艾滋病病毒灭活试验
重庆市疾病预防控制机构行政事业性项目收费标准
附件：重庆市疾病预防控制机构行政事业性项目收费标准一、预防性体检费1、本项包括食品、化妆品、饮用水从业人员体检费,公共场所从业人员体检费，共2个子项。
2、体检机构必须按照项目内涵包括的所有项目作全项体检,并按人次收费。
当国家法律法规要求增减体检项目时,应参照现行《重庆市医疗服务价格》执行.12二、卫生监测费及卫生质量检验费1、本项共427个子项目，包括:（1）卫生微生物、疾病控制、寄生虫病监测、检验94个子项；（2）消毒、杀虫、灭鼠监测67个子项;（3）食品卫生监测、检验18个子项；(4）环境卫生监测、检验30个子项;（5)职业卫生监测、检验43个子项；（6）放射卫生监测、检验86个子项；（7)学校卫生监测、检验7个子项;（8)毒理试验25个子项；（9)仪器方法监测、检验24个;（10）医学实验动物和放射免疫检测16个子项;（11)公共场所集中空调通风系统检测费9个子项；（12）证书工本费3个子项;（13）安全性评价5个子项。
3456789101112131415161718192021222324252627282930三、疫情处理费本项共13个子项目，包括中毒、事故10个子项，污染、超期、不符合卫生要求、标准的健康相关产品3个子项。
3132四、委托性卫生防疫服务费本项共51个子项目,包括卫生业务咨询、资料费3个子项，卫生学评价31个子项,职业病危害17个子项。
33343536注：项目编码说明一级分类编码为1、2、3、4，如“预防性体检费”编码为“1"，“监测费、卫生质量检验费等"编码为“2”；二级分类编码,如“卫生微生物、疾病控制、寄生虫病检测检验”编码为“201";三级分类编码,如“卫生微生物”编码为“20101”；四级分类编码，如“细菌总数”编码为“20101001”;子项目编码,如“O157：37H7免疫磁珠法培养鉴定”编码为“20101018a”。
38。
艾滋病毒(I型Ⅱ型)病毒实验活动风险评估报告
艾滋病毒（I型Ⅱ型）病毒实验活动风险评估报告一、生物因子（一）一般特性1981年，艾滋病首次被报导。
1983年，艾滋病病毒被首次分离到。
1986年，国际病毒命名委员会统一将其命名为人类免疫缺陷病毒（HumanImunodeficiencyVirus，HIV）。
HIV属逆转录病毒科中的慢病毒属或组（Lentivirus）。
成熟的病毒直径为100～120nm，圆形，电子显微镜下可见致密的圆锥状蛋白的核心，内有病毒RNA分子和酶。
其外层有包膜。
包膜为两层的磷脂蛋白膜，膜上为突起，约有80个突起。
HIV-1的基因组长度为9.3kb，HIV-2为9.7kb左右。
基因组的两侧有LTR、3个结构基因（Gag、Pol、Env）和至少有6个调控基因（Tat、Rev、Nef、Vif、Vpu、Vpr）。
病毒的结构蛋白为核心蛋白（Gag）及包膜蛋白（Eev）。
Gag蛋白的P17、P24与P13与病毒核心相联系。
外膜蛋白是一个大分子糖蛋白（Gp120），形成病毒体表面的刺突。
跨膜蛋白（Gp41）的作用是将包膜蛋白固着于细胞膜上。
将病人自身外周或骨髓中的淋巴细胞经pHA刺激48～72h作体外培养（培养液中加IL2）1～2周后，病毒增殖可释放至细胞外，并使细胞融合成多核巨细胞，最后细胞破溃死亡。
亦可用传代淋巴细胞系如HT-H9、Molt-4细胞作分离及传代。
我国将HIV归为二类病原微生物，WHO将其归为于生物安全危险度3级的病原微生物。
原卫生部编制的《人间传染的病原微生物名录》规定病毒分离培养在BSL-3实验室进行，未经培养的感染性材料操作在BSL-2实验室中进行，灭活材料和无感染性物质操作在BSL-1实验室中进行。
运输包装要求按照A类包装，空运属A类（UN2614）。
（二）来源HIV的宿主为人类，感染人后引起艾滋病。
研究发现HIV的序列与猴免疫缺陷病毒（SIV）有高度同源性。
因此，人们用HIV最初是由动物传播给人类的说法来解释HIV流行的起源。
预防艾滋病测试题库及答案
预防艾滋病测试题库及答案1、下列哪一位是预防控制艾滋病的形象大使？ ( )A、牛群B、成龙C、李宁D、濮存昕答案：D2、怎样处理艾滋病病人的尸体才是正确的( )A、死后就没有传染性，不必做消毒处理B、必须就地火化，火化前要彻底消毒C、由病人家属自行处理答案：B3、下列哪项不是急性HIV感染的临床表现：( )A、发热B、咽痛C、淋巴结肿大D、口腔真菌感染答案：D4、窗口期内的艾滋病病毒感染者具有传染性.( )A、正确B、不正确C、不知道答案：A5、艾滋病常见合并症不包括：( )A、肺炎B、一过性脑膜炎C、念珠菌性食管炎D、急性肾炎答案：D6、下列哪个不是艾滋病的传播途径: ( )A、性接触B、血、血制品、器官移植和污染的注射器C、蚊虫叮咬D、母婴垂直传播答案：C7、我国防治艾滋病的工作原则是 ( )A、政府组织领导，部门各负其责，全社会共同参与B、以人为本、科学防治、依法防治C、预防为主、防治结合、综合治理D、突出重点、分类指导、注重实效；答案：A8、下列哪类人群不属于艾滋病毒感染的高危人群：( )A、同性恋者B、性乱交者C、静脉吸毒者D、无偿献血人员答案：D9、2008年世界艾滋病日的主题是：( )A、关注妇女，抗击艾滋B、相互关爱，共享生命C、预防艾滋病，你我共同参与D、遏制艾滋，履行承诺答案：D10、《艾滋病防治条例》于何时正式实施 ( )A、2006年1月18日B、2006年1月29日C、2006年2月18日D、2006年3月1日答案：D11、对于HIV/AIDS的诊断最重要的是根据( )A、临床表现B、经确认HIV抗体阳性C、具有高危行为答案：B12、下列不属于艾滋病急性感染期症状的是 ( )A、发热、出汗、乏力B、厌食、恶心、腹泻C、肌肉酸痛D、消瘦、口腔粘膜白斑答案：C13、下例哪项不是急性HIV感染的临床表现( )A、发热B、咽痛C、淋巴结肿大D、口腔真菌感染答案：D14、目前全球艾滋病流行最严重的地区是：( )A、亚洲B、欧洲C、非洲D、北美答案：C15、关于艾滋病疫苗正确的说法是：( )A、我国科学家已经研制成功了艾滋病的疫苗B、世界上现约有80种艾滋病疫苗C、目前世界上尚未研制出有效预防艾滋病病毒的疫苗答案：C16、最容易受艾滋病感染的高危人群是：( )A、性乱人群、男性同性恋、吸毒人群B、高收入人群、青少年人群C、无偿献血者答案：A17、患者CD4细胞在什么数值时会使机体免疫功能极其低下，继发各种机会性感染。
