Waters LC MS培训讲义
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Waters-LC-MS-日常维护参考手册 PPT课件
灵敏度低下
灵敏度低下
LC侧
流动相污染 确认注入量
灵敏度低下
MS侧 离子源污染
确认喷雾 质量轴偏差
真空度 付附加着イ离オ子ン
2020/3/31
43
©2008 Nihon Waters K.K. 43
灵敏度低下（附着离子）：附着质子
2020/3/31
M M
H+
— 进样针的更换 o 进样针的材质不同，吸附度也不同。
2020/3/31
12
©2008 Nihon Waters K.K. 12
MS各部分的功能
MS
— Probe o 样本离子化后喷雾
— 离子源 o 将喷雾样本（离子）导入MS内部（分析器、检测器）
— 分析器 o 依据m/z分离离子
— 检测器 o 检测离子
2020/3/31
故障在MS侧
分析器 真空
检测器
数据系统
34
©2008 Nihon Waters K.K. 34
确认原因分类（I）LC侧的问题
UV检测器
色谱柱
Probe
离子源
UV检测器与MS的结果中均未见峰值
2020/3/31
故障在LC侧 （未注射样本？）
分析器 真空
检测器
数据系统
35
©2008 Nihon Waters K.K. 35
2020/3/31
6
©2008 Nihon Waters K.K. 6
LC/MS系统的日常维护
LC/MS系统
— HPLC o泵 o 自动进校器
— MS o 离子源 o Probe o 分析器
— 附属设备 o 真空泵（回转泵、涡旋泵） o 氮气发生仪器 o 数据系统
LC-MS基础资料
〔3〕母离子扫描
母离子分析可用来鉴定和确认类型的化合物， 尽管它们的母离子的质量可以不同，但在分裂 过程中会生成共同的子离子，这种扫描功能在 药物代谢争论中特殊重要。
(4)中性丧失扫描
中性丧失扫描分析可用来鉴定和确认类型的化 合物，例如新生儿遗传疾病筛查中某些检测工 程。也可以帮助进展未知物构造推断，例如有 中性丧失18Da的意味着-H2O，28-CO，30HCOH，32-CH3OH，44-CO2等等。
Ionic
IonSpray
电喷雾电离源
APCI
大气压化学电离源
Analyte Polarity
GC/MS
Neutral
101
102
103
104
105
Molecular Weight
LC_MS接口的作用
将淋洗剂及样品气化 分别除去大量的淋洗剂分子适应MS的高真空 样品分子的电离
常用的离子源:
279.1591 m/z 316, 2mm 离心管的产生的特征离子 m/z 384, 瓶的光稳定剂产生的离子 m/z391, 管路中邻苯二甲酸二辛酯, C24H38O4H+,
391.2843 m/z413, 邻苯二甲酸二辛酯+钠, C24H38O4Na+,
413.2668
分子量测定失败的缘由
子离子分析〔 MS/MS 〕 子离子，用于构造推断(得到化合物的二级谱图即碎
片离子)和选择离子对作多种反响监测〔MRM〕。
子离子谱图与锥体电压断裂谱图〔源内CID〕可能特殊 相像，所不同的是子离子质谱图只有一种质量通过MS1， 因此也全部碎片离子都是由我们所选定的母离子所产生 的，所以我们更信任由MS/MS产生的谱图的纯度。
液相色谱基础知识Waters LC School 培训教材23页文档
养 成儿童 自觉的 纪律性 ，这是 儿童道 德教育 最重要 的部分 。—— 陈鹤琴
46、我们若已接受最坏的，就再没有什么损失。——卡耐基 47、书到用时方恨少、事非经过不知难。——陆游 48、书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者。——史美尔斯 49、熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟。——孙洙 50、谁和我一样用功，谁就会和我一样成功。——莫扎特
液相色谱基础知识Waters LC School 培训教材
1、纪律是管理关系的形式。——阿法 纳西耶 夫 2、改革如果不讲纪律，就难以成功。
3、道德行为训练，不是通过语言影响 ，而是 让儿童 练习良 好道德 行为， 克服懒 惰、轻 率、不 守纪律 、颓废 等不良 行为。 4、学校没有纪律便如磨房里没有水。 ——夸 美纽斯
46、我们若已接受最坏的，就再没有什么损失。——卡耐基 47、书到用时方恨少、事非经过不知难。——陆游 48、书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者。——史美尔斯 49、熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟。——孙洙 50、谁和我一样用功，谁就会和我一样成功。——莫扎特
