免疫学技术ppt课件
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医学免疫学免疫学检测技术ppt课件
14
双抗体夹心法、间接法ELISA
15
间接法ELISA
16
ELISA操作图
可调移液器
8孔道可调移液器 17
3. 放射免疫测定（RIA）
常用 125I，测定微量物质 4. 化学发光免疫分析
常用 鲁米诺，测定超微量物质 5. 免疫印迹法（Western Blotting）
先做凝胶电泳将蛋白质分区 再将蛋白质转移至固相载体 后用酶免疫、放射免疫等技术加以测定
1. 免疫荧光法（IFA ）
荧光素可双色；使免疫复合物呈荧光；可定性、定位
（1）直接荧光法 荧光素一抗 对每种抗体作标记 特异 测Ag
（2）间接荧光法： 荧光素二抗 不必标记每种抗体 敏感 测Ag/Ab
12
免疫荧光法
13
2. 酶免疫测定（EIA）: ELISA与酶免疫组化
（1）双抗体夹心法ELISA：查抗原
10
II ) Precipitation （二）沉淀反应
可溶性抗原 + 相应抗体肉眼可见的沉淀物 使用半固体琼脂凝胶为介质——琼脂扩散/免疫扩散
1. 单向免疫扩散：抗原 的定量（Ig、C3 ）
2. 双向免疫扩散：抗原/抗体的定性、组成及Ag相关性分析 3. 免疫电泳： 电泳 + 双向免疫扩散 （抗原分析）
21
3. 细胞因子检测
（1）免疫学检测法—— 夹心法ELISA FCM
（2）生物学检测法—— 细胞增殖（或细胞增殖抑制）试验 细胞毒（或细胞毒抑制）试验
（3） 分子生物学检测法 RT-PCR测定mRNA
4. 皮肤试验： 测试IV型超敏反应能力
22
（二）B细胞功能测定
1. B细胞增殖试验 小鼠：LPS 人： SPA；抗IgM
双抗体夹心法、间接法ELISA
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间接法ELISA
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ELISA操作图
可调移液器
8孔道可调移液器 17
3. 放射免疫测定（RIA）
常用 125I，测定微量物质 4. 化学发光免疫分析
常用 鲁米诺，测定超微量物质 5. 免疫印迹法（Western Blotting）
先做凝胶电泳将蛋白质分区 再将蛋白质转移至固相载体 后用酶免疫、放射免疫等技术加以测定
1. 免疫荧光法（IFA ）
荧光素可双色；使免疫复合物呈荧光；可定性、定位
（1）直接荧光法 荧光素一抗 对每种抗体作标记 特异 测Ag
（2）间接荧光法： 荧光素二抗 不必标记每种抗体 敏感 测Ag/Ab
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免疫荧光法
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2. 酶免疫测定（EIA）: ELISA与酶免疫组化
（1）双抗体夹心法ELISA：查抗原
10
II ) Precipitation （二）沉淀反应
可溶性抗原 + 相应抗体肉眼可见的沉淀物 使用半固体琼脂凝胶为介质——琼脂扩散/免疫扩散
1. 单向免疫扩散：抗原 的定量（Ig、C3 ）
2. 双向免疫扩散：抗原/抗体的定性、组成及Ag相关性分析 3. 免疫电泳： 电泳 + 双向免疫扩散 （抗原分析）
21
3. 细胞因子检测
（1）免疫学检测法—— 夹心法ELISA FCM
（2）生物学检测法—— 细胞增殖（或细胞增殖抑制）试验 细胞毒（或细胞毒抑制）试验
（3） 分子生物学检测法 RT-PCR测定mRNA
4. 皮肤试验： 测试IV型超敏反应能力
22
（二）B细胞功能测定
1. B细胞增殖试验 小鼠：LPS 人： SPA；抗IgM
医学免疫学全套完整版PPT课件
医学免疫学全套完整版PPT 课件
2024/1/30
1
目录
2024/1/30
• 免疫学概述 • 抗原与抗体 • 固有免疫系统 • 适应性免疫系统 • 免疫应答调节与异常 • 免疫学应用与展望
2
01
免疫学概述
2024/1/30
3
