SDS-PAGE电泳操作规范
蛋白质电泳操作步骤
SDS-PAGE电泳操作步骤：试剂配制：（实验中采用均为分析纯）（1）丙烯酰胺贮液（4℃下棕色瓶中储存，试剂尽量勿存储过久）丙烯酰胺贮液（T=30%，C=3%）称取29.1 g丙烯酰胺和0.9 g甲叉双丙烯酰胺，用双蒸水溶解，定容至100 ml，过滤备用。
(试剂有毒，操作中注意防护)（2）浓缩胶缓冲液（1 mol/L Tris-HCl，pH 6.8）（4℃下棕色瓶中储存，试剂尽量勿存储过久）6.06 g Tris溶解于35 ml双蒸水中，用浓盐酸调节pH至6.8，再用双蒸水定容至50 ml。
（3）分离胶缓冲液（1.5 mol/L Tris-HCl，pH 8.8）（4℃下棕色瓶中储存，试剂尽量勿存储过久）18.16 g Tris溶解于75 ml双蒸水中，用浓盐酸调节pH至8.8，再用双蒸水定容至100 ml。
（4）10% SDS（5）10% 过硫酸铵（APS）：使用前新鲜配制，低浓度APS一般当天用当天配制，勿过夜使用。
（6）尿素（7）TEMED(N，N，N’，N’-四甲基乙二胺)（8）电极缓冲液(1×) （棕色瓶中4℃储存，一般使用3-4次）0.025 mol/L Tris，0.192 mol/L甘氨酸，0.1% SDS，pH 8.3（9）电极缓冲液(2×) （棕色瓶中4℃储存，一般使用3-4次）0.050 mol/L Tris，0.384 mol/L甘氨酸，0.1% SDS，pH 8.3（10）样品缓冲液（pH 6.8）（4℃下棕色瓶中储存，试剂尽量勿存储过久）1.6 ml浓缩胶缓冲液（pH 6.8）+ 4 ml 10% SDS + 0.6 g二硫苏糖醇(DTT) +2.5 ml 87%甘油+0.1 mg溴酚蓝，用双蒸水稀释到20 ml.（11）考玛斯亮蓝R-250染色方法：a．固定液20%三氯乙酸b．脱色液250 ml乙醇，80 ml冰醋酸，加水稀释至1000 ml。
c．染色液称取0.29 g考玛斯亮蓝R-250溶于250 ml上述脱色液中样品处理：处理完样品应尽快使用，若存储，须于-20℃下。
SOP-CSDS-PAGE凝胶电泳标准操作规程
文件编号文件名称SDS-PAGE!胶电泳标准操作规程生效日期有效期至审批及颁发:部门签名日期起草质量部审核质量部批准质量受权人颁发质量部会审: 部门签名日期部门签名日期Copy-1Copy-2Copy-3Copy-4Copy-5Copy-6Copy-7Copy-8Copy-9Copy-10Copy-11Copy-12Copy-13Copy-14Copy-15文件编号文件名称SDS-PAGIE!胶电泳标准操作规程生效日期有效期至、目的建立重组人生长激素电泳检查标准操作规程，使中间产品检验有据可依、范围适用丁本公司中间产品“重组人生长激素”的电泳检查。
二、职责1质量部负责制定本规程。
2 QC人员负责按照本操作规程的规定操作，并做好记录。
3 QC室主任负责监督QC人员按照本规程的规定操作实施四、术语无五、内容1仪器、设备包压电源、垂直板泳槽和制胶模具。
2试剂2.1检查所需试剂是否在有效期内，未准备好的及时配制，缺少的试剂及时申购。
2.2所需试剂有：2.2.1 水：电阻率应不低丁18.2MQ .cm。
2.2.2 A 液：（1.5mol/L三羟基氨基甲烷-盐酸缓冲液）称取18.15g三羟基氨基甲烷，加适量水溶解，用盐酸调pH值至8.8，加水稀释至100ml。
2.2.3 B 液：30初烯酰胺-0.8%N, N'-业甲基双丙烯酰胺溶液（避光保存）。
2.2.4 C 液：1咐二烷基磺酸钠溶液。
2.2.5 D 液：10%3甲基乙二胺溶液。
2.2.6 E 液：10%±硫酸铉，临用前配置。
2.2.7 F 液：（0.5mol/L三羟基氨基甲烷-盐酸缓冲液）称取6.05g三羟基氨基甲烷加适量水溶解，用盐酸调pH值至6.8，加水稀释至100ml。
文件名称SDS-PAGE!胶电泳标准操作规程文件编号生效日期有效期至水溶解，用盐酸调PH值至8.3，加水稀释至1000ml。
2.2.9 供试品缓冲液：称取0.303g三羟基氨基甲烷，0.189ml盐酸，4ml甘油，2mg漠酚蓝, 0.8g十二烷基磺酸钠，加水溶解并稀释至10ml，此溶液用丁非还原SDS-PAGE如用丁还原SDS-PAGE则再加2m l6-筑基乙醇。
SDS-PAGE蛋白电泳检测标准操作规程（非还原还原）
SDS-PAGE蛋白电泳检测标准操作规程（非还原还原）GOOD RESEARCH & DEVELOPMENT PRACTICESDS-PAGE蛋白电泳检测标准操作规程（还原&非还原）编号：SDS-PAGE蛋白电泳检测起草人：部门审核：QA审核：替代：□新订：□日期：日期：日期：修订号：0批准：年月日生效日期：年月日文件分发部门：GOOD RESEARCH & DEVELOPMENT PRACTICESDS-PAGE蛋白电泳检测编号：SDS-PAGE蛋白电泳检测一目的保证产品电泳电泳分子量和纯度检测按规范进行和检定结果的准确可靠。
二范围用于规范电泳电泳分子量和纯度的测定。
三责任质量控制部人员。
四内容1试剂与水：所有试剂为分析纯（AR）；水为蒸馏水或超纯水。
2 溶液的配制2.1A液：1.5MTris·HCl pH8.8称取90.75gTris碱(分析纯)加适量的超纯水（约400ml）溶解,用6M盐酸调pH值至8.8,加超纯水定容至500 ml。
贴上标贴，室温储存。
此溶液有效使用期限为三个月。
6M盐酸（调pH用）：浓盐酸50ml，加50ml纯化水，混匀。
2.2、B液: 0.5MTris·HCl pH6.8称取60.5gTris碱(分析纯)加适量的超纯水（约400ml）溶解,用6M盐酸调pH值至6.8,加超纯水定容至1000 ml。
贴上标贴，室温储存。
2.3C液: 30%丙烯酰胺-0.8%N,N-亚甲基双丙烯酰胺溶液称取300g丙烯酰胺(分析纯),8gN,N’-甲叉双丙烯酰胺(分析纯), 加适量的超纯水溶解(一般500ml，因为丙烯酰胺具有溶胀性的特点),再定容至1000 ml,用滤纸过滤。
贴上标贴，避光4℃保存。
2.4D液:1%SDS称取2gSDS(分析纯),用超纯水溶解至200 ml.贴上标贴，4℃保存。
2.5E液:10%过硫酸铵GOOD RESEARCH & DEVELOPMENT PRACTICESDS-PAGE蛋白电泳检测编号：称取10g过硫酸铵(分析纯)，用超纯水溶解至100 ml，以1ml/支分装，贴上标贴，－20℃保存。
SDS凝胶电泳操作手册
