实验三血清总胆固醇的测定
实验三血清总胆固醇的测定
二、样品测定
取3支试管编号后，分别加入试剂，与标准曲线同时作比色测定:
管号
对照
样品①
样品②
稀释的未知血清样品
(mL)
0
0.40
0.40
邻苯二甲醛试剂(mL)
0.20
0.20
0.20
冰乙酸(mL)
0.40
0
0
混合酸(mL)
4.00
4.00
混合酸：冰乙酸100mL与浓硫酸100mL混合。
标准胆固醇贮存液(1mg/mL：准确称取胆固醇100mg溶于冰乙
酸中，定溶至100mL
标准胆固醇工作液(0.1mg/mL):将上述贮存液以冰乙酸稀释10倍，即取10mL用冰
乙酸稀释至100mL
二、测试样品
0.1mL人血清以冰乙酸稀释至4.00mL。
三、器材
实验三 血清总胆固醇的测定
目的要求
了解并掌握胆固醇测定的原理和方法。
实验原理
血清胆固醇(chol)测定是动脉粥样硬化性疾病防治、 临床诊断和 营养研究的重要指标。正常人血清胆固醇含量范围为100 ~250mg/mL。
胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物，它不仅参与血浆蛋白的组成， 而且也是细胞的必要结构成分， 还可以转化成胆汁酸盐、 肾上腺皮质 激素和维生素D等。胆固醇在体内以游离胆固醇及胆固醇酯两种形式 存在，统称总胆固醇。总胆固醇的测定有化学比色法和酶学方法两类。 本实验采用前一种方法。
正常人血浆和血清中含有酯类虽多，但却清澈透明？
胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛产生紫红色物质， 此物
质在550nm波长处有最大吸收。因此，可用比色法作总胆固醇的定量 测定。胆固醇含量在400mg/100mL以内时，与光吸收值呈良好线性关 系。
血清总胆固醇测定实验报告
1. 掌握血清总胆固醇测定的原理和方法。
2. 了解血清总胆固醇测定的临床意义。
3. 培养实验操作技能，提高实验分析能力。
二、实验原理血清总胆固醇（Total Cholesterol，TC）是指血液中所有胆固醇的总和，包括游离胆固醇和胆固醇酯。
血清总胆固醇测定是临床诊断和预防动脉粥样硬化、冠心病等疾病的重要指标。
测定血清总胆固醇的方法主要有酶法、化学比色法、荧光法等。
本实验采用酶法测定血清总胆固醇，利用胆固醇氧化酶（COD）和过氧化物酶（POD）催化反应，将胆固醇氧化生成胆烷4烯3酮，再与4-氨基安替比林和酚在过氧化物酶的作用下生成红色醌亚胺，通过比色法测定吸光度，从而计算出血清总胆固醇含量。
三、实验材料1. 试剂：胆固醇氧化酶试剂、过氧化物酶试剂、4-氨基安替比林试剂、酚试剂、胆固醇标准液、血清样本、蒸馏水、721型分光光度计等。
2. 仪器：恒温水浴箱、移液器、试管、试管架等。
四、实验步骤1. 标准曲线绘制：取一系列已知浓度的胆固醇标准液，分别加入胆固醇氧化酶试剂、过氧化物酶试剂、4-氨基安替比林试剂和酚试剂，混匀后置于37℃水浴箱中保温15分钟。
以蒸馏水为空白对照，在510nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，胆固醇浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2. 样本测定：取血清样本，按照与标准曲线绘制相同的步骤，测定吸光度。
3. 结果计算：根据标准曲线，计算血清总胆固醇含量。
五、实验结果1. 标准曲线绘制：以吸光度为纵坐标，胆固醇浓度为横坐标，绘制标准曲线，相关系数R²=0.997。
2. 样本测定：测定血清总胆固醇含量，结果显示：血清总胆固醇为5.8mmol/L。
1. 本实验采用酶法测定血清总胆固醇，操作简便、准确度高，适合临床应用。
2. 标准曲线绘制过程中，应注意标准液的浓度范围，以保证标准曲线的线性关系。
3. 在实验操作过程中，应注意试剂的配制、仪器的校准等，以保证实验结果的准确性。
4. 血清总胆固醇测定结果对临床诊断和预防动脉粥样硬化、冠心病等疾病具有重要意义。
血清总胆固醇的测定(胆固醇氧化酶法)
化，显色与比色五个阶段。目前临床上常用的是
胆固醇氧化酶法
化学法的种类很多，由于显色反应的特异性不同，其结果有一定 的差异。
Abell-Kendall(L-B反应)法
（化
公学
认测
）定
显色稳定
法
三氯化铁-硫酸反应法（Zak法） 操作简便
灵敏度约5倍于L-B反应
法
特异性差，干扰因素比L-B法多 。Zak法更适合于科研使用 。胆固醇酯与游离胆固醇显 色程度比较接近
（mmol/l）
• 参考值 • 3.0-5.20mmol/l。危险阈值：5.20-6.20mmol/l 。
高胆固醇血症：>=6.20mmol/l
思考题
• （1）血红蛋白，胆红素，维生素c对本实验结果
有干扰，原因是什么？
• （2）试查文献说明胆固醇的定量测定还有哪些方
法？每种方法的原理是什么？
• （3）基础液配置中胆酸钠的作用是什么?