液相色谱基础知识Waters LC School 培训教材
1、纪律是管理关系的形式。——阿法 纳西耶 夫 2、改革如果不讲纪律，就难以成功。
3、道德行为训练，不是通过语言影响 ，而是 让儿童 练习良 好道德 行为， 克服懒 惰、轻 率、不 守纪律 、颓废 等不良 行为。 4、学校没有纪律便如磨房里没有水。 ——夸 美纽斯
WatersLCMS液质联用培训讲义
3. 多反应监控MRM
MS1
Argon gas Collision
Cell
MS2
Precursors
Static m/z 609.1
Product
Static m/z 195.1
Waters 四极杆质谱培训
定性实验 调谐仪器
©2005 Waters Corporation
样品1．利血平标样1ppm, 根据全扫描获得最佳实验锥孔 （CV），调谐特定碎片最佳实验碰撞能量（CE），进行 多反应监控MRM实验准备
仪器质量校正
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
©2005 Waters Corporation
8. 按OK键后会跳出步骤6的自动校正选单，此时 按此页面OK键就会开始进行质量校正。
9. 当所有的校正都完成后，将校正的结果储存起 来，从质量校正页面的档案（File）选取另存新 档（Save As）。输入所欲储存之文件名称后按 OK即可。
峰进行准确质量测量 (如在全扫描方式)
• scan speed compensation扫描速度补偿: 当仪器进行
快速扫描时，对系统进行‘延时’补偿校正。
Waters 四极杆质谱培训
©2005 Waters Corporation
7. 设定采集参数：
选择适当的校正质量范 围，校正大范围的全质 量从22校正到2000，其 余的参数可以使用预设 参数default即可，设定 完后按OK键。
Cell
MS2
Products
Scanning (m/z M-46Da)
样品：混合氨基酸实验 中性丢失46(甲酸) 中性丢失63(甲酸+NH3)
Waters 四极杆质谱培训
MS1
Argon gas Collision
Cell
MS2
Precursors
Static m/z 609.1
Product
Static m/z 195.1
Waters 四极杆质谱培训
定性实验 调谐仪器
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样品1．利血平标样1ppm, 根据全扫描获得最佳实验锥孔 （CV），调谐特定碎片最佳实验碰撞能量（CE），进行 多反应监控MRM实验准备
仪器质量校正
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
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8. 按OK键后会跳出步骤6的自动校正选单，此时 按此页面OK键就会开始进行质量校正。
9. 当所有的校正都完成后，将校正的结果储存起 来，从质量校正页面的档案（File）选取另存新 档（Save As）。输入所欲储存之文件名称后按 OK即可。
峰进行准确质量测量 (如在全扫描方式)
• scan speed compensation扫描速度补偿: 当仪器进行
快速扫描时，对系统进行‘延时’补偿校正。
Waters 四极杆质谱培训
©2005 Waters Corporation
7. 设定采集参数：
选择适当的校正质量范 围，校正大范围的全质 量从22校正到2000，其 余的参数可以使用预设 参数default即可，设定 完后按OK键。
Cell
MS2
Products
Scanning (m/z M-46Da)
样品：混合氨基酸实验 中性丢失46(甲酸) 中性丢失63(甲酸+NH3)
Waters 四极杆质谱培训
液相色谱基础知识Waters LC School 培训教材
4 6 5 3 6 线 性 范 围 1 0 1 0 1 0 1 0 ~1 1 0 0
流 速 敏 感 是 是 否 否 是
温 度 敏 感 是 是 否 否 是
梯 度 淋 洗 不 可 有 限 制 可 以 可 以 脉 冲 的 可 以
色谱条件的优化
分 离 度
速 度 容 量
开发液相色谱方法
分辨率是色谱分离中主要考虑的因素 在开发色谱方法时，有很多因素是很重要
“制备型液相色谱” 分离及纯化
化合物的稳定性 样品的复杂性 制备量的要求 纯度的要求，及纯度的鉴定 方法的安全性
开发液相色谱方法
问题∶什么样的分离结果是好的?分辨率?