各项检验操作注意事项一.SDS-PAGE操作及注意事项1.制胶按如下配方制备分离胶和浓缩胶4%浓缩胶（3ml）10%分离胶（4ml）AB-3 0.25mLAB-6 0.8mL3×gel buffer 0.75mL 1.335mL50%甘油(v/v) 0.64mLH2O 2mL 1.235mL10%APS(w/v) 22.5uL 20uLTEMED 2.25Ul 2uL注意事项：（1）配制前先将两块玻璃板夹紧，可以先试漏。
首先配置分离胶，用水封，静置40min 后，将水吸干，再注入浓缩胶，插上梳子，注意要避免梳孔出现气泡。
（2）在加入APS（10%过硫酸铵）和TENED后要尽快将胶注入，防止其凝固后无法注入玻璃板内。
2. 电泳注意事项：（1）制样：取40uL待测样，加入10uL5×SDS PEGE loading buffer，混匀后煮沸10min （电磁炉1000W），制好的样放至室温后，放4℃保存，待电泳。
（2）电泳：在电泳槽底部加入阳极缓冲液，将制好的胶连同装置放入电泳槽中，在两块胶之间注入阴极缓冲液。
取2uL Marker注入胶孔中作为参照，再一次取5uL样品缓慢注入胶孔中，调整电压800-100V。
待溴酚蓝从浓缩胶进入分离胶后，电压加至120-155V。
继续电泳直到溴酚蓝抵达分离胶底部，断开电源。
小心撬开玻璃板，除去浓缩胶，取出分离胶，加入R250考马斯亮蓝染色40min，再用脱色液脱色。
3. 溶液的配制：（1）正极缓冲液Anode buffer(1×)：12.114gTris加少量ddH2O溶解后，用HCL调PH至8.9，最后用容量瓶定容至500mL，4℃保存。
（2）负极缓冲液Cathode buffer (1×)：6.057gTris+8.96gTricine+0.5SDS加入少量ddH2O 溶解后，定容至500mL，4℃保存。
（3）凝胶缓冲液Gel buffer (3×)：36.342gTris+0.3gSDS加ddH2O定容至100mL，HCL调PH=8.45，过滤4℃保存。
SDS-PAGE电泳SOP
SDS-PAGE电泳标准操作规程1.目的：制定本规程以规范还原性SDS-PAGE和非还原性SDS-PAGE电泳方法分离蛋白的操作过程。
2.范围：抗原或是抗体的定性鉴定、纯度鉴定和相对定量比较。
3.责任：质量分析人员熟悉并遵守该标准操作规程。
4.定义：N/A5.设备、材料和试剂：5.1设备、材料设备名生产商型号/货号设备编号备注电泳仪伯乐PowerpacHC TM HV JS026垂直电泳槽伯乐Miniprotean JS025干式恒温浴K30 JS045离心机eppendorf F-45-12-11 JS020单道移液器（10ul,100ul）Eppendorf Research plus JH07931,GH15898冰箱TCL BCD-211KD3 N/A摇床QILIM BEIER N/APH仪梅特勒5.2试剂试剂名称生产商货号批号APS国药集团化学试剂F20111213甲醇国药集团化学试剂20130407 冰醋酸国药集团化学试剂130420考马斯亮蓝R-250 国药集团化学试剂20130322 Tris-HCl 国药集团化学试剂201300422 甘油国药集团化学试剂F201000115 溴酚蓝国药集团化学试剂20120929 无水乙醇国药集团化学试剂甘氨酸国药集团化学试剂SDSDTTProtein Marker盐酸国药集团化学试剂2×PAGE 7.5%凝胶制备试剂盒Promoton PG111 分离胶缓分离胶溶液4%浓缩胶Promoton 浓缩胶预混液6.溶液配制6.1分离胶以1mm板，配两块为例：取7.5%的分离胶缓冲液和分离胶各5ml混匀，再向其加入10%的APS溶液100μl混匀。
6.2 浓缩胶以1mm板，配两块为例：取浓缩胶的预混液4ml，向其加入10%的APS溶液40μl混匀。
6.3 上样缓冲液（loading buffer）：6.4 10%过硫酸铵称取1g APS，加入10ml纯水搅拌溶解（现配现用）也可储存4~8℃冰箱中保存，保存期为1-2周。
SDS-PAGE电泳的标准操作规程
SDS-PAGE电泳的标准操作规程（编号：039）1、目的及适用范围SDS-PAGE电泳的分离原理，是根据大多数蛋白质都能与阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠（SDS）按重量比结合成复合物，使蛋白分子所带的负电荷远远超过天然蛋白分子的净电荷，消除了蛋白分子的电荷效应，使蛋白按分子大小分离，主要用于蛋白质分子量的测定、蛋白质混合组分的分离和蛋白质亚基组分的分析等方面。
2、主要仪器恒压或恒流电源、垂直板、制胶模具3、试剂及配制方法试剂配制方法或要求H2O 电阻率不低于18.2 MΩ.cm1.5 M Tris-HCl 1.5 moL/L Tris-HCl缓冲液，pH 8.830% Acrylamide 30% 丙烯酰胺溶液（避光保存）10% SDS 10% SDS溶液10% APS 10% 过硫酸铵溶液（临用前配制）TEMED TEMED溶液1 M Tris-HCl 1 moL/L Tris-HCl缓冲液，pH 6.815.1g、甘氨酸94 g、SDS 5 g，水稀释至1 L，pH 8.35×电极缓冲液 Tris2×Loading buffer 100 mM Tris-HCl（pH6.8）、4% SDS、0.2% 溴酚蓝、20% 甘油，用于非还原SDS-PAGE电泳，如用于还原SDS-PAGE电泳，则再加2% β-巯基乙醇5×Loading buffer 250 mM Tris-HCl（pH6.8）、10% SDS、0.5% 溴酚蓝、50% 甘油，用于非还原SDS-PAGE电泳，如用于还原SDS-PAGE电泳，则再加5% β-巯基乙醇考马斯亮蓝染色液 0.1%考马斯亮蓝R250、25%异丙醇、10%冰醋酸，水稀释至1 L考马斯亮蓝脱色液醋酸100 mL、乙醇50 mL、水850 mL4、操作步骤4.1 制胶：取合适的密封垫片和两块已清洁的干燥的玻璃板，组装成灌胶的模具，按下表制成分离胶，灌入模具内一定高度（一般离玻璃板上端3.5 cm），小心加水或异丙醇封顶（约0.5 cm高），室温下聚合（温度不同，聚合时间不同，20℃大约需30 min）。
SDS-PAGE电泳注意事项
SDS-PAGE电泳的操作规程一、样品处理取适量体积的样品溶液（样品含约为0.5-5ug），加入5×样品缓冲液，用振荡器混匀，于95℃水浴中煮5分钟，并于离心机中12000r/min离心5分钟待上样用，煮完后室温冷却。