表7-7血清总胆固醇的测定
项目
血清/μL
胆固醇标准 液/μL 蒸馏水/μL
酶试剂/μL
测定管
50
—
— 1.50
标准管 — 50
— 1.5水浴中保温15分钟，用空白
管调零，在500nm波长处测吸光度。
• 计算公式： 血清总胆固醇=A测定/A标准 x5.17
临床意义动脉粥样硬化原发性高血脂症贫血败血症甲状腺功能亢进实验目的血清中总胆固醇游离胆固醇游离脂肪酸低密度脂蛋白高密度脂蛋白极低密度脂蛋白乳糜微粒测定方法化学法
血清总胆固醇的测定 （胆固醇氧化酶法）
主讲人：刘杰
同组人（刘杰、杨宇光、陈琪、刘婷婷）
我们为什么要做这个实验呢？
• 化验介绍：血清胆固醇是血脂的成分之一，
血清胆固醇的定量测定
六、计算
100ml血清中胆固醇的质量（mg） A 1C 0 m= ÷0.04×100 A0
注意事项：
1、颜色反应与加磷硫铁试剂混合时的产热 程度有关，因此，所用试管口径和厚度要 一致；加磷硫铁试剂必须与乙醇分成两层， 然后混合，不能边加边摇，否则显色不完 全；磷硫铁试剂要加一管混合一管，混合 的手法、程度也要一致；混合时试管发热， 注意勿使试管内液体溅出，以免损伤衣服、 皮肤和眼睛。
管号/试剂 无水乙醇 胆固醇标准液
乙醇抽提液 磷硫铁试剂 A560
空白管 1.0ml
标准管
测定管
1.0ml
1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml
注：磷硫铁试剂须沿管壁缓缓加入，
与乙醇液分成两层，立即迅速振 摇20次，放置10分钟（冷却至室
温）后，于560nm进行比色，以
空白管调零读取各管吸光度。
移液枪的养护及注意事项
1.当移液器吸嘴有液体时切勿将移液器水 平或倒置放置，以防液体流入活塞室腐蚀 移液器活塞。 2.移液器使用完毕后，把移液器量程调至 最大值，且将移液器垂直放置在移液器架 上。 3.如液体不小心进入活塞室应及时清除污 染物。
4.平时检查是否漏液的方法：吸液后在液 体中停1- -3 秒观察吸头内液面是否下降； 如果液面下降首先检查吸头是否有问题， 如有问题更换吸头，更换吸头后液面仍下 降说明活塞组件有问题，应找专业维修人 员修理。
2、所用试管和比色杯均须干燥，浓硫 酸的质量很重要，放置日久，往往因 为吸收水分，而使颜色反应降低。 3、空白管应接近无色，如带橙黄色， 表示乙醇不纯，应用去醛处理。
移液枪的使用
吸嘴的安装
散装吸嘴安装
盒装吸嘴安装
注意事项
血清总胆固醇测定实验报告
血清总胆固醇测定实验报告一、实验目的血清总胆固醇（Total Cholesterol，TC）测定是临床生化检验中的常见项目之一，本实验旨在掌握血清总胆固醇测定的原理、方法和操作步骤，熟悉实验过程中的注意事项，并对实验结果进行准确分析和判断。
二、实验原理目前，血清总胆固醇测定常用的方法是酶法。
其原理是胆固醇酯酶（CE）将胆固醇酯水解为游离胆固醇（FC）和脂肪酸，胆固醇氧化酶（COD）将 FC 氧化为胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶（POD）的催化下与 4-氨基安替比林（4-AAP）和酚反应生成红色醌亚胺。
在一定波长下，通过比色法测定吸光度，从而计算出血清总胆固醇的含量。
三、实验材料与设备1、材料血清样本：新鲜无溶血、无脂浊的血清。
试剂盒：包含胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林、酚等试剂。
2、设备分光光度计移液器恒温水浴箱离心机四、实验步骤1、样本处理空腹采集静脉血，置于干燥无抗凝剂的试管中，室温下静置 30 分钟使其凝固。
以 3000 转/分钟离心 10 分钟，分离血清，备用。
2、试剂准备按照试剂盒说明书的要求，将试剂 R1 和试剂 R2 分别配制好，并放置于恒温水浴箱中预热至规定温度。
3、测定操作取两支干净的比色管，分别标记为空白管和测定管。
空白管中加入蒸馏水20μL 和试剂R1 1000μL，混匀，置于 37℃恒温水浴箱中保温 5 分钟。
测定管中加入血清样本20μL 和试剂R1 1000μL，混匀，置于 37℃恒温水浴箱中保温 5 分钟。
然后，向空白管和测定管中分别加入试剂R2 500μL，混匀，置于37℃恒温水浴箱中保温 10 分钟。
4、比色测定以空白管调零，在分光光度计 500nm 波长处读取测定管的吸光度值（A）。
五、实验结果计算血清总胆固醇（mmol/L）＝（测定管吸光度空白管吸光度）×校准品浓度÷校准管吸光度六、实验结果本次实验测定的血清总胆固醇结果为_____mmol/L。
血清总胆固醇测定操作规程
血清总胆固醇测定操作规程《血清总胆固醇测定操作规程》一、目的本规程旨在规范血清总胆固醇测定的操作步骤，确保测定结果准确可靠。
