植物脱氢酶(PDHA)活性检测试剂盒说明书 微量法
亮氨酸氨基肽酶(LAP)活性检测试剂盒说明书 微量法
亮氨酸氨基肽酶(LAP)活性检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC4145规格:100T/96S产品内容:试剂一:液体120mL×1瓶,4℃保存;试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存;临用前加入2.5mL丙酮溶解。
产品说明:LAP是一种膜结合酶,广泛存在于肝、胆、胰等组织中,参与组织蛋白和某些肽类的降解更新。
各类肝病患者因肝细胞损伤,血清LAP的活性均有不同程度的升高,LAP可以作为各类肝病的一项初步检测指标,特别是肝癌鉴别诊断的指标。
LAP分解L-亮氨酸对硝基苯胺生成对硝基苯胺,后者在405nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算LAP活性。
自备实验用品及仪器:天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、丙酮、匀浆器/研钵。
操作步骤:一、样本处理:组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,然后,10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
细胞:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
液体:直接检测。
二、测定操作:1、分光光度计/酶标仪预热30min以上,波长调至405nm,分光光度计蒸馏水调零。
2、加样表:在微量玻璃比色皿/96孔板中分别加入下列试剂试剂名称(μL)测定管空白管试剂一10样品上清10试剂一170170试剂二2020在微量玻璃比色皿/96孔板中分别加入上述试剂,充分混匀后于405nm处测定30s时的吸光值A1,迅速置于37℃水浴3min(有控温功能的酶标仪可以将温度调至37℃),拿出迅速擦干测定210s时的吸光值A2,计算△A测定管=A2测定-A1测定,△A空白管=A2空白-A1空白,△A=△A测定管-△A空白管。
植物氨态氮含量检测试剂盒说明书 可见分光光度法
植物氨态氮含量检测试剂盒说明书可见分光光度法注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号:BC1520规格:50T/48S产品内容:提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存,临用前将试剂三倒入使其充分溶解备用。
该试剂溶解后10天内有效。
试剂二:粉剂×2瓶,4℃避光保存。
临用前加2mL蒸馏水充分溶解。
试剂三:液体45mL×1瓶,4℃保存。
标准品:粉剂×1支,10mg半胱氨酸,4℃避光保存。
临用前加入1.157mL提取液,得到1000μg/mL氮标准液。
产品说明:氮素是构成生物体的一种必需元素。
铵态氮进入植物细胞后形成氨基酸或酰胺,植物组织氨氮含量可反映植物受胁迫的程度。
氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应,产生蓝紫色化合物,在570nm有特征吸收峰;通过测定570nm 吸光度,来计算氨基酸含量。
试验中所需的仪器和试剂:可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、无水乙醇、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、粗酶液提取:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,室温匀浆后于25℃,12000g离心10min,取上清待测。
二、测定步骤:1、分光光度计预热30min以上,调节波长至570nm,蒸馏水调零。
2、将1000μg/mL氮标准液用提取液分别稀释为200、100、50、25、12.5μg/mL。
3、操作表:试剂名称(μL)测定管标准管空白管样本50--标准品-50-蒸馏水--50试剂一500500500无水乙醇500500500试剂二505050混匀后盖紧瓶盖封口膜封口(防止水分散失),置于沸水浴中保温10min,冷却后反复颠倒EP管数次,将测定管8000rpm离心5min后取上清,于570nm测定吸光值。
显色后务必在30min内测完。
3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)活性检测试剂盒说明书 微量法
3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)活性检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC2215规格:100T/96S产品内容:提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×1瓶,-20℃保存。
试剂二:液体20mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体12uL×1支,4℃保存。
临用前加入0.4mL蒸馏水充分混匀,或根据比例现配现用;用不完的试剂4℃保存一周。
产品说明:GAPDH(EC1.2.1.12)催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸,是糖酵解途径的关键酶,与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关,在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。
