人民医院基因扩增实验室解脲脲原体核酸定量检测标准操作程序
解脲脲原体和微小脲原体相对定量荧光PCR方法的建立及应用
中国病原生物学杂志2020年12月第15卷第12期J ournal o f Pa th ogen H io l ogy Dec.2020.Vol.15.No.12・1422・D()I：10.13350/j.cjpb.201211 •论著•解麻麻原体和微小眠原体相对定量荧光PCR方法的建立及应用*孟凡亮‘，李晶：.龚杰‘，何利华［，张建中1,赵飞(1.中国疾病预防控制中心传染病预防控制所.传染病预防控制国家重点实验室.北京102206；2.中国疾病预防控制中心实验室管理处)目的建立一种含内参基因的解脈9S原体(Uu)ffl微小豚原体(Up)相对定量的荧光PCR分型方法，克服标本采样差异对检测结果的影响.了解患者豚原体感染的生物分群及病原载啟。
方法设计Uu和Up检测与分型引物探针.使用人p-globin(BG)作为相对定量内参引物探针.建立Uu、Up和BG的三重荧光PCR方法.使用核酸标准品建立标准曲线•计算宿主细胞中Uu或Up的相对含量.并确定体系Uu和Up检测下限。
使用20株Uu.30株Up临床分离株以及22种生殖道常见病原体进行体系灵敏度和特异性验证，并对68例豚原体阳性生殖道标本进行分型和相对定址分析。
结果建立的荧光PCR方法对Uu和Up的检测限均为10拷贝，20株Uu利130株Up临床分离株均可正确分型，对22种生殖道道常见微生物无交叉反应。
68份豚原体阳性临床标本Uu阳性率为35.3%(24/68),Up阳性率58.8%(40/68),Uu+Up阳性率为5.9%(4/68),分型结果与文献报道的方法一致性为97.1%。
标本定量检测显示.Uu阳性标本的中位数为4076拷贝/10'细胞.Up阳性标本的中位数为2092拷贝/10'细胞。
结论建立荧光PCR分型方法可快速完成Uu和Up分型，获得致病型脉原体诊断结果•并通过相对定量反映宿主细胞粘附的病原体量，克服采样差异对检测结果的影响，更客观地反映豚原体载最和致病力。
解脲脲原体的检测方法
解脲脲原体的检测方法
1. 尿液检测，收集晨起的第一次尿液样本，送至医院或实验室
进行解脲脲原体的检测。
这种方法简单、非侵入性，是常见的检测
方式之一。
2. 分泌物检测，对于女性患者，可以采集阴道分泌物进行检测，这有助于发现解脲脲原体感染。
3. PCR检测，聚合酶链式反应（PCR）是一种高度敏感的检测
方法，可以检测解脲脲原体的DNA，有助于快速准确地诊断感染。
4. 细胞培养，将患者样本放入培养基中培养，观察是否有解脲
脲原体的生长。
这种方法可以确定细菌的种类，并对抗生素的敏感
性进行测试。
5. 免疫学检测，通过检测患者血清中的抗体水平来确定是否感
染了解脲脲原体。
这种方法对于慢性感染的诊断有一定的帮助。
需要注意的是，不同的检测方法可能在准确性、敏感性和特异
性上有所不同，因此在选择检测方法时，应该结合临床情况和医生
的建议进行综合考虑。
另外，检测前应遵循医生的指导，避免影响检测结果的因素，如抗生素使用、尿液收集等。
希望这些信息能够帮助你更全面地了解解脲脲原体的检测方法。
57-解脲脲原体(UU)核酸定量检测标准操作规程(荧光PCR法)
解脲脲原体（UU）核酸定量检测标准操作规程（荧光PCR法）1.目的规范解脲脲原体（UU）核酸DNA定量（PCR－荧光探针法）检测操作流程，准确进行解脲脲原体（UU）DNA定量分析。
2.应用范围使用泰普生物科学(中国)有限公司解脲脲原体（UU）核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒和Mx3000P荧光定量PCR仪、Roche480荧光定量PCR仪进行解脲脲原体（UU）DNA 检测。
3.职责由PCR实验室制定程序文件，专业技术人员负责执行，实验室主管负责监督实施。
4.内容4.1 实验原理及其临床应用采用聚合酶链式反应(PCR)及荧光标记探针技术，快速检测临床样品中解脲脲原体特有序列，从而判断解脲脲原体的存在。
适用于对生殖道、尿道分泌物拭子样本中的解脲脲原体（UU）核酸进行体外定性检测，可用于解脲脲原体感染的辅助诊断及疗效监控。
4.2标本采集4.2.1使用标本类型：生殖泌尿道分泌物等。
4.2.2标本采集4.2.2.1 生殖泌尿道分泌物4.2.2.1.1 男性：用细小棉拭子伸入尿道约2～4厘米，捻动拭子采集分泌物，将棉拭子置于无菌玻璃管中，密封送检（采集分泌物前2小时禁小便）。