二、适用范围本规程适用于各医疗机构进行血清总胆固醇测定的操作。
三、仪器与试剂1. 仪器：分光光度计2. 试剂：血清总胆固醇测定试剂盒四、操作步骤1. 准备工作a. 开机预热分光光度计，确保仪器处于工作状态。
b. 取出血清总胆固醇测定试剂盒，检查试剂有效期和存储条件。
c. 准备标准品和样本待测血清。
2. 操作流程a. 取出试剂盒中的标准品，按照说明书稀释成不同浓度。
b. 加标准品和待测血清分别加入试剂管中，混匀后置于恒温水浴中反应一定时间。
c. 反应结束后，使用分光光度计在特定波长下测定吸光值。
3. 结果计算a. 使用标准品的吸光值绘制标准曲线。
b. 读取待测血清的吸光值，根据标准曲线计算出血清总胆固醇的浓度。
五、结果判定根据患者血清总胆固醇的测定值，参照相关标准进行结果判定和医疗建议。
六、注意事项1. 操作人员应熟练掌握仪器和试剂使用方法，严格按照操作规程进行操作。
2. 试剂及仪器的质量控制应在每次实验前进行验证。
3. 操作过程中应注意个人防护，避免污染试剂和样本。
七、记录与保存1. 对每次测定的操作步骤、结果和质控记录进行详细记录，确保测定结果可追溯。
2. 相关记录资料应按规定保存，以备查。
八、附则对于特殊情况的处理和异常结果的分析，应根据实际情况进行相应操作，并记录详细的处理过程。
以上即为《血清总胆固醇测定操作规程》，希望操作人员严格按照规程执行，确保测定结果的准确性和可靠性。
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇（标准管法）实验目的：1.了解自动生化分析仪的工作原理2.熟悉血清总胆固醇相关生化的检测项目及检测方法3.掌握血清总胆固醇相关生化检测项目的临床意义。
实验原理：胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇:血清中的胆固醇由游离胆固醇及胆固醇酯构成，胆固醇酯在胆固醇酯酶的作用下水解为胆固醇，再与胆固醇氧化酶作用产生△4-胆甾烯酮及H202;后者在过氧化物酶的作用下，与苯酚及4-氨基安替比林作用生成红色化合物醌亚胺。
测定该红色化合物在500nm波长的吸光度，可以计算出血清总胆固醇含量。
实验操作：1.将准备好的酶工作液（胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、苯酚、4-氨基安替比林）加入空白管、浓度标准管、测定管各1.5ml，再向标准管加20μl胆固醇标准液（5.18mmol/L），再向测定管加入20μl血清。
2.将三支试管放入水浴锅中，37℃保温20分钟3.调节分光光度计波长500nm,透光度T至100%，将空白管试液对光的吸收调节为0，再用空白管调“零”点测定其他各管的吸光度。
实验结果:分光光度计测得标准管吸光度和测定管吸光度，根据朗伯-比尔定律,得到血清样品总胆固醇值=（测定管吸光度/标准管吸光度）x5.18分析讨论：为什么用酶酚混合液作为空白管溶液？酶酚混合液作为空白试剂，调节分光光度计透光度T至100%，可将酶酚混合液对光的吸收调节为0，从而消除对葡萄糖反应产物吸光度测定的影响。
思考题：1.血清甘油三酯升高有和临床意义？血脂代谢紊乱对机体有何危害？血清甘油三酯升高可能代表着各种疾病的发生：如原发性继发性高脂蛋白血症、动脉粥样硬化、糖尿病、肾病、脂肪肝等。
血脂代谢紊乱对机体的危害：血脂代谢紊乱的影响分两种：1）高胆固醇血症引起的危害：主要是动脉粥样硬化，包括大动脉、中动脉、小动脉动脉硬化。
动脉斑块形成主要表现在心、脑、肾等位置，如果动脉硬化斑块较重或者不稳定，发生在心脏可出现急性心肌梗死；在脑血管会出现急性脑血栓，即急性脑梗死，以及肾脏出现急性肾梗死；在外周血管，如腿部可引起坏疽；2）高甘油三酯血症引起的危害：在暴饮暴食的情况下，高甘油三酯可以诱发急性胰腺炎。
胆固醇测定实验报告
本次实验旨在通过学习血清总胆固醇（Total Cholesterol，TC）的测定方法，掌握酶法测定胆固醇的原理和操作步骤，并了解血清总胆固醇在临床诊断中的应用。
二、实验原理血清总胆固醇的测定采用酶法，利用胆固醇酯酶将胆固醇酯水解为胆固醇和脂肪酸，再利用胆固醇氧化酶将胆固醇氧化为胆汁酸，同时生成过氧化氢。
在过氧化氢的作用下，加入的4-氨基安替比林和酚酞在酸性条件下生成红色化合物，其颜色深浅与胆固醇含量成正比。
通过比色法测定吸光度，即可计算出血清中胆固醇的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 血清样品- 胆固醇酯酶试剂- 胆固醇氧化酶试剂- 4-氨基安替比林试剂- 酚酞试剂- 磷酸缓冲液- 96孔微孔板- 吸量器- 酶标仪2. 实验仪器：- 恒温水浴锅- 离心机- 移液器- 烧杯- 移液管1. 准备工作- 将所有试剂和器材准备好，并确保其清洁、干燥。
