病毒感染的实验室诊断PPT课件
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新冠病毒实验室检测+课件
抗体检测是通过检测人体内是否产生针对病毒的抗体来判断是否感染过病毒。抗体检测通常在病毒感染后2-3周内出现阳性结果，可以用于回顾性诊断和流行病学调查。抗体检测可以通过采集静脉血液标本进行检测。优缺点：抗体检测的优点是操作简便、检测时间短、样本易获取。但是抗体检测不能用于早期感染的诊断，因为抗体产生需要一定的时间。此外，抗体检测也有一定的假阳性率和假阴性率，需要结合临床症状和其他检查结果进行综合判断。应用场景：抗体检测主要用于确诊病例的回顾性诊断、流行病学调查和人群免疫水平的评估等场景。
新冠病毒实验室检测 课件
汇报人：
202X-12-27
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目录
新冠病毒概述新冠病毒实验室检测方法新冠病毒检测的流程与注意事项新冠病毒检测的挑战与未来展望新冠病毒检测的伦理与法规问题
01
新冠病毒概述
2019年12月，中国武汉出现不明原因肺炎病例。经过后续调查，科学家们从病例样本中检测到了新型冠状病毒。
发现
世界卫生组织将其命名为“严重急性呼吸综合征冠状病毒2”，简称新冠病毒。
命名
新冠病毒属于冠状病毒科，其形态为圆形或椭圆形，表面有凸起的冠状结构。
形态
基因组
宿主范围
新冠病毒基因组为单链RNA，长度约为30,000个核苷酸。
新冠病毒主要感染人类，但也有可能感染其他哺乳动物和鸟类。
03
02
01
人对人传播
假阳性与假阴性问题
由于检测方法的敏感性和特异性限制，可能会出现误报或漏报的情况。
03
降低成本
通过规模化生产和技术创新，降低检测试剂的成本，使其更易于在贫困地区和国家推广应用。
01
研发更快速、准确的检测试剂
通过改进技术手段和优化试剂配方，提高检测的敏感性和特异性，缩短检测时间。
(完整版)感染性疾病实验室诊断
1.尽快送检
对环境敏感的细菌应保温立即送检,其他所有采集后最好在2小时内送 检,不能及时送检,应注意保存
2. 必须注意安全防护,切勿污染环境 3.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接
用抽取标本的注射器运送
二、 检验方法
查病原体：形态与结构检查 分离培养和鉴定
检测病原体成分（抗原和核酸） 检测患者血清中特异性抗体 代谢产物 （生化试验） 毒素：外毒素、内毒素
SARS冠状病毒 新甲型H1N1流感病毒 高致病性禽流感病毒
(二）按疾病特征分类 1. 病原体被清除 2. 隐性感染(covert infection)，亦称亚临床感染
一般占人群的90％或以上 3. 显性感染(overt infection)又称为临床感染
发病快慢和病程长短：急性感染和慢性感染 感染部位及性质：局部感染和全身感染 全身感染： ①菌血症 ②败血症 ③毒血症 ④脓毒血症
革兰阳性
革兰阴性
抗酸染色
培养在McCoy细胞的沙眼衣原体 吉姆萨染 色的McCoy细胞，含大衣原体包涵体，使 部分细胞核不清楚。（吉姆萨染色,放大
1000倍）
狂犬病毒可于细胞浆中 可形成嗜酸性包涵体
新生隐球菌 墨汁负染
假丝酵母菌（白色念珠菌）
革兰染色
2.不染色标本
1) 检查生活状态下细菌的动力及运动状况 2） 螺旋体由于不易着色并有形态特征
对某些病原菌作出初步鉴定，如霍乱弧菌
常用方法 压片法(压滴法)或悬滴法 暗视野显微镜或相差显微镜检查
体癣皮屑可见关节孢子
3. 直接电镜检测EM 免疫电镜技术IEM
HAV形态电镜图 粪便标本负染 X200000
HAV particles found in fecal extracts by immunoelectron microscopy
对环境敏感的细菌应保温立即送检,其他所有采集后最好在2小时内送 检,不能及时送检,应注意保存
2. 必须注意安全防护,切勿污染环境 3.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接
用抽取标本的注射器运送
二、 检验方法
查病原体：形态与结构检查 分离培养和鉴定
检测病原体成分（抗原和核酸） 检测患者血清中特异性抗体 代谢产物 （生化试验） 毒素：外毒素、内毒素
SARS冠状病毒 新甲型H1N1流感病毒 高致病性禽流感病毒
(二）按疾病特征分类 1. 病原体被清除 2. 隐性感染(covert infection)，亦称亚临床感染
一般占人群的90％或以上 3. 显性感染(overt infection)又称为临床感染
发病快慢和病程长短：急性感染和慢性感染 感染部位及性质：局部感染和全身感染 全身感染： ①菌血症 ②败血症 ③毒血症 ④脓毒血症
革兰阳性
革兰阴性
抗酸染色
培养在McCoy细胞的沙眼衣原体 吉姆萨染 色的McCoy细胞，含大衣原体包涵体，使 部分细胞核不清楚。（吉姆萨染色,放大
1000倍）
狂犬病毒可于细胞浆中 可形成嗜酸性包涵体
新生隐球菌 墨汁负染
假丝酵母菌（白色念珠菌）
革兰染色
2.不染色标本
1) 检查生活状态下细菌的动力及运动状况 2） 螺旋体由于不易着色并有形态特征
对某些病原菌作出初步鉴定，如霍乱弧菌
常用方法 压片法(压滴法)或悬滴法 暗视野显微镜或相差显微镜检查
体癣皮屑可见关节孢子
3. 直接电镜检测EM 免疫电镜技术IEM
HAV形态电镜图 粪便标本负染 X200000
HAV particles found in fecal extracts by immunoelectron microscopy
病毒病的常规实验室诊断
胞现象也可被特异性抗血清所抑制，故在病毒鉴定，特别是对
某些不产生细胞病变的病毒，常用红细胞吸附和吸附抑制试验 进行快速鉴定。
2.4 补体结合试验（CFT）
