流式常用荧光染料

流式荧光染色法实验原理及步骤

流式荧光染色法实验原理及步骤原理：荧光染料CFSE，即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂，是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，这使得CFSE成为一种良好的细胞标记物。

当细胞进行分裂增殖时，具有荧光的胞质蛋白被平均分配到第二代细胞中，这样与第一代细胞相比，其荧光强度便会减弱至一半；以此类推，分裂得到的第三代细胞的荧光强度便会比第二代细胞再次减弱。

这种现象可以在488nm的激发光下，采用流式细胞仪检测分析，通过检测到细胞荧光强度不断的降低，进一步分析得出细胞分裂增殖的情况。

实验步骤，以小鼠脾细胞为例：1.取一只6-8周小鼠颈椎脱臼处死后，将其全部浸泡于75%酒精中；2.在超净工作台上无菌取出小鼠脾脏；3.用无菌注射器内芯研磨脾脏，尽量不残留较大组织块；再用3mlPBS冲洗后，将脾脏研磨液经200目尼龙网过滤至15mL离心管中，离心350g，5min；4.弃上清后，加入2mL红细胞裂解液，轻微吹打，裂解2min后加入等体积PBS终止裂解反应，混匀后离心350g，5min；5.弃上清，用RPMI1640完全培养基重悬沉淀，并取10μL细胞液计数，将细胞浓度调至2.0×106/ml；6.提前将CFSE按照说明书用DMSO配成5mM母液，并分装储存于-80冰箱，其工作浓度为0.5-25μM；7、取部分细胞作为不染色组阴性对照，其他细胞加入CFSE溶液，使得终浓度为5μM，37°C避光孵育15min；8、加入1ml冰冷的RPMI1640完全培养液，4℃，5min以中止染色；9、弃上清，加入冰冷的含10%FBS的完全1640培养液洗2次，最后用1640完全培养基重悬细胞沉淀，充分吹打成单细胞悬液，将上述细胞悬液加入96孔培养板,每孔105个细胞（阳性对照用PHA刺激）；10、37℃，5%CO2培养3天后用流式细胞仪分析细胞488nm激光器检查细胞增殖情况。

流式细胞术中应用的荧光染料介绍

流式细胞术中应用的荧光染料介绍流式细胞术（Flow Cytometry）是一种用于分析和计数细胞的技术。

在流式细胞术中，荧光染料起着至关重要的作用，可以标记细胞的不同成分，使其能够通过流式细胞仪进行检测和分析。

荧光染料通过特定的荧光光谱来发出荧光信号，这些信号被流式细胞仪采集和分析，从而提供有关细胞类型、数量和功能的信息。

以下是几种常见的流式细胞术中应用的荧光染料的介绍。

1. FITC（Fluorescein Isothiocyanate）：FITC是最常用的荧光染料之一，通过与免疫球蛋白G（IgG）结合，可用于免疫细胞表面分子的检测。

FITC在波长为488 nm的激光下激发，发射的荧光信号在525 nm 左右。

它可以与其他荧光染料（如PE或APC）结合使用，以实现多参数流式细胞分析。

2. PE（Phycoerythrin）：PE是一种从红藻中提取的荧光染料，其发射的荧光信号在575 nm左右。

PE通常用于检测细胞表面的抗原或细胞内的蛋白质，如细胞因子。

PE也可以与其他染料结合使用，以实现多参数分析。

3. APC（Allophycocyanin）：APC是一种类似于PE的荧光染料，通过独特的发射波长（约于660 nm附近）和长的荧光寿命来区分。

APC适用于检测多种细胞表面分子和蛋白质，在深色的区域提供了可靠的信号。

5. PE-Cy7：PE-Cy7是PE染料与Cyanine 7（Cy7）结合形成的荧光染料。

它适用于多参数流式细胞术，利用其较长的荧光寿命和波长（激发于488 nm，发射于780 nm左右），可以与其他染料一起使用，以实现更多的细胞表面和内部分子的检测。

除了上述染料外，还有很多其他的荧光染料可以用于流式细胞术。

例如，Alexa Fluor系列、eFluor系列、Brilliant Violet系列等。

这些染料具有不同的光谱特性和荧光强度，可以根据实验需要选择合适的染料。

需要注意的是，在选择荧光染料时，需考虑染料的互相干扰问题和流式仪的激发和检测系统。

常见细胞核荧光染料

细胞核常用荧光染料有：吖啶橙（Acridine Orange，AO）、溴化乙锭（Ethidium Bromide，EB）和碘化丙啶（Propidium Iodide，PI），DAPI、Hoechst染料、EthD III、7-AAD、RedDot1、2 等等。

透膜的染料如下：AO：具有膜通透性，能透过细胞膜，将核DNA和RNA分别染成绿色和红色，因此使细胞核呈绿色或黄绿色荧光。

EB：一种高度灵敏的荧光染色剂，在标准302nm处激发出橙红色信号。

DAPI：蓝色一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，其与DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，而与单链DNA结合无荧光的增强。

DAPI对双链DNA的染色灵敏度要高于EB和PI，荧光强度比Hoechst低，但光稳定性高于Hoechst。

Hoechst染料：蓝色一类在显微观察中标记DNA的荧光染料，最常见的两种是Hoechst33342和Hoechst33258。

这两种染料都在紫外350nm处被激发，在461nm处最大发射光附近发射青/蓝色荧光。

与DAPI相比，Hoechst33342加有乙基，具有更强的亲脂性，因此能更好的透过完整的细胞膜，并且细胞毒性更小。

RedDot 1染料：红色，超强的细胞核选择性，其光谱相似于Draq?5 和Draq?7。

RedDot?染料可被几种常见的激光激发并可在远红外区激发荧光。

RedDot? 的红色近红外荧光有效的与其他常用荧光探针区分开来。

不透膜的染料，如下：PI：不同通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。

PI作为红色荧光复染剂首选，PI经常与Calcein-AM或者FDA等荧光探针合用，区分死/活细胞。

EthD III、7-AAD、RedDot 2：不能透过细胞膜，但能将坏死细胞区分开来；更适合凋亡坏死实验的检测；细胞核荧光染料（PI DAPI Hoechst33342）细胞核荧光染料PI碘化丙啶（简称PI）是一种常用的细胞核荧光染色剂。