3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸。
GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛、无机磷和NAD+,340nm处测定NADH的减少量可反映GAPDH活性的高低。
试验中所需的仪器和试剂:紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、粗酶液提取:组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后,8000g,4℃,离心20min,取上清,置冰上待测。
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
血清(浆):直接检测。
二、测定步骤:1、分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,分光光度计蒸馏水调零。
辅酶ⅠNAD(H)含量试剂盒说明书
辅酶ⅠNAD(H)含量试剂盒说明书微量法100管/48样注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义:辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循环(TCA)的主要氢受体,生成的NADH经呼吸电子链(ETC)传递把电子交给氧,在合成ATP的同时,形成大量的ROS,同时NADH再生为NAD+。
糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。
NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。
较高的NAD(H)及NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高,处于过氧化状态。
此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循环。
另外,NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。
测定原理:分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH,NADH通过PMS的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT)为甲瓒,在570nm下检测吸光值;而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH,进一步采用MTT还原法检测。
需自备的仪器和用品:酶标仪、台式离心机、移液器、96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:酸性提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存;碱性提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存;试剂一:液体10 mL×1瓶,4℃保存;试剂二:液体3 mL×1瓶,4℃保存;试剂三:粉剂×1瓶,-20 ℃保存,用时加入3mL蒸馏水,混匀,用不完的试剂4℃保存一周;试剂四:粉剂×1瓶,4 ℃保存,用时加入3mL蒸馏水,混匀,用不完的试剂4℃保存一周;试剂五:液体3.6mL×1瓶,4 ℃保存;试剂六:液体30mL×1瓶,4 ℃保存;试剂七:液体50mL×1瓶,4 ℃保存。
NAD+和NADH的提取:1 血清(浆)中NAD+和NADH的提取:NAD+的提取:按照血清(浆)体积(mL):酸性提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议取约0.1mL血清(浆),加入1mL酸性提取液),95℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μL上清液,加入500μL碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。
AMM氨测定试剂盒(谷氨酸脱氢酶法)产品说明书
AMM氨测定试剂盒(谷氨酸脱氢酶法)产品说明书AMM氨测定试剂盒(谷氨酸脱氢酶法)一、产品概述AMM氨测定试剂盒是一种基于谷氨酸脱氢酶法的高精度、高灵敏度氨测定试剂盒,用于测量生物体内氨浓度。
本试剂盒可广泛应用于医学、生物科学研究以及临床实验室等领域。
其准确度和可靠性得到了专业机构的认可。
二、试剂组成1. 测定液:包含谷氨酸脱氢酶、NADH(二磷酸腺苷二核苷酸)、缓冲液等。
2. 校准液:含有已知浓度的氨溶液,用于校准仪器。
3. 样本提取液:用于提取样本中的氨,使其能够反应产生信号。
三、试剂储存和稳定性1. 试剂的储存温度应为2-8摄氏度,避免阳光直接照射。
2. 开封后的试剂应储存在2-8摄氏度,并尽快使用。
3. 严禁冷冻试剂,以免造成试剂失效。
4. 正确存放条件下,试剂的稳定期为12个月。
四、仪器要求本试剂盒适用于多种型号的分光光度计,要求光敏器件工作稳定、精密度高,峰值吸光度范围在340-380nm之间。
五、操作步骤1. 准备工作a. 取出试剂,放置于室温下30分钟,使其回温到室温。
b. 将待检样本从冰箱取出后,回温至室温。
c. 开机并调整光源和光敏器件,确保仪器正常工作。
2. 样本制备a. 取适量样本加入样本提取液中,按照规定的比例稀释,混匀待用。