原理：CFT是根据任何抗原抗体复合物可激活、固定补体的特 性，用一定量的补体与致敏红细胞来检测抗原、抗体间有无特 异性结合的一类实验。 参与本实验的五种成分分为两个系统 ①待检系统：已知抗原（或抗体）和待检 抗体（或抗原细胞代谢的测定
病毒间的干扰现象
抗原的测定
电子显微镜观察
1.5 病毒感染力的测定—半数细胞培养物感染量 （TCID50)
Reed-Muench
内插法
Karber法
细胞病变孔：50%以上细胞发生病变才可算为细胞病变孔。
病毒种类 狂犬病病毒 接种途径 卵黄囊 ++ 绒毛尿囊膜 ++ 尿囊腔 养膜腔 脑内 +++ 病变 特征 鸡胚死亡 备注
流感病毒
新城疫病毒 痘病毒 蓝舍病病毒 传支 法氏囊 鹅细小
++++
++++ +++ +++ +++ ++ +++++ ++ ++++ ++++
2.9 单扩溶血试验
是在琼脂单扩散基础上发展起来的，又称为被动溶血技术，主要用于流感 病毒血凝素和神经氨酸酶抗体的测定。 吸附在红细胞表面上的抗原与同种抗体结合，再加上补体的作用，就会使 红细胞溶血，由于糠油抗体血清的稀释度与溶血圈直径或面积的大小成直 线关系，所以可对血清抗体进行定量测定。
动物微生物--病毒感染实验诊断
病毒抵抗力弱，室温中容易灭活， 用于分离培养的标本要尽快送检， 4℃下数ｈ或-70℃。 冻存液中加入甘油或二甲基亚砜 (DMSO)等作保护。
病毒传送培养基以Hanks液为基础加 灭活的小牛血清。为抑制细菌生长加 青霉素100U／ml和链霉素100μg／ml， 为了抑制真菌的生长加入2．5μg／ml 二性霉素B或40μg／ml制霉菌素。
五、病毒检验的结果评价
通过实验手段，从标本中获得有 关病毒感染的证据，从而确定病毒 感染和临床疾病之间的因果关系， 是病毒实验诊断的目标。
通过分离和鉴定获得致病性病毒， 发现病毒感染的特异征象，如机 体内产生特异性抗体,急性期和恢 复期血清中相应的特异性抗体有4 倍以上的升高，细胞内包涵体的形 成等,就可得出病原学诊断。
二、病毒抗原检测
病毒抗原是病毒特异性的标志， 通过免疫学技术检测标本中特 异性抗原存在，可以早期诊断 病毒感染。
1．免疫荧光技术 适合于型别少， 细胞培养难以成功的病毒，如流 感病毒、副流感病毒、疱疹病毒、 巨细胞病毒、腺病毒等。肝活检 组织中的肝炎病毒、神经组织中 的单纯疱疹病毒、脑组织中的狂 犬病毒或其他脱落细胞和活检组 织中的病毒抗原检测。
必须通过全面了解其特性才能 得到鉴定。 1.根据临床特点，流行病学资 料，标本来源，大致了解病 毒的一些特性，有助于确认 病毒的种类。
2.动物感染范围及特点 病毒感 染动物的范围、发病的潜伏期。 3.细胞培养特点。 综合上述资料作出鉴定。
病毒鉴定的方法
1.细胞培养的结果观察
病毒增殖后导致细胞发生:①细胞病 变效应(CPE)。细胞肿大，变圆堆积 成葡萄状，细胞溶解出现空斑，细胞 融合形成多核巨细胞，胞浆内或核内 出现嗜酸性或嗜碱性包涵体等；
第一节标本采集与运送
病毒传送培养基以Hanks液为基础加 灭活的小牛血清。为抑制细菌生长加 青霉素100U／ml和链霉素100μg／ml， 为了抑制真菌的生长加入2．5μg／ml 二性霉素B或40μg／ml制霉菌素。
五、病毒检验的结果评价
通过实验手段，从标本中获得有 关病毒感染的证据，从而确定病毒 感染和临床疾病之间的因果关系， 是病毒实验诊断的目标。
通过分离和鉴定获得致病性病毒， 发现病毒感染的特异征象，如机 体内产生特异性抗体,急性期和恢 复期血清中相应的特异性抗体有4 倍以上的升高，细胞内包涵体的形 成等,就可得出病原学诊断。
二、病毒抗原检测
病毒抗原是病毒特异性的标志， 通过免疫学技术检测标本中特 异性抗原存在，可以早期诊断 病毒感染。
1．免疫荧光技术 适合于型别少， 细胞培养难以成功的病毒，如流 感病毒、副流感病毒、疱疹病毒、 巨细胞病毒、腺病毒等。肝活检 组织中的肝炎病毒、神经组织中 的单纯疱疹病毒、脑组织中的狂 犬病毒或其他脱落细胞和活检组 织中的病毒抗原检测。
必须通过全面了解其特性才能 得到鉴定。 1.根据临床特点，流行病学资 料，标本来源，大致了解病 毒的一些特性，有助于确认 病毒的种类。
2.动物感染范围及特点 病毒感 染动物的范围、发病的潜伏期。 3.细胞培养特点。 综合上述资料作出鉴定。
病毒鉴定的方法
1.细胞培养的结果观察
病毒增殖后导致细胞发生:①细胞病 变效应(CPE)。细胞肿大，变圆堆积 成葡萄状，细胞溶解出现空斑，细胞 融合形成多核巨细胞，胞浆内或核内 出现嗜酸性或嗜碱性包涵体等；
第一节标本采集与运送
EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用PPT课件
3
EB病毒持续感染示意图
• 原发感染后， EBV 在人体B淋巴细胞建 立潜伏感染，只表 达潜伏抗原，受感 染者成为终生病毒 携带者
• EBV健康携带者咽 部不定时排毒
• 在机体免疫功能下 降和某些因素触发 下 ， 潜 伏 的 EBV 可 以被再激活，引起 病毒复制及临床症 状
Rev. Med. Virol. 2008; 18: 305–319
在罕见的病例中抗CA 抗体(IgM)会持续阳 性
20-30% 的EBV新近感染 抗 EA抗体（IgG）阴 性
抗EBNA抗体(IgG)阴 性
14
实验室指标四：EBV病毒核酸检测
• Real-time PCR是目前最主要的监测EBV载量的方法，可以指导治 疗和判断疗效，如PTLD/EBV-HLH/CAEBV等
• 人群感染率高，终身潜伏感染， 具有感染-潜伏-活化的特性
• 肿瘤相关病毒，每年EBV相关 肿瘤死亡病例达15-20万
• 与很多疾病相关，几乎可引起 所有脏器和组织的相关疾病
• 细胞免疫非常重要
Khan G et al. Infectious Agents and Cancer, 2014, 9:38.