非还原不用煮。
二、配制凝胶溶液和灌胶A、预先计算好所需浓度胶的体积及配胶所需要的各种试剂的体积，按这些数据依次加入试剂并混匀，然后灌入预先装好并且用双蒸水试漏过的板层中（先是分离胶），在胶的上面加一小层水饱和的异丁醇，置于平整的桌面让其自然凝固。
B、待分离胶凝固后（以胶与异丁醇界面有折射为准），到掉上层的异丁醇，用双蒸水冲洗三次并用吸水纸吸干。
然后灌入预定浓度的、按步骤A配制的浓缩胶，插入加样梳（注意赶走气泡），平置于水平桌面，自然凝固。
C、待凝固后，放置1小时使胶充分交联凝固。
三、电泳1、拔掉梳子，用双蒸水冲洗加样孔，去除杂质及未凝固的胶溶液，然后装好电泳装置，加入电泳缓冲液（如阴阳极缓冲液不同，需要分别加入相应的缓冲液，另外，阴阳极电泳缓冲液不要混在一起）2、用20ul的微量加样枪上样。
3、电泳开始时，恒压模式下用80V的电压电泳，待指示剂溴酚蓝进入分离胶时，把电压提高到130-150V左右，直到溴酚蓝快走出分离胶时，终止电泳，切断电源，拆下凝胶分别切下上、下角标记胶的方向及区别是哪一块胶。
4、清洗胶架、玻璃及其他附件。
四、染色、脱色及结果的分析与保存1、把剥下的胶浸入染色液中，放在脱色摇床上摇1小时。
2、取出凝胶块，用蒸馏水冲洗干净，然后置于脱色液中脱色，摇荡脱色直到底色基本脱完。
3、脱完色的胶用凝胶成像系统照相并进行数据分析处理。
一、试剂的使用与管理1、30%的丙烯酰胺贮存液（棕色瓶中保存）、pH8.8的缓冲液、PH6.8的缓冲液、10%的AP、TEMED用完后请放回4℃冰箱。
2、2×上样缓冲液，用完后请存放于-20℃冰箱的指定位置。
3、中分子量marker请按照说明书配制，配制后于95℃水浴中煮5分钟，冷却后离心，分装到eppendorf管中，每管10 U L。
电泳纯度(非还原型SDS-PAGE)测定标准操作规程
细胞因子电泳纯度（非还原型SDS-PAGE）测定标准操作规程依据：《中华人民共和国药典》2005年版第三部。
范围：适用于细胞因子纯度的检测。
目的：检测细胞因子蛋白质纯度。
原理：蛋白质具有不同的电荷和分子量，在经过阴离子去污剂SDS处理后，蛋白质分子上的电荷被中和，在聚丙稀酰胺凝胶电泳时，不同的蛋白质按照其分子量大小进行分布，电泳迁移率仅取决于蛋白质的分子量。
由于不连续的PH梯度作用，样品被压缩成一条狭窄区带，采用染色液染色，经扫描仪扫描胶片可及时观察结果。
内容：1 材料1．1样品：经二人复核批号无误后检测1．2试剂甲醇 CH3OH 分析纯无水乙醇 CH3CH2OH 分析纯浓盐酸 HCl 分析纯甘油 C3H8O3分析纯硝酸银 AgNO3分析纯重铬酸钾 K2Cr2O7分析纯正丁醇 C4H9OH 分析纯甲醛 HCHO 分析纯丙烯酰胺 CH2CHCONH2分析纯甲叉双丙烯酰胺（CH2CHCONH2）2CH2分析纯过硫酸铵（NH4）2S2O8分析纯TEMED（四甲基乙二胺）(CH3)2N(CH2)2N(CH3)2分析纯甘氨酸 C2H5NO2分析纯SDS（十二烷基硫酸钠）C12H25O4SNa 分析纯乙酸 CH3COOH 分析纯碳酸钠 Na2CO3分析纯溴酚蓝 C19H10Br4O5S 分析纯1．3注射用水：符合《中华人民共和国药典》2005年版要求。
1．4设备1．4．1扭力天平上海第二天平仪器厂1．4．2垂直板状电泳槽北京东方仪器厂1．4．3恒温恒流电泳仪法玛西亚公司1．4．4快速电泳槽BIORAD USA1．4．5全自动扫描仪CS-930 日本岛津1．4．6TS-1型摇床1．5器皿：500ml瓶、100ul移液器、1ml吸管、10ml吸管3000ml三角瓶、平皿、1000ml烧杯、80ml烧杯，以上器皿经本室洗刷组处理。
2 方法2．1准备工作2．1．1工作环境：控制区，确认场地清场合格，摘下“清场合格”标志牌，挂上“使用中”标志牌。
SDS-PAGE电泳标准操作流程
SDS-PAGE电泳标准操作规程1、目的建立SDS-PAGE电泳的标准操作规程,确保电泳操作有序进行，保证电泳的安全性、有效性。
2.范围与职责适用SDS-PAGE电泳操作岗位。
配制岗位操作人员对本标淮实施负责，QA检查员、生产主管负责监督。
3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。
放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。
3.1.2 分离胶的配置3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：3.1.2.2 灌胶混匀后用移液枪将凝胶溶液沿玻棒小心注入到长、短玻璃板间的狭缝内(胶高度距样品模板梳齿下缘约1cm)。
3.1．2.3液封在凝胶表面沿短玻板边缘轻轻加一层水以隔绝空气，使胶面平整。
静置约30min观察胶面变化，当看到水与凝固的胶面有折射率不同的界限时，表明胶已完全凝固，倒掉上层水，并用滤纸吸干残留的水液。
3.1.3浓缩胶的配置3.1.3.1 5%浓缩胶配方下表：3.1.3.2插入制胶梳混匀后用移液枪将凝胶溶液注入到长、短玻璃板间的狭缝内(分离胶上方)，轻轻加入样品模板梳，小心避免气泡的出现。
约30分钟，聚合完全。
3.2. 电泳3.2.1 安装电泳槽将制备好的凝胶板取下，小心拔下梳子。
两块10%的凝胶板分别插到U形橡胶框的两边凹形槽中，可往上提起使凝胶板紧贴橡胶。
将装好玻璃板的胶模框平放在仰放的贮槽框上，其下缘与贮槽框下缘对齐，放入电泳槽内。
倒入1X tris-gly电泳缓冲液。
3.2.2 样品处理对于蛋白样品直接取80µl的样品，依次加上20µl 5x buffer (加了B-巯基乙醇)，混匀。
对于菌体或组织等固体样品，取少量样品加100ul 2x buffer (加了B-巯基乙醇)煮沸10分钟。
3.2.3 加样用移液枪取处理过的样品溶液10μl，小心地依次加入到各凝胶凹形样品槽内，marker 加入到其中一个槽内，为区别两块板，marker可加在不同的孔槽中。
SDS-PAGE 操作标准
SDS-PAGE 操作标准一、电泳相关溶液的配制：1、30%丙稀酰胺混合溶液（100ml ）：丙稀酰胺 29g （实际可以为29.2g ） 双丙稀酰胺 1g （实际可以为0.8g ）用水溶解定容到100ml ，过滤，4摄氏度保存一个月。