什么是色谱的分辨率？
分辨率的公式：
R
V2 V1 1 (W2 W1 ) 2
影响分辨率的因素：K’，a，N
V 18.70 R
V 16.63 R
16.63 N5 s 25 1.44
2
3334 plates
4.4% height
W 1.03
4.4% height
W 1.44
Good Column
Bad Column
提高柱效的方法
色谱柱本身
减小填料的颗粒度 找到最佳的流速(根据不同内径) 合适的温度 降低溶剂的粘度 增加柱长
感谢您对文章的阅读跟下载，希望本 篇文章能帮助到您，建议您下载后自 己先查看一遍，把用不上的部分页面 删掉哦，当然包括最后一页，最后祝 您生活愉快!
的。除分辨率之外，以下几个因素都要考 虑。
灵敏度 载样量 分析速度 溶剂损耗
成本 容易使用 色谱柱寿命 效率
其实，世上最温暖的语言，“ 不是我爱你，而是在一起。” 所以懂得才是最美的相遇！只有彼此以诚相待，彼此尊重， 相互包容，相互懂得，才能走的更远。 相遇是缘，相守是爱。缘是多么的妙不可言，而懂得又是多么的难能可贵。否则就会错过一时，错过一世！ 择一人深爱，陪一人到老。一路相扶相持，一路心手相牵，一路笑对风雨。在平凡的世界，不求爱的轰轰烈烈；不求誓 言多么美丽；唯愿简单的相处，真心地付出，平淡地相守，才不负最美的人生；不负善良的自己。 人海茫茫，不求人人都能刻骨铭心，但求对人对己问心无愧，无怨无悔足矣。大千世界，与万千人中遇见，只是相识的 开始，只有彼此真心付出，以心交心，以情换情，相知相惜，才能相伴美好的一生，一路同行。 然而，生活不仅是诗和远方，更要面对现实。如果曾经的拥有，不能天长地久，那么就要学会华丽地转身，学会忘记。 忘记该忘记的人，忘记该忘记的事儿，忘记苦乐年华的悲喜交集。 人有悲欢离合，月有阴晴圆缺。对于离开的人，不必折磨自己脆弱的生命，虚度了美好的朝夕；不必让心灵痛苦不堪， 弄丢了快乐的自己。擦汗眼泪，告诉自己，日子还得继续，谁都不是谁的唯一，相信最美的风景一直在路上。 人生，就是一场修行。你路过我，我忘记你；你有情，他无意。谁都希望在正确的时间遇见对的人，然而事与愿违时， 你越渴望的东西，也许越是无情无义地弃你而去。所以美好的愿望，就会像肥皂泡一样破灭，只能在错误的时间遇到错的人。 岁月匆匆像一阵风，有多少故事留下感动。愿曾经的相遇，无论是锦上添花，还是追悔莫及；无论是青涩年华的懵懂赏 识，还是成长岁月无法躲避的经历……愿曾经的过往，依然如花芬芳四溢，永远无悔岁月赐予的美好相遇。 其实，人生之路的每一段相遇，都是一笔财富，尤其亲情、友情和爱情。在漫长的旅途上，他们都会丰富你的生命，使 你的生命更充实，更真实；丰盈你的内心，使你的内心更慈悲，更善良。所以生活的美好，缘于一颗善良的心，愿我们都能 善待自己和他人。 一路走来，愿相亲相爱的人，相濡以沫，同甘共苦，百年好合。愿有情有意的人，不离不弃，相惜相守，共度人生的每 一个朝夕……直到老得哪也去不了，依然是彼此手心里的宝，感恩一路有你！
LC-MS原理详细讲解PPT
组合化学、有机化学的应用等；MALDI-TOF-MS的
特点是对盐和添加物的耐受能力高，且测样速度快，
操作简单。
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8
质谱原理简介：
质谱分析是先将物质离子化，按离子的质荷比 分离，然后测量各种离子谱峰的强度而实现分 析目的的一种分析方法。以检测器检测到的离 子信号强度为纵坐标，离子质荷比为横坐标所 作的条状图就是我们常见的质谱图。
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24
离子源
使被分析样品的原子或分子离化为带电粒子(离 子)的装置，并对离子进行加速使其进入分析器， 根据离子化方式的不同，有机质谱中常用的有 如下几种，其中EI，ESI最常用。
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25
EI(Electron Impact Ionization):电子轰击电离—硬电离。
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35
质量分析器的分类：
双聚焦扇形磁场-电场串联仪器(sector).