6
临床实践诊断EBV感染时需要回答的问题
• 是否感染EBV? • EBV感染的时相？ • 是否EBV活动性感染？ • 组织或器官中EBV感染的细胞定位如何？
7
EBV感染相关的实验室指标
• 血常规：淋巴细胞比例＞50%（学龄以上儿童）
• 嗜异凝集抗体 • 异型淋巴细胞
非特异 性指标
• EBV特异性抗体
• 荧光定量PCR检测EBV核酸 • EBERs原位杂交实验：EBV感染受累的组织学证据
特异性 指标
EB病毒持续感染示意图
• 原发感染后， EBV 在人体B淋巴细胞建 立潜伏感染，只表 达潜伏抗原，受感 染者成为终生病毒 携带者
• EBV健康携带者咽 部不定时排毒
• 在机体免疫功能下 降和某些因素触发 下 ， 潜 伏 的 EBV 可 以被再激活，引起 病毒复制及临床症 状
Rev. Med. Virol. 2008; 18: 305–319
在罕见的病例中抗CA 抗体(IgM)会持续阳 性
20-30% 的EBV新近感染 抗 EA抗体（IgG）阴 性
抗EBNA抗体(IgG)阴 性
14
实验室指标四：EBV病毒核酸检测
• Real-time PCR是目前最主要的监测EBV载量的方法，可以指导治 疗和判断疗效，如PTLD/EBV-HLH/CAEBV等
• 人群感染率高，终身潜伏感染， 具有感染-潜伏-活化的特性
• 肿瘤相关病毒，每年EBV相关 肿瘤死亡病例达15-20万
• 与很多疾病相关，几乎可引起 所有脏器和组织的相关疾病
• 细胞免疫非常重要
Khan G et al. Infectious Agents and Cancer, 2014, 9:38.
6
临床实践诊断EBV感染时需要回答的问题
• 是否感染EBV? • EBV感染的时相？ • 是否EBV活动性感染？ • 组织或器官中EBV感染的细胞定位如何？
7
EBV感染相关的实验室指标
• 血常规：淋巴细胞比例＞50%（学龄以上儿童）
• 嗜异凝集抗体 • 异型淋巴细胞
非特异 性指标
• EBV特异性抗体
• 荧光定量PCR检测EBV核酸 • EBERs原位杂交实验：EBV感染受累的组织学证据
特异性 指标
新冠病毒实验室检测ppt课件
用于病毒分离和核酸检测的标本应尽快进行检测， 能在24小时内检测的标本可置于4℃保存；24小时 内无法检测的标本则应置于-70℃或以下保存（如 无-70℃保存条件，则于-20℃冰箱暂存）。血清可 在4℃存放3天，-20℃以下可长期保存。应设立专 库或专柜单独保存标本。标本运送期间应避免反复 冻融。
标本采集后应尽快送往实验室，如果需要长途运输
重大疫情采样如果出现不合格样本，应该及时向上级汇报 实验检测进行中发现的无法检测的样本
分析无法检测原因； 判断排查是样本质量问题还是保存问题，如：样本降解、严重污染等 保留相应的书面证据 对样本做出妥当处置决定或找到弥补措施
及时通知采样者或被检测者标本无法检测，并说明理由 可能的情况下再次采集标本
十一：样本的保存和送检
病原微生物现场采集的样本
全血、血清 鼻咽分泌液、鼻咽拭子、痰液、唾液、鼻咽洗液 粪便、肛拭子 疱疹液 活检组织、尸检组织
一、 标本种类
咽拭子标本从咽部和扁桃体取分泌物样本。 鼻拭子标本是鼻道内鼻腭处分泌物的样本。 用以检测可能引起疾病的相关微生物。 注：拭子尖端可为是聚酯纤维、人造丝或尼龙绒。 不可使用棉签或海藻酸钙棉签或木柄材质，因为这 些材料中存在的残留物会抑制PCR分析。
九、尸检标本的采集
病人死亡后越早采集越好。 采集感染部位标本（如脑、肝、肺和肠等重 要组织），每一采集部位分别使用单独的消 毒器械。每种组织应多部位取材，每部位应 取2-3份约5-10g，分别置于装有相应培养基 的无菌容器中。
十、不合格样本处理
在采样日志上注明，写清楚不合格的原因，妥善处理
采集到的样品是非常珍贵的，尤其是疫情标本，不能够轻易拒绝或丢弃标 本，仍需要与采样人员明确说明后妥善保存
六、下呼吸道标本
标本采集后应尽快送往实验室，如果需要长途运输
重大疫情采样如果出现不合格样本，应该及时向上级汇报 实验检测进行中发现的无法检测的样本
分析无法检测原因； 判断排查是样本质量问题还是保存问题，如：样本降解、严重污染等 保留相应的书面证据 对样本做出妥当处置决定或找到弥补措施
及时通知采样者或被检测者标本无法检测，并说明理由 可能的情况下再次采集标本
十一：样本的保存和送检
病原微生物现场采集的样本
全血、血清 鼻咽分泌液、鼻咽拭子、痰液、唾液、鼻咽洗液 粪便、肛拭子 疱疹液 活检组织、尸检组织
一、 标本种类
咽拭子标本从咽部和扁桃体取分泌物样本。 鼻拭子标本是鼻道内鼻腭处分泌物的样本。 用以检测可能引起疾病的相关微生物。 注：拭子尖端可为是聚酯纤维、人造丝或尼龙绒。 不可使用棉签或海藻酸钙棉签或木柄材质，因为这 些材料中存在的残留物会抑制PCR分析。
九、尸检标本的采集
病人死亡后越早采集越好。 采集感染部位标本（如脑、肝、肺和肠等重 要组织），每一采集部位分别使用单独的消 毒器械。每种组织应多部位取材，每部位应 取2-3份约5-10g，分别置于装有相应培养基 的无菌容器中。