免疫学定义与研究对象
2024/1/30
免疫学定义
研究生物体对抗原的识别、应答 及排除的科学。
细胞因子在适应性免疫中作用
03
参与免疫细胞活化、增殖、分化及效应功能的调节，对固有免
疫和适应性免疫应答均有重要作用。
19
05
免疫应答调节与异常
2024/1/30
20
免疫应答调节机制
2024/1/30
固有免疫应答的调节
通过模式识别受体（PRR）识别病原体相关分子模式（PAMP），启动固有免疫应答，并 通过正反馈机制放大应答。
旁路途径
又称替代途径，由微生物或外援异物直接激活， 不依赖于抗体。
凝集素途径
通过识别病原体表面的甘露糖等糖类分子而激活 ，参与固有免疫应答的早期阶段。
2024/1/30
14
补体系统激活途径和效应
溶解作用
直接溶解某些细菌和病毒感染的 细胞。
免疫调节作用
参与适应性免疫应答的调节和激 活。
01
02
调理作用
促进吞噬细胞对病原体的吞噬和 清除。
03
04
炎症介质作用
参与炎症反应，吸引和激活炎症 细胞。
2024/1/30
15
04
适应性免疫系统
2024/1/30
ห้องสมุดไป่ตู้
16
T淋巴细胞活化、增殖与分化
2024/1/30
1
目录
2024/1/30
• 免疫学概述 • 抗原与抗体 • 固有免疫系统 • 适应性免疫系统 • 免疫应答调节与异常 • 免疫学应用与展望
2
01
免疫学概述
2024/1/30
3
免疫学定义与研究对象
2024/1/30
免疫学定义
研究生物体对抗原的识别、应答 及排除的科学。
细胞因子在适应性免疫中作用
03
参与免疫细胞活化、增殖、分化及效应功能的调节，对固有免
疫和适应性免疫应答均有重要作用。
19
05
免疫应答调节与异常
2024/1/30
20
免疫应答调节机制
2024/1/30
固有免疫应答的调节
通过模式识别受体（PRR）识别病原体相关分子模式（PAMP），启动固有免疫应答，并 通过正反馈机制放大应答。
旁路途径
又称替代途径，由微生物或外援异物直接激活， 不依赖于抗体。
凝集素途径
通过识别病原体表面的甘露糖等糖类分子而激活 ，参与固有免疫应答的早期阶段。
2024/1/30
14
补体系统激活途径和效应
溶解作用
直接溶解某些细菌和病毒感染的 细胞。
免疫调节作用
参与适应性免疫应答的调节和激 活。
01
02
调理作用
促进吞噬细胞对病原体的吞噬和 清除。
03
04
炎症介质作用
参与炎症反应，吸引和激活炎症 细胞。
2024/1/30
15
04
适应性免疫系统
2024/1/30
ห้องสมุดไป่ตู้
16
T淋巴细胞活化、增殖与分化
免疫学检测技术(课堂PPT)
.
36
一、凝聚反应(Agglutination)
二、沉淀反应
1、溶液中的沉淀反应
2、凝胶扩散沉淀
3、免疫电泳Biblioteka 血清免疫电泳火箭电泳
对流免疫电泳
三、补体参与的反应
四、免疫标记的抗原抗体技术
酶联免疫吸附（ELISA）
.
37
一、凝集反应
凝集反应是指颗粒抗原与相应抗体结合 反应出现的可见性现象。颗粒抗原如完整 的细菌、红细胞等与相应抗体相混合，在 一定条件下出现凝集。凝集反应中抗原称 为凝集原，抗体称为凝集素。
. Equivalence – Lattice formatio6 n
抗原或抗体检测原理
.
7
• 免疫学（Immunology）：
是研究抗原性物质、免疫系统、免疫应 答的规律及免疫应答的调节的一门科学。
• 免疫的定义（Immunity）：免疫是机体识 别自我与非自我的过程。排除异己，维护 自身稳定的生理反应。
体细胞会因物理、化学和病毒等生物因素的影响，使
细胞发生癌变，形成肿瘤等，机体可识别、清除这些
细胞，这是免疫系统的第三个功能。当这一功能低下
或失调时，会导致肿瘤或癌. 症。
9
抗原 （Antigen）
抗原概念 凡能刺激机体产生特异性抗体和致敏淋巴细胞，
并能与相应抗体或致敏淋巴细胞在体内或体外发生 反应的物质。
亲缘关系越远，差异越大，抗原性越强。
自身抗原：自身组织发生异常变异、免疫功能紊乱、眼球晶体 蛋白、精子蛋白、甲状腺蛋白
2. 大分子胶体：一般在10 kD以上 。
3. 具有复杂的立体结构或空间构象.
