合物,此复合物在高盐( > 0. 7 mol/ L) 浓度下可溶,并稳定存在,但在低盐浓度(0. 1～0. 5 mol/ L NaCl) 下CTAB - 核酸复合物就因溶解度降低而沉淀,而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。
通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
经离心弃上清后,CTAB - 核酸复合物再用70 %酒精浸泡可洗脱掉CTAB 。
SDS 是一种阴离子去垢剂,在高温(55～65 ℃) 条件下能裂解细胞,使染色体离析、蛋白变性,同时SDS 与蛋白质和多糖结合成复合物,释放出核酸;提高盐(KAc 或NH4Ac) 浓度并降低温度(冰浴) ,使SDS - 蛋白质复合物转变为溶解度更小的钾盐形式,使蛋白质及多糖杂质沉淀更加完全,离心后除去沉淀;上清液中的DNA 用酚/ 氯仿抽提,反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
SDS 法操作简单,温和,也可提取到高分子量的DNA ,但所得到的产物含糖类杂质较多。
基因组DNA 经典的提取方法由于无需昂贵仪器和药品,提取的DNA 纯度能够满足一般分子生物学的需要,一直作为DNA 提取的常规方法。
但这种方法操作步骤复杂,耗时长,易交叉污染,残留在DNA 溶液中有机物质对DNA 聚合酶有抑制作用。
另外,酚、氯仿等有机溶剂易造成环境污染,有损操作者健康,因此使该方法的应用受到一定的局限性。
3. 2 DNA提取新方法近年来出现了DNA提取新方法，以螯合树脂、特异性DNA 吸附膜、离子交换纯化柱及磁珠或玻璃粉吸附等基础DNA 提取新方法。
这些DNA提取新方法主要应用于提取病毒、微生物、人和动物细胞、包埋组织样品、古生物标本及土壤环境样品DNA。
已有多篇利用纯化柱和玻璃粉纯化植物基因组DNA 的报道。
马小军等将CTAB 液提取和氯仿抽提两步的上清液直接通过Wizard 纯化系统纯化得到的DNA ,RAPD 扩增效果良好,产率达2 250μg/ g 。
张博等用硅珠(SiO2) 颗粒吸附DNA 纯化方法,从不同树木叶片中均得到了高质量的DNA 样品。
黄椰林等对常规CTAB 法提取的DNA 用玻璃粉悬浮液纯化,所获DN 的APCR 产物能直接测序,比较适用于富含黏多糖、单宁、多酚和萜类化合物等次生代谢物的植物样品和长期保存的标本材料。
袁长春等也用玻璃粉吸附法从富含酚类的茶类植物中提取纯净的总DNA 。
目前国内外开发了多种商品化的DNA 提取纯化试剂盒,其分离原理有的利用核酸的分子量差异,有的利用特异性膜与DNA 结合达到分离、回收的目的,如离子交换柱、磁珠等。
这些试剂盒针对不同的材料来源设计了不同的提取方法,操作简单、高效, DNA 质量较高,但价格昂贵,提取量少。
著名的国外的试剂盒生产厂家有Sigma2Aldrich、Promega、Invitrogen、TaKaRa 、Whatman 等,它们针对不同来源的材料如微生物、动物体液、血液和组织、植物、加工产品、转基因产品等开发出一系列的试剂盒。
国内的生物公司发展迅速,如上海生工、北京天为、北京博奥等也开发了系列试剂盒,质量与国外厂家相当,价格较低。
除此之外,由于核酸提取纯化试剂盒制作门槛低,还有大量的生物公司提供试剂盒产品,使用者一定要慎重选择。