3. 样本测定a. 取适量测定液加入试管或微孔板中,作为反应底物。
b. 加入适量样本提取液,搅拌均匀。
c. 读取反应开始后一段时间内的吸光度值。
d. 将读数输入分光光度计或计算机,根据标准曲线计算样品中氨的浓度。
4. 结果判定a. 根据标准曲线上的吸光度值和已知浓度的校准液所对应的吸光度值,计算样品中氨的浓度。
b. 根据实验需求,判断测量结果的可靠性和准确性。
六、注意事项1. 操作前请阅读使用说明书。
2. 所有操作都必须在规定的温度下进行,以保证试剂和样本的稳定性。
3. 使用量杯、试管和微孔板等器具时,应保证其清洁干燥,以免发生干扰现象。
4. 实验过程中应避免直接接触皮肤和吸入试剂,如有意外接触,请立即清洗。
生物膜微生物活性的测定
生物膜微生物活性的测定(TTC-DHA)法在本课题研究中,生物膜微生物的活性通过氯化三苯基四氮唑(TTC)-脱氢酶活性测定法进行。
利用氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride ,TTC;Shanghai Reagent Co., Ltd, Shanghai, China)的还原性产物TTC-甲瓒(TF)的量,来表示微生物的活性。
一、生物膜样品的制备取10g载体生物膜,用蒸馏水润洗2次,置于锥形瓶中,用玻璃珠剧烈摇动将生物膜打碎,用生理盐水20mL稀释,用玻棒搅动,使成悬液,备用。
二、主要仪器和试剂氯化三苯基四氮唑( TTC)-葡萄糖标准溶液:TTC分析纯0.1 g与葡萄糖l g共溶于100 mL蒸馏水中,棕色试剂瓶保存;甲苯(分析纯);三氯甲烷(分析纯);三羟甲基氨基甲烷(Tris)-HCI缓冲溶液,pH值为8.6;其它:硫化钠。
三、标准曲线的制作在分液漏斗中依次注入l,2,3,4,5,6 mL浓度为l g ·L-1 TTC-葡萄糖标准溶液,2 mL Tris-HCI缓冲溶液及lmL 10%Na2S新配溶液,摇匀;待溶液充分显色后,准确加入甲苯溶液5mL,振摇,完全提取TF。
放置片刻;待溶液分层后,取有机溶液层, 移至lcm比色皿中,稳定2 min用752紫外分光光度计在波长485nm处,测对应的吸光度(A)值,对脱氢酶活性作图,以试剂空白作对照,绘制标准曲线。
四、生物膜脱氢酶活性测定取生物膜制备液2mL于带塞试管中,依次加入Tris-HCl缓冲液、0.1 mol ·L-1葡萄糖液、0.5%TTC各2 mL,置入37±1℃恒温箱中培养6 h后取出,加2滴浓硫酸终止反应,准确加入5 mL甲苯,振摇,在4000 rpm下离心5 min,取有机溶剂层比色。
在上述条件下,将1h产生1µgTF的量为1个酶活力单位。
过氧化物酶(Peroxidase,POD)试剂盒使用说明
3、细菌或细胞 POD 活性
(1)按样本蛋 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 定义为一个酶活 力单位。
POD(U/mg prot)=245μL(反应体系)÷1000μL×提取酶液总体积(1000μL)÷样 本体积(5μL)÷0.01×ΔA÷蛋白质浓度(mg/mL)=4900×ΔA÷蛋白质浓度(mg/mL)
2、组织 POD 活性
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白在每 ml 反应体系中每分钟 A470 变化 0.005 定义为一个酶 活力单位。
POD(U/mg prot)=245μL(反应体系)÷1000μL×提取酶液总体积(1000μL)÷样 本体积(5μL)÷0.005×ΔA 测定÷蛋白质浓度(mg/mL)=9800×ΔA÷蛋白质浓度(mg/mL)
用 96 孔板测定的计算公式如下
1、血清(浆)POD 活性
单位的定义:每 mL 血清(浆)在每 ml 反应体系中每分钟 A470 变化 0.005 定义为一个 酶活力单位。
POD(U/mL)=245μL(反应体系)÷1000μL×血清(浆)总体积(1000μL)÷样本 体积(5μL)÷0.005×ΔA =9800×ΔA
(2)按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞在每 ml 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 定义为一 个酶活力单位。
POD(U/104 cell)=245μL(反应体系)÷1000μL×提取酶液总体积(1000μL)÷样 本体积(5μL)÷0.01×ΔA÷细菌或细胞密度(104 cell /mL)=4900×ΔA÷细菌或细胞密 度(104 cell /mL)
(2)按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织在每 ml 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 定义为一个酶活力单 位。
植物褪黑素(MT)说明书
植物褪黑素(MT)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T0.2ng/L -15 ng/L使用目的:本试剂盒用于测定植物组织,细胞及其它相关样本中褪黑素(MT)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物褪黑素(MT)水平。
用纯化的植物褪黑素(MT)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入植物褪黑素(MT),再与HRP标记的褪黑素(MT)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的植物褪黑素(MT)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物褪黑素(MT)浓度。