如明胶分子量虽然为100 kD，但结构简单，免疫原性差。
医学免疫学全套课件ppt
易接近性是指抗原表面这些特殊的化学基 团与淋巴细胞表面相应受体相互接触的难 易程度。
易接近性常与这些化学基团在抗原分子中 分布的部位有关。
三、机体因素
遗传、年龄、生理状态、个体差异等因素
抗原进入机体的方式和途径也有关。
四、抗原进入机体的方式
抗原进入机体的数量、途径、两次免疫间的 时间间隔、次数以及免疫佐剂类型等都影 响机体对抗原的应答。
决定簇； ②多存在于抗原分子的内部。 ③一般不能引起免疫应答，称为隐蔽性表
位。 3.抗原结合价 能和相应抗体结合的功能性表位的数目。 半抗原为单价，天然抗原为多价。
二、T细胞表位与B细胞表位
实验： BSA 免疫动物 抗BSA抗体 针对BSA的效 应淋巴细胞
天然BSA 结合抗BSA的抗体 刺激T细胞增殖
三、异嗜性抗原（Forssman 抗原）
概念：是一类与种属特异性无关，存在于不同 种系生物间的共同抗原。
如：溶血性链球菌的多糖抗原或蛋白质抗原与 人的心肌、心瓣膜或肾小球基底膜之间；
大肠杆菌O14型的脂多糖与人的结肠粘膜之间； 肺炎支原体与链球菌MG株之间等。
四、同种异型抗原
红细胞抗原（ABO血型系统、RH血型系统）、 白细胞抗原、免疫球蛋白的抗原性
（3）无MHC限制性
（4）诱导的T细胞应答是通过分泌大量 细胞因子而参与某些病理生理过程的发 生与发展。
4.生物学意义 （1）毒性作用与诱导炎症反应 （2）自身免疫病 （3）免疫抑制
八、丝裂原（有丝分裂原）
第二节 免疫学发展简史
根据所用的技术和方法，免疫学的发展历史可分 为三个时期：
一、免疫学的经验时期
1.用人痘苗接种预防天花。
2.接种牛痘苗预防天花。
Jenner
易接近性常与这些化学基团在抗原分子中 分布的部位有关。
三、机体因素
遗传、年龄、生理状态、个体差异等因素
抗原进入机体的方式和途径也有关。
四、抗原进入机体的方式
抗原进入机体的数量、途径、两次免疫间的 时间间隔、次数以及免疫佐剂类型等都影 响机体对抗原的应答。
决定簇； ②多存在于抗原分子的内部。 ③一般不能引起免疫应答，称为隐蔽性表
位。 3.抗原结合价 能和相应抗体结合的功能性表位的数目。 半抗原为单价，天然抗原为多价。
二、T细胞表位与B细胞表位
实验： BSA 免疫动物 抗BSA抗体 针对BSA的效 应淋巴细胞
天然BSA 结合抗BSA的抗体 刺激T细胞增殖
三、异嗜性抗原（Forssman 抗原）
概念：是一类与种属特异性无关，存在于不同 种系生物间的共同抗原。
如：溶血性链球菌的多糖抗原或蛋白质抗原与 人的心肌、心瓣膜或肾小球基底膜之间；
大肠杆菌O14型的脂多糖与人的结肠粘膜之间； 肺炎支原体与链球菌MG株之间等。
四、同种异型抗原
红细胞抗原（ABO血型系统、RH血型系统）、 白细胞抗原、免疫球蛋白的抗原性
（3）无MHC限制性
（4）诱导的T细胞应答是通过分泌大量 细胞因子而参与某些病理生理过程的发 生与发展。
4.生物学意义 （1）毒性作用与诱导炎症反应 （2）自身免疫病 （3）免疫抑制
八、丝裂原（有丝分裂原）
第二节 免疫学发展简史
根据所用的技术和方法，免疫学的发展历史可分 为三个时期：
一、免疫学的经验时期
1.用人痘苗接种预防天花。
2.接种牛痘苗预防天花。
Jenner
医学免疫学—ppt课件
免疫缺陷病
免疫缺陷病是指由于免疫系 统遗传基因异常或后天因素 所致的免疫系统功能障碍性 疾病。以下是一些常见的免 疫缺陷病
X连锁重症联合免疫缺陷病 ：这是一种常见的免疫缺陷 病，会导致反复感染、肺炎 和腹泻等症状，患者通常在 出生后不久死亡。
选择性IgA缺陷：这是一种 较常见的免疫缺陷病，会导 致反复感染和过敏反应等症 状。
03
免疫应答
固有免疫应答
非特异性防御机制
01
包括皮肤、黏膜等屏障，以及炎症反应等，能够快速识别并清