同种异体植入性医疗器械病毒灭活工艺验证指导原则(2020年修订版)
附件4同种异体植入性医疗器械病毒灭活工艺验证技术审查指导原则（2020年修订版）同种异体植入性医疗器械是以同种来源组织为原料加工或组成的产品。
我国目前对同种异体植入性医疗器械产品组织供体的病毒筛选多采用检测血清中病毒特异性抗体或抗原的方法，其中对人免疫缺陷病毒（HIV）还要求检测血液中的病毒核酸。
但是，尽管对供体进行了严格的筛选，仍然存在漏检和未知病毒存在的风险，以及生产过程中带入外源病毒的风险。
因此，要求同种异体植入性医疗器械产品在生产过程中采用有效的病毒灭活工艺，并对病毒灭活工艺的有效性进行科学的验证。
本指导原则是对同种异体植入性医疗器械生产过程中特定病毒灭活工艺的效果进行验证的一般要求，注册申请人应依据具体产品的特性对注册申报资料的内容进行充实和细化，如采用的病毒灭活工艺及相关参数等，并依据具体产品的特性确定其中的具体内容是否适用。
本指导原则是对注册申请人和审评人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供详细的研究资料和验证资料。
应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
—1 —本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将进行适时的调整。
本指导原则为2011年发布的《同种异体植入性医疗器械病毒灭活工艺验证技术审查指导原则》的修订版。
主要修订内容包括：修改指导原则中部分语言描述，如常用病毒灭活方法、染毒方法、病毒灭活效果判定、其他需考虑的问题、病毒灭活工艺的再验证等；完善指示病毒类型选择及举例的相关描述；增加病毒灭活/去除有效性验证的原则。
一、适用范围本指导原则适用于需要对生产过程中特定病毒灭活工艺的效果进行验证的同种异体植入性医疗器械。
二、基本要求（一）常用的病毒灭活方法同种异体植入性医疗器械的病毒灭活有多种方法，企业应根据产品的特性选择合适的病毒灭活工艺。
人类免疫缺陷病毒(HIV) 检测
④检测时，先将硝基纤维素膜细条恢复室温，再与待检血清（用稀释 液稀释后）共同浸泡，37℃孵育60min（需用振荡摇床）。 ⑤取出硝基纤维素膜细条，用洗涤液洗涤5次，每次5min（用振荡摇 床）。 ⑥加酶标记抗人IgG 抗体，于37℃孵育60min（需用振荡摇床）。 ⑦洗涤同⑤。 ⑧加酶底物，显色10～20min。终止反应（放置于室温观察）。
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（1）ELISA 间接法检测HIV 抗体：将待测的血清稀释后按HIV 酶标诊断试剂盒的说明进行操作；该法的特异性和敏感性强， 操作简单、快速安全，比较适合大批量标本和筛选实验，但对 HIV 感染初期病人不能检测到抗体是其不足之处。
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（2）蛋白印迹试验：ELISA 法确诊的阳性标本应做蛋白印迹试 验以确证。
人类免疫缺陷病毒（HIV） 检测
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人类免疫缺陷病毒（HIV）是引起人类艾滋病（获得性免疫缺 陷综合征，AIDS）的病原体。
第 2页1.方法第 Nhomakorabea页有检测HIV 抗原和检测HIV 抗体两种。前者可用组织细胞培养 法、核酸检测法及免疫酶标法；后者有凝集试验、免疫荧光试 验、蛋白印迹试验及放射免疫试验和免疫酶标技术等。 目前世界上常用酶联免疫吸附试验（ELISA）间接法作为经典筛 选试验，蛋白印迹试验作为确证试验。
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谢谢大家！
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（2）蛋白印迹试验：AIDS病人血清中的抗HIV 抗体与HIV的 多肽片段（外膜蛋白与核心蛋白）特异性结合后可形成多条蛋 白区带。强阳性反应显示HIV 几个基因组编码的全部蛋白带， 弱阳性反应显示两条或几条显色较弱的蛋白带，阴性反应则无 任何蛋白带显示。
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3.注意事项 （1）使用公认的HIV 酶标诊断试剂盒，不同厂家的试剂盒有可 能操作有异，应严格按说明书操作；不同厂家的产品有不同的 阳性判断标准，应按说明书慎重判断。 （2）鉴于HIV 及有关试验过程的特殊危险性，应严格规范实验 室操作规程，增加试验结果的准确性；严格规范安全防范措施， 防止感染；阳性结果应重复试验。
艾滋病病的PCR检测技术
艾滋病病的PCR检测技术PCR（Polymerase Chain Reaction）是一种常用的分子生物学技术，在艾滋病病毒的检测中起着重要作用。
本文将介绍艾滋病病毒的PCR检测技术以及其在诊断、病毒量测定和研究中的应用。
一、PCR检测技术简介PCR是由美国生物化学家基里尔·穆利斯（Kary Mullis）于1983年发明的一种体外扩增DNA的方法。
它通过模拟DNA在体内复制的过程，能够对少量DNA进行放大，从而便于检测和分析。
二、艾滋病病毒的PCR检测技术艾滋病病毒的PCR检测主要包括两个方面：一是检测病毒的核酸，在感染早期和晚期均可检测到；二是检测病毒的基因型，有助于了解病毒的分类和毒株差异。
1. 检测病毒核酸PCR技术可以通过特异性引物和酶来扩增病毒核酸，并通过凝胶电泳等方法进行检测。
该方法具有高度敏感性和特异性，可以检测到非常低浓度的艾滋病病毒。
2. 检测病毒基因型PCR技术可以通过特定的引物和扩增条件来扩增不同基因型的艾滋病病毒，例如HIV-1和HIV-2。
通过PCR扩增产物的序列分析，可以确定不同基因型的遗传特征和抗药性。
三、PCR技术在艾滋病病毒诊断中的应用PCR技术在艾滋病病毒的诊断中有以下几个方面的应用：1. 早期感染检测艾滋病病毒感染初期，体内的病毒数量较少，无法通过传统的抗体检测方法进行诊断。