试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(20ng/L)0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液 1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
10ng/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液5ng/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液2.5ng/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液1.25ng/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液0.625ng/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求aiweide
α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)适用范围:用于体外定量测定人血清中α-羟丁酸脱氢酶的活性1.1包装规格a) 试剂1:2×45mL,试剂2:1×18mL;b) 试剂1:4×50mL,试剂2:2×20mL;c) 试剂1:2×100mL,试剂2:2×20mL;1.2主要组成成分1.2.1试剂1主要组分1.2.2 试剂2主要组分2.1 外观试剂1:无色澄清液体;试剂2:淡黄色澄清液体。
2.2 试剂装量应不低于试剂瓶标示装量。
2.3 试剂空白2.3.1试剂空白吸光度在340nm波长处测定试剂空白吸光度,应>1.1。
2.3.2试剂空白吸光度变化率在340nm波长处测定其空白吸光度变化率|△A/min|<0.002。
2.4 分析灵敏度测定HBDH含量为100U/L的样品时,其△A/min应为0.0224~0.0274。
2.5 线性范围2.5.1在[25,750] U/L范围内,线性回归的确定系数应不低于0.990;2.5.2测试浓度在[25,100] U/L范围内,线性绝对偏差应不超过±10 U/L;测试浓度在(100,750] U/L范围内,线性相对偏差应不超过±10%。
2.6测量精密度2.6.1重复性:用三个水平的样本重复测试其变异系数(CV)应不超过5%。
2.6.2批间差:抽取3个不同批号的试剂,对同一份样本进行重复测定,相对极差≤10%。
2.7 准确度以证参考物质为检测样本时,测定结果相对偏差不超过±15%。
2.8稳定性取在2℃~8℃条件下贮存达到18个月的试剂进行检测,应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。
植物过氧化物酶(POD)检测试剂盒(愈创木酚比色法)说明书
检测试剂盒(愈创木酚比色法)说明书
4ml预冷的PODLysisBuffer研磨或匀浆,4 POD粗提液,-20℃冻存,用于过氧化物酶的
A测定0=加入PODAssaybuffer工作液后立即测定的测定孔吸光度值t=反应时间(min)=3
注意事项:
1、待测样品中不能含有酶抑制剂,同时需避免反复冻融。
2、POD酶液提取时注意低温操作,防止酶活性。
3、以煮沸的酶液为对照时,酶要充分失活。
4、POD氧化剂和POD终止液具有一定腐蚀性,请小心操作。
5、POD氧化剂易挥发,请密闭保存,否则检测效率下降。
6、如果没有分光光度计,也可以使用普通的酶标仪测定,每次检测指标不宜过多,否则操作时间不一,有可能导致样本间的差异。
7、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
抗坏血酸_总抗坏血酸含量检测试剂盒(比色法)说明书__微量法UPLC-MS-6014
抗坏血酸/总抗坏血酸(AsA/T-AsA)含量检测试剂盒(比色法)说明书微量法货号:UPLC-MS-6014规格:100T/48S产品内容:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体70mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×1瓶-20℃保存试剂二液体10mL×1瓶4℃保存试剂三液体2mL×1瓶4℃保存试剂四液体20mL×1瓶4℃保存试剂五液体15mL×1瓶4℃保存试剂六粉剂×1瓶4℃保存试剂七液体10mL×1瓶4℃保存标准品粉剂×1支4℃保存溶液的配制:1、试剂一:临用前加入2mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂-20℃分装避光保存;2、试剂六:临用前加入10mL70%乙醇溶液(V/V)溶解;3、标准品:临用前配制,加入1.136mL提取液充分溶解;吸取0.02mL上述溶液,加入0.98mL提取液,混匀,即1000nmol/mL AsA标准溶液。
产品说明:抗坏血酸(AsA)是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。
作为植物细胞中最重要的抗氧化剂,AsA在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用,也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。
脱氢抗坏血酸(DHA)是AsA的可逆的氧化型,在生物体内,与抗坏血酸共同组成氧化还原系统,具有电子受体作用。