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5
Ionic
IonSpray离子喷雾
APCI大气压化学电离
Analyte Polarity
GC/MS
Neutral
101
102
103
104
105
Molecular Weight
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6
现代有机和生物质谱进展
在20世纪80及90年代，质谱法经历了两次飞跃。 在此之前，质谱法通常只能测定分子量500Da以 下的小分子化合物。20世纪70年代，出现了场解 吸（FD）离子化技术，能够测定分子量高达 1500~2000Da的非挥发性化合物，但重复性差。 20世纪80年代初发明了快原子质谱法（FABMS），能够分析分子量达数千的多肽。
WATERS公司的UPLC-TQD培训资料 MS7校正
appropriate fittings.
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参考溶液（Reference Solutions）
参考溶液用于在一个宽mass 范围内产生多离子。 质谱仪可以在此范围内被校正。 常用的参考溶液:
— PEG, PPG — NaI/CsI, NaI/RbI — Horse Myoglobin, Poly Alanine
NaI with Cs or Rb
Pegh.ref Pegh1000.ref Pegh2000.ref peghna.ref peghnam.ref peghnh4.ref ppghna.ref ppghnh4.ref
PEG or PPG
— 如同您不愿意在定量曲线之外进行定量计算一样，您也不希望在您的质量 数校正曲线之外工作。
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仪器的校正曲线（Calibration Curves）
一台三重四极杆的仪器需要有三种校正曲线：对于MS1和 MS2, 有六 条校正曲线
— 静态校正（Static calibration）可以使四极杆质量分析器准确地定位于 感兴趣的特定质量数上。 (例如 调谐，SIR和MRM).
进行仪器校正
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校正仪器Calibrate Instrument
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校正窗口
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校正的参考文件
Calibration Reference Files Are Stored in: C:\MASSLYNX\REF
参考文件中的每一个峰与采集的质谱图中对应的峰相匹配。Each peak in the Reference File is matched to a corresponding peak in the acquired spectrum file.
LC-MS基础原理
名义质量 36+6+16 = 58
准确质量 58.0417
C2H2O2 58.0054
C4H10
24+2+32 = 58
48+10 = 58
58.0780
Group/Presentation Title Agilent Restricted Month ##, 200X
质量准确度和准确质量测定
质量准确度：质量分析器测定得到的离子质量与其质量真实值（准确质量） 的接近程度。通常质量准确度用ppm 表示。
API离子源
ESI APCI APPI ESI+APCI组合源
GCM S
AP-MALDI
AP-MALDI （非液质联机用） 没有一种离子化技术可以涵盖所有的应用！
Group/Presentation Title Agilent Restricted Month ##, 200X
电喷雾离子化
电场诱导： 形成带电液滴
三级串联质谱的数据采集方式
• 母离子扫描－Parent Ion Scan • 子离子扫描－Product ion Scan • 中性丢失扫描－Constant Neutral Loss
• 多反应检测－Multiple Reaction Monitoring
• 选择离子检测－Select Ion Recording • 全扫描— Full Scan
母离子扫描
Q1 Scanning Collision Cell Q3 Fixed
381.2 m/z
118 m/z 475.0 m/z
检测可产生相同碎片的母离子。 应用举例：查找中药提取物中具有相同母核的成分； 寻找代谢产物（是否从特定原药转化而来？）
LC、LCMS(MS)检测原理及维护培训教材(PDF 68页)
溶剂前处理-过滤
过滤：0.45 μm或更小孔径滤膜
目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞 色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液
滤膜类型： 聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。
醋酸纤维滤膜： 不适用于有机溶剂，特别适用 于水基溶剂。
尼龙66滤膜：
适用于绝大多数有机溶剂和水溶 液，可以用于强酸，不适用于 DMF，THF， CHCl3 等溶剂
• APCI：对样品的基质和流动相组成的敏感度小；可使用稍高浓度 的挥发性强的缓冲液；有机溶剂的种类和溶剂分子的加成影响离子 化效率和产物
ESI和APCI的比较(3)——溶剂
• ESI：溶剂pH对在溶剂中形成离子的分析物有重大的影响；溶 剂pH的调整会加强在溶液中非离子化分析物的离子化效率
• APCI：溶剂的选择非常重要并会影响离子化的过程；溶剂的 pH值对离子化效率有一定的影响
去离子水重蒸； 二次或三次重蒸水；
不管采用何种途径，配制流动相应用新鲜水
水的等级
未注入样品时空白梯度的色谱图
水中不纯物的出峰
水中的不纯物保留在柱中，随之被乙腈洗脱
有机溶剂的等级
有机溶剂的等级
HPLC级 优级纯 分析纯
微量分析、梯度洗脱
都经过蒸馏和0.45 μm的过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒） 优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂 HPLC级经过0.2 μm的过滤,且除去有紫外吸收的杂质
正离子模式还是负离子模式?