除感染。
吞噬作用
02
吞噬细胞如巨噬细胞、中性粒细胞等，能够吞噬病原体，并对
其进行分解和清除。
自然杀伤细胞（NK细胞）
03
能够识别并杀伤病毒感染的细胞和肿瘤细胞。
适应性免疫应答
淋巴细胞的激活
淋巴细胞在接触抗原（抗原是能够诱导免疫应答的物质）后被激 活，产生特异的抗体或细胞毒性效应。
移植免疫的定义
移植免疫是免疫学的一个重要应用领域，主要涉及对供、受体的选择、 预处理以及移植后的免疫监测与调控，以确保移植成功并减少免疫排斥 反应。
移植免疫的分类
根据供体的来源，移植免疫可分为自体移植免疫和异体移植免疫。其中 ，异体移植免疫又包括同种异基因移植免疫和异种移植免疫。
03
免疫排斥反应
在移植过程中，受体对供体的抗原产生免疫应答，导致移植器官被排斥
肿瘤细胞表达免疫抑制分子：肿瘤细胞表达免疫抑制分子（如PD-L1、 CTLA-4等）可以抑制T细胞的活化和功能，从而逃避机体免疫攻击。
肿瘤细胞诱导免疫抑制细胞：肿瘤细胞可以诱导机体产生免疫抑制细胞 （如调节性T细胞、髓源性抑制细胞等），从而抑制机体免疫系统的功能 。
免疫学应用-PPT课件精选全文
将PHA注射于受试者前臂屈侧皮内， 6-12小时后局部出现红斑硬结，24-48 小时达高峰，即为阳性反应，常用于检 测细胞免疫水平。
祝愿 同学 们前 程似 锦！
免疫标记技术：——免疫荧光技术
免疫荧光直接法
免疫荧光间接法
免疫标记技术：——免疫酶技术
1、包被抗体 洗
1、包被抗原 洗
2、加抗原 洗
2、加抗体 洗
3、加酶标抗体 洗
3、加酶标抗球 蛋白
洗
4、加底物显色 ELISA双抗体夹心法
4、加底物显色 ELISA间接法
免疫标记技术：—放射免疫测定法（RIA）
细胞免疫检测——T细胞亚群测定
用间接荧光法 检测CD4和CD8 T细胞
CD4/CD8正常 比值为1.7-2.0左 右。
细胞免疫检测——淋巴细胞转化试验
---细胞介导的细胞毒试验
B细胞的检测
B细胞数量的检测 (1)膜表面免疫球蛋白(SmIg)的检测：SmIg是 B细胞特有的表面标志，因此是鉴定B细胞的可 靠指标。用抗SmIg抗体，借助直接免疫荧光法 或免疫组织化学法进行检测。
(2)间接免疫荧光法：应用针对B细胞表面抗 原(CDl9、CD20、CD21、CD22等)的特异性 单克隆抗体，以间接免疫荧光法对B细胞进 行鉴定和计数。
B细胞功能测定
B细胞增生试验 原理与T细胞增生试验相同； 但刺激物主要为美洲商陆(PWM)、富
含SPA的金葡菌、细菌脂多糖等。
体内免疫学检测
放射免疫测定法（RIA）是将放射性核 素分析的灵敏性和抗原抗体反应的特异性结 合的测定技术。具有灵敏、精确、特异性高、 易规范化及自动化等优点的一种先进的免疫 标记技术。
免疫标记技术：—金免疫技术（金标法）
祝愿 同学 们前 程似 锦！
免疫标记技术：——免疫荧光技术
免疫荧光直接法
免疫荧光间接法
免疫标记技术：——免疫酶技术
1、包被抗体 洗
1、包被抗原 洗
2、加抗原 洗
2、加抗体 洗
3、加酶标抗体 洗
3、加酶标抗球 蛋白
洗
4、加底物显色 ELISA双抗体夹心法
4、加底物显色 ELISA间接法
免疫标记技术：—放射免疫测定法（RIA）
细胞免疫检测——T细胞亚群测定
用间接荧光法 检测CD4和CD8 T细胞
CD4/CD8正常 比值为1.7-2.0左 右。
细胞免疫检测——淋巴细胞转化试验
---细胞介导的细胞毒试验
B细胞的检测
B细胞数量的检测 (1)膜表面免疫球蛋白(SmIg)的检测：SmIg是 B细胞特有的表面标志，因此是鉴定B细胞的可 靠指标。用抗SmIg抗体，借助直接免疫荧光法 或免疫组织化学法进行检测。
(2)间接免疫荧光法：应用针对B细胞表面抗 原(CDl9、CD20、CD21、CD22等)的特异性 单克隆抗体，以间接免疫荧光法对B细胞进 行鉴定和计数。