4.2.2.1.2 女性生殖道：用无菌生理盐水棉球洗去宫颈外分泌物，再用宫颈刷或无菌棉拭子插入宫颈内，停5秒后旋动宫颈刷或棉拭子采集宫颈分泌物，将宫颈刷或棉拭子置于无菌玻璃管中，密封送检。
4.2.2.1.3 女性尿道：用无菌生理盐水棉球洗净尿道口，再用无菌棉拭子插入尿道约2厘米，捻动拭子采集分泌物，将棉拭子置于无菌玻璃管中，密封送检。
4.2.3 标本保存和运送：标本可立即用于测试，也可保存于-20℃待测，保存期为6个月。
标本运送时应采用0℃冰壶。
4.3试剂准备4.3.1供应商：泰普生物科学(中国)有限公司4.3.2此实验试剂应放在冰箱-20℃保存，在实验前5分钟取出备用，实验后应立即放回冰箱-20℃。
4.3.3如果试剂出现了封口蜡破损导致液体外漏以及过期试剂，应及时更换。
解脲支原体(UU)核酸定量检测标准操作规程(PCR-荧光探针法)
解脲支原体（UU）核酸定量检测标准操作规程（PCR－荧光探针法）1.目的:规范解脲支原体（UU）核酸DNA（PCR－荧光探针法）检测操作流程，保证检测结果的准确性。
2.应用范围：解脲支原体（UU）荧光定量检测。
3.职责:3.1 文件编写：实验室技术员。
3.2 文件审核：实验室主管。
3.3 文件审批：实验室主任。
3.4 执行：PCR实验室所有工作人员。
4.参考文献：4.1 中山大学达安基因股份有限公司解脲脲原体（UU）核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书。
4.2 中山大学达安基因股份有限公司DA7600核酸序列检测系统用户手册。
5. 内容：5.1 检测方法：PCR-荧光探针法5.2 实验原理：用一对解脲脲原体特异性引物和一条解脲脲原体特异性荧光探针，配以PCR反应液、耐热DNA聚合酶（Taq酶）、核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过PCR体外扩增法，即高温变性、低温退火、适温延伸进行DNA扩增，并对PCR全过程进行实时监测，从而检测解脲脲原体（UU）DNA。
主要用于（UU）感染的辅助诊断及其疗效监测的标准。
5.3 性能参数：5.3.1 精密度：检测下限为5.0Χ102 copies。
5.3.2 线性范围：5.0×102～5.0×108 copies。
5.4 标本采集：由合作单位按照以下要求进行采集5.4.1 标本类型：泌尿生殖道分泌物等。
5.4.2 标本采集：5.4.2.1 泌尿生殖道分泌物：5.4.2.1.1 男性尿道分泌物：用细小棉拭子伸入尿道约2～4厘米，捻动拭子采集分泌物，将棉拭子置于无菌玻璃管中，密封送检（采集分泌物前2小时禁小便）。
5.4.2.1.2 女性生殖道分泌物：用无菌生理盐水棉球洗去宫颈外分泌物，再用宫颈刷或无菌棉拭子插入宫颈内，停5s后旋动宫颈刷或棉拭子采集宫颈分泌物，将宫颈刷或棉拭子置于无菌玻璃管中，密封送检。
5.4.2.1.3 女性尿道分泌物：用无菌生理盐水棉球洗净尿道口，再用无菌棉拭子插入尿道约2厘米，捻动拭子采集分泌物，将棉拭子置于无菌玻璃管中，密封送检。
解脲脲原体的检测方法
解脲脲原体的检测方法全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：解脲脲原体是一种引起泌尿道感染的细菌，在临床上是一种比较常见的病原体。
解脲脲原体感染会引起尿频、尿急、尿痛等症状，严重的情况下还可能引起盆腔炎等并发症。
及时检测和治疗解脲脲原体感染对于患者的健康至关重要。
下面我们就来介绍一下解脲脲原体的检测方法。
1. 尿液培养法尿液培养法是最常用的解脲脲原体检测方法之一，通过将患者的尿液样本送到实验室进行培养，观察是否有解脲脲原体的生长。
这种方法的优点是简单易行，准确率较高。
但是缺点是需要较长时间才能得出结果，一般需要2-3天的时间，不能满足紧急诊断的需求。
2. 分子生物学检测法分子生物学检测法是较为先进的解脲脲原体检测方法之一，通过PCR技术能够直接检测解脲脲原体的基因序列，进而确定感染情况。
这种方法的优点是准确率高，检测结果快速，一般在1-2天内就可以得出结果。
但是缺点是设备昂贵，操作复杂，需要专业的技术人员进行操作。
3. 免疫学检测法4. 快速诊断试剂随着科技的不断发展，现在市面上也出现了一些快速诊断试剂盒，可以在家或诊所进行解脲脲原体的快速检测。
这种方法的优点是操作简便，快速方便，一般只需要几分钟就可以得出结果。
但是准确率相对较低，可能存在假阳性或假阴性结果。