• 质谱数据以正离子还是负离子模式采集，需考虑被测样品结 构和特性等
– 由于C-O、C-N、双键、三键及碱性化合物具有较强的质子亲和力 ，上述基团或化合物更倾向于形成正离子
– 含–COOH, -F, -Cl, -HSO3 的化合物由于具有较强的质子给予能力 ，更倾向于形成负离子
Waters检测器培训ppt课件
对积分输出无作用
F i l t e r
常设为∶1.0
A u t o Z e r o
自动调零
486的Diagnostics操作
D i a g . 按此键后，进入Diagnostics状态
面板下面一行显示∶ddd，按相应的数字可进行不同 的校正，常用的如下∶(详细参见操作手册)
即∶ A = abc
* * * *
透过率 % 吸光度 AU
* *
* * * * 浓 度 浓 度
同紫外检测器灵敏度有关的因素
信号强度(S)
从BEER定律可看出
样品的种类 样品浓度及进样的体积 检测池的长度
1 A U
所使用的波长，检测器的 时间常数
噪 音
. 2 5 A U 1 0 % 1 %
光电二极管矩阵检测器
简称∶PDA(Photodiode Array Detector) 兼顾紫外检测器及可见分光光度计的信息
在收集色谱图的同时，得到光谱图
色谱峰的纯度鉴定，色谱峰的确认 任意波长的再处理 对PDA的要求∶
色谱的灵敏度 光谱的灵敏度 光谱的分辨率
光电二极管矩阵检测器示意图
噪音(N)
流动相 S / N = 0 . 2 5 / 0 . 0 1 = 2 5 S / N = 1 / 0 . 1 = 1 0 所使用的波长，灯的能量 检测器的时间常数 非检测器因素 - 电噪音，泵脉动等
紫外检测器的溶剂影响
不同种类溶剂有其截 止波长 溶剂的质量好坏对其 截止波长有影响 为何溶剂质量不好?
产生假的紫外吸收变化∶
定量误差，光谱图不准确 梯度时严重的基线漂移
液相色谱的方法开发(二)梯度方法-Waters LC School 培训教材
B 低压梯度
梯度洗脱的可变参数
❀ A及B液的成分和化学特性 ❀ 梯度的陡度 ❀ 梯度的变化形状 1 2 3 4 5
6 7 8 9 10 11
如不用梯度 分离不理想
梯度条件的优化
压力曲线
梯度曲线
梯度曲线的变化 凹线
梯度曲线的变化 凸线
梯度平衡时间的影响 一
10分钟的梯度 6分钟的平衡时间色谱图不重复
为使色谱峰前移 提高起始时乙腈的比例 50-100% 水-乙腈 分离得到改善 但是9个化合物出了10个色 谱峰 说明有杂质存在 很可能是流动相水中的
梯度方法开发实例 - 第三步
从空白梯度图显示 在同样 的色谱条件 同样的检测灵敏度 下 共有两个杂质峰 说明流动 相水中的杂质在此条件下可能会 对检测有影响
液相色谱的方法开发
二 梯度方法
梯度洗脱的特点
❀ 优点
✎ 单位时间的分离能力增加 ✎ 检测灵敏度提高
❀ 缺点
✎ 仪器设备要求高 ✎ 不适合某些检测方式 ✎ 柱需再生 ✎ 定量分析的重复性较低
梯度的洗脱方式
❀ 高压梯度及低压梯度
溶剂 A 溶剂 B
泵A 泵B
溶剂 A
混合器 溶剂混合点
溶剂 B
比例阀 溶剂混合点 混合器
梯度方法开发实例 - 第六步
根据 梯度曲线下的面积越大 洗脱能力越强 的规律 试用#5 曲线使3-9号峰提前 改用50-95%B见到好的现象
梯度方法开发实例 - 第七步
最后用50-90%B 曲线4 得到好的结果
梯度平衡时间的影响 二
平衡时间 6分钟 平衡时间 7分钟 平衡时间 8分钟 平衡时间 9分钟
平衡时间从6到7分钟 第一个峰的保留时间有明显的 变化 说明6到7分钟的平衡时间不足 而8到9分钟变化 不大因而大于这个时间时 平衡充足
Waters液相基础讲义
©2012 Waters Corporation
7
色谱法的分类
按流动相和固定相的相对极性分: – 正相色谱(Normal Phase Chromatography)
o 固定相的极性大于流动相
– 反相色谱(Reversed Phase Chromatography)
o 固定相的极性小于流动相
有机化合物的极性 – 分子间作用力(静电引力,偶极力,色散力,氢键力…)综合表现的一种
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15
分离度(R)的定义式 简单说来,分离度即是两峰相对于其峰宽分开得有多远