而PCR技术则可以在感染后的数天内检测到病毒核酸，从而早期发现感染者。
2. 感染源追踪通过PCR技术检测病毒核酸，并进行基因型分析，可以追踪艾滋病病毒的感染源，了解传播途径和病毒变异情况，从而制定相应的预防和控制策略。
3. 抗病毒治疗监测艾滋病病毒的抗病毒治疗需要监测病毒的荷载量，即病毒在体内的含量。
PCR技术可以对病毒核酸进行定量检测，从而监测治疗效果，并调整治疗方案。
四、PCR技术在艾滋病病毒研究中的应用PCR技术在艾滋病病毒的研究中有以下几个方面的应用：1. 病毒变异研究通过PCR技术扩增不同基因型的艾滋病病毒，并进行序列分析，可以研究病毒的变异情况和进化规律，为疫苗研发和治疗策略提供理论支持。
血液制品去除灭活病毒技术方法及验证指导原则
血液制品去除/灭活病毒技术方法及验证指导原则目前已知经血液制品传染的病毒主要有HBV、HCV、HIV—1、HIV-2、HTLV和细小病毒B19。
尚未发现经血液制品传染CJD.但有少数研究报告发现有实验性传染现象，因此要密切关注CJD，特别是vCJD的发展动向。
为了提高血液制品安全性,生产工艺要具有一定的去除/灭活部分病毒能力，生产过程中应有特定的去除/灭活病毒方法。
本技术指导原则是对血液制品（指以人血浆为原料制备的制品)生产过程以及特定的去除/灭活病毒方法验证的指导原则，包括指示病毒和病毒去除/灭活方法的选择、验证方案的设计、结果判定以及附录所列技术验证申报的程序。
一、去除/灭活病毒方法的选择由于不同类血液制品潜在的污染病毒的可能性不同,为此选择病毒去除/灭活方法的侧重点也应有所不同：（一）凝血因子类制品生产过程中应有特定的能去除/灭活脂包膜和非脂包膜病毒的方法，可采用一种或多种方法联合去除/灭活病毒。
（二）免疫球蛋白类制品对于免疫球蛋白类制品（包括静脉注射用人免疫球蛋白、人免疫球蛋白和特异性人免疫球蛋白）生产过程中应有特定的灭活脂包膜病毒方法。
但从进一步提高这类制品安全性考虑,提倡生产过程中加入特定的针对非脂包膜病毒的去除/灭活方法。
（三）白蛋白采用低温乙醇生产工艺和特定的去除/灭活病毒方法，如巴斯德消毒法等.二、常用的去除/灭活病毒方法评价（一）巴斯德消毒法（巴氏消毒法）1．人血白蛋白制品几十年临床应用结果表明，白蛋白的巴氏消毒法对HIV和肝炎病毒是安全的。
其病毒灭活条件已很完善，可不要求进行病毒灭活验证。
但是必须对巴氏消毒法所用设施进行验证，使巴氏消毒各参数符合要求（包括制品内温度分布的均一性和灭活时间）。
2．其它血液制品(液体制剂）由于制品的组成、稳定剂（如:氨基酸、糖、枸橼酸盐等)及其浓度的不同,均会对灭活病毒效果有一定的影响。
因此在采用巴氏消毒灭活病毒方法时必须进行病毒灭活效果验证。
艾滋病病毒灭活试验
艾滋病病毒灭活试验（1）目的测定消毒剂对艾滋病病毒（human immunodeficiency virus，HIV）灭活所需的剂量，以验证对该病毒污染物消毒实用剂量。
（2）实验原理用细胞感染法测定消毒剂作用前后（或实验组与对照组）样本中HIV 的量。
以细胞病变作为判断指标，确定各组病毒的感染滴度，计算消毒剂对 HIV 的灭活对数值。
（3）安全防护试验中要求采取严密防护措施。
我国规定所有接触 HIV 的试验均需在生物安全三级（biological safety level 3，BSL 3）实验室内进行，并制定有相应的安全防护措施。
在 HIV 灭活试验时，必须严格按照有关安全规定进行。
（4）试验分组1）试验组。
根据所测消毒剂对其他微生物的杀灭或灭活剂量估计，设立适宜的浓度与作用时间组（不少于1个浓度，3个作用时间），对作用时间的设计应不短于30s。
所设组应能测出使 HIV 全部灭活所需的最低有效剂量（药物浓度与作用时间）。
2）阳性对照组。
用去离子水代替消毒剂，按试验组规定步骤加入 HIV 悬液进行试验和培养，观察 HIV 生长是否良好。
3）阴性对照组。
用不含 HIV 的完全培养基作为阴性对照，观察所用培养基有无污染，细胞是否生长良好。
4）消毒剂对细胞毒性组。
取 100μl 待测消毒剂，加入含有100μl 用完全培养基制备的MT4 细胞悬液（含细胞400 000 个/ml）的 96 孔培养板内。
置二氧化碳温箱（37℃）中培养 7 d，观察细胞生长情况，确定消毒剂对细胞无毒性的最高稀释度。
（5）HIV 悬液定量灭活试验操作程序1）从液氮中取出冻存的 MT4 细胞，在37℃ 温水中迅速融化，并用细胞维持液洗涤两次后，转种于加有 10ml 完全培养基培养瓶中。
逐日观察细胞生长情况，在细胞对数生长期时收获细胞用于消毒试验。
2）从液氮中取出冻存HIV-1毒种，接种于含10ml细胞悬液（含细胞700 000个/ml～800 000个/ml）培养瓶中。
输血科三基知识测试题含参考答案
输血科三基知识测试题含参考答案1、输血相关性病毒性肝炎主要是由丙型和乙型肝炎病毒引起，尤其是前者约占输血后肝炎的（）A、≥70％B、≥10％C、≥30％D、≥90％E、≥50％答案：C2、医疗机构所需全血及其血液成分，需要那级政府批准的血站负责提供？（）A、省级以上人民政府卫生行政部门批准B、由各医院批准C、医疗机构自采自用D、血站答案：A3、WHO加强输血安全工作的指导原则，以下哪项不是：（）A、建立国家协调的采供血机构体系并实施质量管理B、只从低危人群中的无偿献血者采集血液C、严格检测血液，提高输血安全D、督促各国政府对血液机构的资金投入E、加强临床用血管理，做到科学、合理用血，确保输血安全答案：D4、全血的有效成分主要是（）A、红细胞、白细胞B、红细胞、白细胞、血小板、C、红细胞、血浆蛋白及各种有形成分D、红细胞、血浆蛋白、稳定的凝血因子答案：D5、由于输血穿刺过程中未严格执行无菌操作或辅料应用不当造成局部静脉感染，感染最常见的细菌是：（）A、葡萄球菌B、链球菌C、厌氧菌D、大肠埃希菌E、以上都不是答案：A6、下列关于艾滋病病毒的灭活不正确的是（）A、35％山梨醇，70℃失去活性B、56℃230分钟失去活性C、不加稳定剂，70℃失去活性D、0.2％次氯酸钠5分钟失去活性E、室温保存7天无法灭活答案：E7、某患者因肾功能障碍出现高钾血症，此时因贫血症状显著需要输血，最好选择哪种红细胞制品：（）A、洗涤红细胞B、浓缩红细胞C、少白细胞的红细胞D、悬浮红细胞E、辐照红细胞答案：A8、下列输血操作错误的是：（）A、血小板制品从输血科取回后应立即输注，以患