植物组织培养实验室的组成、仪器设备及基本操作(精要)
植物组织培养实验
植物组织培养实验室基本设备：超净工作台；培养室、；洗涤、消毒室，卧式高压消毒锅；温室（培养大棚）；常用仪器：1.蒸馏水器（学习操作），2.手提式高压消毒锅、卧式高压消毒锅（学习使用、操作），3.天平：⑴药物天平（工业天平）、粗天平、（精密度1/10）⑵分析天平（精密度1/10000），4.超净工作台（学习、使用、操作），5.电热干燥箱（烘箱），6.恒温光照培养箱（学习、操作），7.电冰箱，8.显微镜和解剖镜：①手提式解剖镜（学习、使用、操作）②立体解剖镜③普通显微镜，9.旋转培养机，10. 离心机（学习、使用、操作），11. 酸度测定仪：⑴精密PH4－7 试纸；⑵笔型袖珍酸度计。
必要的器皿：（一）玻璃器皿：1.培养器皿：①试管②三角烧瓶（锥形瓶）③圆形高形培养瓶（罐头瓶）④培养皿⑤扁身培养瓶⑥L 型和T 型管⑦凹面载玻片，2.盛装器皿：①试剂瓶②烧杯，3.计量器皿①量筒②容量瓶③吸管，4.其它器皿滴瓶、称量瓶、漏斗、玻璃管、注射器等实验室常用器皿。
（二）金属器械：1.镊子类：①20－25cm 长型镊子（接种或转移愈伤组织）②尖端弯曲“枪型”镊子（镊取较小的植物组织）③尖头钟表镊子和鸭嘴镊子（剥离表皮用）④尖端为小铲状镊子（挖取带琼脂培养基的培养物），2.解剖刀和刀类：①眼科用刀种牛痘疫苗的菱形刀（切割柔软组织中小细胞团）②解剖刀（手术刀）③双面刀片焊接在玻棒上（切取茎尖用）④锋利小刀、大刀和小铁锹，3.剪刀类：①解剖剪②眉剪③眼科剪④18－25cm 弯头剪⑤俢枝剪，4.接种针。
几种常用药剂的配制：（一）用95%尝试酒精配比不同浓度的酒精的配制。
学习配制70%和75%酒精。
（二）消毒剂:1. 20%次氯酸钠溶液：称取20g 次氯酸钠用少许水溶解，100ml 水定容。
2. 0.1%升汞（HgCl2）溶液：称取0.1g HgCl2少许水溶解，100ml水定容。
（三）洗涤剂:1. 2HCl酒精：95%酒精100ml 加入2mlHCl，2.硫酸－重铬酸钾洗液：取10g 重铬酸钾加入蒸馏水90ml，加热溶解冷却后，逐渐加入浓硫酸175ml，放入棕色玻璃瓶备用，（注意：切记不可将盛过洒精，甲醛等原剂的药品玻璃器皿直接泡入洗液在，因为重铬酸钾是一种强的氧化剂，一旦被还原氧化，洗液变绿，失去洗涤作用）。
实验室与基本操作(植物组织培养)
1 实验室与基本操作(植物组织培养)第一章实验室与基本操作第一节实验室及其基本设备实验室的大小取决于工作的目的和规模：1.以工厂化生产为目的，实验室规模太小，则会限制生产影响效率。
2.在设计组织培养实验室时，应按组织培养程序来设计避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。
植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。
要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。
实验室设计标准的组织培养实验室包括：洗涤室(准备室)；配置室；灭菌室；接种室；培养室；观察室等一、准备室作用：材料、培养器械的清洗、培养基准备、灭菌等的准备工作。
普通化学实验室：仪器及设备、化学药品。
纯水仪、冰箱、移液枪、过滤灭菌器、电炉、微波炉、磁力搅拌器、低速台式离心机、电脑等作用：配制培养基。
洗涤室：清洗、贮存器皿设施、鼓风干燥箱等。
作用：玻璃器皿、用具和培养材料的洗涤。
灭菌室：①高压蒸气灭菌装置：如立式、卧式和手提式灭菌器。
作用：培养基、器械、棉塞、无菌纸等灭菌消毒②细菌过滤器作用：进行植物材料分离接种的重要场所，需长期的无菌操作，对组织培养成功起关键作用。
试验设施；超净工作台；紫外灯；固定式和挪移式载物台；消毒器、广口瓶、酒精灯、酒精棉、机械支架；手术剪、解剖刀、解剖针、镊子等超净工作台(alaminarflowhood)工作原理:利用鼓风机驱动空气通过高效过滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。
净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。
作用：进行材料的培养的场所。
其大小、规模可根据工作性质设定。
以充分利用空间和节能为原则。
设备：可调控光、温、湿度等设备。
还有固定式培养架、转床、摇床。
合用于器官(芽、茎、花药等)、愈伤组织、细胞和原生质体的固体培养和液体培养。
作用：细胞学和组织学观察。