2、5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液：5× 1×Tris base 15.1g 25mmol/L 甘氨酸 94g 250mmol/L （pH8.3） 10%SDS （m/V ） 50mL 0.1%（m/V ） dH2O 定容至1000ml 。
3、2×SDS 凝胶加样缓冲液：1.0 mol/L pH6.8 Tris-Cl 10 mL 1.0 mol/L 二硫苏糖醇(DTT ) 20 mLSDS 4g 溴酚蓝 0.2g 甘油 20mL加水定容至100mL ，于4℃保存。
注：1.0 mol/L DTT 可替换为10% β-巯基乙醇 4、染色液的配制（1000ml ）: 甲醇或者乙醇 500ml2010.06.28药物部王红勋乙酸 100ml考马斯亮蓝R250 2.5g，去离子水补至1000ml。
充分混匀后进行过滤，收集滤液备用。
当过滤速度变慢时要更换滤纸，快速过滤完，不可隔夜以免影响染色效果。
5、脱色液（1000ml）:甲醇或者乙醇 250ml乙酸 80ml去离子水补至1000ml,混匀，备用。
二、SDS-PAGE分析：1、20uL收集液，加入5×样品缓冲液5ul，在80℃水浴锅中煮5min。
表一：SDS聚丙烯酰胺凝胶的有效分离范围：丙烯酰胺浓度/% 线性分离范围/kDa15 10-4312 12-6010 20-807.5 36-945.0 57-212注：丙烯酰胺:双丙烯酰胺的分子比=1:29表二、5%浓缩胶配方（积层胶、压缩胶）配制不同体积凝胶所需要各成份的体积/mL成份1 2 3 4 5 6 8 10 5%浓缩胶水 0.68 1.4 2.1 2.7 3.4 4.1 5.5 6.8 30%丙烯酰胺混合溶液 0.17 0.33 0.5 0.67 0.83 1.0 1.3 1.71.0mol/Tris（pH6.8） 0.13 0.25 0.38 0.5 0.63 0.75 1.0 1.2510%SDS 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.08 0.1 10%过硫酸铵 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.08 0.1TEMED 0.0010.0020.0030.0040.0050.006 0.008 0.01表三：分离胶配方配制不同体积和浓度凝胶所需要各成份的体积/mL 成份5 10 15 20 25 30 40 50 6%胶水 2.6 5.3 7.9 10.6 13.2 15.9 21.2 26.5 30%丙烯酰胺混合溶液 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 8.0 10.01.5mol/Tris（pH8.8） 1.32.53.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.510%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5TEMED 0.0040.0080.0120.0160.02 0.024 0.032 0.04 8%胶水 2.3 4.6 6.9 9.3 11.5 13.9 16.5 23.2 30%丙烯酰胺混合溶液 1.3 2.7 4.0 5.3 6.7 8.0 10.7 13.31.5mol/Tris（pH8.8） 1.32.53.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.510%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5TEMED 0.0030.0060.0090.0120.0150.018 0.024 0.03 10%胶水 1.9 4.0 5.9 7.9 9.9 11.9 15.9 19.8 30%丙烯酰胺混合溶液 1.7 3.3 5.0 6.7 8.3 10.0 13.3 16.71.5mol/Tris（pH8.8） 1.32.53.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.510%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5TEMED 0.0020.0040.0060.0080.01 0.012 0.016 0.02 12%胶水 1.6 3.3 4.9 6.6 8.2 9.9 13.2 16.5 30%丙烯酰胺混合溶液 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 16.0 20.01.5mol/Tris（pH8.8） 1.32.53.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.510%SDS 0.05 0.01 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸铵 0.05 0.01 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5TEMED 0.0020.0040.0060.0080.01 0.012 0.016 0.02 15%胶水 1.1 2.3 3.4 4.6 5.7 6.9 9.2 11.5 30%丙烯酰胺混合溶液 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 20.0 25.01.5mol/Tris（pH8.8） 1.32.53.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.510%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5TEMED 0.0020.0040.0060.0080.01 0.012 0.016 0.022、按照上面配方制SDS-PAGE凝胶，安装好电泳仪，在槽中加入电极缓冲液。
SDS-PAGE凝胶电泳操作