流式常用荧光染料概要

如何选择流式细胞仪测定常用的荧光染料
流式细胞仪测定常用的荧光染料有很多种,我们如何来选择流式细胞仪测定的常用荧光染料呢？
首先要考虑，他们分子结构不同,激发光谱和发射光谱也不同,选择荧光染料时，必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长做为重点考虑。

发射光波长，如：氩离子气体激光管,它的发射光波488nm；
氦氖离子气体激光管发射光波长633nm；
488nm激光光源常用的荧光染料有FITC（异硫氰酸荧光素）；
PE（藻红蛋白）
PI（碘化丙啶）
CY5（化青素）
preCP(叶绿素蛋白)
ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)等。

激发光和发射光波长，如下：
流式细胞仪中常用的荧光染料光学特征以及需要的激光器
流式•细胞仪交流论坛：/forum-181-1.ht ml
荧光染料谱。

hochest 染色及流式

hochest 染色及流式Hochest染色及流式染色技术在生物学和医学领域中起着重要作用，其中Hochest染色是一种常用的荧光染色方法。

Hochest染料是一类荧光染料，常用于细胞和组织的核酸染色。

本文将介绍Hochest染色的原理和应用，并结合流式细胞术探讨其在生物研究中的意义。

让我们了解一下Hochest染色的原理。

Hochest染料是一类DNA特异性染料，可以通过与DNA双链结合来发射荧光。

Hochest染料有多种不同的类型，如Hochest 33342和Hochest 33258等。

这些染料都具有很高的DNA亲和力，能够与DNA的碱基序列发生相互作用，从而实现染色的效果。

Hochest染色在细胞和组织学研究中具有广泛的应用。

首先，Hochest染色可以用于检测细胞核的形态和数量。

通过将Hochest 染料与细胞一起处理，可以使细胞核发出荧光信号，从而观察和分析细胞核的形态和数量变化。

这对于细胞周期研究、细胞增殖和凋亡等过程的研究非常重要。

Hochest染色还可以用于染色体分析。

在细胞分裂过程中，可以使用Hochest染色来观察和分析染色体的形态和数量变化。

这对于研究染色体异常、染色体结构和功能等方面具有重要意义。

此外，Hochest染色还可以用于研究DNA损伤和修复、DNA合成和复制等过程。

除了Hochest染色技术本身，流式细胞术也是一种常用的生物研究技术。

流式细胞术利用荧光染料标记的细胞或细胞器，通过流式细胞仪进行检测和分析。

结合Hochest染色和流式细胞术，可以更精确地分析细胞核的形态和数量，进一步研究细胞的生物学特性。

流式细胞术在生物研究中有着广泛的应用。

首先，流式细胞术可以用于细胞表型分析。

通过荧光染料标记的抗体，可以对细胞表面标记物进行定量分析，如细胞膜蛋白、细胞间连接蛋白等。

这对于研究细胞分化、细胞功能和细胞亚群的分离非常重要。

流式细胞术还可以用于细胞周期分析。

通过Hochest染色和荧光染料标记的抗体，可以对细胞周期不同阶段的细胞进行定量分析。

pi染色原理

pi染色原理
PI染色原理。

PI染色是一种常用的核酸染色方法，它可以将DNA和RNA染色成红色，用于细胞核酸的定量和定位分析。

PI染色原理主要基于PI（Propidium Iodide）分子的特性，下面将详细介绍PI染色的原理和应用。

PI染色原理的核心是PI分子的荧光特性。

PI是一种具有DNA亲和力的荧光染料，它可以通过插入DNA的双螺旋结构中而发出红色荧光。

PI在水溶液中呈现橙红色，而当与DNA结合后则呈现红色荧光。

这种荧光的发射波长在600-700nm之间，可以被常见的激光激发，因此非常适合在流式细胞仪等设备中使用。

在实际应用中，PI染色主要用于细胞核酸的检测和分析。

细胞在进行PI染色前通常需要经过固定和透化处理，以保证PI能够穿透细胞膜并与细胞内的核酸结合。

在染色完成后，可以利用荧光显微镜或流式细胞仪等设备观察并记录细胞的荧光信号，从而进行核酸含量的定量分析和细胞周期的研究。

除了用于细胞核酸的定量分析外，PI染色还可以用于细胞死亡的检测。

在细胞凋亡或坏死的过程中，细胞膜通透性会增加，PI可以进入细胞内并与裸露的DNA 结合，从而发出红色荧光。

因此，通过PI染色可以快速、直观地检测细胞的存活状态和死亡比例。

总之，PI染色原理是基于PI分子的DNA亲和性和荧光特性，通过将DNA和RNA染色成红色荧光来进行核酸的定量和定位分析。

它在细胞生物学和分子生物学研究中具有广泛的应用，为科研工作者提供了重要的实验手段和数据支持。

希望本文的介绍能够帮助读者更好地理解PI染色的原理和应用，为相关研究工作提供参考和指导。

如何选择流式细胞仪测定常用的荧光染料流式细胞仪测定常用的荧光染料有很多种,我们如何来选择流式细胞仪测定的常用荧光染料呢？首先要考虑，他们分子结构不同,激发光谱和发射光谱也不同,选择荧光染料时，必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长做为重点考虑。