设备：需备有高倍显微镜、体视显微镜、倒置显微镜、各种相机、恒温箱、切片机、恒温水浴、滴瓶、染色缸、载玻片、盖玻片等。
第2章+植物组培实验室及实验基本操作
5.有机溶剂 5.有机溶剂
苯、二甲苯、丙酮等。 二甲苯、丙酮等。 适用范围： 适用范围：用于浸洗除去小件异形 仪器，如活栓孔、 仪器，如活栓孔、吸管及滴定管的 尖端等
(二)、洗涤方法
1.新购买的玻璃仪器的清洗 1.新购买的玻璃仪器的清洗 2.使用过的玻璃仪器的清洗 2.使用过的玻璃仪器的清洗 3.塑料器皿的清洗 3.塑料器皿的清洗 仪器清洗后 4.金属用品洗涤 4.金属用品洗涤 干净的标准： 干净的标准： 5.除菌过滤器清洗 5.除菌过滤器清洗 以内外不挂 有水珠为宜。 有水珠为宜。
第三节 培养基及其配制
一、培养基的种类 二、培养基的成分 三、培养基的配制 四、培养基的配制及其灭菌 五、常用培养基的配方及其特点
一、 培养基的种类
根据培养基成分种类和含量：主要有MS、 （一）根据培养基成分种类和含量：主要有MS、 White、 White、B5、N6、SH等 SH等 根据无机盐的浓度：1.高无机盐 2.高硝 （二）根据无机盐的浓度：1.高无机盐 2.高硝 3.中等无机盐 4.低无机盐 态氮 3.中等无机盐 4.低无机盐 培养基根据其态相:固体、 （三）培养基根据其态相:固体、液体 培养基根据培养物的培养过程：初代、 （四）培养基根据培养物的培养过程：初代、 继代。 继代。 培养基根据其作用：诱导、增殖、生根。 （五）培养基根据其作用：诱导、增殖、生根。 （六）培养基根据其营养水平：基本、完全。 培养基根据其营养水平：基本、完全。
1.干热灭菌 1.干热灭菌
适用于玻璃器皿和金属器 械的灭菌。操作方法： 械的灭菌。操作方法： 150℃，40min或120℃， 150℃，40min或120℃， 120min， 120min，如果发现芽孢杆 160℃，90－120min。 菌，160℃，90－120min。 使用的仪器干燥消毒柜。 使用的仪器干燥消毒柜。 干燥消毒柜
植物组织培养试验
植物组织培养试验《植物组织培养技术》实验指导实验一组培室设备参观及器皿的洗涤和灭菌一、目的要求：1.通过参观，了解组织培养室的几个主要组成部分和各部分应有的基本设备以及有关仪器的用途与功能。
2.通过实际操作，学会洗涤剂的配制和各种器皿的清洗和灭菌方法。
二、材料用具：高压灭菌锅、烘箱、超净工作台、双筒解剖镜、酸度测定仪、空调机、控温仪、百分之一与万分之一天平、电炉、玻璃器皿（试管、三角瓶、移液管、漏斗、烧杯、容量瓶、试剂瓶、量筒酒精灯），以及镊子、解剖刀、解剖针、手术剪，肥皂、洗衣粉、重铬酸钾、浓硫酸等。
三、说明：在进行各类具体的组培实验前，首先了解组培室的结构及主要设备的用途和性能是十分必要的,总体上的了解有利于以后各实验的进行以及正确的使用各种仪器和设备。
植物组织培养是一项十分细致的工作，为了保证植物外植体不受污染,第一关就是要对各种器皿进行清洗和消毒,使它们保持无菌状态，做这些工作同样有一套科学的方法和需要熟练的技巧，因此每个学生必须学好这套基本功。
四、方法和步骤：首先在老师带领下参观组培室，并听取讲解，然后配制洗液，称取工业用重铬酸钾40克，溶解在500ml在水中，然后徐徐加入450ml 粗制浓硫酸（或废硫酸）配好的溶液呈红色，铬酸洗液是一种强氧化剂，去污能力强，但玻璃器皿上沾有油脂、凡士林、石蜡等则用此液无效，铬酸洗液可反复使用，直到溶液呈青褐色为止。
此溶液腐蚀性强，洗涤时需注意。
每人清洗部分玻璃器皿，方法：清水洗净一泡入洗衣粉水溶液中进行洗刷f清水反复冲洗f蒸馏水淋一遍f烘干备用。
然后清洗部分较脏的玻璃器皿，方法：采用先碱后酸，即用洗衣粉洗刷后冲洗干净f晾干一侵入酪酸洗液，浸泡时间视器皿的肮脏程度而定f清水反复冲洗干净f蒸馏水淋洗一遍f烘干备用。
带有石蜡或胶布的器皿：先将其除去，再用常规洗涤，石蜡用水煮沸数次即可去掉，胶布粘着物则需用洗衣粉液煮沸数小时,再用水冲洗，凉干后浸入洗液，以后的步骤同前。
全面组织培养实验室及操作技术
饱和蒸汽压力与其对应的温度
饱和蒸汽压力
温度（℃）
饱和蒸汽压力
温度（℃）
kg/cm2
1b/m2
kg/cm2
1b/m2
0.0 0.141 0.281 0.442 0.563 0.703 0.844 0.984
0 2 4 6 8 10 12 14
100 103.6 106.9 109.8 112.6 115.2 117.6 119.9
1.0
MnSO4·4H2O
10
盐酸吡哆醇
1.0
ZnSO4·7H2O
2.0
激动素
0.1
Na2MoO4·2H2O