者能够耐受的速度尽快输注完毕B、输注血液制品过程中，护士应严密观察和护理，如出现输血不良反应需要进行必要的处理C、红细胞制剂内禁止添加任何药物D、输血时当发生阻塞时可强行挤压血袋和输血器E、红细胞制品粘稠度比较大，输注过程中需要经常反复倾倒血袋，使红细胞悬液混匀答案：D9、血型为B型的人，其基因型有几种：（）A、1B、2C、3D、4E、5答案：B10、溶血反应的早期特征是（）A、面部潮红，出现荨麻疹B、寒战高热，呼吸困难C、粘膜皮肤有出血点和瘀斑D、头部胀痛，恶心呕吐E、腰背部剧痛，心前压迫感答案：E11、可用于补充血容量的是（）A、免疫球蛋白B、血小板C、冷沉淀D、白蛋白液E、浓缩红细胞答案：D12、“输血标本采集、接收制度”规定护士采集输血标本的流程是：（）A、护士应遵医嘱按标本采集要求做好标本采集前准备B、护士在血液标本采集前，先遵医嘱打印用血申请单的标本条形码，贴好血标本试管，标识清楚，患者基本信息正确无误C、护士在血标本采集时，应持输血申请单和标识试管，在患者床前当面核对患者姓名、性别、年龄、住院号、床号、血型，并采集2-4ml血样D、采集完成后必须再次核对标本标识与患者是否相符，标本条形码与申请单是否一致E、以上都是答案：E13、对于有免疫缺陷或有免疫抑制患者输血，最好应输（）A、浓缩红细胞B、辐照红细胞C、悬浮红细胞D、洗涤红细胞答案：B14、可用于难治性感染的是（）A、免疫球蛋白B、冷沉淀C、血小板D、白蛋白液E、浓缩红细胞答案：A15、手术全麻患者输血后出现下列哪项临床表现应考虑急性溶血反应A、皮肤粘膜苍白B、心率增快与心律不齐C、呼吸竭难D、原因不明的血压下降及创面出血不止（）E、尿量增加答案：D16、下列各项不是储存式自体输血禁忌症的是：（）A、服用抑制代偿性心血管反应药物者B、有活动性癫痫病史者C、有献血后发生迟发性昏厥史者D、可能患有菌血症或正在使用抗生素抗感染治疗的患者E、健康人希望预存自体血液以备需要时使用答案：E17、《广东省实施<中华人民共和国献血法>办法》（广东省人民政府第250号令）规定，医疗机构临床用血应当遵守下列规范：（）A、使用依法设立的本行政区域内血站提供的血液B、储存、运输血液应当符合国家规定的卫生标准和要求C、严格执行输血技术规范和制度，科学、合理用血，不得浪费和滥用血液D、禁止出售无偿献血的血液E、以上均是答案：E18、输血后患者出现酱油色尿，意味着可能出现：（）A、过敏反应B、发热反应C、喉头水肿D、溶血反应E、呼吸困难答案：D19、红细胞在正常人血液循环中的平均寿命大约是：（）A、100天B、3~4天C、7天D、120天E、24小时答案：D20、再生障碍性贫血的产生是由于（）A、造血原料缺乏B、无效造血C、骨髓造血功能低下D、红细胞破坏过多E、出血答案：C21、某人某基因型为Bi，其父母的表型可以是：（）A、A型+AB型B、A型+O型C、AB型+AB型D、A型+A型E、O型+O型答案：A22、下面的叙述中哪种说法不正确：（）A、Rh血型系统的抗原性最弱B、中国汉族人群中大多数是RhD阳性C、Rh血型是继ABO血型发现后临床意义最大的血型D、Rh血型不合的输血，可产生危及生命的溶血性输血反应E、母子Rh血型不合可导致新生儿溶血病答案：A23、《中华人民共和国献血法》何时开始实施：（）A、1997年7月B、1999年10月C、1998年10月D、2001年10月E、2000年1月答案：C24、患者男，50岁。
HIV实验室检测方法和步骤
HIV实验室检测方法和步骤HIV，也称为人类免疫缺陷病毒，是一种能导致艾滋病的病毒。
HIV实验室检测方法和步骤被广泛应用于检测感染HIV的个体。
以下是一般情况下使用的实验室检测方法和步骤的详细说明。
1.预处理和登记在进行HIV实验室检测之前，需要对样本进行预处理和登记。
预处理包括标识样本的相关信息，如样本编号和患者信息。
这些信息对于结果记录和跟踪是至关重要的。
此外，还需检查样本的适应性和完整性。
2.血液样本采集3.血清分离采集到的血液样本需要进行血清分离。
这可以通过离心来分离血液的不同成分，例如血红蛋白和血清。
离心速度和时间需要根据实验室设备和协议进行调整。
4.酶联免疫吸附测定法（ELISA）最常用的HIV实验室检测方法是酶联免疫吸附测定法（ELISA）。
这种方法使用特定的抗体来检测血液中特定的抗原。
根据ELISA方法的不同，可检测HIV抗原或抗体。
实验室技术人员将患者血清样本加入到已包含HIV相关抗原或抗体的试剂盘中，然后根据试剂盘的建议操作，包括孵育时间、温度和洗涤步骤。
任何与接触抗原或抗体反应的特异性颜色改变，都可作为阳性结果。
否则，结果被视为阴性。
5.确认试验在进行HIV检测的初步结果后，通常会进行一个或多个确认试验。
确认试验的目的是统一确定检测结果的可靠性。
常用的确认试验包括HIV免疫荧光试验（IFA）和西方印迹法（Western blot）。
这些试验通过检测血清中的HIV特异性抗体，以确保先前的结果的准确性。
6.分子检测有时，为了获得更加可靠和敏感的结果，实验室会使用分子检测方法，例如聚合酶链式反应（PCR）。
PCR可以检测和放大病毒的基因或核酸，以确定HIV感染的存在和病毒的数量。
7.结果解读和记录HIV实验室检测结束后，实验室技术人员需要解读并记录结果。
阳性结果意味着存在HIV感染，而阴性结果则表示未检测到HIV感染。
针对不同的检测方法和样本类型，结果的解释可能有所不同。
因此，在结果解读和记录时，实验室人员需要严密遵循实验室的标准操作规程（SOP）。
艾滋病病毒(HIV)初筛实验室室内质量控制标准操作程序
艾滋病病毒(HIV）初筛实验室室内质量控制标准操作程序【目的】保证ELISA检测结果准确可靠, 充分发挥其方法学的优点。
【该SOP变动程序】本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：科主任、专业主管。
【方法】【分析前质控】一、人员培训实验是人操作的,因此检验人员需经过培训，熟练掌握本专业如下几方面的技术知识:1、检验项目的基本原理（ELISA原理)。
2、临床意义。
3、熟悉检测技巧，了解易出差错的环节及难点.4、熟悉检测试剂性能（包括试剂盒组成，包被片段及其组成）。
5、熟悉检测仪器的原理及性能；掌握数据处理的能力和质量控制知识。
6、需参加有关部门组织的专门培训班，考试合格后持证上岗。