对于解脲脲原体感染的检测方法有多种选择，医生会根据患者的具体情况和需求来选择适合的检测方法。
对于一些需要紧急诊断的情况，建议选择快速诊断试剂进行检测，以便及时进行治疗。
而对于一些普通的检测情况，可以选择尿液培养法、分子生物学检测法或免疫学检测法进行检测。
希望通过以上介绍，能够帮助大家更好地了解解脲脲原体的检测方法，及时发现和治疗感染，保障健康。
第二篇示例：解脲脲原体是一种引起尿路感染的细菌，其检测方法对于及早诊断和治疗尿路感染至关重要。
下面将介绍关于解脲脲原体检测方法的相关内容。
一、尿液检测法尿液检测法是最常用的解脲脲原体检测方法之一。
患者可以收集清晨第一次尿液样本，通过专业实验室进行PCR（聚合酶链式反应）检测。
人民医院基因扩增实验室肺炎支原体核酸定量检测标准操作程序
人民医院基因扩增实验室肺炎支原体核酸定量检测标准操作程序1 项目名称肺炎支原体核酸定量检测2 检验方法名称TaqMan荧光定量检测3 方法学原理用一对肺炎支原体特异性引物和一条肺炎支原体特异性荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个荧光报告基团（R）和一个荧光淬灭基团（Q）。
探针完整时，R基团发射的荧光信号被Q基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使R荧光基团和Q荧光基团分离，Q基团对R基团的抑制吸收作用消失，荧光监测系统就可接收到R基团的荧光信号。
每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成。
被切割产生的荧光分子数与PCR产物的数量成比例，这样就实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
因此根据PCR 反应液的荧光强度即可计算出初始模板的数量。
4 标本要求4.1 适用标本类型：痰液、咽拭子等。
4.2 标本采集（泌尿生殖道分泌物）a ) 痰液—使用一次性吸痰器，患儿取仰头平卧位，将吸痰管缓缓插入咽喉部，调节负压，将气管深部分泌物（在雾化吸入后效果较好）缓缓吸入储液瓶中，反复数次，储液瓶中分泌物即为标本，密封送检。
a ) 咽拭子—用咽拭子取咽部分泌物（多数会有粘稠的痰液），将咽拭子置入无菌玻璃管，密封送检。
4.3 标本保存：标本可立即用于测试，也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月。
5 试剂5.1 试剂名称：肺炎支原体核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）5.2 生产厂家：中山大学达安基因股份有限公司；5.3 试剂货号：#DA-B064；5.4 包装规格：20人份/盒；5.5 试剂成份：5.6 试剂储存条件：保存于—20℃，有效期6个月。
6 仪器ABI 7500全自动基因扩增检测仪7 操作步骤7.1 DNA提取7.1.1 阴性质控品处理a ) 向阴性质控品管中加入等量DNA提取液充分混匀，100℃恒温处理10±1分钟；b ) 12000r/min离心5min，备用。
UU核酸检测试剂盒产品使用说明书
解脲脲原体（UU）核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法）说明书【产品名称】通用名称：解脲脲原体（UU）核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)英文名称：Detection Kit for Nucleic Acid of Ureaplasma urealyticum (PCR-fluorescence probing)【包装规格】 32人份/盒【预期用途】本试剂盒用于定性检测尿道、生殖道分泌物拭子样本中的解脲脲原体核酸成分，主要用于解脲脲原体感染的临床辅助诊断。
根据相关文献研究，解脲支原体有14 株脲原体标准血清型可分为微小脲原体（Ureaplasma parvum，UP）1、3、6、14 和解脲脲原体（Ureaplasma urealyticum，UU）2、4、5、7、8、9、10、11、12、13，其中UP为条件致病菌，致病性与其含量有关，且普通人也有携带少量UP。
UU是引起非淋球菌性尿道炎、阴道炎等病症的主要致病菌之一，也是引起输卵管炎、盆腔炎、慢性前列腺炎、流产、产后热等的重要病原菌之一。