B细胞功能测定
B细胞增生试验 原理与T细胞增生试验相同； 但刺激物主要为美洲商陆(PWM)、富
含SPA的金葡菌、细菌脂多糖等。
体内免疫学检测
放射免疫测定法（RIA）是将放射性核 素分析的灵敏性和抗原抗体反应的特异性结 合的测定技术。具有灵敏、精确、特异性高、 易规范化及自动化等优点的一种先进的免疫 标记技术。
免疫标记技术：—金免疫技术（金标法）
医学免疫学ppt课件
白细胞是免疫系统的主要组成细 胞，包括淋巴细胞、粒细胞、单
核细胞等。
T细胞是细胞免疫的主要效应细 胞，能够识别并结合抗原，通过 产生细胞因子和杀伤性T细胞来
清除抗原。
B细胞是体液免疫的主要效应细 胞，能够产生抗体来中和抗原。
免疫应答的调节和机制
免疫应答的调节包括正调节和负调节 ，正调节促进免疫应答的发生，负调 节抑制免疫应答或防止过度免疫。
获得性免疫缺陷病
这类疾病通常是由于后天因素（如感染、营养不良、药物等）导致的免疫系统受损或功能下降。例如艾滋病（ AIDS）就是一种由人类免疫缺陷病毒（HIV）感染引起的获得性免疫缺陷病，患者通常会出现严重的免疫系统崩 溃和感染风险增加。
免疫相关疾病的种类和发病机制
自身免疫性疾病
超敏反应性疾病
肿瘤免疫学
CHAPTER 03
抗感染免疫
抗细菌免疫
非特异性免疫
包括皮肤、黏膜等屏障，以及巨 噬细胞、NK细胞等对细菌的直接 杀伤作用。
特异性免疫
通过抗原-抗体反应，激活T细胞 和B细胞等免疫细胞，产生针对细 菌的特异性抗体和记忆细胞。
抗病毒免疫
非特异性免疫
包括呼吸道、胃肠道等黏膜免疫系统 ，以及干扰素等细胞因子的抗病毒作 用。
医学免疫学
汇报人：
2023-11-29
CONTENTS 目录
• 免疫系统概述 • 免疫应答机制 • 抗感染免疫 • 自身免疫性疾病 • 免疫缺陷病与免疫相关疾病 • 肿瘤免疫学
CHAPTER 01
免疫系统概述
免疫系统的定义和组成
免疫系统定义
免疫系统是生物体内一套防御和保护机制 ，能够识别和清除外来物质、感染和体内 突变细胞，维持内环境稳定。
兽医免疫学《免疫学技术概述》课件
，可获得高水平的抗体。
18
四、采血与抗血清的处理和保存
采血方式可以从心脏直接取血。也可通过动脉 放血，待血液凝固后用针筒或吸管吸取血清。
3000r/min 离 心 ， 15 分 钟 ， 取 上 层 血 清 ， 56℃ 水浴30分钟，灭活后分装，-30℃冷冻保存。
19
，背部两侧ห้องสมุดไป่ตู้颌下、耳后等处皮内或皮下。
免疫间隔时间也是重要因素，特别是首次与第二次之间更
应注意。第一次免疫后，因动物机体正处于识别抗原和B细胞
增殖阶段，如很快接着第二次注入抗原，极易造成免疫抑制。
一般3-4周比较适合。大部分动物，小动物可间隔10-14d，大
动物则在2月左右。在加强免疫最后一次的一周内采集抗血清
免疫制备技术：指制备与免疫检测有关 制剂的技术。
3
三、抗原抗体反应的特点
*1.特异性 *2.比例性 *3.可逆性
4
1. 特异性（specificity）
抗原分子，只能与由它刺激所产生的抗体结合而起 反应的专一性能。
如：抗猪瘟病毒的抗体只能与猪瘟病毒结合，而不 能与口蹄疫病毒结合。
*交叉反应(cross reaction) 若两种不同抗原具有部分相同
10
抗体
一
混
、
有
抗
SPAg
原
抗
体
结
合
抗体-SPAg
抗体-SPAg
二
分
、
离
分
剂
离
抗
体
抗体
可逆性示意图
11
四、影响血清学反应的因素
1.血清质量 2.电解质 3.温度 4.pH
12
1.血清质量
注意：
《现代免疫学技术》课件
分子免疫技术
基因敲除技术
利用基因编辑技术对特定基因进行敲除或突变，研究 基因在免疫应答中的作用。
基因转染技术
将外源基因导入到细胞内，研究基因对细胞免疫功能 的影响。