发射光波长，如：氩离子气体激光管,它的发射光波488nm；氦氖离子气体激光管发射光波长633nm；488nm激光光源常用的荧光染料有FITC（异硫氰酸荧光素）；PE（藻红蛋白）PI（碘化丙啶）CY5（化青素）preCP(叶绿素蛋白)ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)等。

激发光和发射光波长，如下：流式细胞仪中常用的荧光染料光学特征以及需要的激光器流式•细胞仪交流论坛：/forum-181-1.ht ml荧光染料谱第十三章：干燥通过本章的学习，应熟练掌握表示湿空气性质的参数，正确应用空气的H–I 图确定空气的状态点及其性质参数；熟练应用物料衡算及热量衡算解决干燥过程中的计算问题；了解干燥过程的平衡关系和速率特征及干燥时间的计算；了解干燥器的类型及强化干燥操作的基本方法。

二、本章思考题1、工业上常用的去湿方法有哪几种？态参数？11、当湿空气的总压变化时，湿空气H–I图上的各线将如何变化? 在t、H 相同的条件下，提高压力对干燥操作是否有利? 为什么?12、作为干燥介质的湿空气为什么要先经预热后再送入干燥器？13、采用一定湿度的热空气干燥湿物料，被除去的水分是结合水还是非结合水？为什么？14、干燥过程分哪几种阶段？它们有什么特征？15、什么叫临界含水量和平衡含水量？16、干燥时间包括几个部分？怎样计算？17、干燥哪一类物料用部分废气循环？废气的作用是什么？18、影响干燥操作的主要因素是什么？调节、控制时应注意哪些问题？三、例题例题13-1：已知湿空气的总压为101.3kN/m2 ,相对湿度为50%，干球温度为20o C。

试用I-H图求解：(a)水蒸汽分压p；(b)湿度Ｈ；(c)热焓Ｉ；(d)露点t d；(e)湿球温度tw ；(f)如将含500kg/h干空气的湿空气预热至117o C，求所需热量Ｑ。

常见荧光染料及用途

常见荧光染料及用途《常见荧光染料及用途》荧光染料是一种能够吸收可见光或紫外光，并在吸收能量的激发下发射可见光的化学物质。

它们的应用非常广泛，涵盖了许多领域，例如生物医学、材料科学、环境监测等。

以下介绍几种常见的荧光染料及其主要用途。

1. 墨水蓝(BR)：墨水蓝是一种具有强烈蓝色荧光的染料，常用于生物实验中的DNA染色。

它与DNA结合后能发出强烈的荧光信号，从而在实验中方便地观察和分析DNA的存在和定位。

2. 罗丹明B(RhB)：罗丹明B是一种红色荧光染料，广泛用于组织切片和细胞染色。

它能够与细胞核和胞浆中的核酸结合，以显示细胞和组织的结构，帮助科研人员研究细胞分裂和组织结构变化。

3. 草酸罗丹明G(OG)：草酸罗丹明G是一种绿色荧光染料，主要应用于蛋白质和核酸的定量分析。

在分光光度计中配合荧光检测器使用，可以精确测定溶液中蛋白质和核酸的浓度。

4. 罗丹明110(Rh110)：罗丹明110是一种黄绿色荧光染料，常用于细胞活性检测。

通过与细胞内的酶或细胞膜结合，罗丹明110可以用来评估细胞的活力和存活情况，特别适用于细胞毒性测试和细胞增殖研究。

5. 荧光素(FITC)：荧光素是一种与生物相容性极高的荧光染料，常用于免疫染色和分子生物学实验。

它能与抗体特异性结合，在免疫组化和流式细胞术中用于检测蛋白质的表达以及细胞表面标记。

以上只是常见的荧光染料中的几种，它们的应用还远不止于此。

随着科学技术的不断进步，新型的荧光染料不断问世，为各个领域的研究提供了更多更有力的工具。

通过荧光染料的运用，科学家们能够更好地理解和研究生物、物质和环境，进一步推动科学的发展。

常用荧光染料探针列表

这是来自于Salk的一个比较全的荧光染料列表，这些荧光染料可广泛用于流式细胞术以及荧光显微镜技术，汇集了各种荧光染料的特性，方便大家查找。

可根据实际所用的检测平台、染料的最大激发光波长和最大发射光波长来选择合适的荧光染料用于实验。

请注意这上面所显示的颜色可能会由于所用浏览器不同而有所不同，他们只是一个与实际颜色的近似值。

Ex: Peak excitation wavelength (nm)
Em: Peak emission wavelength (nm)
QY: Quantum yield
BR: Brightness; Extinction coefficient * Quantum yield / 1000 PS: Photostability; time to 50% brightness (sec)
光色波长λ(nm)代表波长
红（Red）780～630700
橙（Orange）630～600620
黄（Yellow）600～570580
绿（Green）570～500550
青（Cyan）500～470500
蓝（Blue）470～420470
紫（Violet）420～380420。