目前，临床上常用的脲原体检测方法有液体培养和核酸检测，但其并不能鉴别出其病菌是UP还是UU。
【检验原理】本试剂盒选用针对解脲脲原体（UU）特异性基因片段设计特异引物及特异Taqman荧光探针，该探针能与引物扩增区域中间的一段DNA摸板发生特异性结合，在PCR延伸反应过程中，Taq酶的外切酶活性将5´端荧光基团从探针上切割下来，使之游离于反应体系中，从而脱离了3´端荧光淬灭基团的屏蔽，即能接受光刺激而发出可供仪器检测的荧光，从而实现在全封闭反应体系中对解脲脲原体（UU）核酸的自动检测，发出荧光信号的强度与UU-DNA的量呈正相关。
【主要组成成份】注：不同批号试剂盒中各组份不能互换。
【储存条件及有效期】试剂应储存在-20℃保存，产品有效期为12个月，未使用完的试剂继续冷冻保存不影响其稳定性，但试剂反复冻融不得超过3次。
核酸检测实验的操作规范和流程
核酸检测实验的操作规范和流程本文档旨在规范核酸检测实验的操作步骤，确保实验进行的准确、可靠和安全。
请根据以下流程进行操作。
实验前准备1. 确保工作台面干净整洁，并备齐所需的实验器材。
2. 检查实验器材的完整性和消毒情况。
3. 将试剂室保持洁净，并检查试剂的标签和有效期。
4. 穿戴实验室服装和个人防护装备，包括实验手套、防护眼镜和口罩。
核酸提取1. 取样前，将样本标识清晰地写在试管上，并确保与记录一致。
2. 使用无菌技术，使用专用取样器具采集样本，并放入已标识的试管中。
3. 使用适当的提取试剂盒，按照说明书的要求进行样本提取。
注意遵守实验室的安全操作规程。
核酸扩增1. 将样本提取后的核酸溶液，按照扩增试剂盒说明书的要求，加入扩增试剂反应体系。
2. 启动扩增仪器，设置好反应条件，如温度、时间等。
3. 按照试剂盒要求，制备必要的阴性对照和阳性对照。
4. 将样品、对照和负控物分别加入扩增试剂反应体系中，注意控制反应体系的杂交和污染风险。
PCR产物分析1. 终止扩增反应后，将PCR产物置于4°C冰上保存。
2. 使用凝胶电泳或其他适当的分析方法，对PCR产物进行分析验证。
确保正确的扩增结果，并评估目标基因的存在与否。
结果解读1. 根据PCR产物分析结果，判断目标基因的存在与否。
2. 结果解读应结合实验目的，结合相关样本信息，进行科学合理的判断和分析。
实验后清理1. 将使用过的试剂瓶、试管和其他实验器材分类清理，并正确处理。
2. 清洗工作台面，保持实验环境整洁。
3. 按照实验室废物管理规定，进行废物处理。
以上是核酸检测实验的操作规范和流程，请按照要求严格执行，确保实验结果的准确性和可靠性。
57-解脲脲原体(UU)核酸定量检测标准操作规程(荧光PCR法)
解脲脲原体（UU）核酸定量检测标准操作规程（荧光PCR法）1.目的规范解脲脲原体（UU）核酸DNA定量（PCR－荧光探针法）检测操作流程，准确进行解脲脲原体（UU）DNA定量分析。
2.应用范围使用泰普生物科学(中国)有限公司解脲脲原体（UU）核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒和Mx3000P荧光定量PCR仪、Roche480荧光定量PCR仪进行解脲脲原体（UU）DNA 检测。
3.职责由PCR实验室制定程序文件，专业技术人员负责执行，实验室主管负责监督实施。
4.内容4.1 实验原理及其临床应用采用聚合酶链式反应(PCR)及荧光标记探针技术，快速检测临床样品中解脲脲原体特有序列，从而判断解脲脲原体的存在。
适用于对生殖道、尿道分泌物拭子样本中的解脲脲原体（UU）核酸进行体外定性检测，可用于解脲脲原体感染的辅助诊断及疗效监控。
4.2标本采集4.2.1使用标本类型：生殖泌尿道分泌物等。
4.2.2标本采集4.2.2.1 生殖泌尿道分泌物4.2.2.1.1 男性：用细小棉拭子伸入尿道约2～4厘米，捻动拭子采集分泌物，将棉拭子置于无菌玻璃管中，密封送检（采集分泌物前2小时禁小便）。
4.2.2.1.2 女性生殖道：用无菌生理盐水棉球洗去宫颈外分泌物，再用宫颈刷或无菌棉拭子插入宫颈内，停5秒后旋动宫颈刷或棉拭子采集宫颈分泌物，将宫颈刷或棉拭子置于无菌玻璃管中，密封送检。
4.2.2.1.3 女性尿道：用无菌生理盐水棉球洗净尿道口，再用无菌棉拭子插入尿道约2厘米，捻动拭子采集分泌物，将棉拭子置于无菌玻璃管中，密封送检。
4.2.3 标本保存和运送：标本可立即用于测试，也可保存于-20℃待测，保存期为6个月。
标本运送时应采用0℃冰壶。