- 将血清样品进行编号，并在实验过程中注意避免交叉污染。
2. 样品处理- 取一定量的血清样品，按照实验要求进行稀释。
- 将稀释后的血清样品加入微孔板中，每孔加入一定量的胆固醇酯酶试剂。
3. 酶反应- 将微孔板放入恒温水浴锅中，在37℃下孵育一定时间，使胆固醇酯酶与胆固醇发生反应。
4. 洗板- 将微孔板取出，用去离子水冲洗3次，以去除未反应的酶和底物。
5. 添加试剂- 向每个微孔中加入一定量的胆固醇氧化酶试剂、4-氨基安替比林试剂和酚酞试剂。
- 加入磷酸缓冲液，使溶液pH值保持在酸性范围内。
6. 比色- 将微孔板放入酶标仪中，在特定波长下测定吸光度。
- 将吸光度值与标准曲线进行对比，计算出血清中胆固醇的含量。
7. 结果分析- 根据实验结果，分析血清总胆固醇水平与临床诊断的关系。
五、实验结果与分析1. 实验结果- 根据实验数据，绘制标准曲线，并计算出样品中胆固醇的含量。
2. 结果分析- 通过实验结果，了解血清总胆固醇水平与临床诊断的关系，为临床诊断提供依据。
血清总胆固醇测定
如癌症晚期等。
【注意事项】
胆固醇:
▪ 标本采集：空腹12h采血，避免溶血。可用下列抗凝 剂，直至所列浓度对结果没有明显影响，EDTA 25mg/ml； 枸橼酸钠50mg/ml；草酸盐50mg/ml；肝素2mg/ml；氟化 物10mg/ml。
▪ 标本保存：血清胆固醇在室温（25℃）或2-8℃冷藏
可稳定7天，在-20℃密集冷冻可稳定数月，血浆中胆固醇 稳定性同血清。
实验五 血清总胆固醇测定
【实验目的】 ▪ 学习血清总胆固醇测定的实验原理。 ▪ 掌握总胆固醇的测定方法和操作技术。
【实验原理】
血清脂类包括甘油三酯、胆固醇、胆固醇 酯、磷脂、糖脂、游离脂肪酸。它们在血液中 以脂蛋白（脂和载脂蛋白的复合体）的形式存 在。用超速离心技术可把血浆脂蛋白分成四大 族：CM、VLDL、LDL、HDL，用电泳技术可 把血浆脂蛋白分成α-脂蛋白、前β-脂蛋白、β脂蛋白、CM。
【思考题】
▪ 一、简述双缩脲法测定蛋白质含量的原理 ▪ 二、简述血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的原理 ▪ 三、简述酶法测定血糖的原理 ▪ 四、Km的意义？
五、简述酶法测定血清总胆固醇的基本原理。
【试剂与器材】
▪ 1.总胆固醇测定试剂盒 ▪ 2.酶标板、板条、微量进样器、微量移液器 ▪ 3.生化培养箱、酶标仪 ▪ 4. 血清
【操作步骤】
1. 配制工作试剂： R1取4.5ml，R2取0.5ml，置于10ml玻璃试管中
2. 取酶标板1块，板条1条，按下表操作：
3.置于37℃生化培养箱10mi源自，492nm波长处在酶标仪上读 取各管的吸光度A。
血清中总胆固醇（TC）包括游离胆固醇 FC和胆固醇酯（CE）两部分。胆固醇酯可 被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪 酸（FFA），胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化 作用下生成Δ4-胆甾烯酮和过氧化氢，H2O2 在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物 酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌 类化合物，其颜色深浅与标本中TC含量成正 比。
血清总胆固醇测定
加毕，混匀，静置10分钟后，以对照管校0于550nm测 定吸光值，从标准曲线中查出相应的浓度。
• 吸光度与液层厚度和溶液浓度的乘积成正比，称
为朗伯—比尔定律，简称比尔定律，即光的吸收 定律。
• 吸光系数的大小，取决于物质(溶质、溶剂)的本性和光的波
长。 1. 物质不同，则吸光系数不同，所以吸光系数可作为物质的 特性常数。在分光光度法中，常用摩尔吸光系数ε来衡量显 色反应的灵敏度，ε值越大，灵敏度越高。 2. 溶剂不同，其吸光系数亦不同， 3. 光的波长不同，其吸光系数亦不同。如将不同波长的单色 光依次通过被分析物质，分别测得吸光度，然后绘制吸光 度—波长曲线，称为吸收曲线(absorption curve)，吸收曲 线上有极大值 的部分，称为吸收峰。吸收峰所对应的波长， 称为最大吸收波长，以符号λmax表示 ，这是物质定性的依 据之一。 4.单色光的纯度也影响吸光系数。单色光越纯，即经单色器分 光后的波长范围越窄，其吸光系数越大。
实
验
பைடு நூலகம்
五
血清总胆固醇的测定（邻苯二 甲醛法）
一、试验目的
• 学习分光光度计的原理及操作 • 学习用分光光度法测定胆固醇含量及
标准曲线的制作
二.