0.25
2,4－D
0.1－1.0
CoCl2·6H2O
0.025
盐酸硫铵
10
Na2-EDTA
37.3
B5培养基的组成和配方
4、N6培养基 ◆1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养设计 ◆ KNO3和（NH4）SO4含量高，不含钼
05
壹
贰
8、琼脂
是使用最普遍的凝固剂 用量一般在6—10g/L之间 颜色以浅、透明度高好，洁净为上品 除了琼脂外，在组织培养中还可以使用琼脂糖、结冷胶等。
生长素类 促进细胞伸长和分裂 促进生根、抑制器官脱落、性别控制、延长休眠、顶端优势、单性结实 诱导愈伤组织形成 溶于95%酒精或0.1mol/L的NaOH中，后者的溶解效果更好 常用的生长素： IAA(吲哆乙酸) NAA (奈乙酸 ) 2,4-D(二氯苯氧乙酸) IBA(吲哆丁酸) 促进细胞分裂分化
温度 光照 湿度 气体 培养基的渗透压 pH值
植物材料一般最适温度在25±2℃之间
组培实验仪器配置清单
组培实验仪器配置清单植物组织培养(Planttissueculture)是以植物生理学为基础发展起来的一门新生的生物技术学，科针对此项目，托普云农特整理出组培实验仪器配置清单供新老客户参考。
如果您需要更详细的清单和参数。
植物组培实验室设置条件及器具一、实验室组成二、基本设备三、培养器皿及实验用具四、无菌条件及创设五、无菌操作六、组培的环境条件和营养条件组织培养实验室布局的总体要求基本实验室辅助实验室实验室组成准备室缓冲室无菌操作室培养室细胞生物学实验室温室生化分析实验室基本实验室布局平面图实验台搁架培养架培养架培养架培养架药品及仪器柜无菌台无菌台搁架拉窗冰箱搁架水槽电炉门 4.5m 3.0m 3.5m 4.0m 准备室缓冲室无菌室培养室组织培养准备实验室缓冲室培养室无菌室（一）无菌室（二） 1 冰箱酸度计电炉天平纯水器培养基分装器搅拌器2、灭菌设备蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。
蒸汽压力灭菌锅干热消毒柜无菌瓶顶过滤装置喷雾消毒器（参考图）（参考图）3、无菌操作设备超净工作台无菌接种箱4、细胞培养设备摇床培养架H Z C - 2 5 0 恒温振荡培养箱1 5 0 C 2 5 0 D 光照培养箱5、细胞学鉴定设备光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜倒置显微镜光学显微镜1、玻璃器皿三、培养器皿及实验用具培养皿三角瓶培养瓶2、金属材质用具镊子解剖刀接种针无菌条件物理方法：物理灭菌干热、湿热、射线处理、物理除菌、过滤、离心、沉淀等化学方法：消毒剂、抗菌素灭菌1、灭菌方法2、灭菌（1）培养基灭菌：高温高压湿热灭菌法压力在9.8×10 4 —10.8×10 4 Pa 温度在121℃灭菌20—30min （2）玻璃器皿灭菌：蒸汽高压消毒灭菌干热消毒灭菌（3）塑料器皿灭菌：多采用高压蒸汽消毒灭菌（4）金属用具灭菌：灼烧灭菌浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼烧，冷却后使用（5）接种室灭菌空气消毒灭菌接种室超净工作台紫外灯照射70%—75% 的酒精擦洗培养材料的接种紫外灯照射（6）外植体灭菌流水冲洗10—20min 或更长时间70%—75% 酒精中浸泡30s 0.1%—0.2%氯化汞液中浸泡10min左右蒸馏水冲洗4—5次在10%的次氯酸钠、饱和漂白粉浸泡30min左右备用六、无菌操作实验员消毒实验室、无菌台灭菌实验器材的灭菌无菌接种消毒实验台卫生培养室培养1、消毒，更换实验服、帽子与鞋子，进入接种室。
植物组织培养实验室的构建和操
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3） 消毒间
配备实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细 菌过滤设备、干热消毒柜、电炉等。灭菌锅的选择 应根据不同的要求选择不同型号的灭菌锅。一般实 验室可选用小型的医用手提式高压灭菌锅，较大的 实验室可选用立式自动控制压力和温度的灭菌锅。 生产性的实验室可选用大型的卧式灭菌锅。
如果没有条件的话，可以将上述工作间合并成 一个准备间，要求是设备的安装和排列要合理、房 间要宽敞、明亮、透风，地面要便于清洁、防滑。
14
15
2）培养基配制间