4.3试剂准备4.3.1供应商：泰普生物科学(中国)有限公司4.3.2此实验试剂应放在冰箱-20℃保存，在实验前5分钟取出备用，实验后应立即放回冰箱-20℃。
4.3.3如果试剂出现了封口蜡破损导致液体外漏以及过期试剂，应及时更换。
解脲脲原体之微生物学检验
解脲脲原体之微生物学检验微生物学检验(一)检验程序解脲脲原体检验程序见图20-5。
(二)标本采集用无菌试管或无菌瓶收集非淋菌性尿道炎患者的中段尿、慢性前列腺炎患者按摩后的前列腺液、原因不明的不育症患者的精液、阴道炎与宫颈炎患者的炎性分泌物等。
(三)标本直接检查1．核酸检测以部分尿素酶基因的核苷酸序列为模板合成相应引物，进行体外扩增，解脲脲原体16个血清型均见460bp的DNA片段。
通过对PCR产物的核酸杂交和序列分析町将各种支原体鉴别分类，该法敏感性高。
DNA探针技术是直接用缺口转移法制各P标记的DNA探针，测定时将标本粗提DNA 100μl点样到硝酸纤维膜上，与放射性探针杂交。
此法敏感，可检测50～100pg的DNA。
2．免疫斑点试验(IDT)检测抗原提取物，敏感、特异、快速，不需特殊仪器，易于推广。
可作为临床Uu感染者病原检查的特异诊断方法，此法也可检测Uu培养物。
(四)分离培养和鉴定1．分离培养将标本接种于含尿素、精氨酸和酚红指示剂的液体培养基中，标本中若有解脲脲原体存在，则37℃培养24~48小时，解脲脲原体分解尿素或精氨酸产氨，培养基pH上升至7 6～8．6，液体培养基颜色由橙黄色转变成红色，即为阳性。
解脲脲原体在液体培养基中不出现菌膜、浑浊及沉淀生长现象。
如培养基出现浑浊则表明有杂菌污染，不能报告解脲脲原体阳性。
液体培养阳性者应及时转种相应琼脂平板，置于5％CO2、95％N2环境中做次代培养，Uu在A8琼脂平板中1～3天出现圆形、棕色菌落。
以放大镜或低倍镜观察菌落形态，需注意支原体菌落与水泡、水、脂质滴物及其他杂质的区分。
2．鉴定取培养物分别作吉姆萨染色、革兰染色和细胞壁染色，观察菌体形态。
Uu分解尿素产氨，不分解葡萄糖和精氨酸，氯化三苯四氮唑还原阴性。
进一步鉴定需用特异性抗血清做GIT与MIT。
泌尿生殖道感染支原体的血清学检查临床意义不大。
解脲支原体（UU）核酸检测试剂盒（PCR荧光法）说明书
解脲支原体（UU）核酸检测试剂盒(PCR荧光法)说明书【产品名称】通用名：解脲支原体(UU)核酸检测试剂盒(PCR荧光法)英文名：Ureaplasma Urealyticum polymerase chain reaction (PCR) Fluorescence Diagnostic Kit【包装规格】32人份/盒【预期用途】可作为临床实验室对男性尿道拭子样本或女性宫颈拭子样本中解脲支原体核酸定性检测，为临床早期发现尿道炎或子宫颈炎及性病高危人群的筛查提供分子生物学上的参考依据。
适应症：由解脲支原体感染引起的尿道炎及宫颈炎【检验原理】本试剂盒选用解脲支原体(UU)保守基因片段设计特异引物及特异Taqman 探针，该探针能与引物扩增区域中间的一段DNA模板发生特异性结合，在PCR延伸反应过程中，Taq酶的外切酶活性将5’端荧光基团从探针上切割下来，使之游离于反应体系中，从而脱离了3’端荧光淬灭基团的屏蔽，即能接受光刺激而发出可供仪器检测的荧光，从而实现在全封闭反应体系中对解脲支原体(UU)核酸的自动化检测。
【主要组成成份】注:不同批号试剂盒中各组份不可以互换【储存条件及有效期】试剂-20℃可保存12个月，未使用完的试剂继续冷冻保存不影响其稳定性，但试剂反复冻融不得超过三次。
【适用仪器】具有FAM荧光通道的ABI7000型荧光PCR扩增仪。
【样本要求】1. 标本：男性尿道拭子样本或女性宫颈拭子样本2. 采集容器：应当选用国家批准生产的一次性使用的男性拭子或女性拭子，拭子应当包括套管、棉签杆、塞子，棉签杆与塞子都应连接牢固。
3. 采集：样本采集具体方法请参考《微生物标本采集手册》一书。
【男性】先清洁尿道口，要求病人在采样前2小时不能排尿。
取尿道分泌物或细小棉拭子伸入尿道约2-4cm，略捻拭子取出分泌物（应略带黏膜）。
将分泌物或棉拭子置入无菌玻璃管，密闭送检。
【女性】先用棉/麻拭子将宫颈口过多的分泌物擦去，用扩阴器扩阴，再换取棉拭子伸入宫颈，通过上皮交界处，直到看不到拭子头，旋转10-20秒，取出拭子，将拭子置入无菌玻璃管中，密闭送检。
UU核酸检测试剂盒产品使用说明书