蛋白质组学技术
利用蛋白质组学方法对蛋白质进行分离、鉴定和分析 ，了解蛋白质的功能和相互作用。
04
现代免疫学技术在医学中的 应用
疾病诊断
03
现代免疫学技术分类
抗原抗体技术
酶联免疫吸附试验（ELISA）
利用酶标记的抗体或抗原与特异性抗原或抗体结合，通过显色反应对样本中的抗原或抗体 进行定性或定量检测。
免疫荧光技术
利用荧光物质标记抗体，与样本中的抗原结合，通过荧光显微镜观察荧光信号，对抗原进 行定位和定性分析。
免疫组化技术
利用标记的抗体与样本中的抗原结合，通过组织化学方法显示抗原，对组织或细胞内的抗 原进行定位和定性分析。
详细描述
免疫组化技术广泛应用于肿瘤诊断中，通过对肿瘤组织中的特定抗原进行标记， 有助于确定肿瘤的性质、来源和分化程度，为临床医生提供重要的诊断依据。
案例二
总结词
CAR-T细胞免疫疗法是一种利用基因工程技术改造T细胞，使其表达嵌合抗原受体（CAR），增强T细 胞对肿瘤细胞的识别和杀伤能力，从而达到治疗肿瘤的目的。
20世纪80年代，基因工程技术的兴起，为免疫学技术的发展提
供了新的工具和手段。
免疫学技术的应用领域
疾病诊断
利用免疫学技术对疾病进行早期诊断、病情 监测和预后评估。
疫苗研发
通过免疫学技术研发新型疫苗，预防和控制 传染病的发生和传播。
药物研发
利用免疫学技术对药物进行筛选、制备和质 量控制。
生物安全检测
免疫学ppt课件
免疫学的发展历程
01
02
03
经验免疫学时期
通过观察疾病现象和疫苗 接种等实践，积累了一些 免疫学经验。
实验免疫学时期
通过动物实验和细菌学研 究，揭示了免疫应答的基 本规律。
分子免疫学时期
利用分子生物学和基因工 程技术，深入研究了免疫 系统的分子机制和基因调 控。
免疫学在医学领域的重要性
01
02
03
答的治疗方法。
THANKS
感谢观看
生物医学研究
在基础医学研究中，免疫学检 测技术可用于研究免疫系统的 结构和功能，揭示疾病的发生
和发展机制。
06
免疫学相关疾病与治疗
超敏反应性疾病
I型超敏反应
速发型，如过敏性休克、药物引起的药疹等 。
III型超敏反应
免疫复合物型，如局部免疫复合物病、全身 性免疫复合物病等。
II型超敏反应
细胞型，如输血反应、新生儿溶血病等。
免疫学ppt课件
目录
• 免疫学概述 • 免疫系统组成与功能 • 抗原与抗体 • 免疫应答与调节 • 免疫学检测技术与应用 • 免疫学相关疾病与治疗
01
免疫学概述
免疫学的定义与研究对象
免疫学的定义
免疫学是研究生物体免疫系统结 构、功能和免疫应答机制的科学 。
研究对象
包括免疫器官、免疫细胞、免疫 分子以及它们之间的相互作用和 调节机制。
利用放射性同位素标记的抗原或抗体与待测样品中的相应抗体或抗原 结合，通过测量放射性强度来推算待测物质的含量。
免疫荧光技术
利用荧光素标记的抗原或抗体与待测样品中的相应抗体或抗原结合， 在荧光显微镜下观察荧光信号，从而进行定性或定位检测。
免疫印迹技术
相关主题
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和分布情况.阳性细胞以拟标记的细胞为前提,
阳性表达必须在细胞特定的抗原部位,若不在
抗原所在部位的阳性表达和非目标细胞即使
阳性也不应作为判断依据.根据抗原在细胞中
分布和阳性颗粒沉淀部位可分5种类型：
-
19
⑴ 胞膜型 阳性颗粒主要分布于细胞膜表 面,形成一薄层棕黄色颗粒包绕整个细胞.此类 型常见于某些膜抗原,如上皮膜抗原（EMA） 、白细胞共同抗原（LCA）及B细胞、T细胞 、粒细胞相关抗原（GAA）
13
ELISA试验用耗材、试剂及仪器
耗材:移液器、吸头、酶标板、滤纸 试剂:酶标抗体、抗体稀释液、封闭液、底物
溶液、终止液 仪器:酶标仪
-
14
ELISA结果分析
1.根据标准品的含量及检测OD值结果,应用线