实验原理
• 根据物质对光的吸收特征和吸收强度，对物质进
行定性和定量的分析方法，称为分光光度法 (spectrophotometry)。该法具有一定的灵敏度和准 确度，分析手续较简便快速，仪器设备也不复杂， 故应用很广。
•
四、操作步骤 五.实验结果 六.结果讨论
管号
0
1 0.3
2 0.2
3 0.1
4 0
X(样品) 0.3
醋酸 0.4 液（毫 升） 标准胆 0
血清总胆固醇(TC)测定操作规程
血清总胆固醇(TC)测定操作规程A1．2 原理血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯水解酶(CEH)水解成游离胆固醇(Chol)，后者被胆固醇氧化酶(CHOD)氧化成△4—胆甾烯酮，并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化4—氨基安替比林与酚(三者合称PAP)，生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)。
醌亚胺的最大吸收在500nm 左右，吸光度与标本中总胆固醇呈正比。
反应式如下：胆固醇酯+H2O CEH 胆固醇+游离脂肪酸胆固醇+02 CHOD △4-胆甾烯酮十H2022H202+4－氨基安替比林+酚POD 昆亚胺+4H2OA1．3．1 受检者(体检对象或病人)的准备：除总胆固醇不一定用空腹血外，测定甘油三酯、脂蛋白与载脂蛋白的病人必须空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，近期内体重稳定，无急性病、外伤、手术等意外情况。
妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或终止哺乳后3个月检验才能反映其基本血脂水平。
注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药、噻嗪类利尿剂、β受体阻滞剂、免疫抑制剂、某些降压剂、降糖药、胰岛素及其他激素制剂等，检验以前应根据所用药物的特性停止用药数天或数周，否则应记录用药情况。
对体检对象及做前瞻性观察者，还应注意采血的季节，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24h内不作剧烈运动。
A1．3．2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，因此影响血脂水平。
例如站立5 min 可使血脂浓度提高5％，15 min提高16％，故在采血前至少应***5min。
一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1 min，穿刺成功后立即松开止血带。
静脉阻滞5min可使甘油三酯增高10％～15％。
A1. 3．3 抗凝剂：我国多用血清作血脂检验。
如用血浆，多主张用EDTANa2(1mg／mL)抗凝。
血清总胆固醇测定法
血清总胆固醇测定法1.实验原理胆固醇酯被胆固醇酯酶水解酶(CEH)水解成游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶(COD)氧化成胆甾烯酮并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化，使4-氨基安替比林与酚（三者合称PAP）反应，生成红色醌亚胺色素（Trinder反应）。
醌亚胺的最大吸光度在500nm左右，吸光度与标本中TC含量成正比。
反应式如下：CEH胆固醇酯+ H2O 胆固醇＋脂肪酸COD胆固醇＋O2Δ4-胆甾烯酮＋H2O2POD2H2O2+ 4-AAP +酚苯醌亚胺(显色) + 4H2O 2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清，肝素或EDTA抗凝血浆。
3. 标本存放：血清稳定性：20～25℃保存可稳定1周；4～8℃保存可稳定1周；-20℃保存可稳定3个月。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂欧泰克总胆固醇试剂盒（货号：112 1307170 1 试剂8×70ml）6.1.1 试剂组成Tris缓冲液pH7.3 50mmol/L酚20mmol/L4-氨基安替比林 1.0mmol/L 胆固醇酯酶(CHE) ≥400U/L 胆固醇氧化酶(CHO) ≥200U/L 过氧化物酶(POD) ≥4000U/L 6.1.2 试剂准备试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂6.2 校准品：使用罗氏复合校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
实验四血清总胆固醇的测定（硫磷铁法）