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16
R:分离程度的量度
此处是几个计算分离度的实例
t1
t2
t3
t0
时间 .5
12
5
R
=
t2 − t1
1 2
(W1
+
W2
)
©2012 Waters Corporation
色谱法chromatography溯源100多年前俄国植物学家tswett茨维特分离植物色素时采用的实验方法他将植物色素的石油醚提取液倒入装有碳酸钙的直?2012waterscorporation2他将植物色素的石油醚提取液倒入装有碳酸钙的直立玻璃管再加入石油醚使其自由流下结果色素中各组份互相分离形成各种不同颜色的谱带tswett用希腊语chroma色和graphos谱描述他的实验方法即现在的chromatography色谱法?一根长玻璃管填充碳酸钙的颗粒?将碾碎之植物叶片的提取液灌入柱中?随着石油醚提取液向下流过柱子出现展宽的色带?分离出不同的化合物tswett的实验?2012waterscorporation3chromato颜色graphy图像注
waters液质联用-质谱基础知识介绍讲义
1: Scan AP+ BPI 8.29e4
%
33.78 35.04 38.26 39.52 33.32
0 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00
Time 40.00
为什么使用 LC/MS? …...
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快速得到丰富的结果
世界上第一台现代意义质谱仪在英国剑桥Cavendish实验室出现 电喷雾(Electrospray) 物理现象被发现 (并非为了 MS) 世界上第一台实际意义质谱仪在美国芝加哥大学实验室出现 (扇型磁场MS) 世界上第一台商业质谱仪 四极杆质量分析器质谱仪 飞行时间质量分析器质谱仪 开发GC/MS 大气压电离(APcI)源被发现(但并未被广泛应用) 开始广泛研究 LC/MS 传送带式 LC/MS 接口成为商业产品 离子束LC/MS接口出现 第一台电喷雾 MS仪宣告诞生 电喷雾离子源 MS 首次应用于蛋白质的分析
LC/MS中的质谱
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Mass Spectrometry-质谱
质量是物质固有特征之一，不同的物质有不同的质量谱 分析物被转化为气相离子而被分析 这些离子按其质荷比 (m/z)被分离而被检测 质谱图即是相关的离子流对m/z的图
•灵敏度高 •定性/定量本领高 •脉冲扫描采集数据 •高真空环境工作 •溶剂参与反应(API电离源)
为什么使用 LC/MS?
极高的灵敏度 (2)
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为什么使用 LC/MS?
极佳的定量结果(3)
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5 orders of magnitude linear dynamic range . over the concentration range 0.1pg to 10000pg, producing a coefficient of determination of 0.9975 for sulfadimethoxine injected on column,
WATERS公司的UPLCTQD培训资料 MS7校正.ppt
参考文件中的每一个峰与采集的质谱图中对应的峰相匹配。Each peak in the Reference File is matched to a corresponding peak in the acquired spectrum file.
A calibration curve is created that ‘adjusts’ the masses of the experimantal spectral peaks to the theoretical masses of peaks as listed in the reference file.