十、不合格样本处理
在采样日志上注明，写清楚不合格的原因，妥善处理
采集到的样品是非常珍贵的，尤其是疫情标本，不能够轻易拒绝或丢弃标 本，仍需要与采样人员明确说明后妥善保存
六、下呼吸道标本
病毒感染的实验诊断
本 • 对冷冻标本应避免反复冻融
2.保湿送检
• 50%甘油盐水保存送检 • 病毒转运培养基（virus transport medium ，VTM）
含0.5%明胶或牛血清白蛋白的Hank’s液
3.无菌送检
• 抑制细菌生长 100U/ml青霉素＋100μg/ml链霉素 • 抑制真菌生长 2.5μg/ml二性霉素B 或40 μg/ml制霉
细胞变圆、融合、肿胀、细胞空 泡、核浓缩、形成嗜酸性或嗜碱 性包涵体等。
某些病毒感染细胞后不出现CPE
3. 干扰现象（interference）
当两种不同的病毒同时或先后感染同一细胞时， 其中一种病毒可抑制另一种病毒的增殖，称为 病毒的干扰现象。
干扰现象也可被相应特异性抗体抑制，称为干 扰抑制现象
绒毛尿囊膜表现有痘病毒的特异性损伤
优点 鸡胚来源充足，操作简便，有多种接种途径 病毒增殖快，可收获大量病毒
鸡胚本身是无菌的，对接种的病毒不产生抗 体
缺点
易感病毒少，目前主要用于流感病毒、腮腺 炎病毒、疱疹病毒和痘类病毒的分离培养。
某些病毒在鸡胚内传代后，其毒力下降
3. 动物接种
常用动物 小鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、猴等。 不同病毒对动物的敏感性不同，根据病毒种类
一般比细菌强，耐甘油，对抗生素及磺胺类药物不 敏感，干扰素可抑制病毒复制。
病毒感染的实验诊断方法
病原学诊断
✓ 病毒分离培养 ✓ 显微镜检查 ✓ 抗原检测 ✓ 核酸检测
血清学诊断
✓ 抗体检测 IgM、IgG
一、标本采集、运送和处理
（一）标本采集
➢ 采集时间：尽早采集（越早越好） ➢ 标本种类：根据感染的部位、可能感染的病毒类
醚作用后，失去感染性 4. 耐酸试验 肠道病毒耐酸，在pH3的环境下稳
2.保湿送检
• 50%甘油盐水保存送检 • 病毒转运培养基（virus transport medium ，VTM）
含0.5%明胶或牛血清白蛋白的Hank’s液
3.无菌送检
• 抑制细菌生长 100U/ml青霉素＋100μg/ml链霉素 • 抑制真菌生长 2.5μg/ml二性霉素B 或40 μg/ml制霉
细胞变圆、融合、肿胀、细胞空 泡、核浓缩、形成嗜酸性或嗜碱 性包涵体等。
某些病毒感染细胞后不出现CPE
3. 干扰现象（interference）
当两种不同的病毒同时或先后感染同一细胞时， 其中一种病毒可抑制另一种病毒的增殖，称为 病毒的干扰现象。
干扰现象也可被相应特异性抗体抑制，称为干 扰抑制现象
绒毛尿囊膜表现有痘病毒的特异性损伤
优点 鸡胚来源充足，操作简便，有多种接种途径 病毒增殖快，可收获大量病毒
鸡胚本身是无菌的，对接种的病毒不产生抗 体
缺点
易感病毒少，目前主要用于流感病毒、腮腺 炎病毒、疱疹病毒和痘类病毒的分离培养。
某些病毒在鸡胚内传代后，其毒力下降
3. 动物接种
常用动物 小鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、猴等。 不同病毒对动物的敏感性不同，根据病毒种类
一般比细菌强，耐甘油，对抗生素及磺胺类药物不 敏感，干扰素可抑制病毒复制。
病毒感染的实验诊断方法
病原学诊断
✓ 病毒分离培养 ✓ 显微镜检查 ✓ 抗原检测 ✓ 核酸检测
血清学诊断
✓ 抗体检测 IgM、IgG
一、标本采集、运送和处理
（一）标本采集
➢ 采集时间：尽早采集（越早越好） ➢ 标本种类：根据感染的部位、可能感染的病毒类
醚作用后，失去感染性 4. 耐酸试验 肠道病毒耐酸，在pH3的环境下稳
感染性疾病实验室诊断ppt演示课件
②败血症
③毒血症 ④脓毒血症
. 6
(三）按病原体来源
外源性感染
内源性感染
.
7
三、感染性疾病的实验诊断
（一）一般实验检测 WBC常规检查 C-反应蛋白（CRP）
血清降钙素原（PCT）
器官功能改变的检测
.
8
（二）病原学实验诊断 临床病原体检查目的
明确感染病原体 指导治疗，预防，判断预后
.
9
第二节 感染性疾病的常用病原学检测
体外联合药物敏感试验
.
51
第三节 常见感染性疾病的实验诊断
.
52
一、血流感染
（一）引起血流感染常见微生物与常见疾病
常见微生物
革兰阳性球菌：葡萄球菌、 链球菌、肠球菌 革兰阴性杆菌：大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷 伯菌、沙门菌
真菌：
病毒：HBV、HCV
血流感染常见疾病
细菌：菌血症、败血症、脓毒血症 真菌：真菌血症
.
47
2. 外毒素的测定
（1）体内毒力试验
若先给动物注射抗毒素，然后再注射外毒素，则动物
细菌外毒素对机体的毒性作用，可被相应抗毒素中和， 不产生中毒症状。
.