SDS-PAGE凝胶电泳操作一、常规试剂的配制1. 30% 聚丙烯酰胺贮液：丙烯酰胺150g，甲叉双丙烯酰胺4g，双蒸水500ml，滤纸过滤后，棕色瓶避光4℃保存；2. 1.5mol/L，pH 8.8 Tris-HCl分离胶缓冲液：18.15g Tris，用1mol/L HCl定容至100ml，棕色瓶避光4℃保存；3. 1.0mol/L，pH 6.8 Tris-HCl分离胶缓冲液：12g Tris，用1mol/L 调pH至100ml，棕色瓶避光4℃保存；4. 10% SDS溶液：10g SDS加水定容至100ml，完全溶解室温保存；5. 10% AP溶液：0.1g AP（过硫酸铵）加水定容至1ml，用前新鲜配制；6. 1×SDS-PAGE电泳缓冲液：25mM Tris（3.0285g/L），192mM甘氨酸（14.41g/L），0.1%SDS （1g/L），pH 8.30；7. 染色液：0.25g 考马斯亮蓝R-250溶解于45ml甲醇，45ml水，10ml冰醋酸，过滤除去杂质；8. 脱色液：45ml甲醇，45ml水，10ml冰醋酸；9. 固定液：50ml甲醇，40ml水，10ml冰醋酸；10. 2×SDS-PAGE上样缓冲液：10% SDS 0.4ml，0.375M Tris-HCl（pH 6.8）0.333ml，甘油0.2ml，1% 溴酚兰10μL，β-疏基乙醇100μL，加水定容至1ml，分装后-20℃保存。
二、样品的处理1. 蛋白含量较低的酶制剂或原料样品（1）粉剂（或颗粒）样品称取样品1g，加入3-5ml蒸馏水进行搅拌溶解1h（搅拌时间可根据实际情况进行增减），4000rpm离心10min，取离心上清液等体积加入20%的三氯乙酸聚沉30min，离心，弃去离心上清液，用70%的丙酮溶液洗涤沉淀，4000rpm离心10min，重复洗涤3-5次，将丙酮洗涤液吹干，加入适量（1-3ml）PBS溶解沉淀，溶解液即可用于电泳实验。
SDS-PAGE电泳的标准操作规程
SDS-PAGE电泳的标准操作规程（编号：039）1、目的及适用范围SDS-PAGE电泳的分离原理，是根据大多数蛋白质都能与阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠（SDS）按重量比结合成复合物，使蛋白分子所带的负电荷远远超过天然蛋白分子的净电荷，消除了蛋白分子的电荷效应，使蛋白按分子大小分离，主要用于蛋白质分子量的测定、蛋白质混合组分的分离和蛋白质亚基组分的分析等方面。
2、主要仪器恒压或恒流电源、垂直板、制胶模具3、试剂及配制方法试剂配制方法或要求H2O 电阻率不低于18.2 MΩ.cm1.5 M Tris-HCl 1.5 moL/L Tris-HCl缓冲液，pH 8.830% Acrylamide 30% 丙烯酰胺溶液（避光保存）10% SDS 10% SDS溶液10% APS 10% 过硫酸铵溶液（临用前配制）TEMED TEMED溶液1 M Tris-HCl 1 moL/L Tris-HCl缓冲液，pH 6.8g、甘氨酸94 g、SDS 5 g，水稀释至1 L，pH 8.315.15×电极缓冲液 Tris2×Loading buffer 100 mM Tris-HCl（pH6.8）、4% SDS、0.2% 溴酚蓝、20% 甘油，用于非还原SDS-PAGE电泳，如用于还原SDS-PAGE电泳，则再加2% β-巯基乙醇5×Loading buffer 250 mM Tris-HCl（pH6.8）、10% SDS、0.5% 溴酚蓝、50% 甘油，用于非还原SDS-PAGE电泳，如用于还原SDS-PAGE电泳，则再加5% β-巯基乙醇考马斯亮蓝染色液 0.1%考马斯亮蓝R250、25%异丙醇、10%冰醋酸，水稀释至1 L考马斯亮蓝脱色液醋酸100 mL、乙醇50 mL、水850 mL4、操作步骤4.1 制胶：取合适的密封垫片和两块已清洁的干燥的玻璃板，组装成灌胶的模具，按下表制成分离胶，灌入模具内一定高度（一般离玻璃板上端3.5 cm），小心加水或异丙醇封顶（约0.5 cm高），室温下聚合（温度不同，聚合时间不同，20℃大约需30 min）。
BIORAD电泳仪及SDS-PAGE凝胶电泳操作规范
使用BIO-RAD电泳仪进行SDS-PAGE凝胶电泳的操作规范实验原理根据蛋白分子量亚基的不同而分离蛋白，在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的电泳迁移速率主要取决于亚基分子量的大小。
实验所用仪器FR-200A全自动紫外与可见分析装置上海复日科技有限公司电泳仪 BIO-RAD公司TS-1型脱色摇床江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司实验用试剂低分子量蛋白Maker TAKARA4*上样缓冲 TAKARAPagn Blue protein staining solution Fermentas试剂的配制1.贮液的配制（1）凝胶储液取30g丙烯酰胺+0.8g甲叉双丙烯酰胺0.8g ,先用35ml双蒸水溶解，搅拌，直到溶液变成透明，再用双蒸水稀释至100ml，过滤。
棕色瓶4℃保存一个月。
（2）1 mol/l Tris-HCL (PH 8.8)12.1g Tris(三羟甲基氨基甲烷)溶解在80ml双蒸水中，用4mol/l盐酸调PH至8.8。
再用双蒸水稀释至100ml，保存在4℃冰箱。
（3）1.0 mol/l Tris-HCL (PH 6.8)6.06g Tris溶解在40ml双蒸水中，用用4mol/l盐酸调PH至6.8。
再用双蒸水稀释至50ml，保存在4℃冰箱。
（4）10%过硫酸铵（APS）0.1g过硫酸铵+1ml双蒸水。
使用前新鲜配制（5）Tris–甘氨酸电泳缓冲液的配制（25mmol/L Tris；250mmol/L甘氨酸(pH8.3)）30.3gTris+ 144.2g甘氨酸+ 10gSDS，双蒸水定容至1L。
每次使用时10倍稀释。
（6）样品缓冲液使用4*SDS-PAGE loading buffer(Takara公司)，上样缓冲与样品比例1:3混匀，之后煮沸5min。
2.凝胶的配制注：上表所标体积为配制两块胶的用量。
若配制一块或多块，可按比例减半或加倍。
具体步骤如下：1、样品制备：40 µL蛋白+5*上样缓冲液10 µL，煮沸5 min，冷却后放冰箱下层保存，备用2、制胶1）用专用的医用棉口罩将胶板擦拭干净，电泳槽清洗干净，组装模具。
(完整版)SDS-PAGE蛋白电泳方法
SDS-PAGE一. 实验原理SDS 是一种阴离子表面活性剂，在蛋白质溶液里加入 SDS 和巯基乙醇后，巯基乙醇能使蛋白质分子中的二硫键还原， SDS 能使蛋白质的氢键、疏水键打开并结合到蛋白质分子上，形成蛋白质-SDS 复合物。