解脲脲原体（UU）核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法）说明书【产品名称】通用名称：解脲脲原体（UU）核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)英文名称：Detection Kit for Nucleic Acid of Ureaplasma urealyticum (PCR-fluorescence probing)【包装规格】 32人份/盒【预期用途】本试剂盒用于定性检测尿道、生殖道分泌物拭子样本中的解脲脲原体核酸成分，主要用于解脲脲原体感染的临床辅助诊断。
根据相关文献研究，解脲支原体有14 株脲原体标准血清型可分为微小脲原体（Ureaplasma parvum，UP）1、3、6、14 和解脲脲原体（Ureaplasma urealyticum，UU）2、4、5、7、8、9、10、11、12、13，其中UP为条件致病菌，致病性与其含量有关，且普通人也有携带少量UP。
UU是引起非淋球菌性尿道炎、阴道炎等病症的主要致病菌之一，也是引起输卵管炎、盆腔炎、慢性前列腺炎、流产、产后热等的重要病原菌之一。
目前，临床上常用的脲原体检测方法有液体培养和核酸检测，但其并不能鉴别出其病菌是UP还是UU。
【检验原理】本试剂盒选用针对解脲脲原体（UU）特异性基因片段设计特异引物及特异Taqman荧光探针，该探针能与引物扩增区域中间的一段DNA摸板发生特异性结合，在PCR延伸反应过程中，Taq酶的外切酶活性将5´端荧光基团从探针上切割下来，使之游离于反应体系中，从而脱离了3´端荧光淬灭基团的屏蔽，即能接受光刺激而发出可供仪器检测的荧光，从而实现在全封闭反应体系中对解脲脲原体（UU）核酸的自动检测，发出荧光信号的强度与UU-DNA的量呈正相关。
【主要组成成份】注：不同批号试剂盒中各组份不能互换。
【储存条件及有效期】试剂应储存在-20℃保存，产品有效期为12个月，未使用完的试剂继续冷冻保存不影响其稳定性，但试剂反复冻融不得超过3次。
解脲脲原体试验标准操作规程
解脲脲原体试验标准操作规程
1．目的
规范解脲脲原体试验标准操作规程。
2．原理
解脲脲原体在合适其生长的培养基中分解培养基底物，使培养基的PH值上升，培养基由黄色变红。
3．试剂
解脲脲原体培养基。
4．质控
解脲脲原体ATCC27618阳性。
5.操作步骤
将取样后棉拭子插入培养基中充分荡洗，棉拭子在管壁上挤干水分后丢弃；液态标本取150-200ul直接加入培养基中摇匀，35℃培养18～24小时后，观察结果。
6.结果判断
培养基由橙色变成红色且清亮为阳性，表示有脲原体生长。
培养基不变色为阴性。
7.注意事项
培养基接种到药敏板前腰充分摇匀。
培养基变红但混浊，不能报阳性，或重做试验。
8.临床意义
解脲脲原体主要引起人体泌尿生殖系统的感染，如急性尿道
综合症、非淋菌性尿道炎，也可引起肾盂肾炎、阴道炎和盆腔炎等。
解脲支原体DNA 检测室内质控物的制备及质控方案的设计
解脲支原体DNA 检测室内质控物的制备及质控方案的设计葛燕梅;张娣;樊苏逸;袁杭;毛源【期刊名称】《国际检验医学杂志》【年(卷),期】2016(037)008【摘要】目的：制备解脲支原体（UU）DNA荧光定量PCR室内质控物，建立室内质量控制体系，对其临床应用进行初步评价。
方法分别留取C t值为24～25（阳性）和32～33（弱阳性）标本和检测结果为阴性的标本，待留取到15 m L时充分混匀，按每管150μL分装作为室内质控物。
前20次检测采用“即刻法”判断检测结果是否在质控范围内，20次以后绘制Levey‐Jennings图，确定靶值、标准差（s）和变异系数（CV），采用 Westdard多规则质控方法对自制室内质控物检测结果进行判断。
在 Unity Real Time（URT）系统中使用质控规则配置操作导出UU‐DNA的功效函数图（OPSPecs图），根据OPSPecs图设置质控规则。
结果131次实验中，前20次采用“即刻法”判断室内质控物；20次以后采用Levey‐Jenni ngs图判断，质控品稳定，质控规则合理。
结论用临床分泌物混合液制备UU‐DNA检测项目的室内质控物品，制备方法简单，测定结果稳定，可作为实验室检测UU‐DNA项目的质控品；依据O PS Pecs图设置分子生物学检测项目的室内质控规则简便、实用。
