组培实验方案
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组培实验方案
同一地区枝条按木质化程度分三个等级分别做实验对比
方案一、不加0.1%吐温，对比升汞消毒时间(MS培养基：4.74g/LMs+_30g/L蔗糖+8g/L琼脂+5g/LVc)
一级（茎尖）：木质化程度最低
方案1.1：全撕皮后用5g/L洗衣粉搓洗5-10min，再用蒸馏水冲洗2-3次后进入超净工作台进行无菌消毒以及接种工作。
超净工作台中的操作：将冲洗过的枝条用无菌镊子移入无菌瓶（高温灭菌过的无菌瓶），用无菌水冲洗枝条1-3次后用75%酒精消毒30s-1min，再用无菌水冲洗2-3次，用0.1%升汞消毒3min,再用无菌水冲洗5-7次（以上每次无菌水冲洗时分别手摇1min）
方案1.2:全撕皮后用5g/L洗衣粉搓洗5-10min，再用蒸馏水冲洗2-3次后进入超净工作台进行无菌消毒以及接种工作。
超净工作台中的操作：将冲洗过的枝条用无菌镊子移入无菌瓶（高温灭菌过的无菌瓶），用无菌水冲洗枝条1-3次后用75%酒精消毒30s-1min，再用无菌水冲洗2-3次，用0.1%升汞消毒5min,再用无菌水冲洗5-7次（以上每次无菌水冲洗时分别手摇1min）
二级：茎段中段
方案1.3：全撕皮后用5g/L洗衣粉搓洗5-10min，再用蒸馏水冲洗2-3次后进入超净工作台进行无菌消毒以及接种工作。
超净工作台中的操作：将冲洗过的枝条用无菌镊子移入无菌瓶（高温灭菌过的无菌瓶），用无菌水冲洗枝条1-3次后用75%酒精消毒30s-1min，再用无菌水冲洗2-3次，用0.1%升汞消毒3min,再用无菌水冲洗5-7次（以上每次无菌水冲洗时分别手摇1min）
方案1.4:全撕皮后用5g/L洗衣粉搓洗5-10min，再用蒸馏水冲洗2-3次后进入超净工作台进行无菌消毒以及接种工作。
超净工作台中的操作：将冲洗过的枝条用无菌镊子移入无菌瓶（高温灭菌过的无菌瓶），用无菌水冲洗枝条1-3次后用75%酒精消毒30s-1min，再用无菌水冲洗2-3次，用0.1%升汞消毒5min,再用无菌水冲洗5-7次（以上每次无菌水冲洗时分别手摇1min）
三级：半木质化
方案1.5：全刮皮后用5g/L洗衣粉搓洗5-10min，再用蒸馏水冲洗2-3次后进入超净工作台进行无菌消毒以及接种工作。
超净工作台中的操作：将冲洗过的枝条用无菌镊子移入无菌瓶（高温灭菌过的无菌瓶），用无菌水冲洗枝条1-3次后用75%酒精消毒30s-1min，再用无菌水冲洗2-3次，用0.1%升汞消毒3min,再用无菌水冲洗5-7次（以上每次无菌水冲洗时分别手摇1min）
方案1.6:全刮皮后用5g/L洗衣粉搓洗5-10min，再用蒸馏水冲洗2-3次后进入超净工作台进行无菌消毒以及接种工作。
超净工作台中的操作：将冲洗过的枝条用无菌镊子移入无菌瓶（高温灭菌过的无菌瓶），用无菌水冲洗枝条1-3次后用75%酒精消毒30s-1min，再用无菌水冲洗2-3次，用0.1%升汞消毒5min,再用无菌
水冲洗5-7次（以上每次无菌水冲洗时分别手摇1min）
方案二、不用75%酒精消毒，对比升汞消毒时间(MS培养基：4.74g/LMs+_30g/L蔗糖+8g/L琼脂+5g/LVc)
一级（茎尖）：木质化程度最低
方案2.1：全撕皮后用5g/L洗衣粉搓洗5-10min，再用蒸馏水冲洗2-3次后进入超净工作台进行无菌消毒以及接种工作。
超净工作台中的操作：将冲洗过的枝条用无菌镊子移入无菌瓶（高温灭菌过的无菌瓶），用无菌水冲洗2-3次，用0.1%升汞+0.1%吐温混和溶液消毒3min,再用无菌水冲洗5-7次（以上每次无菌水冲洗时分别手摇1min）
方案2.2:全撕皮后用5g/L洗衣粉搓洗5-10min，再用蒸馏水冲洗2-3次后进入超净工作台进行无菌消毒以及接种工作。
超净工作台中的操作：将冲洗过的枝条用无菌镊子移入无菌瓶（高温灭菌过的无菌瓶），用无菌水冲洗2-3次，用0.1%升汞+0.1%吐温混和溶液消毒5min,再用无菌水冲洗5-7次（以上每次无菌水冲洗时分别手摇1min）
二级：茎段中段
方案2.3：全撕皮后用5g/L洗衣粉搓洗5-10min，再用蒸馏水冲洗2-3次后进入超净工作台进行无菌消毒以及接种工作。
超净工作台中的操作：将冲洗过的枝条用无菌镊子移入无菌瓶（高温灭菌过的无菌瓶），用无菌水冲洗2-3次，用0.1%升汞+0.1%吐温混和溶液消毒3min,再用无菌水冲洗5-7次（以上每次无菌水冲洗时分
别手摇1min）
方案2.4:全撕皮后用5g/L洗衣粉搓洗5-10min，再用蒸馏水冲洗2-3次后进入超净工作台进行无菌消毒以及接种工作。
超净工作台中的操作：将冲洗过的枝条用无菌镊子移入无菌瓶（高温灭菌过的无菌瓶），用无菌水冲洗2-3次，用0.1%升汞+0.1%吐温混和溶液消毒5min,再用无菌水冲洗5-7次（以上每次无菌水冲洗时分别手摇1min）
三级：半木质化
方案2.5：全刮皮后用5g/L洗衣粉搓洗5-10min，再用蒸馏水冲洗2-3次后进入超净工作台进行无菌消毒以及接种工作。
超净工作台中的操作：将冲洗过的枝条用无菌镊子移入无菌瓶（高温灭菌过的无菌瓶），用无菌水冲洗2-3次，用0.1%升汞+0.1%吐温混和溶液消毒3min,再用无菌水冲洗5-7次（以上每次无菌水冲洗时分别手摇1min）
方案2.6:全刮皮后用5g/L洗衣粉搓洗5-10min，再用蒸馏水冲洗2-3次后进入超净工作台进行无菌消毒以及接种工作。
超净工作台中的操作：将冲洗过的枝条用无菌镊子移入无菌瓶（高温灭菌过的无菌瓶），用无菌水冲洗2-3次，用0.1%升汞+0.1%吐温混和溶液消毒5min,再用无菌水冲洗5-7次（以上每次无菌水冲洗时分别手摇1min）
方案三、不加Vc，对比升汞消毒时间(MS培养基：4.74g/LMs+_30g/L蔗糖+8g/L琼脂)