二、室内质控血清的制备:1、收集阳性血清（无明显溶血、黄胆、脂肪血和污染血清，到一定量（够本室使用3-6个月的量).2、传染性病毒阳性需经56℃、30分钟灭活后使用.3、过滤，除纤维沉淀物。
4、稀释,用正常人血清或10％小牛血清PBS溶液稀释。
5、测定值，与定值参考品进行对比、求值,一般定在Cut Off值附近的阳性值。
6、分装小瓶（每日用量），加盖、贴签,—20℃冻存备用.【试剂盒选择】必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格，并贴有防伪标签的产品。
【试剂盒评价】试剂评价需要有权威的血清考核盘（Panel）进行检测,价格昂贵，操作繁琐,一般实验室不易开展，可以通过以下信息,了解试剂质量.1、根据该试剂生物制品鉴定所的批批检定报告，了解其质量水平,按照质量计划选择灵敏度高的或特异性高的试剂。
2、通过询问试剂包被物的组成，如原料来源(基因工程或合成多肽)，片段的组合（按比例混合或化学合成），片段的长短等判断试剂的优劣。
3、参考室间质评报告中对试剂的评价结果，了解不同试剂的质控成绩.4、根据权威部门发布的试剂评价结果，了解市场上试剂的质量优劣.【仪器质控】为使仪器保持最佳工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序（SOP)，所要控制的仪器包括移液器（加样枪),水浴箱（温箱），洗板机和酶标仪.1.移液器：ELISA加样量小(5—100ｕl),其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示量的水,万分之一天平称重后计算吸量是否准确,一般应在±10%以内.2。
HIV抗体检测与质量控制
快速检测（RT）及其它检测试验
酶联免疫吸附试验（ELISA）
HIV抗体检测试剂（第三代）：检测HIV-1/2抗
体
HIV抗原抗体联合检测试剂（第四代）：可同时
检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体
用酶标仪测定结果
有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定
ELISA试验中可能出现的问题和原因分析
问题 可能的原因（非试剂盒本身的原因） 1.加样本及试剂量不准 2.加样过快，孔间发生污染 3.加错样本 测定的重复性差 4.加样本和试剂时，加在孔壁上部非包被区 5.温育时间、洗板、显色时间不一致 6.酶标仪滤光片问题
ELISA试验中可能出现的问题和原因分析
问题 可能的原因（非试剂盒本身的原因） 1.漏加酶结合物 白板（阳性对照 2.洗液配制问题，量筒不干净含酶抑制物 不显色） 3.漏加显色剂A或B 4.终止液当显色剂使用 1.洗板不干净 全部板孔都有显 2.加底物的吸头被酶污染 色 3.洗板液受酶污染
病毒特点
HIV病毒主要攻击人体的辅助T淋巴细胞系统； 一旦侵入机体细胞，病毒会和细胞整合在一起 终生难以消除；病毒基因变化多样；广泛存在 于感染者的血液、精液、阴道分泌物、唾液、 尿液、乳汁、脑脊液、有神经症状的脑组织液 ，其中以血液、精液、阴道分泌物中浓度最高 ；对外界环境的抵抗力较弱，对乙肝病毒有效 的消毒方法对艾滋病病毒消毒也有效；感染者 潜伏期长、死亡率高；艾滋病病毒的基因组比 已知任何一种病毒基因都复杂。
体外生存
人类免疫缺陷病毒在人体外生存能力极 差，不耐高温，抵抗力较低，离开人体 不易生存，常温下只可生存数小时至数 天。 HIV对热敏感。在56℃条件下30分钟即 失去活性，但在室温保存7天，仍保持活 性。
猪场消毒制度
猪场消毒制度近年来，随着养殖水平的不断提高，我国养殖业已进入一个快速发展的时期，但由于养殖场规模集约化、高密度饲养，使养殖场的病原体不断复杂，而这些病原微生物在适当条件下能造成疫病的流行，如猪瘟、口蹄疫、猪蓝耳病、猪圆环病毒、禽流感、高热病等，养殖场一旦发病，将导致严重的经济损失。
消毒是指用化学的、物理的，或者生物学的方法清除或者杀灭外环境中的病原微生物及其它有害微生物，通过切断疫病的传播途径以防止疫病的发生或者防止传染病的扩大与蔓延，确保安全生产。
彻底的消毒、规范的免疫和科学的药物预防手段是最有效、最方便的控制疾病的方法。
1 消毒剂分类及常用消毒剂1.1 按消毒剂作用水平分类1.1.1 高效消毒剂：指可杀灭所有微生物，包括各种细菌繁殖体、细菌芽胞、真菌、结核杆菌、囊膜和非囊膜病毒等，也称灭菌剂，如过氧乙酸、甲醛、戊二醛等及有机汞类；1.1.2 中效杀毒剂：除不能杀死细菌芽胞外，可杀死细菌繁殖体、真菌和病毒等其他微生物，如乙醇、酚剂类；1.1.3 低效杀毒剂：可杀死部份细菌繁殖体、真菌和囊膜病毒，不能杀灭结核菌、细菌芽胞和非囊膜病毒，如季胺盐类等阳离子表面活性剂--新洁尔灭、洗必太等。
1.2 按消毒剂用途分类1.2.1 环境消毒剂；1.2.2 带畜(禽)体表消毒剂(包括饮水、器械等)。
1.3 按物品性状：固体、液体、气体1.4 按化学性质分类1.4.1 过氧化物类消毒剂：指能产生具有杀菌能力的活性氧的消毒剂，如过氧乙酸、过氧化氢、过氧戊二酸、臭氧、二氧化氯等，如杜邦公司Antec 的 “Virkon ” 过一 硫酸氢钾复合盐消毒剂等。
缺陷及危害：过氧乙酸、过氧化氢、过氧戊二酸不稳定、 刺激性强，长期使用对人和动物眼睛、呼吸道黏膜、环境有强力的破坏。
表 1 过氧化物消毒剂性能对照表1.4.2 含氯消毒剂：指在水中能产生具有杀菌活性的次氯酸的消毒剂： (1)有机含氯消 毒剂：如二氯异氰尿酸钠、二(三)氯异氰尿酸、氯胺－T 、二氯二甲基海因、四氯 甘脲氯脲等的消毒剂； (2)无机含氯消毒剂：漂白粉(CaOCl2)、漂(白)粉精(高效次氯 酸钙 Ca(ClO)2 2H2O)、次氯酸钠(NaClO.5H2O )、氯化磷酸三钠(Na3PO4 . 1/4NaOCl . 12H2O)等。
HIV实验室检测技术
HIV实验室检测技术
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操作方法
• 实验准备:试验开始前将试剂和样品放置在 室温(18~23℃), 按实验室SOP做好试剂准 备。
• 备好试剂盒、待检样品和外部对照质控血 清后,严格按试剂盒说明书以及质控和安全 防护要求进行筛查检测.