在一定条件下，SDS 与大多数蛋白质的结合比例为 1.4:1。
由于十二烷基磺酸根带负电，使各种蛋白质的SDS-复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质原有的电荷量，因而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别。
SDS与蛋白质结合后，还引起了蛋白质构象的改变。
蛋白质-SDS复合物的流体力学和光学性质表明，它们在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒，不同蛋白质的 SDS 复合物的短轴长度都一样，约为 1.8nm ，而长轴则随蛋白质的 Mr 成正比的变化。
基于上述原因，蛋白质-SDS 复合物在凝胶电泳中的迁移率，不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而只与椭圆棒的长度有关，也就是蛋白质 Mr 的函数。
二. 试剂器材30%凝胶贮液(100mL)：称取试剂Acr 29.2g和Bis 0.8g置于100mL烧杯中，向烧杯中加入约60mL双蒸水，充分搅拌溶解后加双蒸水定容至100mL，置于棕色瓶内4℃贮存，每过1-2个月应重新配制；注意：丙稀酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用有积累性，配制时应戴手套和口罩等。
分离胶缓冲液(1.5 mol/L Tris-HCl，pH 8.8，100mL)：称取Tris 18.2g 溶于约80mL 双蒸水，用6mol/L的HCl 调整pH值至8.8，加双蒸水定容到100mL，4℃ 贮存；堆积胶缓冲液(0.5 M Tris-HCl，pH 6.8，100mL)：称取Tris 6.0g溶于约80mL双蒸水，用1mol/L的HCl 调整pH值至6.8，加双蒸水定容到100mL，4℃ 贮存；电泳缓冲液(1L)：称取试剂Tris 3.03g和甘氨酸 14.4g置于500mL烧杯中，向烧杯中加入约400mL双蒸水充分溶解，再加入10%SDS溶液1.0mL，以双蒸水定容至1L (自然pH值为8.3，无需再调)，4℃ 贮存，可重复使用5-6次；2×加样缓冲液(10mL)：取下列试剂置于10mL塑料离心管中0.5mol/L Tris-HCl缓冲液(pH6.8) 2.0mL10%SDS溶液 4.0mL甘油 2.0mL巯基乙醇 2.0mL溴酚蓝 0.02g，混匀后1mL分装，-70℃可贮存6个月；10%AP：称取(NH4)2S2O3 1.0 g，溶于10.0mL双蒸水中，分装成每份1mL，-20℃贮存；TEMED：分装成每份1mL，4℃避光贮存；水饱和正丁醇(100mL)：在玻璃瓶中加入50mL双蒸水和50mL正丁醇，振摇。
SDS-PAGE蛋白电泳标准操作规程
SDS-PAGE蛋白电泳标准操作----(纯度检测)一.目的：检测蛋白质的纯度是否达到生产抗体的要求。
二.依据：《分子克隆手册》，Ab-mart公司内部标准。
三. 职责：质量控制部。
四.试剂与水：所有试剂为分析纯（AR）；水为蒸馏水或超纯水。
五. 器皿与耗品：所有玻璃器皿使用前用玻璃清洁剂清洗, 80℃烤干。
tube、tip一次性使用。
六. 仪器设备：电泳仪（电源1--300V）电泳槽灌胶模具染色具凝胶扫描仪七. 环境要求：相对洁净环境，室温。
八. 溶液的配置：1.A液：1.5MTris·HCl pH8.8称取18.15gTris碱(分析纯)加适量的超纯水溶解,用浓盐酸(分析纯)调pH值至8.8,加超纯水定容至100 ml。
贴上标贴，4℃保存。
此溶液有效使用期限为三个月。
（溶液配置台帐见附件）2.B液: 1MTris·HCl pH6.8称取12.1gTris碱(分析纯)加适量的超纯水溶解,用浓盐酸(分析纯)调pH值至6.8,加超纯水定容至100 ml。
贴上标贴，4℃保存。
此溶液有效使用期限为三个月。
（溶液配置台帐见附件）3.C液: 30%丙烯酰胺称取29.2g丙烯酰胺(分析纯),0.8gN,N’-甲叉双丙烯酰胺(分析纯), 加适量的超纯水溶解,再定容至100 ml,用滤纸过滤,。
贴上标贴，避光4℃保存。
此溶液有效使用期限为三个月。
（溶液配置台帐见附件）4.D液:10%SDS称取10gSDS(分析纯),用超纯水溶解至100 ml.贴上标贴，室温储存。
此溶液有效使用期限为三个月。
（溶液配置台帐见附件）5.E液:10%过硫酸胺称取10g过硫酸胺(分析纯), 用超纯水溶解至100 ml。
贴上标贴，-20℃保存。
此溶液有效使用期限为三个月。
（溶液配置台帐见附件）6.F液:TEMED(amersco)7.电泳缓冲液(10X)称取60.57g Tris碱(分析纯),288.268g甘氨酸(分析纯),20gSDS(分析纯),加超纯水定容至2000ml，临用前加超纯水稀释10倍，贴上标贴，室温储存。
(完整版)SDS-PAGE电泳标准操作流程
SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。
放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。
3.1.2 分离胶的配置梳齿下缘约1cm)。
3.1．2.3液封在凝胶表面沿短玻板边缘轻轻加一层水以隔绝空气，使胶面平整。
静置约30min观察胶面变化，当看到水与凝固的胶面有折射率不同的界限时，表明胶已完全凝固，倒掉上层水，并用滤纸吸干残留的水液。
3.1.3浓缩胶的配置3.1.3.1 5%浓缩胶配方下表：3.1.3.2插入制胶梳混匀后用移液枪将凝胶溶液注入到长、短玻璃板间的狭缝内(分离胶上方)，轻轻加入样品模板梳，小心避免气泡的出现。
约30分钟，聚合完全。
3.2. 电泳3.2.1 安装电泳槽将制备好的凝胶板取下，小心拔下梳子。
两块10%的凝胶板分别插到U形橡胶框的两边凹形槽中，可往上提起使凝胶板紧贴橡胶。
将装好玻璃板的胶模框平放在仰放的贮槽框上，其下缘与贮槽框下缘对齐，放入电泳槽内。
倒入1X tris-gly电泳缓冲液。
3.2.2 样品处理对于蛋白样品直接取80µl的样品，依次加上20µl 5x buffer (加了B-巯基乙醇)，混匀。
对于菌体或组织等固体样品，取少量样品加100ul 2x buffer (加了B-巯基乙醇)煮沸10分钟。