48
（2）体外毒力试验
以细菌外毒素的特异性免疫血清为抗体与被检细菌外毒素(抗 原)进行抗原抗体反应，来检测外毒素，从而鉴定细菌是否产生 该种毒素。 白喉棒状杆菌的Elek平板毒力测定 （３) 免疫学方法：如ELISA法
PNA-FISH PCR
Serological detection
Direct microscopic examination
First report
临床感染性疾病实验诊断课件
ABCD
诊断方法
通过病毒分离、抗原抗体检测和核酸检测等实验 室手段，确定感染的病原体。
治疗原则
病毒性感染通常采用对症治疗和支持治疗，同时 预防并发症的发生。
真菌性感染
真菌性感染概述
真菌性感染是由各种真菌引起的感染性疾病 ，多发生在免疫功能低下的患者。
诊断方法
通过真菌培养、组织病理学检查和免疫学检 测等实验室手段，确定感染的病原体。
通过实验室检测，还可以评估预防措施的效果和疫苗接种情况，为防控工作提供数 据支持。
05 新技术在临床感染性疾病 实验诊断中的应用
基因测序技术在感染性疾病诊断中的应用
基因测序技术
局限性
通过分析病原体的基因序列，快速准 确地检测和鉴定病原体，为临床诊断 提供有力支持。
基因测序技术成本较高，需要专业人 员操作，且对数据分析要求较高，目 前尚未普及。
详细描述
感染性疾病是由各种病原体（如细菌、病毒、真菌、寄生虫等）引起的疾病，这些病原体通过直接或间接接触传 播，导致人体出现不同程度的病理变化。根据病原体的种类和特性，感染性疾病可分为多种类型，如细菌感染、 病毒感染、真菌感染等。
感染性疾病的流行病学
总结词
流行病学是研究感染性疾病在人群中的分布、传播和影响因素的学科。通过流行病学调查，可以了解 疾病的传播途径、易感人群和危险因素，为预防和控制疾病提供科学依据。
3
此外，还可以通过细菌培养、病毒分离等方法， 进一步确定感染的病原体类型，为治疗提供更有 针对性的方案。
感染性疾病的病情监测与疗效评估
实验诊断在感染性疾病的病情监测与疗效评估中也具 有重要作用。通过定期检测患者的实验室指标，可以
了解病情的发展趋势和治疗效果。
病毒感染的实验诊断
病毒感染的实验诊断● 考点病毒的生物学性状病毒的实验室检查方法常见病毒的感染【内容讲解】第一节概述一类非细胞型微生物，个体极小，可通过细菌滤器，需用电子显微镜观察。
仅含一种核酸作为遗传物质，外被蛋白质衣壳或还有包膜。
病毒只能在活细胞内寄生，以复制的方式进行增殖。
在临床微生物感染中，近75%的传染病是由病毒引起的。
一、病毒的基本性状（一）形态结构1.大小和形状：大小：测量单位用纳米表示，一般在20-300nm之间。
形态大致可分为：球形或近似球形、杆状、弹形、砖形、蝌蚪形等。
2.结构（二）病毒的增殖病毒必须依赖宿主细胞，以特殊的自我复制方式进行增殖。
病毒的复制周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成、组装与成熟、释放6个阶段。
异常增殖：顿挫感染：病毒进入细胞后的环境不利于它的复制，不能合成本身的成分或不能组装和释放有感染性的病毒颗粒。
缺陷病毒：由于病毒基因组不完整或基因位点改变而不能进行正常增殖的病毒。
干扰现象：当两种不同的病毒或两株性质不同的同种病毒，同时或先后感染同一细胞或机体时，可发生一种病毒抑制另一种病毒增殖的现象。
（三）噬菌体以细菌、真菌等为宿主，能引起细菌等裂解的病毒。
噬菌体特异性识别细菌表面受体，可用于进行细菌的鉴定与分型。
噬菌体感染细菌后产生两种后果：溶菌周期和溶源性周期。
（四）非寻常病毒比病毒更小更简单的致病因子，又称为亚病毒因子，包括类病毒、卫星病毒和朊粒等。
朊粒个体微小，不含核酸，其主要成分是一种蛋白酶抗性蛋白，对各种理化作用的抵抗力强，具有传染性，是引起传染性海绵状脑病的病原体。
朊粒致中枢神经系统退化性病变，引起牛海绵状脑病（疯牛病）。
克雅病（CJD）和Kuru病被认为与朊粒感染有关。
二、病毒的分类与命名科、属、种3级或科、亚科、属、种4级。
DNA病毒、RNA病毒、DNA和RNA逆转录病毒三大类。
按传播途径可分为呼吸道病毒、胃肠炎病毒、经性传播感染的病毒等。
按感染部位与症状特征可分为肝炎病毒、出血性热病毒、疱疹病毒等。
病毒及病毒类疾病的实验室诊断—病毒的特性和致病性(动物微生物技术课件)
动物微生物应用技术
任务三：病毒的特性和致病性
任务三：病毒的其他特性和致病性
一、干扰现象和干扰素
干扰现象：当两种病毒感染同一细胞或机体时，一种病毒抑制另 一种病毒的进入或复制，称病毒的干扰现象。 先进入细胞的病毒干扰后进入的病毒；死的干扰活的；缺陷病
毒干扰完整病毒。 干扰现象的机制：
① 诱导干扰素的产生，抑制被干扰病毒的生物合成； ② 占据表面受体或改变宿主细胞代谢途径； ③ 竞争干扰，病毒增值时，消耗了宿主细胞的原料等。
8/27/2023
12
任务三：病毒的其他特性和致病性
五、病毒的致病性——感染途径
急性感染：一般病程较短，病毒常随疾病的痊愈而被消灭 或自体内排除。
持续感染：病毒在体内较长时间存在，在一定时期内无明
显症状。（1）慢性感染（2）潜伏感染（3）慢病毒感染
局部感染
全身感染 细胞外、细胞间、细胞核播散
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
14
8/27/2023
10
任务三：病毒的其他特性和致病性
四、病毒的遗传与变异
病毒遗传的特点：遗传方式简单；受宿主细胞影 响；易产生突变。
病毒变异的类型：突变；重组；重配；表型混合。
病毒基因组研究的意义：保护性表位的研究；高变 区的研究；毒力相关基因的研究、耐药性的研究。
8/27/2023
11
任务三：病毒的其他特性和致病性
4
任务三：病毒的其他特性和致病性
一、干扰现象和干扰素
干扰素：当机体活细胞受病毒感染或干扰素诱生剂刺激 后产生的能干扰病毒复制的一种小分子蛋白质。
动物体内干扰素基因 活化 干扰素mRNA
翻
干扰素诱生剂
译
▪ 干扰素诱生机理 干扰素
任务三：病毒的特性和致病性
任务三：病毒的其他特性和致病性
一、干扰现象和干扰素
干扰现象：当两种病毒感染同一细胞或机体时，一种病毒抑制另 一种病毒的进入或复制，称病毒的干扰现象。 先进入细胞的病毒干扰后进入的病毒；死的干扰活的；缺陷病
毒干扰完整病毒。 干扰现象的机制：
① 诱导干扰素的产生，抑制被干扰病毒的生物合成； ② 占据表面受体或改变宿主细胞代谢途径； ③ 竞争干扰，病毒增值时，消耗了宿主细胞的原料等。
8/27/2023
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任务三：病毒的其他特性和致病性
五、病毒的致病性——感染途径