流式测细胞凋亡原理

流式测细胞凋亡原理
细胞凋亡是一种形态学特征独特的程序性细胞死亡方式，它在多种生理和病理状态下发挥重要作用。

流式细胞术可以用来分析和测量细胞凋亡，其中包括细胞表面标记物的检测和细胞染色。

流式细胞术是一种流式细胞仪结合荧光标记物的技术。

在细胞凋亡的研究中，最常用的荧光染料是亚碧菜素（annexin V）和PI（propidium iodide）。

亚碧菜素可以结合凋亡细胞表面的磷脂（phosphatidylserine），而PI则可以进入破损的细胞膜并结合DNA。

流式细胞术中，细胞样本首先经过适当的处理，如细胞固定和染色，以保持细胞形态并增强荧光信号。

然后，样本通过流式细胞仪中的流动通道，单个细胞经过激光束的照射而产生荧光信号。

流式细胞仪会同时检测和记录细胞的形态学特征和荧光信号。

在细胞凋亡的测量中，亚碧菜素和PI的荧光信号用于区分不同类型的细胞。

在正常细胞中，磷脂位于细胞膜的内侧，不会结合亚碧菜素。

而在凋亡细胞中，磷脂外露到细胞膜的外侧，可以与亚碧菜素结合。

通过检测亚碧菜素的荧光信号，可以确定凋亡细胞的比例。

同时，PI的荧光信号用于鉴定破损的细胞，因为PI只能进入破损的细胞并结合DNA。

通过流式细胞术，可以获得细胞凋亡的定量信息，例如凋亡细
胞的比例和凋亡细胞的亚型。

这对于研究细胞凋亡的机制以及相关疾病的发生和发展具有重要意义。

流式配色及分析

Foxp3本身属于转录因子，始终存在于Treg细胞之中；
如想要鉴定到th中的细胞因子，则必须对其进行“开源”与“节流”。
精选2021版课件
47
胞内因子的含量与检测效果
如想要鉴定到th中的细胞因子，则必须对其进行“开源”与“节流”。
开源：刺激活化T细胞。方法有二：
1:PMA（PHA/LPS...)＋Ionomycin: PMA能自由透过细胞膜，因此能绕过细胞膜受体直接激活PKC; Ionomycin则能使细胞膜外Ca2+进入膜内增加，导致细胞内游离钙浓度升高；只有PMA+Ionomycin联合应用才是使T细胞进入细胞周期的最有效的方法.
流式配色分析及实验设计
精选2021版课件
1
关于流式抗体
什么是荧光素
fitc pe
✓ 荧光素是具有荧光特性的染料 ✓ 只在特定波长激光照射后才发出自身荧光 ✓ 发出的精选荧20光21版颜课件色（波长）也是固定的 2
流式细胞技术：
在细胞分子水平上；通过单克隆抗体；对单个细胞或其他生物粒子；进行多参数；快速的；定量分析。
红3
Pe-cy7
远红 4
Apc(AF647,ef660) 红 5
Apc-cy7(ApcH7,ef780)
远红 6
可以也仅可以最多选择8个荧光抗体去标记抗原；
需要注意：同一通道不可以选2种荧光抗体，例如： AF488，BB515,FITC 不可以同时使用；
精选2021版课件
19
染料的亮度与抗原表达强度相匹配
Tertiary: 低水平表达，激活性marker，或者表达区分不明显
Example: CD25
CD4 CD45RA
CD25

常用荧光染料的激发和发射波长

常用荧光染料的激发和发射波长荧光染料广泛应用于生物医学、材料科学、光电子学等领域，其特点是在受到激发后会发出可见光，具有较高的荧光量子产率和灵敏度。

在实际应用中，荧光染料的激发和发射波长显得尤为重要，因此本文将整理常用荧光染料的激发和发射波长，方便读者在实验或研究中的选择。

常用荧光染料1. FITC （荧光同型素-异硫氰酸酯）FITC是一种广泛应用于生物学实验的荧光染料，常用于标记蛋白质、抗体、药物等分子，其最大吸收波长和最大发射波长分别为495 nm和519 nm。

FITC的分子量小，荧光量子产率高，这使得它成为一种理想的荧光标记分子。

2. Rhodamine 123Rhodamine 123是一种阳离子荧光染料，可在细胞中标记线粒体，同时也可在许多生物学应用中标定其他细胞器。

Rhodamine 123的最大吸收波长和最大发射波长分别为507 nm和529 nm，其荧光量子产率高，荧光亮度高。

3. Texas RedTexas Red是一种常用的激发波长长达596 nm的荧光染料，在荧光共振能量转移等实验中被广泛应用。

Texas Red的最大发射波长在610 nm左右，其在荧光共振能量转移实验中能够提供强烈的荧光标记。

4. PE （腺苷酸酰基酯）PE是一种被广泛用于流式细胞仪实验中的荧光染料，其最大激发波长为488 nm，最大发射波长在575 nm左右。

PE作为一种非常亮的荧光染料，可用于标记和鉴定特定类型的细胞。

荧光染料的选择在实验或研究中，需要根据具体的情况选择合适的荧光染料。

对于激发波长和发射波长的选择，一些因素应该被考虑，如：•研究对象的荧光信号贡献；•其他染料的交叉激发和发射波长；•激发和发射波长的设备可用范围。

一般来说，应选择滤光片相对集中并且有较高吸收的荧光染料，以确保设备需要的能量和检测返回信号的量达到最大程度。

总结本文简要介绍了几种常用的荧光染料及其特性，这些荧光染料可以分别从不同角度用于生物学、光学、材料学等领域的研究和实验中。

流式细胞仪试剂介绍

FITC＋PE：最常用的双色组合 FITC＋PE＋PE-Cy5：最常用的三色组合，进行多色荧光染色时荧光光谱重叠补偿很小 FITC＋PE＋PerCP+APC：BD最常用的四色组合 FITC＋PE＋ECD+PE-Cy5:贝克曼库尔特公司最常用的四色组合 FITC＋PE＋ECD+PE-Cy5+PE-Cy7：贝克曼贝克曼库尔特公司最常用的五色组合，而且PE-Cy7与FITC 、PE、PE-Cy5标记的抗体一同使用时的荧光补偿小 PE-Cy5可与FITC、PE同时使用，但不能与APC同时使用，二者之间荧光干扰太大
Red APC APC-Cy7 UV DAPI Hoechst