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注意事项
• ELISA 是目前公认的抗-HIV 较佳的筛选方 法，但在实际工作中，ELISA抗-HIV的检测 受诸多因素影响。
艾滋病期：保持和发展AIDS早期症状，出现多种机 会性感染，神经细胞和功能损伤的表现，易发生 多种肿瘤
* AIDS的病程通常2年
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关于检测抗-HIV的残余危险度
含义：在目前条件下，筛查后仍具感染性的机率 称为残余危险度。
影响因素： * 窗口期和检测时机的选择问题 * 实验室质控 * 个别人免疫功能低下，对HIV无反应 * 试剂质量和保存问题 * 是否在有效期内使用 * 试验操作错误：标本或结果登记的差错、仪器校准否、 错误的操作
第4代试剂
• 从理论上来讲，这种试剂是很完美的，但其 敏感度和特异度尚需通过大量的临床评估加 以确认。在初筛诊断试剂上还发展了特异的 HIV IgA，用作围产期儿童诊断，敏感度达 93.1%，特异度在1月龄以上的婴儿可达 100%。此外，在对抗HIV IgM的诊断也正在 积极研究，并取得了可喜的成绩，无形中可 缩短窗口期7—10天。
B
± ±或 ＋ 再次采样，做确证实验
C
±－
报告抗-HIV阴性
D
－ 不必复检 报告抗-HIV阴性
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论艾滋病病毒的消毒与灭活
论艾滋病病毒的消毒与灭活发表时间：2018-01-15T11:41:18.033Z 来源：《世界复合医学》2017年第7期作者：徐素珍[导读] 本文通过分析艾滋病病毒的特性，针对性的提出关于艾滋病病毒的消毒与灭活方法的研究探讨。
沿河土家族自治县人民医院贵州铜仁 565300摘要：由于艾滋病的强大影响力，所以大家对于艾滋病存在偏见，认为艾滋病病毒传播非常简单，而且危害巨大。
为了能够更好地实现解除偏见，本文通过分析艾滋病病毒的特性，针对性的提出关于艾滋病病毒的消毒与灭活方法的研究探讨。
最终的目的是形成关于艾滋病病毒防治的正确认识，消除对于艾滋病的偏见。
关键词：艾滋病病毒；消毒；灭活引言艾滋病作为一种急速传播的传染病，大家对于它的认识程度并不够，在很大程度上，由于对艾滋病的恐惧，大家对艾滋病人存在排斥恐惧心理。
这样的认知带来了很多的社会问题。
所以为了让大家正确认识艾滋病，了解艾滋病毒的消毒与灭活是很重要的。
有了了解就能带来理解，所以需要进行更多的关注。
一．艾滋病病毒相关概念（一）艾滋病艾滋病是一种恶性传染病，一旦感染，病毒就会攻击人的免疫系统，最终由于免疫力极低而死于病毒交叉感染。
由于感染后的治疗没有很有效的办法，所以在一定意义上，艾滋病对于大多数人属于不治之症。
（二）艾滋病毒艾滋病病毒是依靠人体存活的，一旦离开人体就很难存活，常温下，在体外的血液中只可生存数小时。
而且病毒在性质上对热敏感，在56℃条件下30分钟即失去活性，且病毒在离开体外的瞬间失去传染性，日常生活接触不会感染。
这是艾滋病毒的基本特性。
二．艾滋病病毒消毒与艾滋病病毒灭活（一）消毒方法由于病毒的性质决定，我们在防止艾滋病的过程中，需要进行大面积消毒。
大家都了解艾滋病的传播方式主要有三种：血液、性交和母婴，所以我们能够利用消毒方法进行防治大部分的艾滋病。
对血液进行消毒是一种最常见而且较为有效的方法。
消毒方法主要分为加热消毒和化学方法消毒，加热消毒一般采取高压蒸气消毒、燥空气烘箱消毒、煮沸保证器械的各个部分都达到100℃，并保持10～30分钟这三种方法，由于持续时间长，要求精准，所以在可控范围内进行加热消毒是可以实现的，而且效果较好。
输血科三基习题库及参考答案
输血科三基习题库及参考答案一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1、下列关于艾滋病病毒的灭活不正确的是（）A、56℃230分钟失去活性B、不加稳定剂，70℃失去活性C、室温保存7天无法灭活D、0.2％次氯酸钠5分钟失去活性E、35％山梨醇，70℃失去活性正确答案：C2、根据《临床输血技术规范》附件一成分输血指南规定，血浆的适应症错误的是：（）A、大面积创伤、烧伤B、紧急对抗华法林的抗凝血作用C、治疗低蛋白血症D、手术、外伤、肠梗阻等大出血或血浆大量丢失E、补充凝血因子正确答案：C3、溶血性输血反应的实验室检查包括：（）A、检测血浆游离血红蛋白、尿血红蛋白，尿常规B、重做输血前后血液标本ABO及Rh血型C、重做交叉配血试验D、直接抗人球蛋白试验E、以上都是正确答案：E4、急性失血输血合理的是（）A、失血量达到总血容量的15%，输浓缩红细胞B、失血量达到总血容量的20%，输浓缩红细胞及全血C、失血量达到总血容量的35%，只输浓缩红细胞D、失血量低于总血容量的20% ，可考虑不输血正确答案：D5、病毒感染存在检出窗口期，用NAT试剂检测HIV RNA的窗口期为：（）A、16天B、11天C、30天E、28天正确答案：B6、ABO血型基因在第几号染色体上：（）A、第1号B、第2号C、第9号D、第10号E、第13号正确答案：C7、可用于治疗慢性贫血的是（）A、血小板B、白蛋白液C、冷沉淀D、免疫球蛋白E、浓缩红细胞正确答案：E8、采用凝聚胺法进行交叉配血试验的原理是：（）A、消化红细胞表面唾液酸B、抗体搭桥作用C、具有分子筛作用D、中和红细胞表面的正电荷E、中和红细胞表面的负电荷正确答案：E9、手术室对患者实施自身输血，可能采取几种方法？