四极杆系统的校正
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校正 – 硬件 vs 软件
硬件的校正是由原厂和维修工程师进行的，可以保证名义质量数的准 度。
对于某些应用，硬件校正是足够的。 对于需要最高的质量准确度的情况，用户可以通过Masslynx 软件进
行软件校正，并将系统的质量校正变得更为精确。 在识别未知物以及MRM 和 SIR 分析时，确认选择了准确的质量数，
参考文件置于Masslynx软件的Ref 文件夹下。 参比文件都是 text 文本文件，.ref” 的扩展名。
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MS 校正的方式
从调谐页面进入，选择校正－仪器校正 使用自动调谐中的校正功能 对于SQD、TQD，可以使用IntelliStart – Instrument Setup功能
— 扫描校正（Scanning calibration） 保证在扫描采集中峰采集的质量数 准确性。 (例如 全扫描 Full Scan).
— 扫描速度补偿（Scan speed compensation calibration）：当仪器快 速扫描是，补偿系统中的“滞后时间” 。
液质联用培训讲义
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
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Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
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10. 输入所欲储存之文件名称后按存盘即可，确认所 有的扫描模式都已经被校正。
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
样品2. 对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸乙酯/对羟基苯甲 酸丁酯1ppm实验，调谐最佳实验锥孔电压（CV）/碰撞 能量（CE） ESI 对羟基苯甲酸甲酯 MRM :151/136,92 CV 30/ CE 15/ CE 20 对羟基苯甲酸丙酯 MRM :179/136,92 CV 30/ CE 15/ CE 20 对羟基苯甲酸丁酯 MRM :193/136,92 CV 30/ CE 18/ CE 25
• 此为第一段和第二段扫描模式参数。这是因为在进行质量
校正的时候必须同时校正两个质量分析器的三种模式（静 态扫描、动态扫描、扫描速率补偿）的缘故。
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仪器质量校正
©2005 Waters Corporation
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M+H+ 134 106 148 76 156 175 120 90 116 121 182 118 150 147 132 132 166 备注： * 碱性氨基酸 易中性丢失63(甲酸+NH3) ▼ 带苯环氨基酸 ● 仲氨酸 易中性丢失46(甲酸)
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定性实验 调谐仪器
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WATERS公司的UPLC-TQD培训资料MS1LCMS基础
为什么使用 LC/MS?
极高的灵敏度 (2)
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为什么使用 LC/MS?
极佳的定量结果(3)
5 个数量级的动态线性范围 (0.1pg - 1000pg) 实验系数= 0.9975,样品:磺胺二甲氧哒嗪上柱分析
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608.687
使用单一同位素质量: C: 33 x 12.0000 = 396.000 H: 40 x 1.0078 = 40.312 N: 2 x 14.0031 = 28.006 O: 9 x 15.9949 = 143.954
608.272
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为什么使用 LC/MS?
进一步增加HPLC的分离能力(4)
如果让您来选择， 您满意那一种分 离度?
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为什么使用 LC/MS?
解决无UV吸收样品分析问题(5)
LC_MS_OK
TaiyuanLC_MS5
100
x36
%
2: Diode Array 254 1.00Da 1.71e6
0 TaiyuanLC_MS5 100 2.914.81 5.84
4.00
1: Scan AP+ BPI
8.29e4
2.27 %
2.04 0
7.22 9.12
11.59 14.87
9.98 13.15
19.12
25.16
17.40 21.42 22.52 26.8228.84
33.3233.7835.04 38.2639.52
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碰撞压力 3×10-3mbar
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50
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2. 在质量分析器页面（Analyzer）设定以下的数值，括 号内的数值即为设定值：
• LM Resolution 1（15.0） HM Resolution 1（15.0） Ion Energy 1（0.5） • Entrance（50） Collision（2） Exit（50） • LM Resolution 2（15.0） HM Resolution 2（15.0） Ion Energy 2（0.5）
:609 (CV=45)
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2．子离子扫描 daughter scan
Argon gas
Collision
MS1
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5. 从下拉式选单选择适当的参考档案，如以碘化钠铯，从 下拉式选单选择适当的参考档案，如以碘化钠铯校正质 量范围两千以内可选择 Naics2 。确认后按开始键。
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RF only
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• 样品： 利血平标样,调谐最佳实验锥孔cone
voltage(CV)、毛细管电压、RF lens、离子能量等参数 ，进行全扫描获最大分子离子峰609。