面积60平方米左右，配备的主要仪器设 备有 ：冰箱、天平、微波炉、pH计、培养 基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电 炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管 、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。冰箱 以体积180-200L为宜，用于储存培养基母 液、激素维生素等贵重药品、彩色胶卷、 及保存植物材料。天平应有不同感量。
PHS-802中文台式酸度计
通用型或经济型酸度计43
（三）观察分析仪器设备
显微镜 类型： 倒置显微镜 普通显微镜 荧光显微镜 电子显微镜 体视显微镜
第一章 组培的基本条件及一般技术
一、实验室设置及仪器设备
实验室是进行组培研究的主要场所 ，应能满足清洗、培养基制备、储 藏、无菌操作、培养、鉴定等多方 面的工作。
第一章 组培的基本条件及一般技术
1.构成与配置
准备室
缓冲室 基本实验室 无菌操作室
实验室 组成
培养室
细胞生物学实验室 辅助实验室 温 室
第一章植组物培组的基织本培条件养及一般技术
▪ 第一章 植物组织培养实验室的构建 和操作技术
第一章 组培的基本条件及一般技术
第一节 实验室及主要设备
第一章 组培的基本条件及一般技术
1 植物组织培养实验室的构建
医用手提式灭菌锅
不锈钢立式灭菌锅
3、超净工作台
陈列于操作室（接种室）内
类型：垂直式和水平式
作用：无菌操作
（二）药品贮存和配制仪器设备
1、冰箱
作用：低温保存材料，存 放药品、培养基母液、激 素、酶制剂。
2、天平
陈列于制备室中
作用：称取大量元素、微 量元素、酶制剂
3、酸度计
注意！ 实际应用中要通过试验筛选。
基本培养基对西洋杜鹃增殖的影响
三、培养基的配制
（一）培养基母液的配制
1.基本培养基母液 类型：四液式（钙盐最后加入）、三液式、 五液式（钙盐和铁盐单独配制）。 成分：大量元素、微量元素、铁盐、 有机成 分。 贮藏：2~4冰箱内贮藏。 倍数：10X、100X。 标记：名称、配制倍数、日期等。
取容器（搪瓷缸），加入1/3~2/3左右的蒸馏水，加热至沸腾； 称取定量的琼脂和蔗糖加入上述煮沸的水中并不断搅拌， 直到完全溶解。 用移液管量取所需量的母液加入一只干净的烧杯中， 待琼脂完全溶解后加入 用NaOH或稀HCl调节pH值 高压灭菌，（121℃，15 min~20min） 冷却，取出，备用
植物组织培养材料移到田间前，通常 先移到温室进行练苗，待生根成活后， 再移到大田。
二、仪器和设备
（一）无菌操作设备 １、烘箱：
作用：干燥洗后的器皿
高温干热灭菌 测定培养物的干重时烘干培 养材料。
2、灭菌锅
类型：普通医用消毒锅 大的高压灭菌锅
作用：培养基、水和各种用具的消毒
（四）培养设备 1.空调
作用：控制培养温度
2.加湿器和去湿机
控制培养室内湿度状况
3.定时器
植物组织培养实验室的构建与操作技术
第二十六页，共82页
思考题
• 1、一个正规的组织培养实验室应具备哪 些房间？
• 2、组织培养常用的设备有哪些？各有何 用途？
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第二节 培养基及其配制
定义：
培养基(culture medium)——根据植物生长所需营养 成分，配制成的供植物生长的人工制作的营养物质。是 植物组织培养的重要基质。
第十七页，共82页
接种室主要设备及用具
• 接种箱
主体为玻璃箱罩、入口有袖罩
• 超净工பைடு நூலகம்台
操作台面半开放，方便、操作舒适；通过过滤的空气连续不断吹出，大于 0.03um直径的微生物很难在工作台的操作空间停留
• 解剖镜
分离微茎尖、转基因等
• 无菌操作用的器具
酒精灯、镊子、解剖刀，解剖刀片、剪刀、培养瓶，刀剪架等
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第二十二页，共82页
第二十三页，共82页
小型臭氧发生器
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二、培养器皿及用具
1、培养器皿（包括玻璃器皿和塑料器皿） 各种规格的培养皿、三角瓶、试管、培养瓶。
2、微孔过滤器（细菌过滤器） 0.45微米，抽滤灭菌用，如激素
3、器械用具 镊子、剪刀、解剖刀、接种针（铲）等。
到严格无菌的条件
第二页，共82页
组培的常见技术路线： 外植体→愈伤组织→不定芽→生根→再生植株
基本的工艺流程： 容器具洗涤，物质准备→配置培养基并灭菌→外植体 消毒与无菌操作接种→观察、记录、处理（脱分化、 再分化、继代） →再生植株