（）A、血液等容稀释、术中自身血回输，术中控制性低血压B、控制出血，用止血药及红细胞生成素C、术前采血、术后输血D、晶体盐或胶体液维持正确答案：A10、以下哪些检验项目是准备输血的患者在输血申请前必须完成的：（）A、ABO、RhD血型鉴定B、血常规和/或凝血功能C、乙肝表面抗原、HCV抗体、HIV抗体、梅毒E、A+B正确答案：D11、一次输血不应超过（）A、8 小时B、4 小时C、5 小时D、6 小时E、2 小时正确答案：B12、根据《临床输血技术规范》附件六内科输血治疗同意书规定，输血治疗是临床治疗的重要措施之一，但输血存在一定的风险，可能发生的输血反应及感染经血传播的疾病有：（）A、过敏反应、发热反应B、感染乙肝、丙肝、梅毒、艾滋病C、感染疟疾D、巨细胞病毒和EB病毒感染E、以上均是正确答案：E13、最常引起急性溶血性输血反应的抗体为：（）A、抗-A或抗-BB、抗JKaC、抗ED、抗FyaE、抗P1正确答案：A14、由于输血穿刺过程中未严格执行无菌操作或辅料应用不当造成局部静脉感染，感染最常见的细菌是：（）A、葡萄球菌B、链球菌C、厌氧菌D、大肠埃希菌E、以上都不是正确答案：A15、中心血站的设置审批：（）A、省人民政府卫生行政部门B、国家卫生行政部门C、根据本辖区用血情况由医院设置D、省、自治区人民政府正确答案：B16、血液发出，受血者和供血者的血样应在什么条件下保存几天？（）A、零下保存一个月B、22℃保存一周C、应在2-6℃下保存7天D、常温下保存10天正确答案：C17、对于有免疫缺陷或有免疫抑制患者输血，最好应输（）A、悬浮红细胞B、浓缩红细胞C、洗涤红细胞D、辐照红细胞正确答案：D18、洗涤红细胞最常用于：（）A、心功能不全患者B、慢性贫血患者C、反复输血发热的非溶血性输血反应的患者D、预防输血传播性疾病E、因输血而发生过严重血浆蛋白过敏的患者正确答案：E19、医疗机构所需全血及其血液成分，需要那级政府批准的血站负责提供？（）A、省级以上人民政府卫生行政部门批准B、由各医院批准C、医疗机构自采自用D、血站正确答案：A20、从200ml全血分离的1单位浓缩红细胞可提高70kg成年人的HCT（）A、2%～3%B、1%～2%C、3%～4%D、4%～5%正确答案：B21、若悬浮红细胞在输注时出现输注不畅，可通过Y型管加入的稀释液为：（）A、低分子右旋糖酐B、葡萄糖盐水C、林格液D、生理盐水E、葡萄糖液正确答案：D22、病人输血前，医护人员将做哪些工作？A、医护人员持输血申请单，贴好血样标签，共同核对患者性命、性别、年龄、病案号、病室门诊序号、血型和诊断、采集血样送输血科或血库B、无须核对，只要医生写好输血申请，即可送输血科C、医生下医嘱，护士执行D、病房工人持输血申请和血样送输血科正确答案：A23、可增加血容量，并维持作用6～12 小时的是（）A、羟乙基淀粉代血浆B、中分子右旋糖酐C、丙种球蛋白D、低分子右旋糖酐E、白蛋白液正确答案：B24、输血速度老年人一般为（）A、20滴/分B、5ml/分C、10滴/分D、1ml/分正确答案：D25、对于有免疫缺陷或免疫抑制患者输辐照红细胞的作用是（）A、防止不良反应B、防止溶血C、防止移植物抗宿主病D、提高免疫力正确答案：C26、回收式自体输血不良反应不包括：（）A、空气栓塞B、细菌污染C、溶血反应D、TA-GVHDE、肿瘤扩散正确答案：D27、输血可以传播以下疾病哪项除外（）A、输血传播艾滋病B、输血传播丙型肝炎C、输血传播甲型肝炎D、输血传播乙型肝炎正确答案：C28、WHO提出的临床输血实践的原则是（）A、输血只是病人治疗的一部分B、根据国家临床用血指南，考虑到病人自身需要再作出输血决定C、应尽可能减少失血以减少病人输血要求D、临床医务人员应该知晓输给病人的血液和血液制品有传播输血传染的危险，还有其它5个方面的原则E、以上都是正确答案：E29、非溶血性发热反应发生时间一般在：（）A、输血后第二天B、输血期间或输血后1~2小时C、输血24小时内D、输血开始后1~2小时内E、输血后6~8小时正确答案：B30、患者男，30岁，输血后4~5分钟，即出现寒战，高热，头痛，腰背部剧痛，心前区压迫感，全身有散在性荨麻疹，血压为80/60mmHg，血浆呈粉红色。
艾滋病检测
筛查试验呈阴性反应可出具HIV1/2抗体阴性报告，见于未被HIV感染的个体，但处于窗口期的新近感染者筛查试验也可呈阴性反应。若呈阳性反应，应用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的试剂进行重复检测，或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进行重复检测，如两种试剂复测均呈阴性反应，则为HIV抗体阴性;如有一种或两种试剂呈阳性反应，需进行HIV抗体确证试验。确证试验无HIV特异性条带产生，报告HIV1/2抗体阴性。确证试验出现HIV1/2抗体特异带，但不足以判定阳性，报告HIV1/2抗体不确定，可在4周后随访。如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性;如随访期间发生带型进展，符合HIV抗体阳性判定标准则为HIV抗体阳性，如带型仍不满足阳性标准，继续随访到8周。如带型没有进展或呈阴性反应则报告阴性;满足HIV阳性诊断标准则报告阳性，不满足阳性标准可视情况决定是否继续随访。经确证试验HIV1/2抗体阳性者，出具HIV1/2抗体阳性确认报告，并按规定做好咨询、保密和报告工作。
艾滋病检测方法
艾滋病检测方法
艾滋病检测方法包括：
1. HIV抗体检测：这是最常用和常规的艾滋病检测方法。
通过血液样本检测人体内是否存在HIV抗体来判断是否感染艾滋病病毒。
这种检测方法的结果通常在一个工作日内出来。