【总页数】3页(P1070-1071,1074)【作者】葛燕梅;张娣;樊苏逸;袁杭;毛源【作者单位】南京金域医学检验所，江苏南京210042;南京金域医学检验所，江苏南京210042;南京金域医学检验所，江苏南京210042;南京金域医学检验所，江苏南京210042;南京金域医学检验所，江苏南京210042【正文语种】中文【相关文献】1.CMV-DNA荧光定量PCR检测室内质控物的制备及初步应用 [J], 钟天鹰;陈倩2.荧光定量PCR法检测HBV-DNA室内质控物的制备及质控图的应用 [J], 吕虹;闫惠平;周亚莉;张国军;方芳;王雅杰;康熙雄3.荧光定量PCR检测 HBV-DNA、HCV-RNA室内质控物的制备及评估 [J], 葛咏梅;冯晓朦;周劲松;高申4.荧光定量PCR检测HBV-DNA室内质控物的制备及初步应用 [J], 邹单东;郑楚5.HBV-DNA室内质控物的制备及质控图的绘制 [J], 黄锦莲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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人民医院基因扩增实验室解脲脲原体核酸定量检测标准操作程序
1 项目名称
解脲脲原体核酸定量检测
2 检验方法名称
TaqMan荧光定量检测
3 方法学原理
用一对解脲脲原体特异性引物和一条解脲脲原体特异性荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个荧光报告基团（R）和一个荧光淬灭基团（Q）。
探针完整时，R基团发射的荧光信号被Q基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使R荧光基团和Q荧光基团分离，Q基团对R基团的抑制吸收作用消失，荧光监测系统就可接收到R基团的荧光信号。
每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成。
被切割产生的荧光分子数与PCR产物的数量成比例，这样就实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
因此根据PCR 反应液的荧光强度即可计算出初始模板的数量。
4 标本要求
4.1 适用标本类型：生殖泌尿道分泌物等。
4.2 标本采集（泌尿生殖道分泌物）
a ) 男性—用细小棉拭子伸入尿道约2～4 厘米，捻动拭子采
集分泌物，将棉拭子置入无菌玻璃管，密闭送检(采集分泌
物前2小时禁小便)
a ) 女性生殖道—用无菌生理盐水棉球洗去宫颈外分泌物，再
用宫颈刷或无菌棉拭子插入宫颈内，停5 秒钟后旋动宫颈
刷或棉拭子采集宫颈分泌物，将宫颈刷或棉拭子置入无菌
玻璃管，密闭送检。
b ) 女性尿道—用无菌生理盐水棉球洗净尿道口，再用无菌棉
拭子插入尿道约2 厘米，捻动拭子采集分泌物，将棉拭子
置入无菌玻璃管，密闭送检。
4.3 标本保存：标本可立即用于测试，也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月。
5 试剂
5.1 试剂名称：解脲脲原体核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
5.2 生产厂家：中山大学达安基因股份有限公司；
5.3 试剂货号：#DA-B055；
5.4 包装规格：20人份/盒；
5.5 试剂成份：
5.6 试剂储存条件：保存于—20℃，有效期6个月。
6 仪器
ABI 7500全自动基因扩增检测仪
7 操作步骤
7.1 DNA提取
7.1.1 阴性质控品处理
a ) 向阴性质控品管中加入等量DNA提取液充分混匀，100℃
恒温处理10±1分钟；
b ) 12000r/min离心5min，备用。
7.1.2 标本处理(生殖泌尿道分泌物)
a ) 向玻璃管中加入1 ml灭菌生理盐水，充分震荡摇匀，挤干
棉拭子；
b ) 吸取全部液体转至1.5ml离心管中，12,000rpm离心5分
钟；
c ) 去上清，沉淀加灭菌生理盐水1ml混匀，12,000rpm离心
5分钟；
d ) 去上清，沉淀中加入50μl DNA提取液充分混匀，100℃恒
温处理10±1分钟；
e ) 12,000 rpm离心5分钟，备用。
7.1.3 UU弱阳性质控品处理（同阴性质控品）；
7.1.4 UU强阳性质控品处理（同阴性质控品）；
7.1.5 UU阳性定量参考品处理：8000rpm离心数秒，备用；
7.2 PCR扩增
7.2.1 试剂准备（在试剂准备区操作）：按比例（UU PCR反应液40µl/人份+ Taq酶3µl/人份）取相应量的PCR反应液及Taq 酶，充分混匀后按43µl/管分装至0.2ml离心管中备用。