急性感染：一般病程较短，病毒常随疾病的痊愈而被消灭 或自体内排除。
持续感染：病毒在体内较长时间存在，在一定时期内无明
显症状。（1）慢性感染（2）潜伏感染（3）慢病毒感染
局部感染
全身感染 细胞外、细胞间、细胞核播散
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
14
8/27/2023
10
任务三：病毒的其他特性和致病性
四、病毒的遗传与变异
病毒遗传的特点：遗传方式简单；受宿主细胞影 响；易产生突变。
病毒变异的类型：突变；重组；重配；表型混合。
病毒基因组研究的意义：保护性表位的研究；高变 区的研究；毒力相关基因的研究、耐药性的研究。
8/27/2023
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任务三：病毒的其他特性和致病性
4
任务三：病毒的其他特性和致病性
一、干扰现象和干扰素
干扰素：当机体活细胞受病毒感染或干扰素诱生剂刺激 后产生的能干扰病毒复制的一种小分子蛋白质。
动物体内干扰素基因 活化 干扰素mRNA
翻
干扰素诱生剂
译
▪ 干扰素诱生机理 干扰素
感染性疾病实验诊断ppt课件
组织病理学诊断
组织病理学诊断是通过采集病变组织样 本，进行病理学检查，观察组织结构和 细胞形态的变化，从而确定感染性疾病
的一种实验诊断方法。
组织病理学诊断可以用于确诊各种感染 性疾病，如肝炎、肺炎、肿瘤等。
组织病理学诊断的优点是能够直接观察 病变组织和细胞形态的变化，有助于明 确诊断。缺点是需要采集病变组织样本
感染性疾病的传播途径多样，包括空 气传播、接触传播、血液传播等。
感染性疾病是全球范围内的主要疾病 负担，对人类健康构成严重威胁。
实验诊断的重要性
实验诊断是感染性疾病诊断的 重要手段，通过实验室检测可 以快速、准确地确定病原体的 种类和感染程度。
实验诊断有助于指导临床治疗 ，为制定合理的治疗方案提供 科学依据。
微生物培养的优点是能够直接观察病原体的生长和繁殖情况，有助于明确诊断。缺 点是培养时间较长，需要一定的实验室设备和经验。
免疫学检测
免疫学检测是通过检测人体内的抗原或抗体，间接推断是否存在感染的一种实验诊断方法。
常见的免疫学检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、胶体金免疫层析试验、间接免疫 荧光试验等。
THANKS
感谢观看
优化检测流程
对检测流程进行优化，减 少操作环节和时间，降低 误差率，提高检测效率。
标准化试剂和仪器
推动试剂和仪器的标准化 ，确保不同实验室之间的 检测结果具有可比性。
加强实验室质量控制
建立质控体系
制定严格的质量控制标准 和质量管理体系，确保实 验室操作的规范性和数据 的可靠性。
定期质控检查
对实验室的仪器、试剂、 操作过程等进行定期检查 和校准，及时发现并纠正 问题。
多重检测与高通量检测
多重检测
医院感染诊断标准ppt课件
医院感染诊断标准
演讲人
目录
01. 医院感染概述 03. 医院感染的诊断标准 05. 医院感染的预防措施
02. 医院感染的分类 04. 医院感染的监测与管理 06. 结论
医院感染概述
1
定义
感染途径：包括接触传 播、空气传播、飞沫传
播等
感染症状：包括发热、 咳嗽、腹泻、皮疹等
01
02
03
04
医院感染：指在医院内 发生的感染，包括患者、
染
医护人员防护： 医护人员应穿戴 防护服、口罩、 手套等防护用品，
避免感染
隔离措施与消毒灭菌方法
01
Байду номын сангаас
隔离措施：对疑似或确诊患 者进行隔离，防止交叉感染
02
消毒灭菌方法：使用消毒剂、 紫外线、高温等方法对环境、 物品进行消毒灭菌
03
防护措施：医护人员穿戴防 护服、口罩、手套等，减少 感染风险
04
监测与评估：定期对患者进 行感染状况监测，评估隔离 措施与消毒灭菌方法的效果
染事件
加强医务人 员培训，提 高医院感染 防控意识和
能力
加强医院感 染控制设施 和设备的投 入，确保医 疗环境安全
建立医院感 染应急处置 机制，确保 及时有效应 对感染事件
医院感染管理政策与法规
国家卫生计生 委颁布的《医
院感染管理办 1
法》
各地方卫生计 4
生委颁布的医 院感染管理相 关法规和政策
国家卫生计生 委颁布的《医
D
寄生虫感染：如蛔虫、钩虫等
C
真菌感染：如念珠菌、曲霉菌等
B
病毒感染：如流感病毒、乙型肝炎病毒等
A
细菌感染：如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等
演讲人
目录
01. 医院感染概述 03. 医院感染的诊断标准 05. 医院感染的预防措施
02. 医院感染的分类 04. 医院感染的监测与管理 06. 结论
医院感染概述
1
定义
感染途径：包括接触传 播、空气传播、飞沫传
播等
感染症状：包括发热、 咳嗽、腹泻、皮疹等
01
02
03
04
医院感染：指在医院内 发生的感染，包括患者、
染
医护人员防护： 医护人员应穿戴 防护服、口罩、 手套等防护用品，
避免感染
隔离措施与消毒灭菌方法
01
Байду номын сангаас
隔离措施：对疑似或确诊患 者进行隔离，防止交叉感染
02
消毒灭菌方法：使用消毒剂、 紫外线、高温等方法对环境、 物品进行消毒灭菌
03
防护措施：医护人员穿戴防 护服、口罩、手套等，减少 感染风险
04
监测与评估：定期对患者进 行感染状况监测，评估隔离 措施与消毒灭菌方法的效果
染事件
加强医务人 员培训，提 高医院感染 防控意识和
能力
加强医院感 染控制设施 和设备的投 入，确保医 疗环境安全
建立医院感 染应急处置 机制，确保 及时有效应 对感染事件
医院感染管理政策与法规
国家卫生计生 委颁布的《医
院感染管理办 1
法》
各地方卫生计 4
生委颁布的医 院感染管理相 关法规和政策
国家卫生计生 委颁布的《医
D
寄生虫感染：如蛔虫、钩虫等
C
真菌感染：如念珠菌、曲霉菌等
B
病毒感染：如流感病毒、乙型肝炎病毒等
A
细菌感染：如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等
感染性疾病标志物及快速诊断ppt课件
➢ 严重细菌感染或脓毒症的检 测（鉴别诊断）
➢ 疾病或治疗反应的监测
➢ 局部与全身性感染 ➢ 脓毒症的诊断和监测 ➢ 新生儿脓毒症的检测
经营者提供商品或者服务有欺诈行为 的，应 当按照 消费者 的要求 增加赔 偿其受 到的损 失，增 加赔偿 的金额 为消费 者购买 商品的 价款或 接受服 务的费 用
经营者提供商品或者服务有欺诈行为 的，应 当按照 消费者 的要求 增加赔 偿其受 到的损 失，增 加赔偿 的金额 为消费 者购买 商品的 价款或 接受服 务的费 用