性回归方程进行统计分析,可求得待测样品
的定量值
2.上机前将标准品的数量及含量按要求在酶
标仪上进 行设置,机器自动计算打印出标准
c.加入可能含特异性抗原的待检液
d.温育后清洗
e.加入酶标记特异性抗体
f.温育后清洗
g.加入酶作用底物
h.测定颜色反应深浅
-
8
竞争法
a、将已知抗体吸附于载体上 b、温育后清洗 c、加入可能含特异性抗原的待检
液和酶标记的已知抗原液 d、温育后清洗 e、加入酶作用底物 f、测定颜色反应深浅
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9
生物素-亲和素系统
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4
Ⅰ.ELISA Ⅱ.免疫组化 Ⅲ.荧光抗体标记 Ⅳ.荧光原位杂交（FISH） Ⅴ.分光光度法
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5
Ⅰ.酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）
以酶标记抗体或抗原进行的抗体抗原反应.
酶结合物具有双功能:高度特异的免疫反应、
生物催化放大作用
曲线及各待测样品的定量结果
-
15
Ⅱ.免疫组织化学技术
免疫组化是组织化学的一种,是利用已知的
抗体或抗原能特异性结合的特点,通过化学反
应使结合在特异性抗体上显示剂(酶、金属离
子、同位素等)显示一定的颜色,在显微镜下观
察颜色的变化,在抗原抗体结合部位确定组织
、
-
16
1.阳性标记色度特征
免疫组化细胞阳性程度与抗原含量、分布密
-
25
3.阳性标记组织学特征
根据免疫组化阳性细胞的组织学特点, 免疫组化阳性细胞或阳性颗粒可呈以下类 型排列:局灶型 弥漫型 片块型 网状型 腺 管型 腔缘型 菊团型
-
26
4.阳性标记强度特征
细胞免疫组化标记的阳性强度根据显 色程度分为弱阳性、阳性和强阳性;也可依 据阳性细胞在细胞中所占比例大致分为:弱 阳性,阳性细胞≤25%;阳性,阳性细胞25%~ 50%;强阳性,阳性细胞>50%
度、标记方法有关. 一般抗原含量越多、密度
越高、标记方法越敏感,阳性显色则越强.淡黄
色,弱阳性;黄色,阳 性;棕黑色,强阳性 .结果判
断中,后两者有意义,前者除标本处理和方法学
因素外,与细胞轻度异常表达及某些细胞摄取
了周围组织抗原有关 -
17
-
18
2.阳性标记细胞学特征
免疫组化阳性细胞反映抗原在细胞中的定位
-
27
5.非特异着色特征
下面情况可干扰免疫组化结果的观察和判断 ： （1）抗体交叉反应:是由于该抗原决定簇同
时存在于多种组织细胞，如GFAP可同时存在 于星形胶质细胞和唾液腺肌上皮.S-100蛋白 则更为严重,可表达于多种组织细胞.因此应 全面了解和认识该抗体- 的功能和标记范围28
（2）肿瘤细胞异常表达:可选用多种标记证 实或排除,鉴别其真正组织来源或向某一组织 细胞分化 （3）肿瘤细胞吞噬组织抗原:某些恶性肿瘤 细胞摄入周围正常组织细胞成分,虽然后者也 存在某些抗原,但不属于瘤细胞固有成分,胞浆 内抗原定位较模糊,因此应该区别
基本方法:间接法、双抗体夹心法、竞争法、
生物素-亲和素系统
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6
间接法
a.将已知可溶性抗原吸附于载体 b.温育后清洗 c.加入可能含特异性抗体的待检液 d.温育后清洗 e.加入酶标记的二抗 f.温育后清洗 g.加入酶作用底物 h.测定反应颜色深浅
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7
双抗体夹心法
a.将已知抗体吸附于载体上
b.温育后清洗