AsA具有还原性,能将Fe3+还原成Fe2+,Fe2+与2,2’-联吡啶形成粉红色络合物,在525nm处有特征性吸收峰。
DTT可还原DHA生成AsA,可用于检测样本总抗坏血酸(AsA+DHA)含量。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:研钵/匀浆器、冰、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液器、乙醇和蒸馏水。
酪氨酸酶活性检测试剂盒说明书 微量法
酪氨酸酶活性检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC4055规格:100T/96S产品内容:提取液:液体125mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×3瓶,4℃保存。
临用前每瓶加入7mL提取液充分溶解待用。
现配现用。
产品说明:酪氨酸酶(tyrosinase:EC1.14.18.1)是一种单酚单加氧酶,是具有双功能的含铜糖蛋白,广泛存在于植物、酵母和动物组织中。
酪氨酸酶是生物体合成黑色素的关键酶,也是引起果蔬酶促褐变的主要因素,同时也对昆虫的免疫及生长有重要影响酪氨酸酶催化L-多巴生成多巴色素,其在475nm下有特征吸收峰,进而测定出酪氨酸酶的活性。
自备实验用品及仪器:可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。
操作步骤:一、样本处理:(1)组织:称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆。
12000g,4℃离心20min,取上清,置冰上待测。
(2)细胞或微生物样品的制备:先收集细胞或微生物样品到离心管内,弃上清,按照每500万细胞或微生物加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次)。
12000g,4℃离心20min,取上清,置冰上待测。
(3)血清(浆):直接检测。
二、测定步骤:(1)分光光度计/酶标仪预热30min,波长调至475nm。
蒸馏水调零。
(2)加样表:在微量玻璃比色皿/96孔板中分别加入试剂名称(μL)测定管试剂一180样品20充分混匀后立即测定10s时在475nm下的吸光度,记为A1,之后迅速将其放入37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)水浴或培养箱中3min(若酶标仪自带控温功能,将温度调至37℃或25℃)。
然后迅速拿出擦净后测定190s时的吸光度,记为A2。
计算ΔA=A2-A1。
三、酪氨酸酶活力计算:1、按微量玻璃比色皿计算:(1)按蛋白浓度计算:单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化生成1nmol多巴色素的酶量定义为一个酶活性单位。
植物激素及理化指标检测书
► 积的变化不会影响影响定量结果。 内ꢉ法抵消了前处理的操作误差,乃至流动相、 检测器的影响。
匮_ E-ꢂꢃꢄꢅ: ꢆꢇdꢈꢇ@bꢈꢉꢊꢆfbꢈꢉꢊꢋꢊꢆp
类别 游离态生长素 结合态生长素
生长素前体
脱落酸 游离态茉莉酸 结合态茉莉酸 茉莉酸前体 游离态水杨酸 结合态水杨酸
天然细胞分裂素
人工合成细胞分裂素 赤霉素系列 油菜素内酯
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比色法
乙醇提取-比色法测定
果胶含量检测试剂盒说明书 微量法
果胶含量检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC1405规格:100T/48S产品内容:试剂一:标准液1mL×1支,4℃保存。
试剂二:液体5mL×1瓶,4℃保存。
产品说明果胶是一种植物胶体,分布于果蔬类植物中,存在于植物的细胞壁和细胞内层。
果胶中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等,主要成分是半乳糖醛酸,其独特的物理、化学性质影响着植物源食品的口感和品质。
采用咔唑比色法测定果胶含量。
果胶水解成半乳糖醛酸,在硫酸溶液中与咔唑试剂缩合生成紫红色化合物,在530nm处有最大吸收峰。
测定样品中半乳糖醛酸的含量,即可确定果胶的含量。
需自备的仪器和用品研钵、可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、浓硫酸和蒸馏水。
操作步骤:一、样品处理将组织样品捣碎,按照样品质量(g)和蒸馏水体积(mL)为1:5-10的比列(建议取约0.1g样品,加入1mL蒸馏水),充分匀浆,8000g、4℃离心10min,取上清液待测。
二、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至530nm处,蒸馏水调零,试剂一和试剂二37℃预热10min以上。
三、测定操作表(在EP管中加入下列试剂)试剂名称(μL)空白管标准管对照管测定管待测样本5050试剂一50蒸馏水5050试剂二505050混匀浓硫酸400400400400充分混匀,95℃水浴5min后,冷却至室温,取200μL置微量石英比色皿或96孔板中,测定530nm 处吸光值,空白管、标准管、对照管和测定管吸光值分别记为A1、A2、A3和A4。
若A大于1,需将待测样本用蒸馏水稀释(可稀释10倍或20倍)注意:空白管和标准管只要做一管,每个测定管需设一个对照管。