仪器和试剂
• BET-24A细菌内 毒素分析仪
• MB-80微生物快 速动态监测系统
经营者提供商品或者服务有欺诈行为 的，应 当按照 消费者 的要求 增加赔 偿其受 到的损 失，增 加赔偿 的金额 为消费 者购买 商品的 价款或 接受服 务的费 用
• 国外把 PCT作为最敏感的感染标志。
经营者提供商品或者服务有欺诈行为 的，应 当按照 消费者 的要求 增加赔 偿其受 到的损 失，增 加赔偿 的金额 为消费 者购买 商品的 价款或 接受服 务的费 用
降钙素原 PCT : 分子结构
血清降钙素(CT)的前 肽物质
分子量：14.5 kDa 由116个氨基酸组成
的糖蛋白质 无激素活性
11号染色体上
的单拷贝基因
转录
降钙素原前体内源多肽酶
甲状腺滤泡细胞
降钙素原 PCT
正常情况下
分解
降
细胞内特殊 钙
蛋白酶
素
经营者提供商品或者服务有欺诈行为 的，应 当按照 消费者 的要求 增加赔 偿其受 到的损 失，增 加赔偿 的金额 为消费 者购买 商品的 价款或 接受服 务的费 用
随着患者对抗生素治 疗的响应，引起了 PCT血中浓度水平的 典型变化过程
HIV感染的实验室检测(共36张PPT)
• （3）实验结果
• ①阴性对照（NC），HIV-1阳性对照（PC1），HIV-2阳性对照 （PC2）
NC 必须＜0.25方可用，排除NC≥0.25的值，计算NC平均 值。
NC界限范围：0.6倍NC均值＜NC＜1.4倍NC均值。
• 竞争法、捕获包被法等 4、严格遵守实验室标准操作规程（SOP）。
为了达到以上的某个目的的HIV 检测可能不适合其他目的，比如输血服务的检测不适合临床诊断HIV感染 （4）艾滋病唾液检测卡：在硝酸纤维膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原，可同时检测含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗体，原理为酶 免疫间接法。 监测(为了知晓人群流行状况) Introduction to HIV Testing ⑥在2h内置于酶标仪读数，单波长450nm，或双波长450/630nm测OD值。 常用HIV抗体检测方法: 加受检标本，保温反应。 （1）明胶颗粒凝集试验（PA）：PA是HIV血清抗体检测的一种简便方法，是将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用，混匀后 保温（一般为室温）。
ELISA的原理
用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗 体复合物与液体中的其他物质分开。再 加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应 而结合在固相载体上。此时固相上的酶 量与标本中受检物质的量呈一定的比例 。
ELISA的原理
加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有 色产物，产物的量与标本中受检物质的量 直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性 或定量分析。由于酶的催化效率很高，间 接地放大了免疫反应的结果，使测定方法 达到很高的敏感度。
ELISA
酶联免疫吸附试验 + ve
HIV
包被了HIV 抗
原的检测板
患者的抗体
动物微生物3.4 病毒感染的实验室诊断
项目三病毒任务五病毒感染的实验室诊断一、病毒的一般诊断程序（一）标本的采集和处理用于分离病毒的标本应含有足够量的活病毒，因此必须根据病毒的生物学特性、病毒感染的特征、流行病学规律以及机体的免疫保护机制，来选择所需要采集标本的种类、确定最适采集时间和标本处理的方法。
标本采集必须无菌操作，如有细菌污染，可通过加抗菌素、过滤和离心等方法处理。
由于大多数病毒对热不稳定，所以标本经处理后一般应立即接种。
若需要运送或保存，数小时内可置于50％中性甘油内4℃保存，对需较长时间冻存的标本最好置于-20℃以下或干冰保存。
以感染病毒的动物病料采集为例，一般说来，应从病畜体内存在病毒最多的器官或组织采取病料。
例如上呼吸道疾病取鼻分泌物，脑炎取脑组织，痘症取患部皮肤。
采集病料的时间，以症状刚出现时为佳。
检查抗体时，则采取一个病畜的初期和恢复期的血清，以了解抗体滴度的变化。
（二）病毒的分离培养病毒与细菌不同，病毒是严格的活细胞内寄生的，因此分离培养病毒应采用寄主接种法、鸡胚培养法或细胞培养法，而且还必须根据不同病毒的要求进行选择，才能得到满意的结果。
1、寄主接种法分离的标本接种于实验寄主的种类和接种途径主要取决于病毒寄主范围和组织嗜性，同时还应考虑操作、培养及结果判定的简便。
噬菌体标本可接种于生长在培养液或培养基平板中的细菌培养物。
植物病毒标本可接种于敏感植物叶片，产生坏死斑或枯斑。
动物病毒标本可接种于敏感动物的特定部位，嗜神经病毒接种于动物脑内，嗜呼吸道病毒接种于动物鼻腔。
常用动物有小白鼠、大白鼠、地鼠、家兔和猴子等。
在兽医病毒学实践中，还常用本动物进行实验感染试验。
例如，应用健康马驹作马传染性贫血病毒接种试验；应用健康猪、鸡分别作猪瘟病毒、鸡新城疫病毒接种试验等等。
接种病毒后，隔离饲养，每日观察动物发病情况，根据动物出现的症状，初步确定是否有病毒增殖。
2、鸡胚培养法不同的病毒可选择不同日龄的鸡胚和不同的接种途径，如痘病毒接种于10～12d的鸡胚绒毛尿囊膜上，鸡新城疫病毒宜接种在10d尿囊腔和羊膜腔内，虫媒病毒宜接种于5d卵黄囊，继续培养观察。
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最后鉴定
• 血清学鉴定: 中和试验、补体结合试验、血凝抑制
试验等 分离的新病毒，必须进行系统的鉴定
编现
（1）细胞代谢作用改变（培养液颜色变化） 正常细胞代谢： 培养液由红变黄 病毒增殖，抑制细胞代谢：培养液颜色不变或更红
编辑版ppt
13
（2）细胞病变效应（cytopathic effect ，CPE）
（1）组织块培养
（2）器官培养 人胚气管－呼吸道病毒；人胚肠－肠道病 毒
（3）细胞培养 最常用
– 原代和次代细胞培养 – 二倍体细胞培养 – 传代细胞培养
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7
原代和次代培养细胞
动物新鲜组织（人胚肾等）→胰酶消化→营养液培养→ 单层细胞（原代细胞）
原代细胞→胰酶消化→转种培养（次代培养细胞） 对病毒敏感，但制备费时费力，只能传2～3代。