内分布通常为弥漫性或局限性.弥漫性是阳性
颗粒弥漫而均匀地分布于整个细胞浆,局限性
是指阳性颗粒呈小斑点状或斑块状局限于细
胞浆中的某一部位、核周或细胞浆的一侧
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⑷ 微绒毛型 抗原颗粒主要分布于腺癌细
胞的微绒毛,胞浆和胞膜可以是阳性或阴性表
达.此形最常见于各种腺癌,如甲状腺、乳腺、
胃肠、胆道、卵巢浆液性腺 癌等.特点是阳性
生物素-亲和素系统（biotin-avidin system）
生物素:一种维生素H,经活化后可与抗体、抗原、
酶以多 配一方式共价结合,且不影响它们的活性
亲和素:从卵蛋白中提取的一种碱性糖蛋白,可与
酶偶合,以一配多的方式对生物素有很强的亲和力
BAS用于检测的基本方法：BAB法或BRAB法/BA
法/ABC法
免疫学实验技术
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1
免疫学技术--抗原抗体反应
可对抗原或
抗体进行定性
、
定量、定位的
检测
影响因素:
电解质、温度
酸碱度
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2
免疫标记技术:
是指用荧光素、放射性同位素、 酶、 发光剂或电子致密物质等作为示踪剂,标 记抗体或抗原进行的抗原抗体反应
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3
特点:高度灵敏、特异、快速, 定性、定量、 定位
分类:免疫酶技术、免疫荧光技术、放射 免疫技术、免疫电镜技术、免疫胶 体金技术和发光免疫测定
颗粒靠近腔面,基底部可呈阴性反应.在肿瘤标
记物中多见于上皮膜抗原、上皮特异性抗原
、结肠相关抗原、卵巢癌抗原等,甲状腺腺癌
中甲状腺球蛋白常以该形式出现
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⑸ 复合型 常规免疫组化标记中,同一种 抗原可以同时表达于胞膜和胞浆、胞核和胞 浆、微绒毛和胞浆,很少发现胞膜和胞核同时 表达.应注意组织标本固定不及时造成抗原移 位
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⑵ 胞核型 阳性颗粒定位于细胞核,呈均匀 分布位于核膜下,有的呈小斑块状不规则分布. 多见增殖细胞核抗原、Ki-67及激素受体中雌 激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和基因 p53等
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21
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⑶ 胞浆型 阳性颗粒主要分布于细胞浆.大
部分抗原均属此型,如细胞角蛋白、波形蛋白
、神经丝蛋白、肌红蛋白、α1-抗胰糜蛋白酶 及前列腺特异性抗原（PSA）等.抗原在胞浆-10源自BAS法与常规酶法-
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ELISA操作注意事项
1.待检样品不应反复冻融 2.加样前充分混匀样品 3.洗板:保证洗涤次数,确保冲洗干净 4.加完终止液在要求时间内上机检测,反 应温度最好在37℃
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ELISA检测标本
1.血清或血浆 2.尿液 3.脑脊液、关节液等体液 4.细胞培养上清等
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