2. 口腔快速检测：这种检测方法采集口腔黏膜上的细胞样本进行检测，通常只需等待20分钟即可得到结果。
口腔快速检测的优势在于无需采血，便于操作。
3. 家庭自测：这是一种便利的艾滋病检测方法，可以在家中进行。
这种测试通常使用唾液样本进行，通过测试盒上的指示线来判断是否感染HIV病毒。
然而，家庭自测结果可能不够准确，若有阳性结果，应再进行确认性实验。
4. PCR检测：该方法使用聚合酶链反应技术来检测艾滋病病毒的核酸。
PCR检测能提供早期感染的准确结果，但相对成本较高，一般用于特定情况下或疑难病例的诊断。
需要注意的是，艾滋病检测结果应在正规医疗机构进行解读和咨询，以便获得准确的诊断和适当的咨询建议。
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艾滋病病毒灭活试验
（1）目的
测定消毒剂对艾滋病病毒（human immunodeficiency virus，HIV）灭活所需的剂量，以验证对该病毒污染物消毒实用剂量。
（2）实验原理
用细胞感染法测定消毒剂作用前后（或实验组与对照组）样本中HIV 的量。
以细胞病变作为判断指标，确定各组病毒的感染滴度，计算消毒剂对 HIV 的灭活对数值。
（3）安全防护
试验中要求采取严密防护措施。
我国规定所有接触 HIV 的试验均需在生物安全三级（biological safety level 3，BSL 3）实验室内进行，并制定有相应的安全防护措施。
在 HIV 灭活试验时，必须严格按照有关安全规定进行。
（4）试验分组
1）试验组。
根据所测消毒剂对其他微生物的杀灭或灭活剂量估计，设立适宜的浓度与作用时间组（不少于1个浓度，3个作用时间），对作用时间的设计应不短于30s。
所设组应能测出使 HIV 全部灭活所需的最低有效剂量（药物浓度与作用时间）。
2）阳性对照组。
用去离子水代替消毒剂，按试验组规定步骤加入 HIV 悬液进行试验和培养，观察 HIV 生长是否良好。
3）阴性对照组。
用不含 HIV 的完全培养基作为阴性对照，观察所用培养基有无污染，细胞是否生长良好。
4）消毒剂对细胞毒性组。
取 100μl 待测消毒剂，加入含有100μl 用完全培养基制备的MT4 细胞悬液（含细胞400 000 个/ml）的 96 孔培养板内。
置二氧化碳温箱（37℃）中培养 7 d，观察细胞生长情况，确定消毒剂对细胞无毒性的最高稀释度。
（5）HIV 悬液定量灭活试验操作程序
1）从液氮中取出冻存的 MT4 细胞，在37℃ 温水中迅速融化，并用细胞维持液洗涤两次后，转种于加有 10ml 完全培养基培养瓶中。
逐日观察细胞生长情况，在细胞对数生长期时收获细胞用于消毒试验。
2）从液氮中取出冻存HIV-1毒种，接种于含10ml细胞悬液（含细胞700 000个/ml～800 000个/ml）培养瓶中。
逐日观察病变，待3/4细胞出现病变时，收获病毒。
收获时，将培养液取出，尽快离心，并将含病毒的上清液按每管 0.5ml 分装于无菌离心管（1.5ml）中，冷冻保存于-80℃备用。
如不能立即离心，可暂将培养瓶冷冻保存于
-20℃，并争取尽快离心分装。
3）取待测消毒剂，用无菌去离子水作 1:2、1:4、1:8 ...系列稀释。
视消毒剂的类型和实验目的，确定最高稀释度。
为防止污染培养液，必要时在试验前需将消毒剂过滤除菌。
4）取 50μl 待检消毒剂，与 50μl 病毒原液混合。
在规定温度作用一定时间（根据试验要求确定作用时间和温度），立即加入0.9ml 用完全培养基制备的 MT4 细胞悬液（400 000 个/ml），在37℃，放置 40min，以确保残留病毒全部吸附在细胞上。
阳性（病毒）对照
组试验中，用无菌去离子水代替消毒剂；消毒剂对细胞毒性组试验中，用无菌去离子水代替病毒。
5）取出反应管，立即采取去除残留消毒剂处理。
处理可用物理去除法或中和剂法（所用方法需先经试验证明，既可有效去除残留消毒剂，又对细胞和 HIV 无杀灭或抑制作用。
6）在 96 孔培养板上滴定样本中残留的病毒量。
先在培养板（96孔）的各孔中，加入 100μl 用完全培养基制备的 MT4 细胞悬液（含细胞 400 000 个/ml）。
同时，用完全培养基对待滴定样本做 1：10 系列稀释，然后取 100μl 稀释好的样本加入已含 MT4 细胞悬液的 96孔培养板内。
每个稀释度做 4 孔。
7）将按上述程序加液的 96 孔培养板，放入二氧化碳培养箱中（37℃，5% CO2），逐日在显微镜下观察细胞病变。
被感染细胞融合肿胀，出现多核巨细胞。
第 4 d，在各反应孔内补加 50μl 新鲜完全培养基。
第7d，逐孔观察并记录细胞病变情况。
8）试验重复 3 次。
（6）评价规定
1）对测试滴度的HIV，3次灭活试验后均应不再检出，此时的灭活对数值应≥4.00，可判为该消毒剂浓度与作用时间，对HIV污染物消毒的实验室试验合格。
2）在正常情况下，HIV阳性对照组病毒感染滴度（TCID50）对数值应在5～7之间。
阴性对照组宿主细胞生长良好，并且无HIV 检出。
所用浓度的消毒液对宿主细胞生长无不良影响。
否则，根据发现的问题，
或调整 HIV悬液浓度，或选择适宜消毒液浓度，或更换污染试剂和培养基，或改进其他有关条件后，重做试验。
（7）注意事项
1）操作人员应具有较丰富的病毒学实验工作经验，必须绝对遵守BSL3实验室的安全制度。
身体状态欠佳，或有伤口时，应暂时停止工作。
2）有感染可能性的操作，均应在BSL3实验室的层流负压超净工作台中进行。
3）一旦发生事故，有病毒感染或污染环境的可能时，切莫惊慌，除立即进行妥善消毒处理外，并应尽快报告实验室和单位领导。
4）本试验周期较长，在全部过程中应注意防止样本污染。