Innovation – First Commercial Tandem Conjugates
APC Alexafluor™700 APC Alexafluor™750 PE-Texas Red PE-Cy7™
1985
性对照应为Mouse IgG1-FITC
如何看懂试剂的说明
临床试剂
RD1=PE
标记的荧光素
试剂包装规格大小
如何看懂试剂的说明
科研试剂
科研试剂，以mg/g表示试剂包装大小，需要做滴度实验，摸索最佳实验所需试剂量
如何看懂试剂的说明－试剂的货号识别
6开头的试剂为美国库尔特生产
200 of 208 New Drugs Are PKIs
The Competition: Western Blot vs Flow Cytometry
Western Blot
Untreated Treated
Flow Cytometry

bd流式细胞仪荧光对应通道

bd流式细胞仪荧光对应通道
BD流式细胞仪是一种常用的实验仪器，用于分析和分类细胞。

在流式细胞仪中，荧光对应通道是指不同荧光染料所发出的荧光信号被检测的通道。

不同的荧光染料对应不同的通道，以便对细胞进行多参数分析。

一般而言，BD流式细胞仪的荧光对应通道可以根据实验需要进行设置和调整。

常见的荧光染料及其对应的通道包括：
1. FITC（荧光素异硫氰酸酯）染料通常对应488nm激发激光和530/30nm检测滤波器。

2. PE（phycoerythrin）染料通常对应488nm激发激光和
585/42nm检测滤波器。

3. APC（allophycocyanin）染料通常对应633nm激发激光和660/20nm检测滤波器。

4. PerCP（peridinin-chlorophyll-protein complex）染料通常对应488nm激发激光和675/30nm检测滤波器。

5. PE-Cy7染料通常对应488nm激发激光和780/60nm检测滤波器。

6. APC-Cy7染料通常对应633nm激发激光和780/60nm检测滤波器。

除了上述常见的荧光染料外，还有许多其他荧光染料以及对应的检测通道，可以根据实验需要进行设置。

此外，一些高端的流式细胞仪还具有更多的荧光激发和检测通道，以支持更复杂的多参数分析。

总的来说，荧光对应通道的设置需要根据实验所用的荧光染料和流式细胞仪的配置来确定，合理的设置可以确保准确的数据采集和分析。

希望这些信息能够帮助你更好地理解BD流式细胞仪荧光对应通道的相关知识。

流式细胞术中应用的荧光染料介绍

流式细胞术中应⽤的荧光染料介绍当我们在进⾏多⾊流式分析的时候，对分析成功的⼀个关键影响因素是每个抗体选择何种荧光染料标记。

通常会有很多可⾏的结合，我们在做选择的时候有很多的因素需要我们去考虑。

对任何单克隆抗体，其阴性和阳性的信噪⽐相差四到六倍都取决于荧光素的使⽤。

相对的荧光强度也取决于使⽤的仪器。

⾼密度表达的抗原我们可以应⽤任何荧光素标记的抗体来检测，低密度表达的抗原就需要我们应⽤⾼信噪⽐⾼的荧光素，譬如PE或者APC标记的抗体来充分检测分离出阳性表达的细胞与阴性表达的细胞。