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标准的组培实验室 洗涤室、准备室、无菌室、培养室、观察室等 基本组培实验室 准备室（含配药室）、缓冲间、无菌操作室、 培养室
植物组织培养实验室的组成及特点
植物组织培养实验室的组成及特点植物组织培养实验室是用于进行植物组织培养的科研实验室，主要用于研究植物生长、发育和遗传变异等方面的问题。
该实验室的组成和特点如下。
一、组成：1. 培养室：用于培养植物组织的主要场所，具备恒温、恒湿、光照等环境条件控制设备，以提供适宜的生长环境。
2. 器械室：用于存放和管理植物组织培养所需的器械、耗材和试剂等。
3. 培养箱：用于在无菌条件下培养植物组织，保证培养过程的无菌性。
4. 植物材料库：用于存放和管理各类植物材料，如种子、离体器官等。
5. 实验台：用于进行植物组织培养实验的操作台，配备显微镜、离心机、培养皿、移液器等实验器材。
6. 数据分析室：用于对实验数据进行统计和分析，以及进行相关的科研文献检索和资料整理。
二、特点：1. 无菌环境：植物组织培养实验室的一个重要特点是要保持无菌环境，以防止外界微生物的污染对实验结果的影响。
因此，实验室内需要进行严格的无菌操作，包括无菌培养箱的使用、培养基的制备和无菌操作技术的掌握等。
2. 精密控制条件：植物组织培养实验室需要精密控制培养环境的温度、湿度、光照等条件，以提供适宜的生长环境。
这样可以促进植物组织的生长和发育，并提高培养效果。
3. 多种培养方法：植物组织培养实验室可以采用多种培养方法，如组织培养、离体培养、原代培养等。
这样可以满足不同研究目的的需求，并开展多样化的实验研究。
4. 多样化的研究内容：植物组织培养实验室的研究内容涉及植物生长、发育、遗传变异、细胞学、生理学、分子生物学等多个方面。
通过培养不同植物组织或植物材料，可以对这些方面进行深入研究，为进一步理解植物的生物学特性提供重要依据。
5. 团队合作和交流：植物组织培养实验室通常由一支研究团队组成，团队成员之间需要密切合作和交流，共同解决实验中遇到的问题，提高实验效率和科研水平。
此外，实验室还需要与其他实验室、学术机构和产业界进行合作和交流，以促进学术交流和科技创新。
植物组织培养实验室的构建和操作技术
各种灭菌方法及其使用范围
干热灭菌 湿热灭菌 熏蒸灭菌 过滤灭菌 药剂灭菌 烧灼灭菌 辐射灭菌
玻璃器皿、器械 培养基、蒸馏水、器械、棉塞等 接种室、培养室 液体培养基、蒸馏水 培养材料 器械、瓶口、棉塞、包头纸 接种室。培养间
1）干热灭菌
适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。操作方 法：150℃ 、40min或120℃ 、120min， 如果发现芽孢杆菌，160℃ 、90～120min
对有材料的培养室，也可以采用乙二醇加热熏蒸
（三）无菌操作技术
污染来源
人为因素（工作人员本身）：工作服、帽、口罩、酒精擦手。
物品因素
器 培养皿：洗→热压
皿 玻璃器皿：洗→干热（干热箱）或晾干
和 接种用具：用CCL4布擦→湿布擦→
2）湿热灭菌
适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水 、棉塞、纸等。121℃ 维持20～30min 注意点：加足水、排尽气、气压降到0时， 才能开盖
3）过滤灭菌
培养基的灭菌一般用高压高温处理，但如果培 养基中某些成分遇到高温分解（如某些生长调节剂 GA3、玉米素等），就需要过滤灭菌。另外酶、 血清等也需要过滤灭菌
生化分析实验室
基本实验室布局平面图
搁 水槽 架
搁 4.0 架 m
电 炉
门
实 验 台
准备室
4.5m
冰箱 无菌台
药 品 及 无菌台 仪
器 无菌室
柜
缓冲室
搁
拉 窗
培养架
培养架
架 培养室
培
培
养
养
架
架
3.0m
3.5m
A Glimpse of Plant Tissue Culture
第一章 组培的基本条件及一般技术
【VIP专享】实验一、植物组培室基本设备及培养基配置
（1）培养基配制：取大量元素 50ml；微量元素、铁盐、维生素、肌醇各 10ml；琼脂 4.5g；糖 30g、 激素用量按培养要求加入，定容 1000ml，加热至 800C 左右至琼脂溶解。