3.2.3 加样用移液枪取处理过的样品溶液10μl，小心地依次加入到各凝胶凹形样品槽内，marker 加入到其中一个槽内，为区别两块板，marker可加在不同的孔槽中。
3.2.4 电泳将电泳槽放置电泳仪上，接通电源，正负极对好。
电压调至约150v保持恒压。
待溴酚蓝标记移动到凝胶底部时，关电源，把电泳缓冲液倒回瓶中。
3.2.5剥离胶把电泳槽取出，两块板拿下来，用刮片从长短玻片中间翘起，再把浓缩胶刮掉，取下。
3.3. 染色放于加有R250染色液的染色皿中，染液漫过胶即可，置于摇床上，转速约为45r/min，时间约1小时，完成后染液倒掉并用水洗掉染液。
BIORAD电泳仪及SDS-PAGE凝胶电泳操作规范
使用BIO-RAD电泳仪进行SDS-PAGE凝胶电泳的操作规范实验原理根据蛋白分子量亚基的不同而分离蛋白，在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的电泳迁移速率主要取决于亚基分子量的大小。
实验所用仪器FR-200A全自动紫外与可见分析装置上海复日科技有限公司电泳仪 BIO-RAD公司TS-1型脱色摇床江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司实验用试剂低分子量蛋白Maker TAKARA4*上样缓冲 TAKARAPagn Blue protein staining solution Fermentas试剂的配制1.贮液的配制（1）凝胶储液取30g丙烯酰胺+0.8g甲叉双丙烯酰胺0.8g ,先用35ml双蒸水溶解，搅拌，直到溶液变成透明，再用双蒸水稀释至100ml，过滤。
棕色瓶4℃保存一个月。
（2）1 mol/l Tris-HCL (PH 8.8)12.1g Tris(三羟甲基氨基甲烷)溶解在80ml双蒸水中，用4mol/l盐酸调PH至8.8。
再用双蒸水稀释至100ml，保存在4℃冰箱。
（3）1.0 mol/l Tris-HCL (PH 6.8)6.06g Tris溶解在40ml双蒸水中，用用4mol/l盐酸调PH至6.8。
再用双蒸水稀释至50ml，保存在4℃冰箱。
（4）10%过硫酸铵（APS）0.1g过硫酸铵+1ml双蒸水。
使用前新鲜配制（5）Tris–甘氨酸电泳缓冲液的配制（25mmol/L Tris；250mmol/L甘氨酸(pH8.3)）30.3gTris+ 144.2g甘氨酸+ 10gSDS，双蒸水定容至1L。
每次使用时10倍稀释。
（6）样品缓冲液使用4*SDS-PAGE loading buffer(Takara公司)，上样缓冲与样品比例1:3混匀，之后煮沸5min。
2.凝胶的配制注：上表所标体积为配制两块胶的用量。
若配制一块或多块，可按比例减半或加倍。
具体步骤如下：1、样品制备：40 µL蛋白+5*上样缓冲液10 µL，煮沸5 min，冷却后放冰箱下层保存，备用2、制胶1）用专用的医用棉口罩将胶板擦拭干净，电泳槽清洗干净，组装模具。
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聚丙烯酰氨凝胶电泳一简介作用原理：聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。
它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native-PAGE）及SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）；非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。
而SDS-PAGE仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开蛋白质。
该技术最初由shapiro 于1967年建立，他们发现在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂（SDS即十二烷基磺酸钠）后，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小（可以忽略电荷因素）。
二作用SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。
而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇(DTT)能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。
在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。
SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统，与连续缓冲系统相比，能够有较高的分辨率。
浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。
当样品液和浓缩胶选TRIS/HCl缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。
电泳开始后，HCl解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。
蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。
电泳开始时氯离子泳动率最大，超过蛋白，因此在后面形成低电导区，而电场强度与低电导区成反比，因而产生较高的电场强度，使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动，形成以稳定的界面，使蛋白聚集在移动界面附近，浓缩成一中间层。
此鉴定方法中，蛋白质的迁移率主要取决于它的相对分子质量，而与所带电荷和分子形状无关。
三电泳过程蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。
如果加入一种试剂使电荷因素消除，那电泳迁移率就取决于分子的大小，就可以用电泳技术测定蛋白质的分子量。
1967年，Shapiro等发现阴离子去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）具有这种作用。
当向蛋白质溶液中加入足够量SDS和巯基乙醇，可使蛋白质分子中的二硫键还原。