实验四血清总胆固醇的测定（硫磷铁法）[目的要求]掌握血清总胆固醇测定原理、方法及其临床意义。
[临床意义]胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物，主要来自体内合成，一部分直接从食物中摄取。
胆固醇在体内不仅参与血浆脂蛋白的合成，而且可转变为胆汁酸盐、维生素D3及某些类固醇激素(性激素、肾上皮质激素等)。
血液中的胆固醇包括游离胆固醇及其酯两种，二者总称“总胆固醇”，其中胆固醇酯占70～75%。
糖尿病昏迷患者几乎都有血清胆固醇浓度的增加。
胆固醇增加还见于动脉粥样硬化、肾病综合症，总胆管阻塞及粘液性水肿。
粘液性水肿胆固醇增加的主要原因是甲状腺机能减退而垂体前叶有继发性活动过度所致。
其它如肥大性骨关节炎、老年性白内障、牛皮癣等，血清胆固醇浓度间或也有增加。
在恶性贫血、溶血性贫血以及甲状腺机能亢进时，血清胆固醇含量降低。
其它如严重肝病、感染、营养不良等情况，胆固醇总量常见降低。
近年来大量文献报导表明，血胆固醇含量过高与动脉粥样硬化的发病机制有关，更引起了人们的注意。
[实验原理]用无水乙醇提取血清中胆固醇同时沉淀蛋白质，向提取液中加入硫磷铁显色剂，胆固醇与浓硫酸及三价铁作用，生成比较稳定的紫红色化合物，与同样处理的标准液进行比色，求得其含量。
[标本]人或动物血清。
[器材]1．试管及试管架；2．刻度吸量管或移液器；3．离心机；4．721型分光光度计。
[试剂]1．胆固醇标准贮存液(1.0ml≈1.Omg)：精确称取干燥重结晶胆固醇lOOmg，溶于无水乙醇内(稍加温助溶)，然后移入lOOml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，贮于棕色瓶中，密塞瓶口置4℃冰箱内保存。
配制应用液时，应将其预先恢复至室温。
2．胆固醇标准应用液(1ml≈0.05mg)：取上述贮存液5ml于100ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，再加蒸馏水2ml，贮于棕色瓶内，置冰箱中保存，用时将其恢复至室温。
3．铁贮存液：称取三氯化铁(Fecl3•6H2O)2.5克溶于87％浓磷酸内，并加至100ml，贮于棕色瓶中．此液在室温可长期保存。
血清总胆固醇的测定实验报告
血清总胆固醇的测定实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过测定血清中的总胆固醇水平，了解被检测者的心血管健康状况，为预防和治疗心血管疾病提供参考依据。
二、实验原理。
血清总胆固醇是指血液中所有脂蛋白和游离胆固醇的总和，通常以毫摩尔/升（mmol/L）为单位进行测定。
在实验室中，我们采用酶法测定血清总胆固醇，即通过酶的催化作用将胆固醇氧化成酮醇，然后通过比色法测定产生的色素来确定总胆固醇的浓度。
三、实验步骤。
1. 采集被检测者的静脉血样本，放置于离心管中，离心10分钟后取上清液。
2. 将上清液放入试剂盒中，按照说明书的操作步骤进行样本处理和试剂添加。
3. 使用分光光度计测定样本吸光度，根据标准曲线计算出血清总胆固醇的浓度。
四、实验结果。
根据实验测定，被检测者的血清总胆固醇水平为X mmol/L。
五、实验分析。
根据血清总胆固醇的测定结果，结合被检测者的年龄、性别、生活方式等因素，可以初步判断其心血管健康状况。
若总胆固醇水平偏高，可能存在心血管疾病的风险，需要进一步进行相关检查和干预措施。
若总胆固醇水平正常，被检测者的心血管健康状况良好。
六、实验注意事项。
1. 在采集血样和进行实验操作时，要严格遵守无菌操作规范，确保实验结果的准确性和可靠性。
2. 实验过程中要注意化学试剂的使用安全，避免接触皮肤和吸入气体，必要时戴上防护手套和口罩。
3. 实验设备的使用和维护要符合相关规定，保证设备的正常运转和数据的准确性。
七、实验结论。
通过本次实验测定，我们成功得出了被检测者的血清总胆固醇水平，并对其心血管健康状况进行了初步分析。
实验结果对于预防和治疗心血管疾病具有一定的参考价值。
八、实验展望。
在今后的实验中，我们将进一步完善实验方法，提高测定精度和准确性，为更多人群的心血管健康提供更多的数据支持和科学依据。
以上就是本次血清总胆固醇的测定实验报告，希望对大家有所帮助。
总胆固醇测量方法
总胆固醇测量方法《总胆固醇测量方法》一、前言总胆固醇是一种有机化合物，是一种重要的体内血脂代谢物质。
总胆固醇的水平测量可以推测血液中胆固醇含量，是检测脂质代谢紊乱的重要指标。
二、测量原理总胆固醇测量一般采用酶联免疫酶法，电化学发光法，比色法等测量方法进行测试，其原理是利用抗原特异性抗体与特异抗原结合，催化特异性酶而诱导发光或比色反应，以此测定血清中总胆固醇的含量。
三、实验材料及仪器1. 操作材料：血清/血浆样本，质控品，抗原及抗体，洗涤液，酶标板，酶，3,3',5,5'-四甲基联苯胺棕榈酸根（TMB）试剂级及稀释剂，发光消除液。
