高中生物选修一 植物组织培养技术复习进程

高中生物选修一 植物组织培养 技术
二、植物组织培养类型：
根据不同分类的依据可以分为不同类型。
根据培养材料不同分为：
（1）完整植株培养：对幼苗和较大植株等的培养。 （2）胚胎培养：包括成熟胚、幼胚、子房、胚珠等的培养。 （3）器官培养：包括离体根、茎、叶、果实、种子、花的培养。 （4）组织培养：如分生组织、薄壁组织、输导组织培养。 （5）细胞培养：对单细胞或较小的细胞团进行培养。 （6）原生质体培养：对去掉细胞壁后所获得的原生质体进行培养
配备的主要仪器设备有 ：天平、微波炉、pH计、 药品柜、器械柜、电炉、各种规格的培养瓶、培 养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶、 冰箱等。
? 冰箱用于储存培养基母液、激素维生素等贵重药
品、彩色胶卷、及保存植物材料。天平应有不同 感量。
1.3 消毒
配备高压灭菌锅、排风灭火设备等。 如果没有条件的话，可以将上述工作合并成一 个准备间，要求是设备的安装和排列要合理、房间 要明亮、透风，地面要便于清洁、防滑。
各种灭菌方法及其使用范围
干热灭菌 湿热灭菌 熏蒸灭菌 过滤灭菌 药剂灭菌 烧灼灭菌 辐射灭菌
玻璃器皿、器械 培养基、蒸馏水、器械、棉塞等 接种室、培养室 液体培养基、蒸馏水 培养材料 器械、瓶口、棉塞、包头纸 接种室、培养间
（1）干热灭菌
适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。操作方 法：150℃ 、40min或120℃ 、120min， 如果发现芽孢杆菌，160℃ 、90～120min
脱分化也称去分化，是指离体条件下生长的细胞、组织 或器官逐渐失去原来的结构和功能而恢复分生能力，形成 无组织结构的细胞团或愈伤组织的过程。再分化是由脱分 化形成的愈伤组织重新分化出特定细胞、组织和器官的过 程。
细胞全能性的表达：尽管理论上每个细胞都具 有全能性，但实际表达难易程度却随植物种类、 组织和细胞的不同而异。
灭菌方法：将生长调节剂或酶配成一定浓度， 用注射器注入微孔滤膜虑，滤膜孔径0.22～0.45 微米。制培养基时，现将培养基高压灭菌，待降至 50℃左右时，加入适量的激素，然后分装。
（4）射线灭菌
主要是利用紫外灯进行照射，适合实验室 空气、操作台等，灭菌时间20～30min。 注意：关灯后5min后再进入。超净工作台 关灯后要打开风机。
矮牵牛茎尖离体培养培养
人参细胞 悬浮培养
三、植物组织培养技术的理论基础
植物细胞的全能性(Plant cellular totipotency） 从理论上讲，植物体的每个生活细胞都具有该
植物体的全部遗传信息，在特定的离体培养条件 下，具有发育成完整植株的潜在能力。
分化、脱分化与再分化：分化是指个体发育过 程中，不同部位的细胞形态结构和生理功能发生 改变，形成不同组织或器官。
在30-50m2。在实验室的一侧设置专用的洗涤水 槽，用来清洗玻璃器皿。中央实验台还应配置2 个水槽，用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大， 可以购置一台洗瓶机。准备1-2个洗液缸，专门 用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿。此外还 应配置落水架、干燥箱、柜子、超声波清洗器等。 地面应耐湿并排水良好。
1.2配制培养基
（5）火焰灼烧灭菌
用火焰灼烧达到灭菌目的，适用于 接种器皿的灭菌。
（6）消毒剂
适用外植体、实验器皿、操作表面、皮肤等。 几种常用消毒剂的效果比较
消毒剂
使用浓度(%)
消毒时间 (min)
乙醇
70-75
0.1-3
新洁尔灭
10～20
5～30
氯化汞 过氧化氢
抗菌素
0.1～1 10～12 4～50mgl-
培养室应配有培养架、摇床、光照培养箱、生化培 养箱、自动控时器等。日光灯一般用40W，固定在培养 架的侧面或搁板的下面，每层有两支日光灯，距离在 20cm，光照强度为2000-3000lx。
2.2、温室
为试管苗提供满足生长的适宜环境条件。
§2 实验基本操作
灭菌
（一）、灭菌工作是极其重要的。
首先应建立有菌和无菌的概念有菌的范畴： 有菌：凡是暴露在空气中的物体，至少其表面都是有菌的。 如植物的表面、超净工作台的台面，未处理的工具和手等。 无菌：高压高温处理（工具、器皿、培养基等）
物理或化学处理； 火烤后的物体； 健康的动植物不与内外部表面接触的组织 内部可能是无菌的（有时也有内生菌，但 不会影响培养，也不会污染）
（二）、灭菌的方法
1、物理方法：干热、湿热、过滤（0.25微 米）、紫外灯、超声波等。 2、化学方法：使用灭菌剂或抗菌素，如酒 精、次氯酸钠、升汞、漂白粉、高锰酸钾、 双氧水、福Biblioteka Baidu马林等
（2）湿热灭菌
适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、 棉塞、纸等。121℃ 维持20～30min 注意点：加足水、排尽气、气压降到0时， 才能开盖
（3）过滤灭菌
培养基的灭菌一般用高压高温处理，但如果培 养基中某些成分遇到高温分解（如某些生长调节剂 GA3、玉米素等），就需要过滤灭菌。另外酶、 血清等也需要过滤灭菌
？ 操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。 室内应配有超净工作台，紫外灯、解剖镜、各种 接种器械等。
1.5 培养室
为了控制培养室的温度和光照时间及其强度，培养 室的房间不要窗户，但应当留一个通气窗，并安上排气 扇。室内温度由空调控制，光照由日光灯控制。一般要 分两间，一为光照培养室，一为暗培养室。培养室外应 有一预备间或走廊。
§1 实验室设置及仪器设备 §2 实验基本操作 §3 培养基的成分及其配制 §4 培养条件的选择
§1 实验室设置及仪器设备
实验室是进行组培研究的主要场所，应 能满足清洗、培养基制备、储藏、无菌 操作、培养、鉴定等多方面的工作。
1．基本实验室
1.1 洗涤 根据工作量的大小决定其大小，一般面积控制
1.4 无菌操作室
无菌操作室主要用于实验材料的接种操作，所以又叫 接种室。通常由里外两间组成，外间是缓冲间，用于 准备工作，还有防止污染的作用。缓冲间的门应该与 接种室的门错开，两个门也不要同时开启，以保证无 菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲间内应该设 有水槽、实验台、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌操 作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修，工作人员进入