（2）调整 pH：用 0.5.0N NaOH 或 0.5N HCl 调整 pH，一般要求 pH 5.8—6.0。 （3）分装：趁热把培养基分装入培养瓶，旋紧瓶盖，置于高压锅内。 （4）灭菌：接通高压灭菌锅电源，加热至压力为 0.1MPa，停电，排气至压力为 0，再加热至压力为 0.1 Mpa，保温 20 分钟，停电，排气至压力为 0，取出培养基，置于干净的场所。灭菌过的固体培养基在 温度 600C 左右时不能摇动，否则会影响凝固效果。
植物组织培养实验
实验一 植物组培室基本设备及培养基实验室的基本设备及其用途、并掌握使用方法；学习培养基的配制方法。 二、实验过程： （一）组培室基本设备： 1、超净工作台：由鼓风机、中效及高效过滤板、紫外灯、照明灯、工作台面、控制面板组成。 2、高压灭菌锅：由内锅、外锅、进水口、出水口、安全阀、排气管、压力表、电热管等组成。 3、其它设备：天平、冰箱、培养架、接种器具、培养瓶及其它一般实验室常用仪器、玻璃器皿等。 （二）培养基配制：（以配制 1 升 MS 培养基为例） 1、母液配制； 2、1 升 MS 培养基配制：
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6.培养学生观察、思考、对比及分析综合的能力。过程与方法1.通过观察蚯蚓教的学实难验点，线培形养动观物察和能环力节和动实物验的能主力要；特2征.通。过教对学观方察法到与的教现学象手分段析观与察讨法论、，实对验线法形、动分物组和讨环论节法动教特学征准的备概多括媒，体继课续件培、养活分蚯析蚓、、归硬纳纸、板综、合平的面思玻维璃能、力镊。子情、感烧态杯度、价水值教观1和.通过学理解的蛔1虫.过观适1、察于程3观阅 六蛔寄.内列察读 、虫生出蚯材 让标容生常3根蚓料 学本教活.见了 据身： 生，师的2的、解 问体巩鸟 总看活形线作 用蛔 题的固类 结雌动态形业 手虫 自形练与 本雄学、三动： 摸对 学状习人 节蛔生结、4物、收 一人 后和同类 课虫活构请一并蚯集 摸体 回颜步关 重的动、学、归蚓鸟 蚯的 答色学系 点形教生生让纳在类 蚓危 问。习从 并状学理列学线平的害 题蚯四线人 归、意特出四生形面生 体以蚓、形类 纳大图点常、五观动玻存 表及的鸟请动文 本小引以见引、察物璃现 ，预身类 3学物明 节有言及的导 、巩蚯的上状 是防体之生和历 课什根蚯环学 怎固蚓主和， 干感是所列环史 学么据蚓节二生 样练引要牛鸟 燥染否以举节揭 到不上适动、回 区习导特皮类 还的分分蚯动晓 的同节于物让答 分。学征纸减 是方节布蚓物起 一，课穴并学课 蚯生。上少 湿法?广的教， 些体所居归在生前 蚓回4运的 润；泛益学鸟色生纳.靠物完问 的答蛔动原 的4，处目类 习和活环.近在成题 前蚯虫的因 ？了以。标就 生体的节身其实并 端蚓寄快及 触解上知同 物表内特动体结验总 和的生利慢我 摸蚯适识人 学有容点物前构并结 后生在用一国 蚯蚓于与类 的什，的端中思线 端活人问样的 蚓飞技有 基么引进主的的考形 ?环体题吗十生行能着 本特出要几变以动境，？大 节活的1密 方征本“特节化下物.并会让为珍 近习形理切 法。课生征有以问的引小学什稀 腹性态解的 。2课物。什游题主.出起结生么鸟 面和结蛔关观题体么戏：要蚯哪利明？类 处适构虫系察：的特的特蚓些用确等 ，于特适。蛔章形殊形征这疾板，资 是穴点于可虫我态结式。种病书生料 光居是寄的们结构，五典？小物， 滑生重生鸟内学构，学、型5结的以 还活要生类部习与.其习巩的如鸟结爱 是的原活生结了功颜消固线何类构鸟 粗形因的存构腔能色化练形预适特护 糙态之结的，肠相是系习动防于点鸟 ？、一构现你动适否统。物蛔飞都为结。和状认物应与的。虫行是主构课生却为和”其结病的与题、本理不蛔扁的他构？特环以生8特乐虫形观部特8三征境小理页点观的动位点、梳相组等这；，哪物教相，引理适为方些2鸟，育同师.导知应单面鸟掌类结了；？生学识的位你握日构解2互.生。办特认线益特了通动观手征识形减点它过，察抄；吗动少是们理生蛔报5？物，与的解.参虫一了它和有寄主蛔与结份解们环些生要虫其构。蚯都节已生特对中。爱蚓会动经活征人培鸟与飞物灭相。类养护人吗的绝适这造兴鸟类？主或应节成趣的为要濒的课情关什特临？就危感系么征灭来害教；？；绝学，育，习使。我比学们它生可们理以更解做高养些等成什的良么两好。类卫动生物习。惯根的据重学要生意回义答；的3.情通况过，了给解出蚯课蚓课与题人。类回的答关：系线，形进动行物生和命环科节学动价环值节观动的物教一育、。根教据学蛔重虫点病1.引蛔出虫蛔适虫于这寄种生典生型活的线结形构动和物生。理二特、点设；置2.问蚯题蚓让的学生生活思习考性预和习适。于穴居生活的形态、结构、生理等方面的特征；3.线形动物和环节动物的主要特征。
植物组培实验室设置条件及器具.