2. 仪器：酶标仪、微量滴定管、离心机、分光光度计、体外诊断试剂诊断仪、热微波消解仪等。
3. 试剂：总胆固醇质控品及标准品，TMB和助剂试剂。
四、步骤1. 酶标仪的设置：在酶标仪中进行试剂和质控程序的设置，确定比色曲线，并计算相应的曲线斜率，计算相关性系数的可信度水平。
2. 加样：按试剂的操作规程，向各个试管中加入合适的血清样本、抗体和抗原。
3. 免疫反应：将各个试管放置在摇床中，摇晃3—5分钟，以使其充分混合，催化特异性酶而诱导发光或比色反应。
4. 测量：将试管放入离心机进行离心，将各个试管的比色结果通过分光光度计或其他胆固醇测量仪法进行测量。
5. 校正：将质控试管的测定结果与标准值进行比较，根据结果，调节测量结果的可信度水平。
6. 报告：根据测量结果，报告总胆固醇的测定结果及可信度水平。
五、注意事项1. 在质控品、样本标记及加样时要注意完整性及准确性，以防止交叉污染等偏差。
2. 加样时，要注意充分混合，以保证实验的准确性。
3. 测量结果要经过校正后，才能确定总胆固醇的测定结果及可信度水平。
六、总结总胆固醇是检测脂质代谢紊乱的重要指标，常用的总胆固醇测量方法有酶联免疫酶法，电化学发光法，比色法等，其原理是利用抗原特异性抗体与特异抗原结合，催化特异性酶而诱导发光或比色反应，以此测定血清中总胆固醇的含量。
血清总胆固醇测定实验报告
血清总胆固醇测定实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过测定血清中的总胆固醇含量，了解被测者的血脂代谢情况，为临床诊断和治疗提供参考依据。
二、实验原理。
总胆固醇是人体内的一种脂质物质，主要存在于血浆中。
在正常情况下，总胆固醇主要由低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和极低密度脂蛋白胆固醇（VLDL-C）三部分组成。
总胆固醇的测定是通过酶法或化学法测定血清中总胆固醇的含量，以反映被测者的血脂代谢情况。
三、实验步骤。
1. 采集被测者静脉血标本，禁食12小时以上。
2. 将采集的血清标本离心，取上清液用于测定。
3. 使用生化分析仪器，按照厂家提供的试剂盒说明书进行总胆固醇的测定。
4. 记录测定结果，并进行数据分析。
四、实验结果。
经测定，被测者血清中总胆固醇含量为XXX mmol/L（参考范围，2.85-5.69 mmol/L），属于正常范围。
五、实验分析。
根据实验结果，被测者的总胆固醇含量处于正常范围内，说明其血脂代谢情况良好。
但在临床实际操作中，还需结合被测者的其他临床指标进行综合分析，以全面了解其健康状况。
六、实验注意事项。
1. 采集血样时需遵守无菌操作规范，避免污染。
2. 实验过程中需严格按照试剂盒说明书进行操作，避免误差。
3. 实验结束后，及时清洗和消毒实验用具，保持实验环境整洁。
七、实验总结。
本次实验通过测定血清总胆固醇含量，了解了被测者的血脂代谢情况。
实验结果显示，被测者的总胆固醇含量处于正常范围内，说明其血脂代谢情况良好。
实验过程中，我们严格遵守了操作规范，保证了实验结果的准确性和可靠性。
实验结果为临床诊断和治疗提供了重要参考依据。
八、参考文献。
[1] XXX. 血脂代谢异常与心血管疾病的关系[J]. 中国循证心血管医学杂志, 2018, 20(3): 365-368.[2] XXX. 血清总胆固醇测定技术规范与质量控制[J]. 中国检验医学, 2019, 42(5): 689-692.以上为本次血清总胆固醇测定实验的报告内容，如有不足之处，欢迎批评指正。
血清总胆固醇测定实验报告
血清总胆固醇测定实验报告一、实验目的血清总胆固醇（Total Cholesterol，TC）测定是临床生化检验中常见的项目之一。
本次实验的目的是掌握血清总胆固醇测定的基本原理、操作方法和结果分析，了解血清总胆固醇水平在健康评估和疾病诊断中的意义。
二、实验原理目前常用的血清总胆固醇测定方法为酶法。
胆固醇酯酶（CE）首先将胆固醇酯水解为游离胆固醇和脂肪酸，胆固醇氧化酶（COD）催化游离胆固醇氧化生成胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶（POD）的作用下与 4-氨基安替比林（4-AAP）和酚反应生成红色醌亚胺化合物。
在 500nm 波长处测定吸光度，吸光度的高低与血清中总胆固醇的含量成正比，通过与标准品比较可计算出血清总胆固醇的浓度。
三、实验材料1、仪器分光光度计恒温水浴箱移液器离心机2、试剂胆固醇测定试剂盒（包括胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林、酚等）标准胆固醇溶液（浓度已知）血清样本四、实验步骤1、试剂准备按照试剂盒说明书将试剂配制成工作液，置于 37℃恒温水浴箱中预温。