• 样品：利血平1ppm (乙腈：水=1:1配置) ESI + scan
• 此为第一段和第二段扫描模式参数。这是因为在进行质量
校正的时候必须同时校正两个质量分析器的三种模式（静 态扫描、动态扫描、扫描速率补偿）的缘故。
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3. 多反应监控MRM
MS1
Argon gas Collision
Cell
MS2
Precursors
Static m/z 609.1
Product
Static m/z 195.1
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样品1．利血平标样1ppm, 根据全扫描获得最佳实验锥孔 （CV），调谐特定碎片最佳实验碰撞能量（CE），进行 多反应监控MRM实验准备
Cell
MS2
Precursor
Products
Static (m/z 609.1)
Scanning
利血平标样,根据全扫描获得最佳实验锥孔CV、毛细管电压、RF lens、 离子能量等参数，调谐碰撞能量collision energy (CE)、碰撞压力，进行
子离子扫描实验准备。 Daughter scan：609/195，448，397，174
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• static calibration静态精确校正:使四极杆质量分析器准
确地‘停’在指定的质荷比上 (如： Tuning， SIR ， MRM)。
• scanning calibration 扫描校正:能确保所采集到的质谱
3. 在质谱调机页面（MS Tune）选择校正仪器以开启 的质量校正页面。
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4. 开启质量校正页面后，质量校正前请先确定目前仪器处 于未校正的状态，所有六种校正都为未校正（No Calibration），若不然则开启一个未校正（Uncal.cal）的 档案。
6. 按开始键后会跳出自动校正选单 请勾选所有种类（Type） 处理程序部分选择讯号采集和校正
（Acquire & Calibrate），可勾选打 印报告（Print Report） 勾选完成后点压采集参数 （Acquisition Parameters）
！注意，在设定采集参数前请不要按
OK键。
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M+H+ 134 106 148 76 156 175 120 90 116 121 182 118 150 147 132 132 166
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备注： * 碱性氨基酸 易中性丢失63(甲酸+NH3) ▼ 带苯环氨基酸 ● 仲氨酸 易中性丢失46(甲酸)
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ESI +
MRM :609 /195(CV=45,CE=55)
样品2. 对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸乙酯/对羟基苯甲 酸丁酯1ppm实验，调谐最佳实验锥孔电压（CV）/碰撞 能量（CE）
ESI 对羟基苯甲酸甲酯 MRM :151/136,92 CV 30/ CE 15/ CE 20 对羟基苯甲酸丙酯 MRM :179/136,92 CV 30/ CE 15/ CE 20 对羟基苯甲酸丁酯 MRM :193/136,92 CV 30/ CE 18/ CE 25
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4．母离子扫描
MS1
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Collision Cell
Argon gas MS2
PPrreeccuurrssoorr
PPrroodduuccttss
Scanning
Static m/z 92
样品：对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟基苯甲酸丁酯实验 与氨基酸混合液。 调谐最佳实验锥孔电压（CV）/碰撞能量（CE），对羟基苯甲酸甲 酯/对羟基苯甲酸乙酯/对羟基苯甲酸丁酯三种化合物有共同碎片92， 可进行母离子扫描将其与氨基酸区别开。
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10. 输入所欲储存之文件名称后按存盘即可，确认所 有的扫描模式都已经被校正。
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Full scan(MS),daughter scan(MS/MS),MRM 实验参数设置建议如下：
Full scan(MS)
daughter scan(MS/MS)
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8. 按OK键后会跳出步骤6的自动校正选单，此时 按此页面OK键就会开始进行质量校正。
9. 当所有的校正都完成后，将校正的结果储存起 来，从质量校正页面的档案（File）选取另存新 档（Save As）。输入所欲储存之文件名称后按 OK即可。
MRM(MS /MS)
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parent scan(MS/MS),neutral loss scan(MS/MMS)
neutral loss scan(MS/MS)
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6. 混合扫描
• 样品：对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟
基苯甲酸丁酯与氨基酸混合液。
• 要求：一次实验同时完成多种扫描组合方式 • 羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟基苯甲酸
丁酯采用母离子扫描
• 氨基酸采用中性丢失扫描
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5. 中性丢失扫描neutral loss：
MS1
Precursor
Scanning (m/z M)
Argon gas Collision
Quattro LC/Micro 液质联用培训讲义
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• 仪器质量校正 • 定性实验 调谐仪器 • 定量实验 • 维护及故障排除 • 常用备件号
内容
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1. 注射泵注入校正溶液，以碘化钠铯（异丙醇/水 = 1：1, NaI 2ug/L , CsI 50ng/L）溶液为例，流速5ul/min
Cell
MS2