DNA 试剂盒经过了几十年的发展,已经不再局限于单纯的提取纯化,有些厂家推出了DNA 提取—扩增PCR 试剂盒,将DNA 提取和PCR 扩增结合起来,极大的提高了工作效率,如Sigma2Aldrich 公司的Sigma’s Extract2N2Amp Plant PCR kit 等。
另外,还有高通量的DNA 提取产品,如高通量组织细胞研磨仪MM301 ,在常温和冷冻条件下对硬性、中硬性、韧性、脆性及纤维材料的研磨破碎,每次处理样品的个数可以多达48 个甚至192 个。
美国应用生物系统公司6100 型核酸提取仪,可用于RNA、DNA 的提取纯化,可自编程序, 可选预设的程序,具有严格的防交叉污染体系,可从不同来源的样品中同时提取96 个样品。
4 DNA纯化及杂质去除4. 1 酚类杂质的去除对植物中次生产物酚类物质的去除,普遍是在提取液中加入适量的抗氧化剂和螯合剂,防止多酚氧化褐变。
在提取DNA 过程中加入巯基乙醇、半胱氨酸、二硫苏糖醇、谷胱甘肽及抗坏血酸等巯基试剂,抑制氧化反应,避免褐化。
在样品液氮研磨及提取缓冲液中加入高分子螯合剂PVP(聚乙烯吡咯烷酮) 或PVPP(聚乙烯聚吡咯烷酮) 等能络合多酚和萜类物质离心或氯仿抽提出去,有效的防止多酚物质氧化成醌类,避免溶液变褐而具有抗氧化作用。
因此在提取液中加入适量的PVP 或PVPP 能提高DNA 的纯度) ,其用量视杂质的多少而定(1 %～6 %) ,PVP 同时能有效去除多糖。
因此将PVP 和巯基乙醇配合使用并调整用量,能够有效地防止多酚污染。
王玉成等认为以上的方法仅对褐化现象较轻者有效,却很难克服一些含酚类化合物丰富的植物,如柽柳、冷杉等树种的褐化。
在CTAB 缓冲液加入一定量的硼砂(提取缓冲液含0. 012 5 mol/ L 硼砂、2 % CTAB 、 1. 4 mol/ L NaCl 、巯基乙醇0. 1 mol/ L ,pH值为9. 0) 提取柽柳、冷杉的RNA 取得了良好的效果,而且在提取紫丁香、糖槭、旱柳等植物组织的RNA 时也从未发生褐化。
4. 2 多糖类杂质的去除多糖的污染是提取植物DNA 时常遇到的另一棘手的问题。
植物组织中往往富含多糖, 而多糖的许多理化性质与DNA 很相似,因此很难将它们分开。
经典的CsCl 梯度离心能有效的除去植物中多糖,但梯度离心设备昂贵,操作不便且DNA 得率很低。
近年国内外有一些去除多糖的相关报道,Dellaporta 等认为加入高浓度的KAc 有利于除去多糖;Fang 等认为在1. 0～2. 5 mol/ L NaCl 的高盐TE 中,用无水乙醇沉淀DNA 能除去多糖; Sue Porebski 等在沉淀粗提DNA 时,将NaCl 的浓度提高至2. 5 mol/ L 以除去多糖;Candelario 等通过调节材料的取样时期、使用量, 在氯仿处理后加含2 %CTAB 的分离缓冲液, 及延长离心时间等方法来有效去除仙人掌植物的多糖;徐志祥等将DNA 沉淀重悬于30 %乙醇中4 ℃放置过夜,离心, 上清加乙醇至80 %重新沉淀DNA ,能去除多糖和其他杂质;陈大明等利用活细胞中由于细胞区室化多酚类以及其他杂质与DNA 相互隔离的特性,在裂解细胞前用不含CTAB 的提取缓冲液(0. 14 mol/ L 葡萄糖、3 %可溶性PVP、10 mmol/ Lβ2巯基乙醇) 去除细胞质中大多数生化成分,同时有效地防止多酚类物质被氧化,从而达到排除多酚类等杂质干扰的目的;程运江等先用水饱、乙醚和1. 2～1. 5 mol/ L Na2 Cl 溶液将大部分多糖去除, 再用2 倍乙醇沉淀DNA 可大大提高效率。