4、用70%—75%的酒精擦拭工作台和双手。
5、用沾有70%—75%酒精的纱布擦拭盛培养基的 培养器皿，放进工作台。 6、把解剖刀、剪刀、镊子等器械浸泡在95%的 酒精中，再在火焰上消毒，放在器械架上。 7、在酒精灯火焰附近切割备用的接种材料。 8、打开瓶口，用火焰烧瓶口，转动瓶口使瓶口 各部分都烧到。
2.微量营养元素：
3、碳源 5、肌醇 7、天然复合物 8、琼脂 12、细胞分裂素类 4、维生素类 6、氨基酸 如：水解酪蛋白、玉米胚乳、酵母提取物 9、活性炭 10、抗生素 11、生长素类
13、赤霉素类和脱落酸
因地制宜，创设实验
上述是正规的组培条件，很多学校并不具备这样 的条件。但因为组培实验在课标中是应用要求，最好 创设条件做一下。 比如做一个组培的实验最低要求就是要有一个灭 菌锅和一个超净台，这个就能满足洁净的要求。 如果没有灭菌锅可用高压锅代替，进行细菌的灭 菌； 如果没有超净台，可选择比较容易做的材料，就 用胡萝卜，在外面的开放的环境下，点上两个酒精灯， 最主要保证在火焰温度的范围内，温度可以保证无菌， 瓶子也置于酒精灯的外焰灼烧灭菌，而胡萝卜也进行 外部的消毒，用消毒的刀片割里面的韧皮部即可。
植物组培实验室设置条件及器具
一、实验室组成 二、基本设备
三、培养器皿及实验用具
四、无菌条件及创设
五、无菌操作
六、组培的环境条件和营 养条件
一、实验室组成
组织培养实验室布局的总体要求
便于隔离 便于操作
便于灭菌
便于观察
准备室
缓冲室
基本实验室 实验室 组成 辅助实验室 无菌操作室 培养室 细胞生物学实验室
0.1%—0.2%氯化汞 液中浸泡10min左右 在10%的次氯酸钠、 饱和漂白粉浸泡 30min左右
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大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、 Mg、S 分别占植物干重的百分数为18％、 10％、70％、0.3%、0.07％、0.3%、0.3 ％、0.07%、0.05％。
微量元素：Fe、B、Mn、Zn、Mo、Cu、 Co、Cl等。
（一）准备室（化学实验室）：
1. 主要功能：
用于培养器皿的清洗、干燥、培养基 的配制、分装和灭菌、试管苗的出瓶及 整理等工作。
2. 主要仪器设备及用品：
药品柜、实验台、水槽、超声波洗涤 仪、凉干架、干燥箱、各种玻璃器皿 （烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶、三角 瓶等）、蒸馏水制造装置。
天平、移液器、 pH计、水浴锅、微波 炉、电炉、磁力搅拌器、蠕动泵、及培 养基分装用品等、高压灭菌锅、 冰箱。
第二章 植物组织培养实验室的组 成、仪器设备及基本操作
第二节 培养基的组成、配制与灭菌
一、培养基（medium）的组成和作用
通常植物组织培养所用培养基包括以下六大类
成分，即矿质营养、有机成分、植物生长 调节剂、碳源、琼脂以及其他附加物等。
培养基的主要指标是: 营养成分的浓度 植物生长调节物质的浓度
c.不少培养基颜色加深。
d.体积和浓度有所变化。
e.营养成分有时受到破坏。
3、不耐高温材料的灭菌：
采用过滤灭菌，如IAA、ZT、天然有机 添加物等。
4、外植体的表面灭菌：
采用70－75％乙醇（10-30秒）、有效 氯1％的次氯酸钠（5-30分钟）、0.1－ 0.2%的氯化汞（2-15分钟）等杀菌剂中加 入几滴吐温－20或80（Tween－20或80） 效果较好。
（一）矿质营养：
矿质营养又称无机营养，是指植物生 长发育所需要的各种化学元素。
矿质元素的生理作用：
（1）组成各种化合物，成为结构物质；
（2）许多酶和附酶的组成部分，参与 代谢；
（3）维持离子平衡、胶体稳定及电荷 平衡等电化学作用；
（4）影响形态发生和组织、器官的建 成等。
根据植物对元素的吸收量，可以把植物必 需元素分为大量元素和微量元素。