⾃发荧光个别的细胞有着他们各⾃特异性⽔平的⾃发荧光（荧光信号产⽣于他们⾃⾝）。

当在全波长荧光通道中进⾏观察的时候，⾃发荧光信号在长波长（>600nm）明显的降低。

对于有较⾼⽔平⾃发荧光类型的细胞，如长期组织培养的细胞，应使⽤较⾼发射波长的荧光染料（APC、APC-Cy7等）标记抗体，通常他们会有⼀个较好信噪⽐的结果。

对于那些不是有较多⾃发荧光类型的细胞，如新鲜的细胞，可以使⽤FITC 标记的抗体了。

以下为各种常⽤荧光素介绍：Alexa Fluor 488 has a spectrum almost identical to that of fluorescein isothiocyanate (FITC), but with extraordinary photostability. Because of this photostability, it has become a choice for fluorescent microscopy applications and has become popular in cytometry applications. It is detected in the FL1 detector of the FACSCalibur or FACScan. Unlike other fluorochromes with similar emission spectra, Alexa Fluor 488 is pH insensitive over a broad range.Alexa Fluor 633 is a practical alternative to APC as well as Cy5. Alexa Fluor 633 conjugates can be used in multi-color flow cytometry with instruments equipped with a second red laser or red diode. It is detected in the FL4 detector of the FACSCalibur. The FACScan cannot be used to detect Alexa Fluor 633 conjugates because the FACScan lacks a red laser or diode. Like other Alexa Fluor dyes, Alexa Fluor 633 exhibits uncommon photostability, making it an ideal choice for fluorescent microscopy.A great number of different Alexa Fluor dyes exist that are beyond the scope of this introductory fluorophore section. Many manufacturers sell directly-conjugated Alexa Fluor antibodies. Know that Molecular Probes' Zenon Antibody Labeling Kits, which are available for all of their Alexa Fluor dyes, make it possible to rapidly and quantitatively label antibodies from a purified antibody fraction or from a crude antibody preparation such as serum, ascites fluid or a hybridoma supernatant. See /servlets/publications?id=150 for specifics.Allophycocyanin (APC) is an accessory photosynthetic pigment found in blue-green algae. APC has 6 phycocyanobilin chromophores per molecule, which are similar in structure to phycoerythrobilin, the chromophore in phycoerythrin or PE. APC tandem dyes, APC-Cy5.5 and APC-Cy7, are also available. APC has a 650-nanometer wavelength absorption maximum and a 660-nanometer fluorescence emission maximum. APC can be used in flow cytometers equipped with dual lasers for multi-color analysis. Like Alexa Fluor 633, APC is excited using the helium-neon red diode laser (633 nanometers) of the FACSCalibur and is detected on the FL4 detector. APC cannot be detected on the FACScan as that instrument is not equipped with a red laser.APC-Cy7 is a tandem conjugate system that combines APC and a cyanine dye (Cy7) and has an absorption maximum at~650 nanometers. This tandem uses the efficiency of the fluorescence light energy transfer between the two fluorochromes. When excited by light from a helium-neon laser, the excited fluorochrome (APC) is able to transfer its fluorescent energy to the cyanine molecule, which then fluoresces at a longer wavelength. The resulting fluorescent emission maximum is in the deep red at approximately 767 nanometers. APC-Cy7 run on a FACSCalibur results in dim expression because the FL4 detector's optical filter is centered for APC emission (660 nanometers) and not the longer red wavelengths excited with the helium-neon diode. It is recommended that special precautions be taken with this conjugate, and cells stained with them, to protect the fluorochrome from long-term exposure to visible light.Carboxyfluorescein Diacetate (CFSE) can be used to track asynchronous cell division. Cell division results in sequential halving of the initial fluorescence, resulting in a cellular fluorescence histogram.The peaks labeled 1, 2, 3, 4 and 5 represent successive generations of CFSE-cultured cells.Cy3 and Cy5 are excited by the 488-nanometer line of an argon laser and the 633-nanometer line of a helium-neon diode or laser, respectively. These conjugates can be used in flow cytometry but typically do not give the fluorescence intensity comparable to that of PE or APC. Applications where a smaller dye is required are more appropriate for these dyes. These fluorochromes are well suited for fluorescent microscopy.Enhanced Cyan Fluorescent Protein (eCFP) cannot be analyzed using the FACScan or FACSCalibur as this molecule requires excitation in the violet range. The protein is easily detected using the violet laser of the LSRII, or the violet lines of the MoFlo's argon or krypton lasers. This molecule has an excitation maximum at 475 nanometers and is best excited using the MoFlo's 457nm line of the argon or argon-krypton mixed gas laser. Use of the 407nm violet laser of the LSRII will result in weak eCFP expression. More detailed discussion of this molecule can be found in the next section of this web site, the section on Fluorescent Proteins.Enhanced Green Fluorescent Protein (eGFP) can be excited at 488 nanometers with a peak emission at 509 nanometers and is detected in the FL1 detector on the FACSCalibur or FACScan. The MoFlo and LSRII are able to distinguish between concurrently expressing eGFP and eYFP cells if the proper optical filters and experimental controls exist. More detailed discussion of this molecule can be found in the next section of this web site, the section on Fluorescent Proteins. Enhanced Yellow Fluorescent Protein (eYFP), a yellow-shifted variant of the eGFP molecule, is also excited at 488 nanometers with a peak emission at 535 nanometers and is also detected in the FL1 detector on the FACSCalibur or FACScan. More detailed discussion of this molecule can be found in the next section of this web site, the section on Fluorescent Proteins.Fluorescein isothiocyanate (FITC) is currently the most commonly used fluorescent dye for flow cytometry analysis. When excited at 488 nanometers, FITC