四、计算公式果胶含量(mg/mg prot)=(C标准×V1)×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)×稀释倍数=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷Cpr×稀释倍数果胶含量(mg/g鲜重)=(C标准×V1)×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)×稀释倍数=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀释倍数C标准:标准管浓度,0.05mg/mL;V1:加入样本体积,0.05mL;V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
脱氢抗坏血酸(DHA)含量检测试剂盒说明书 微量法
脱氢抗坏血酸(DHA)含量检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号:BC1245规格:100T/96S产品内容:提取液:液体110mL×1瓶,室温保存。
试剂一:液体20mL×1瓶,室温保存。
试剂二:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。
临用前加入5mL蒸馏水充分溶解。
标准品:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。
临用前加入5.743mL蒸馏水充分溶解;吸取0.1mL上述溶液,加入0.9mL蒸馏水,混匀,即为0.1μmol/mL DHA。
产品说明:AsA作为植物细胞一个重要生理指标,其AsA的含量、氧化还原状态(AsA/DHA比率)及其合成与代谢相关酶类活性的变化涉及植物对一系列环境胁迫的响应。
DHA是AsA的可逆的氧化型,在生物体内,与抗坏血酸共同组成氧化还原系统,具有电子受体的作用。
DTT还原DHA生成AsA,通过测定体系中AsA的生成速率,即可计算出DHA含量。
自备仪器和用品:低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、样品中DHA提取:称取约0.1g样品,加提取液1mL,冰上充分研磨,16000g4℃离心20min,取上清液待测。
二、DHA测定操作:1.紫外分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到265nm,蒸馏水调零。
2.试剂一在25℃水浴锅中预热30min以上。
3.标准管:依次在微量石英比色皿/96孔板加入20μL标准液、160μL预热的试剂一和20μL试剂二,迅速混匀后于265nm比色,记录10s和130s的吸光值,分别为A1,A2,△A标准管=A2-A1。
4.测定管:依次在微量石英比色皿/96孔板加入20μL上清液、160μL预热的试剂一和20μL试剂二,迅速混匀后于265nm比色,记录10s和130s的吸光值,分别为A3,A4,△A测定管=A4-A3。
植酸酶活性检测试剂盒说明书 微量法
植酸酶活性检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC3145规格:100T/48S产品内容:提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
缓冲液:液体10mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×2支,4℃保存,临用前加缓冲液4mL配制,现用现配。
试剂二:液体10mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体10mL×1瓶,4℃保存。
显色剂:粉剂×6瓶,4℃保存,临用前根据用量每瓶加0.4mL双蒸水溶解,再加1.6mL试剂三混匀。
样本处理产品说明:植酸酶(phytase)是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸(盐)的一类酶的总称,属磷酸单酯水解酶,它能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷,降低粪便中的磷含量,减轻对环境的污染,改善营养成分的吸收和利用,因此具有极其广泛的研究和应用价值。
测定原理植酸酶在一定温度和pH值条件下,水解底物植酸钠生成无机磷与肌醇衍生物,无机磷在酸性环境中与钼酸铵显色剂反应生成蓝色复合物,在700nm处有特征吸收峰,根据700nm处吸光值变化可计算得植酸酶活性。
自备实验用品及仪器天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅,超声溶解器,回旋式振荡器。
操作步骤:1.酶制剂:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:500~1000的比例(建议称取约0.001g,加入1mL提取液)第1页,共4页加入提取液,在超声波溶解器上溶解15min,再用回旋式振荡器振荡15min,待测。
2.组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,在超声波溶解器上溶解15min,再用回旋式振荡器振荡15min,4℃,4000g离心10min,取上清待测。
3.饲料样品:饲料烘干粉碎,过40目筛,按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,在超声波溶解器上溶解15min,再用回旋式振荡器振荡15min,4℃,4000g离心10min,取上清待测。
木质素含量检测试剂盒说明书 微量法