由于十二烷基硫酸根带负电，使各种蛋白质—SDS复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间原有的电荷差别，SDS与蛋白质结合后，还可引起构象改变，蛋白质—SDS复合物形成近似“雪茄烟”形的长椭圆棒，不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都一样，约为18A(1A=10的负十次方米），这样的蛋白质—SDS复合物，在凝胶中的迁移率，不再受蛋白质原的电荷和形状的影响，而取决于分子量的大小由于蛋白质－SDS复合物在单位长度上带有相等的电荷，所以它们以相等的迁移速度从浓缩胶进入分离胶，进入分离胶后，由于聚丙烯酰胺的分子筛作用，小分子的蛋白质可以容易的通过凝胶孔径，阻力小，迁移速度快；大分子蛋白质则受到较大的阻力而被滞后，这样蛋白质在电泳过程中就会根据其各自分子量的大小而被分离。
因而SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可以用于测定蛋白质的分子量。
当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳经常应用于提纯过程中纯度的检测，纯化的蛋白质通常在SDS电泳上应只有一条带，但如果蛋白质是由不同的亚基组成的，它在电泳中可能会形成分别对应于各个亚基的几条带。
SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高的灵敏度，一般只需要不到微克量级的蛋白质，而且通过电泳还可以同时得到关于分子量的情况，这些信息对于了解未知蛋白及设计提纯过程都是非常重要的。
四操作步骤所需试剂及仪器：试剂：丙烯酰胺，双丙烯酰胺，Tris-base，TEMED，SDS，过硫酸铵，甘油，溴酚兰，甘氨酸，DTT，考马斯亮蓝R-250，甲醇，冰醋酸，蛋白Marker5只（50ul装），小牛血清白蛋白10mg。
仪器设备：电泳仪、槽、板5套；10ml小烧杯10只，微量移液器5把，普通移液器5套，足量滤纸，0.45μm滤器。
母液：1、2M Tris-HCL (pH8.8)100ml：24.2g Tris-base，50ml蒸馏水，加入浓盐酸调pH8.8，最后定容至100ml。
高压灭菌处理。
2、1M Tris-HCL (pH6.8)100ml：12.1g Tris-base，50ml蒸馏水，加入浓盐酸调pH6.8，最后定容至100ml。
高压灭菌处理。
3、10%SDS100ml：10gSDS，加入70ml蒸馏水在60℃搅拌溶解，待泡沫消失后，定容至100ml。
4、50%（w/v）甘油100ml：50ml甘油，50ml蒸馏水，混匀即可。
5、1%（w/v）溴酚兰（染色）10ml：100mg溴酚兰，蒸馏水定容至10ml。
6、0.01mol/L乙酸钠溶液100ml：0.139g乙酸钠溶于100ml蒸馏水中，调pH至5.2。
7、1M DTT20ml：20ml0.01mol/L乙酸钠溶液溶解3.09gDTT，过滤除菌后分装成1ml/份，-20℃保存。
工作液：1、30%聚丙酰胺母液（A液）实际需要250ml100ml：丙烯酰胺29g，双丙烯酰胺1g，去离子水在37℃溶解，定容到100ml。
0.45μm滤器过滤除菌，棕色瓶保存。
pH≤7.0。
2、4×分离胶缓冲液（B液）100ml：75ml 2M Tris-HCL (pH8.8)4ml 10%SDS21ml蒸馏水4℃存放。
3、4×浓缩胶缓冲液（C液）100ml：50ml 1M Tris-HCL (pH6.8)4ml 10%SDS46ml蒸馏水4℃存放。
4、10%过硫酸铵（D液）5ml：0.5g过硫酸铵，5ml蒸馏水，0.1m分装。
5、TEMED （E液）5、1×Tris-甘氨酸缓冲液1L：Tris-base 3g甘氨酸14.4gSDS 1g 蒸馏水定容到1L，pH8.3左右。
6、5×上样缓冲液10ml：0.5ml 1M Tris-HCL（pH6.8）1ml 1M DTT2ml 10% SDS1ml 1%溴酚兰5ml 50%甘油0.5ml 蒸馏水7、考马斯亮蓝染色液1L：考马斯亮蓝R-250 1.0g甲醇450ml冰醋酸 100ml蒸馏水450ml 8、考马斯亮蓝脱色液1L：甲醇100ml冰醋酸 100ml蒸馏水800ml 步骤：一、组装模具：用海绵蘸取少量清洁剂，擦洗干净两块玻璃板，自来水冲洗3—5遍然后，再用无水乙醇冲洗2遍，晾干待用。
将已清洗干净的两块玻璃板用封条封严。
组装在电泳架上，浅玻璃板朝外（靠近操作者一侧），然后固定结实。
（注意：清洗玻璃板时动作要轻柔，切勿划破玻璃面；清洗干净之后，不要用手碰玻璃面。
）二、制胶：1、配10%分离胶10ml：吸取A液3.3ml，B液2.5ml，蒸馏水4.2ml，D液100μl，在小烧杯中摇匀，再加入E液10μl，立即混匀并用10ml 注射器吸取大约8ml混合溶液，沿着玻璃板之间缝隙左上处，缓慢灌胶，一直到距前玻璃板上沿1.5cm处为止。
（注意：A当凝胶完全浸没玻璃板底的时候，留意观察是否漏胶。
若漏胶，则立即停止灌胶，重新固定模具之后再继续。
B灌胶应缓慢进行，避免有气泡产生）2、水膜封闭空气：在分离胶上面小心加入一层蒸馏水，以隔绝空气，促进凝胶聚合。
等待约20—30min，交界面有明显的折光线，且倾斜模具，交界面不随之改变，为凝胶凝固良好。
用滤纸小心洗干水分。
3、配5%浓缩胶5ml：吸取A液0.67ml，C液1.0ml，蒸馏水2.3ml，D液50μl，在小烧杯中摇匀，再加入E液5μl，立即混匀，灌胶，到到前玻璃板上沿即可。
4、插上齿梳，确保无气泡。
等待凝胶完全聚合，约需30分钟。
5、小心拔出梳子，卸下封条，将玻璃板颠倒放置，使浅玻璃板朝内，固定在电泳架上。
将整个电泳架放入电泳槽，在内外槽中倒入电泳缓冲液，内槽液面应在前后玻璃板之间。
三、点样：1、吸取20μl蛋白样品到EP管中，加入4μl上样缓冲液，混匀，沸水中加热5min2、全部样品上样，小心不要使样品漂散。
3、同时吸取蛋白Marker10—20μl点样。
四、电泳：连接好正负极导线，稳压120V，至溴酚兰到达分离胶底部。
五、染色：1、剥胶2、将凝胶小心放入考马斯亮蓝染液浸泡，45℃摇床摇30min。
3、脱色：将凝胶浸泡入考马斯亮蓝脱色液中，放入一小块海绵，45℃摇床摇4—8h，其间更换脱色液3—4次，观察蛋白电泳情况。
参考资料：牛血清白蛋白分子量： 6.6KD因此，分离胶浓度选为10%。