7.2.2 加样：向准备好试剂的0.2ml离心管中，分别加入处理后的样品（包括样本、阴性质控品、临界阳性质控品和强阳性质
控品）上清液2µl，或直接加入阳性定量参考品2µl，8000rpm离心数秒，放入仪器样品槽。
7.2.3 设置PCR循环扩增程序如下
93℃2分钟预变性；
93℃45秒→55℃60秒10个循环
93℃30秒→55℃45秒30个循环
8 结果判断：
8.1 阴性结果判定：如果增长曲线不呈S型或Ct值=30，则实验结果判为样品的UU DNA含量<5.0×102基因拷贝。
8.2 阳性结果判定：如果增长曲线呈S型曲线且Ct值<27，则：
a ) 若实验结果，样品的Qty≤1×108则该样品的UU DNA含
量=Qty/20基因拷贝；
b ) 若实验结果，样品的Qty>1×108则该样品的UU DNA含
量为>5.0×106基因拷贝。
如果需要精确定量结果，可将提
取后的样品稀释100倍再检测。
8.3 实验灰度区：如果27≤Ct<30，则为实验灰度区，需重复实验一次，若重复实验结果，增长曲线呈S型曲线且Ct值<30，判为阳性，该样品的UU DNA含量=Qty/20基因拷贝；否则判为样品的UU DNA含量<5.0×102基因拷贝。
9 质控
a ) 阴性质控品：全部阴性；
b ) 阳性质控品：全部阳性，且强阳性质控品检测值允许范围
在2.5×106基因拷贝/ml~4.0×107基因拷贝/ml范围，弱阳
性质控品定量参考值在 2.5×104基因拷贝/ml~4.0×105基
因拷贝/ml范围；（参考值为仪器自动分析计算出的数值）；
c ) 阳性定量参考品：均为阳性，且线性相关系数0.97≤|r|≤1；
d ) 以上要求需在同一次实验中同时满足，否则，本次实验无
效，需重新进行。
10 参考范围
低于检测下限
11 性能指标
灵敏度：1.0×104基因拷贝/ml
线性范围：1.0×104基因拷贝/ml~1.0×108基因拷贝/ml
12 临床意义
解脲脲原体是人类泌尿生殖道常见的共生微生物，为致病性比较弱的条件致病病原体。
在成人主要通过性接触传播，新生儿则由母亲生殖道分娩时感染。
成人男性的感染部位在尿道粘膜，女性感染部位在宫颈。
主要引起非淋菌性尿道炎(宫颈炎)、子宫内膜炎、绒毛膜羊膜炎、自然流产、早产、前列腺炎、附辜炎、不育症、低体重新生儿、新生儿
肺炎、脑膜炎以及败血症等。
在临床标本中检测到解脲脲原体，并不能确定是携带状态压是感染状态，具体须结合患者临床症状及其他相关性病病原体的检测来综合判断，临床实验室应对PCR检测结果做出适当的解释。
13 注意事项
13.1 实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理规范，实验人员必须进行专业培训，实验过程严格分区进行（试剂准备区、标本制备区、扩增和产物分析区），所用消耗品应灭菌后一次性使用，实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备，各区各阶段用品不能交叉使用；
13.2 为试剂和标本制备阶段提供生物安全柜，实验过程中穿工作服，带一次性手套，使用自卸管移液器；
13.3 对每次实验进行质量控制；
13.4 试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融；
13.5 自备灭菌生理盐水；
13.6 标本处理时“去上清”步骤，注意吸头不要碰触沉淀；
13.7 试剂盒DNA提取液内含不溶于水的物质，取样时需用加样器充分混匀后吸取。
如出现因吸头嘴部太细不能吸取或取样后堵塞吸头现象，可先用洁净无污染的剪刀将吸头嘴部剪去一截；
13.8 为保证病原体颗粒充分裂解可转至4℃静置6~8小时；
13.9 标本制备区所用过的吸头请打入盛有消毒剂的容器，并与废弃物一起灭菌后方可丢弃；
13.10 实验完毕用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
13.11 所有检测样品应视为具有传染性物质，操作和处理均需符合相关法规要求：卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通用准则》和《医疗废物管理条例》。
14 参考文献
中华人民共和国卫生部医政司编．全国临床检验操作规程(第三版) ．南京：东南大学出版社，2006
中山大学达安基因股份有限公司. 解脲脲原体核酸定量检测试剂盒（PCR—荧光探针法）说明书.2012年2月，第一版/1。