木质素含量检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC4205规格:100T/96S产品内容:试剂一:液体34mL×1瓶,4℃保存。
每次用完用封口膜密封保存。
试剂二:液体30mL×1瓶,4℃保存。
标准品:粉剂×1支,200mg木质素,4℃保存(纯度50%,木质素含量25mg)。
用高氯酸定容至1mL,充分混匀溶解,配成25mg/mL的标准液。
使用前混匀。
产品说明:木质素是构成植物细胞壁的成分之一,具有使细胞相连的作用。
木质素存在于木质组织中,主要作用是通过形成交织网来硬化细胞壁,为次生壁主要成分。
木质素中的酚羟基发生乙酰化后在280nm处有特征吸收峰,280nm的吸光值高低与木质素含量正相关。
试验中所需的仪器和试剂:紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、封口膜、高氯酸、冰乙酸和蒸馏水。
操作步骤:一、样品处理:样品80℃烘干至恒重,粉碎,过40目筛,称取约3mg于1.5mLEP管中。
二、测定步骤:1、分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至280nm,冰乙酸调零。
2、操作表:在1.5mL离心管中依次加入下列试剂:测定管标准管空白管样品(mg)3--试剂一(µL)300300300高氯酸(µL)12-12标准液(µL)-12-封口膜密封,充分混匀。
于80℃水浴锅水浴40min,进行乙酰化。
每隔10min震荡一次,然后自然冷却。
试剂二(µL)300300300充分混匀后于常温8000g离心10min,取上清。
上清液(µL)121212冰乙酸(µL)588588588测定280nm下的吸光值A,记为A测定管、A空白管、A标准管,计算△A=A测定管-A空白管、△A标准=A标准管-A空白管。
三、木质素含量计算:C标准=C原液×V标准÷V乙酰化×V上清÷V检测=0.0098mg/mL木质素(mg/g)=△A÷(△A标准÷C标准)×V检测÷(W×V上清÷V乙酰化)=0.3×△A÷△A标准÷WC标准:标准液在最终检测体系中的浓度,0.0196mg/mL;C原液:标准液浓度,25mg/mL;V标准:加入的标准液的体积,0.012mL;V乙酰化:乙酰化反应体积,0.612mL;V上清:上清液体积,0.012mL;V检测:检测反应总体积,0.6mL;W:样本质量,g。
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植物脱氢酶(PDHA)活性检测试剂盒说明书微量法
注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号:BC3125
规格:100T/48S
产品内容:
试剂一:粉剂×2瓶。
使用前加少量水溶解,定容至50mL,避光、4℃保存(尽量现配现用)。
试剂二:液体100mL×2瓶,4℃保存。
试剂三:乙酸乙酯,自备。
产品说明:
生物体的脱氢酶(Plant dehydrogenase,PDHA)的活性在很大程度上反映了生物体的活性状态,能直接表示生物细胞对其基质降解能力的强弱。
受氢体2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride,即TTC)在细胞呼吸过程中接受氢以后,其还原产物三苯基甲替(TriphenylFormazone,即TFF)呈现红色,在波长485nm处有最大吸收峰,采用分光光度法于485nm测定其吸光值,即得植物脱氢酶活性。
试验中所需的仪器和试剂:
台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板(非聚苯乙烯/聚丙烯材质)、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水、乙酸乙酯(不允许快递,请用户自备)。
操作步骤:
一、样品处理:
称取0.1g的植物组织,用双蒸水清洗3-4次,用滤纸吸干水分,备用。
二、测定步骤:
1、可见分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至485nm,乙酸乙酯调零。
2、操作表:取5mLEP管依次加入
对照管测定管
样品(g)0.10.1
试剂一(mL)1
试剂二(mL)21
充分混匀,37℃,暗培养3h,取出后立即冰浴5min,去滤液,尽量用滤纸吸干样品,置于研钵/匀浆器中。
试剂三(mL)11
充分研磨(建议在通风橱操作)后全部移至于离心管中,用少量试剂三冲洗研钵,一起加入离心管,用试剂三定容至2mL,10000rpm/min,4℃,离心5min,取200μL上清至微量
玻璃比色皿或96孔板中,测定485nm下的吸光值。
计算ΔA=A测定-A对照。
三、脱氢酶活力计算
A:用微量玻璃比色皿(光径,1cm)测定的计算公式如下
酶活单位定义:在37℃时,每小时每克组织样品使反应体系吸光值每增加0.01为一个酶活单位。
脱氢酶活性(U/g/h)=ΔA÷0.01÷T÷W=33×ΔA÷W。
B:用96孔板(光径,0.5cm)测定的计算公式如下
酶活单位定义:在37℃时,每小时每克组织样品使反应体系吸光值每增加0.005为一个酶活单位。
脱氢酶活性(U/g/h)=ΔA÷0.005÷T÷W=66.7×ΔA÷W。
T:反应时间,3h;W:样品鲜重,g。
注意事项:
1.配制好的试剂一避光保存于4℃,尽量在一周内使用,若出现红色,则不能使用。
2.试剂三易挥发,有毒,为了您的健康,请穿实验服,戴口罩,戴乳胶手套操作。
3.反应完成后立即冰浴以终止反应,并去除干净残留的反应液。
4.如果测定出来的吸光值较大,需把样品适当稀释再进行测定,注意计算公式乘以稀释倍数。
5.如果用96孔板进行检测,建议不要使用聚苯乙烯/聚丙烯材质的96孔板。