has a green emission that's usually collected at 530 nanometers, the FL1 detector of the FACSCalibur or FACScan. FITC has a high quantum yield (efficiency of energy transfer from absorption to emission fluorescence) and approximately half of the absorbed photons are emitted as fluorescent light. For fluorescent microscopy applications, FITC is seldom used as it photobleaches rather quickly though in flow cytometry applications, its photobleaching effects are not observed due to a very brief interaction at the laser intercept. FITC is highly sensitive to pH extremes.Peridinin chlorophyll protein (PerCP) has a 677 nanometer maximum emission, red, when excited at 488 nanometers and is detected on the FL3 detector of the FACSCalibur or FACScan. A PerCP tandem dye is also available (PerCP-Cy5.5). PerCP is not suited for the high-powered lasing (>150mW) applications, such as on the MoFlo, due to its photobleaching characteristics. PerCP conjugates can only be obtained from Becton Dickinson and its subsidiary, Pharmingen. Phycoerythrin (PE or R-PE) has a huge absorption coefficient and almost perfect quantum efficiency. In vivo, it functions to transfer light energy to chlorophyll during photosynthesis. It is one of the brightest dyes used today and emits in theyellow/orange at about 570 nanometers. Those accustomed to fluorescent microscopy may not be familiar with this fluorochrome as it photobleaches rather quickly under a microscope.Phycoerythrin-Cy5 (PE-Cy5) is a tandem conjugate where PE is coupled to the cyan dye, Cy5. When excited by 488-nanometer light, the excited fluorochrome (PE) is able to transfer its fluorescent energy to the cyanine molecule, which then fluoresces at a longer wavelength in the red at 670 nanometers. This tandem dye is known by a confusing myriad of names to include Becton Dickinson's CyChrome, Caltag and Sigma's Tri-Color, GIBCO's RED670, Coulter's PC5, and probably others. Other PE conjugates exist, e.g., PE-Cy5.5 and PE-Cy7, that will not be discussed in this introductory fluorophore section. It is recommended that special precautions be taken with this conjugate, and cells stained with them, to protect the fluorochrome from long-term exposure to visible light.Phycoerythrin-Texas Red (PE-Texas Red) is a tandem conjugate where PE is coupled to Texas Red. Similar to other tandem conjuates, when excited by 488-nanometer light, the excited fluorochrome (PE) is able to transfer its fluorescent energy to the Texas Red molecule, which then fluoresces at a longer wavelength with a peak in the orange at 612 nanometers. This tandem is also known by other names such as Red 612 and ECD (Electron Coupled Dye). Know that PE-Texas Red conjugates run on the FACScan or FACSCalibur will result in dull expression due to the extant optical filters. This is not observed on the LSRII or MoFlo when equipped with the appropriate optical filters for this conjugate. There is considerable overlap of emission when running PE and PE-Texas Red specimens.Propidium Iodide (PI) is a membrane-impermeant dye that stains by nondiscriminately intercalating into every 4th or 5th nucleic acid base pair, binding both DNA and RNA. Once bound, PI undergoes a conformational change and becomes ~40 times brighter. Propidium iodide has a broad emission spectrum with a peak in the orange at 620 nanometers. A number of assays employ propidium iodide. Cells or nuclei with altered DNA content are identified by staining alcohol-fixed, RNAse-treated cells or nuclei with this dye (see below).The first peak (M1) on the left represents normal diploid cells. The next major peak (M2) represents tumor cells with increased DNA content and DNA index of 1.27. Propidium iodide can be combined with additional fluorescent antibodies that are specific for a unique cell population and allow for more accurate S phase analysis of multiple overlapping populations.Propidium iodide has also been employed for many years as a marker for viability as the disrupted membranes of dead cells allow the dye to pass freely to the nucleic acids. However, this dye is very sticky; it will stick to sample tubing and, given sufficient time exposure to living cells, living cells will appear to be propidium iodide positive. Given this dye's broad emission spectrum and its sticky properties, contemporary flow cytometry labs have replaced propidium iodide with other nucleic acid dyes, e.g., 7-AAD (listed below), TO-PRO-3, or DAPI, among many others, for viability measurements though propidium iodide remains the most commonly used dye for DNA content analysis.Texas Red has an excitation maximum in the yellow-orange range of the color spectrum; consequently, Texas Red cannot be excited on any of the benchtop analyzers in the core facility. It can, however, be detected using one of green laser lines of the MoFlo's argon laser but ideally using the yellow laser line of the MoFlo's krypton laser. When excited, Texas Red has an excitation maximum in the orange at 612 nanometers.7-Aminoactinomycin D (7-AAD), like propidium iodide, is a DNA intercalating dye but 7-AAD is specific for C-G base pairs. It is well suited for viability measurements and also for apoptosis experiments where it's paired with Annexin V. Unlike propidium iodide, this dye has minimal emission bleed from the FL3 detector into the FL2 (PE) detector on the FACSCalibur or FACScan. Whereas PI can be detected in either FL2 or FL3, though it is typically detected in FL2, of the FACScan or FACSCalibur, 7-AAD is detected in FL3.PE：Phycoerythrin 藻红蛋⽩；488nm，575nm（橙红）FITC，异硫氰酸荧光素 488nm，525nm（绿APC：英⽂全名：allophycocyanin，中⽂名：别藻青蛋⽩，最⼤吸收峰：650nm，最⼤发射荧光峰：660nm，适⽤于双激光流式仪，可被600-640nm波长的激光激发。