2、样本处理采集空腹静脉血，离心分离血清。
3、标准曲线绘制取 5 支试管，分别加入0μl、50μl、100μl、150μl、200μl 标准胆固醇溶液，用生理盐水补足至200μl。
各管中胆固醇的浓度分别为0mmol/L、25mmol/L、50mmol/L、75mmol/L、100mmol/L。
向各管中加入 20ml 工作液，充分混匀，37℃水浴 10 分钟。
以空白管调零，在 500nm 波长处测定各管吸光度。
以胆固醇浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
4、样本测定取200μl 血清样本，加入 20ml 工作液，充分混匀，37℃水浴 10 分钟。
测定样本管的吸光度，根据标准曲线计算出血清总胆固醇的浓度。
五、实验结果1、标准曲线记录各标准管的胆固醇浓度和对应的吸光度值，绘制标准曲线。
标准曲线应呈线性关系，相关系数（r）应大于 098。
2、血清总胆固醇测定
校准液/μL 血清/μL 生理盐水/μL 酶工作液/μL
空白孔（1） — — 2 200
校准孔（2-3） 2 — —
200
测定孔（4-5） — 2 — 200
（2）摇匀后，置37℃生化培养箱15min。 （3）在500nm波长处，以空白孔为对照，酶标仪上读取各孔的吸光度A值。
500nm检测生成呈红色的苯醌亚胺的吸光度，对照标准可计算出样本中的总胆固醇含量。
三、试剂与器材
• （一）材料：血清 • （二）试剂：R1、R2、酶工作液（R1:R2=9:1）、
胆固醇标准液（3.16mmol/L）、生理盐水 • （三）器材：烧杯、试管与试管架、酶标仪、生化培养箱、酶标板板条、
酶标板
五、实验结果
胆固醇浓度（mmol/L）=（A测定孔平均值/A标准孔平均值）×校准物浓度
• 注：校准孔或测定孔A值=实际测得吸光度数值－空白孔测得吸光度数值
六、思考题
（1）什么是高胆固醇血症？ （2）高水平的血清胆固醇可能导致哪些疾病？
实验二
一、目的要求
（1）了解血清总胆固醇含量测定的正常值与临床意义。 （2）掌握血清总胆固醇测定的基本原理和方法。
二、实验原理
• 血清胆固醇经反应后可以生成红色苯醌亚胺：
胆固醇酯+H2O 游离胆固醇+O2 2H2O2 + 4-氨基安替比林 + 4-氯酚
胆固醇酯酶 胆固醇氧化酶 过氧化物酶
游离胆固醇+脂肪酸 胆甾烯酮+H2O2 苯醌亚胺（红色）
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实验三血清总胆固醇的测定
目的要求
了解并掌握胆固醇测定的原理和方法。
实验原理
血清胆固醇(chol)测定是动脉粥样硬化性疾病防治、临床诊断和营养研究的重要指标。
正常人血清胆固醇含量范围为100 ~ 250mg/mL。
胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物，它不仅参与血浆蛋白的组成，而且也是细胞的必要结构成分，还可以转化成胆汁酸盐、肾上腺皮质激素和维生素D等。
胆固醇在体内以游离胆固醇及胆固醇酯两种形式存在，统称总胆固醇。
总胆固醇的测定有化学比色法和酶学方法两类。
本实验采用前一种方法。
胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛产生紫红色物质，此物质在550nm波长处有最大吸收。
因此，可用比色法作总胆固醇的定量测定。
胆固醇含量在400mg/100mL以内时，与光吸收值呈良好线性关系。
本法不必离心，颜色产物也比较稳定。
试剂和器材
一、试剂
邻苯二甲醛试剂：称取邻苯二甲醛50mg，以无水乙醇溶至50mL冷藏，有效期为一个半月。
混合酸：冰乙酸100mL与浓硫酸100mL混合。
标准胆固醇贮存液（1mg/mL）：准确称取胆固醇100mg，溶于冰乙酸中，定溶至100mL。
标准胆固醇工作液（0.1mg/mL）：将上述贮存液以冰乙酸稀释10倍，即取10mL用冰乙酸稀释至100mL。
二、测试样品
0.1mL人血清以冰乙酸稀释至4.00mL。
三、器材
试管1.5×15cm（×11）；移液枪，量筒50mL分光光度计。
操作方法
一、制作标准曲线
取9支试管编号后，按下表顺序加入试剂：
加毕，温和混匀，20～37℃下静置10分钟，在550nm波长处测定光吸收值。
以总胆固醇量（mg%）为横坐标，光吸收值为纵坐标做出标准曲线。
二、样品测定
取3支试管编号后，分别加入试剂，与标准曲线同时作比色测定：
加毕，温和混匀，20～37℃下静置10分钟，在550nm下测定光吸收值。
然后，从标准曲线上可查出样品中总胆固醇的含量。
注意事项
1.本法在20～37℃条件下显色。
2.混合酸粘度比较大，颜色容易分层，比色前一定要混匀。
思考题
1. 本实验操作中特别需要注意些什么？为什么？
2. 酯类难溶于水，将它们均匀分散在水中则形成乳浊液，为什么正常人血浆和血清中含有酯类虽多，但却清澈透明？。