（3）灼烧灭菌：接种时，解剖刀及镊子等浸入 95％乙醇，然后取出在酒精灯火焰上灼烧杀菌。
2、培养基灭菌：
采用高压蒸汽灭菌。120℃ 15－20分 钟。
培养基体积越大，灭菌时ห้องสมุดไป่ตู้越长。
高温高压灭菌对培养基成分的影响：
a.pH值普遍下降。
b.产生混浊或沉淀，这主要是由于一些离子发 生化学反应而产生混浊或沉淀。例如Ca+2与 PO4-3化合，就会产生磷酸钙沉淀。
体视显微镜、普通显微镜、倒 置显微镜、荧光显微镜、配套显 微照相装置、普通相机或数码相 机、切片机及配套制片及染色用
品等。
体视显微镜
用途：放大倍数5~80 倍主要用于植物形态 分化的观察、茎尖的 切取。
普通光学显微镜
用途：用于植物切 片观察，确定植物 的发育进程，如： 不定芽、不定胚的 分化过程以及其它 器官组织的分化等。
3、点燃酒精灯，进行操作，接种材料前 后，灼烧瓶口，工具要灼烧彻底，防止交 叉污染。
4、保持培养室的洁净，发现污染及时挑 出，以减少污染源。
5、操作中穿工作服、戴口罩、工作帽， 出入接种室换拖鞋以保持接种室的洁净。
第二章 植物组织培养实验室的组成、 仪器设备及基本操作
第一节 实验室结构、仪器设备及操作技术 一、植物组织培养实验室的结构及设计要求 二、 实验室基本操作
1、大量元素：
N、P、K、Ca、Mg、S等6种大量元素依靠各种无 机盐提供。
不同植物种类和不同试验目的对元素的使用量要求 不同，需经试验确定。
目前已选择出多种培养基配方用于植物组织培养。其 中以MS应用最广泛。
（二）灭菌：
灭菌 是指用物理和化学方法杀死物体表面和内 部的所有微生物（包括芽胞），使之呈无菌状态。 经过灭菌的物品称“无菌物品”。
1、器具灭菌：培养皿、解剖刀、镊子等用品。
（1）干热灭菌：铝箔包好后，放于恒温干燥箱 内，150 ℃保温2小时，成本较高。
（2）高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌锅内120 ℃ 15－20分钟 。
植物组织培养实验室的组成、仪 器设备及基本操作
第一节 实验室结构、仪器设备及操作技术
一、植物组织培养实验室的结构及设计要求：
完整的植物组织培养室通常包括洗涤室、化学实验室、 接种室、培养室、细胞学实验室等部分。可以根据实际需 要和条件进行设计。
但从功能上至少包括准备室（化学实验室）、接种室以 及培养室三部分，并且按顺序排列。 在化学实验室与接种 室之间应留有缓冲空间。
倒置显微镜
用途：主要用于细 胞、原生质体的细 胞分裂和细胞团形 成的观察。
二、实验室基本操作：
（一）洗涤：
1. 普通器皿：采用洗衣粉、洗洁精等中 性洗涤剂洗涤。
2. 难清洗器皿及移液管等：用水清洗后 再用重铬酸钾洗液浸泡，最后清水冲洗， 或用超声波仪清洗。
重铬酸钾洗液的配制方法：43g重铬酸钾溶于 1000ml蒸馏水中，将浓硫酸缓慢倒入重铬酸钾 溶液中，浓度比例为1：1。
（三）无菌操作：
1、保持接种室的无污染环境，定期熏蒸 或喷雾处理。接种前打开超净工作台及紫 外灯照射20-30分钟，关闭紫外等灯后使气 体散出后开始操作。
2、保持超净工作台的洁净：接种前用70 ％乙醇擦拭台面或用喷壶喷雾，操作前， 将手和手臂用70％乙醇消毒，所需试验用 品用乙醇擦拭后放入超净工作台。
1、功能：
主要用于植物材料的培养。
要求室内洁净并能保持一定的温度、 光照以及湿度，以促进植物材料的生 长和分化。
2、仪器设备及用品：
培养架及灯管、摇床（振荡 器）、空调、自动定时器、加湿及 除湿器、光照培养箱等。
（四）细胞学实验室：
1、功能：
主要用于培养材料的显微观察及 照相等。
2、仪式设备及用品：
（二）接种室（无菌操作室）：
1、功能：
接种材料的灭菌、接种以及培养物的 继代转接等。
接种室要求保持洁净，与化学实验室 之间应设置缓冲室。
2、仪器设备及用品：
超净工作台、紫外灯、小推车、搁架、 磁盘、接种工具（各种镊子、解剖刀、手 术剪、普通剪刀接种针、酒精灯、手持喷 雾器、细菌过滤器等）等。
（三）培养室：