fitc荧光标准曲线

fitc荧光标准曲线
FITC（荧光同型素）是一种常用的荧光染料，常用于流式细胞
仪等生物实验中。

荧光标准曲线是一种用于定量测量FITC荧光信号
的方法，通过建立一系列已知浓度的FITC标准溶液，测量其荧光强度，并绘制出荧光信号强度与浓度之间的关系曲线。

建立FITC荧光标准曲线的步骤如下：
1. 准备FITC标准溶液，根据实验需要，选择适当的FITC标准品，按照一系列不同浓度（通常为等比例浓度序列）配制标准溶液。

2. 测量荧光强度，使用荧光测量仪器（如流式细胞仪）对每个FITC标准溶液进行荧光强度的测量。

确保仪器参数设置一致，如激
发波长、发射波长、增益等。

3. 绘制标准曲线，将每个FITC标准溶液的荧光强度值与其对
应的浓度值进行配对，绘制荧光信号强度与浓度之间的曲线图。

通
常使用线性回归或其他拟合方法拟合曲线，得到拟合方程。

4. 校准样品浓度，使用已建立的FITC荧光标准曲线，测量待
测样品的荧光强度，并根据标准曲线反推出样品中FITC的浓度。

通过FITC荧光标准曲线的建立和使用，可以实现对待测样品中FITC浓度的定量测量。

这种方法具有灵敏度高、准确性好、重复性高等优点，广泛应用于生物医学研究和临床诊断中。

需要注意的是，在建立FITC荧光标准曲线时，应尽量避免实验条件的变化和误差的引入，确保测量结果的准确性。

另外，标准曲线的范围应覆盖待测样品的浓度范围，以确保测量结果的可靠性。

bv510激发和发射波长

BV510激发和发射波长一、什么是BV510BV510是一种荧光染料，常用于流式细胞术中的细胞标记。

它是一种有机化合物，属于靛绿染料家族。

BV510在流式细胞仪中作为荧光探针，用于检测细胞表面或细胞内特定分子的表达情况。

二、BV510的激发和发射波长BV510的激发波长为405纳米，发射波长为510纳米。

这意味着在流式细胞仪中，我们可以使用405纳米的激光来激发BV510染料，然后检测510纳米的荧光信号。

三、BV510的应用BV510具有广泛的应用领域，特别是在免疫学和细胞生物学研究中。

以下是一些常见的应用：1. 免疫细胞表型分析在流式细胞仪中，BV510可以与其他荧光染料一起使用，用于分析细胞表面的特定蛋白或分子的表达情况。

通过检测细胞表面标记物的荧光信号，我们可以对不同类型的免疫细胞进行鉴定和定量分析。

2. 细胞增殖和凋亡研究BV510也可用于评估细胞增殖和凋亡的情况。

通过标记细胞增殖指标或凋亡标记物，我们可以利用BV510的荧光信号来定量分析细胞的增殖或凋亡水平。

3. 细胞内信号转导研究BV510还可用于研究细胞内信号转导通路。

通过将BV510标记于信号转导通路中的关键蛋白或分子，我们可以观察到这些信号转导分子的定位、表达和活性状态。

四、BV510的优点和注意事项1. 优点•BV510的发射波长在510纳米，不会与其他常用荧光染料的发射波长重叠，避免了光谱交叉干扰。

•BV510的荧光强度较高，可以增加检测的灵敏度。

•BV510的化学性质稳定，不易褪色，可以长时间保存。

2. 注意事项•BV510对光敏感，应避免暴露在强光下，以免荧光信号被破坏。

•在使用BV510时，应根据实验需求选择适当的激发波长和检测通道，以确保荧光信号的最大化。

•BV510染料使用后应妥善处理，避免对环境造成污染。

五、总结BV510是一种常用于流式细胞术中的荧光染料，具有激发波长405纳米和发射波长510纳米。

它在免疫学和细胞生物学研究中有广泛的应用，可以用于细胞表型分析、细胞增殖和凋亡研究以及细胞内信号转导研究。

apc荧光染料激发波长

apc荧光染料激发波长APC荧光染料激发波长APC（Allophycocyanin）是一种常用的荧光染料，广泛应用于流式细胞仪和免疫组化等领域。

其激发波长是其荧光染料分子吸收最大的波长，常见的激发波长为633纳米。

本文将围绕APC荧光染料的激发波长展开讨论，并介绍其在科学研究和医学诊断中的应用。

APC荧光染料是一类天然存在于蓝藻和红藻中的蓝色色素。

它的荧光特性使得它成为生物实验中常用的标记物，能够帮助科学家观察和分析细胞及其内部分子的分布和功能。

而APC荧光染料的激发波长则是触发其发出荧光的关键。

在流式细胞仪中，激光束照射到样本中的APC荧光染料上，激发荧光染料分子跃迁到激发态，再经过一系列的非辐射过程回到基态时，发出荧光。

而这种激光束的波长就是APC荧光染料的激发波长。

APC荧光染料的激发波长常见的是633纳米，也有一些变种的APC 荧光染料的激发波长在其他范围内。

不同的激发波长对应着不同的应用场景。

以633纳米为例，它常用于流式细胞仪中同时标记多种细胞表面标记物的实验中。

通过合理设计荧光染料的激发波长，可以避免不同染料间的光谱重叠，从而减少实验误差。

此外，荧光染料的激发波长也与激光器的选择有关。

常见的激光器波长包括405纳米、488纳米和633纳米等，而选择合适的激发波长可以提高实验的准确性和效率。

APC荧光染料的应用不仅局限于流式细胞仪，它还在免疫组化和细胞成像等领域发挥着重要作用。

在免疫组化中，APC荧光染料可以与特定抗体结合，用于检测特定蛋白的表达和定位。

通过激发荧光染料的激发波长，可以观察到目标蛋白在细胞或组织中的分布情况，进而研究其功能和调控机制。

在细胞成像中，APC荧光染料可以与细胞内特定分子或结构结合，用于实时观察细胞活动和信号传导。

通过激发荧光染料的激发波长，可以获得高分辨率和高对比度的细胞图像，为科学研究和医学诊断提供重要依据。

除了633纳米外，APC荧光染料还有其他激发波长的变种。

PerCP-Cy5

PerCP-Cy5.5串联染料解决方案常见流式抗体荧光染料介绍：1) 藻红蛋白（phycoerythrin，PE）：PE是从红藻中分离纯化获得的一种常见染料，经激光激发后发出橙黄色荧光，最大发射波长为575 nm。

PE具有吸光性能好和光量子产率高的特点，可用于标记表达水平较低的蛋白。

在流式细胞术检测中，PE标记的抗体适用于所有配备488 nm氩离子激光器的流式细胞仪。

2) PE-Cy5：PE-Cy5是一种复合染料，属于藻红蛋白偶联物，在此类复合染料中，激发能量可从PE传递到Cy5上，最大发射波长为667 nm。

由于PE-Cy5与FITC、PE在光谱上重叠范围较少，荧光干扰少，因此实验中常将PE-Cy5与FITC、PE搭配使用。

需注意，PE-Cy5不适合与APC搭配使用，两者荧光重叠大。

3)PE-Cy5.5：PE-Cy5.5也是一种复合染料，能量从PE传递到Cy5.5上，最大发射波长为694 nm。

同PE-Cy5不一样，PE-Cy5.5与FITC、PE、APC间荧光干扰小，可搭配使用，且其荧光强度要优于PE-Cy5。

4) PE-Cy7：复合染料，最大发射波长为785 nm。

PE-Cy7与FITC无光谱重叠，与APC重叠也较少，因此其可与FITC、PE、APC搭配使用。

在实验中需要注意，PE-Cy7的光淬灭性很强，需要绝对避光环境。

5) PerCP-Cy5.5：复合染料，最大发射波长为695 nm。

PerCP-Cy5.5光量子产率高，可用于表达水平较低物质的检测，与PerCP-Cy5.5相反，PerCP的光量子产率较低，适用于表达水平较高物质的检测，在双激光管仪器上与APC共同检测时，需要做补偿调节，但比PerCP补偿少。

6) PI/7-AAD：碘化丙啶（propidium iodide，PI）和7-AAD（7-amino-actinomycin D）的最大发射波长分别为617 nm和647 nm，是常见的荧光染料，常用于细胞凋亡检测，可用于鉴别死、活细胞。