• 病毒在细胞内增殖后，使宿主的形态发 生不同程度改变，这种由病毒增殖引起 的细胞形态变化，称为细胞病变效应。
• 细胞变圆、融合、肿胀、细胞空泡、核 浓缩、形成嗜酸性或嗜碱性包涵体等。
• 某些病毒感染细胞后不出现CPE
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14
编辑版ppt
15
（3）空斑现象
• 空斑（plaque）是指在单层细胞中，由活细胞包围的由
• 二倍体细胞株 原代细胞反复传代（50～70代）仍保持二
倍体染色体特性。病毒分离和疫苗制备的首选细胞株。
• 传代细胞系 来源于肿瘤细胞或突变的二倍体细胞，能在
体外无限增殖。增殖快，不易衰老，易于传代保存。常用 于病毒的分离鉴定，但不能用于制备疫苗。
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8
2. 鸡胚培养
常用于粘病毒、疱疹病毒和痘类病毒的分离培养
病毒感染的实验室诊断
编辑版ppt
1
病毒感染的实验诊断方法
➢病原学诊断
➢病毒分离培养 ➢显微镜检查 ➢抗原检测 ➢核酸检测
➢血清学诊断
➢ 抗体检测 IgM、IgG
编辑版ppt
2
一、标本采集与运送
（一）标本采集 ➢采集时间：尽早采集（越早越好） ➢标本种类：根据感染的部位、可能感染的病毒类型选择
编辑版ppt
编辑版ppt
19
病毒的理化性质测定
主要用于新发现病毒的鉴定 （1）病毒的大小及形态 电镜直接观察 （2）核酸类型
5-溴-2-脱氧尿苷（BUDR）能抑制DNA复制，而不抑 制RNA病毒。 （3）乙醚敏感试验
有包膜病毒对乙醚敏感，经乙醚作用后，失去感染性 （4）耐酸试验
肠道病毒耐酸，在pH3的环境下稳定，鼻病毒不耐酸， 在pH3的环境下被灭活
3
（二）标本的运送与保存
1.低温送检
• 4℃可保存数小时 •-70℃可长期保存 • -10 ～ -20℃下病毒易灭活，不可用于保存病毒标本 • 对冷冻标本应避免反复冻融
2.保湿送检
• 50%甘油盐水保存送检 • 病毒转运培养基（virus transport medium ，VTM）含0.5%明
胶或牛血清白蛋白的Hank’s液
接种途径及方法
38～39℃
新鲜受精卵
7～13d
卵黄囊接种 羊膜腔接种 接种病毒 尿囊腔接种 绒毛尿囊膜接种
编辑版ppt
9
绒毛尿囊膜表现有痘病毒的特异性损伤
编辑版ppt
10
3. 动物接种
常用动物 小鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、猴等。不同病对 动物的敏感性不同，根据病毒种类加以选择。
接种途径 按病毒侵袭部位选择相应的接种途径：
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20
病毒的血清学鉴定
• 中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验等
编辑版ppt
21
三、病毒的血清学诊断
单份血清IgM测定 早期诊断 双份血清IgG测定 4倍以上增长，有诊断意义
编辑版ppt
22
病毒血清学试验常用方法
（一）中和试验
原理 抗体与相应病毒结合后，能够使病毒失去感染性。 V.＋Ab → 失去感染易感细胞的能力 一定量抗体可中和一定量病毒。 中和试验的必要条件：
编辑版ppt
24
（二）补体结合试验
• 检测IgM，常用于早期诊断。 • 不需活细胞，比中和试验简单，省时。
3.无菌送检
• 抑制细菌生长 100U/ml青霉素＋100μg/ml链霉素 • 抑制真菌生长 2.5μg/ml二性霉素B 或40 μg/ml制霉菌素
编辑版ppt
4
二、病毒的分离与鉴定
（一）病毒分离和鉴定的一般程序
标本采集
标本处理后接种
动物接种
观察发病
抗原检测 抗体检测 病理检查
组织培养
鸡胚接种
CPE EM
• 乙型脑炎病毒及狂犬病毒 小鼠脑内接种 • 柯萨奇病毒 乳鼠腹腔接种 • 乙肝病毒 黑猩猩静脉注射 • 流感病毒 鼻腔滴种
用途
• 分离鉴定病毒，制备疫苗，制备抗血清
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11
（三）病毒的鉴定
病毒的初步鉴定
• 动物感染范围及潜伏期 • 对鸡胚的敏感性 • 在细胞培养中的表现 • 理化性质的测定
1. 活病毒 2. 敏感细胞、鸡胚或动物
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23
中和试验的常用方法：
•固定V.，稀释血清，测定抗体效价 （常用） • 固定血清，稀释V.，求中和指数
中和试验的优缺点
• 特异，敏感，既可检测抗体，也可测定抗原（定属、定型）。 • 既可用细胞培养做，也可用动物或鸡胚接种，以细胞最常用。 • 检测IgG，不能用于早期诊断，常用用于流行病学调查。
病毒感染引起的死细胞的区域。一个空斑由一个病毒颗粒 感染 所致，利用空斑可纯化病毒。
• 不同种类病毒形成 的空斑大小和形状不同，可用于鉴定
病毒。
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16
（4） 干扰现象
当两种不同的病毒同时或先后感染同一细胞时，其中一种 病毒可抑制另一种病毒的增殖，称为病毒的干扰现象。
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17
（5）红细胞吸附及吸附抑制试验
包涵体
空斑试验
红细胞吸附
中和试验
卵黄囊膜 尿囊液 羊膜腔液 绒毛尿囊膜
观察囊膜病变
血凝试验
血凝抑制试验
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5
（二）病毒的分离
• 组织培养 • 鸡胚培养 • 动物接种
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6
1.组织培养
将人或动物离体的活组织或分散的活细胞在体外人工控制的 条件下使其生长繁殖的一种技术。
组织培养的类型
受感染的宿主细胞膜含 病毒抗原（血凝素），可吸附 鸡、豚鼠或猴红细胞
如果在培养瓶中加入相应 的血凝素抗血清，则不出现红 细胞吸附现象，即红细胞吸附 抑制试验阳性
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18
（6）血凝及血凝抑制试验
含有血凝素的病毒能吸附一定种类的哺乳动物或禽类的 红细胞，使红细胞凝集。该现象可被相应的血凝素抗体抑制， 称为血凝抑制试验，可用于分型。
• 血清学鉴定: 中和试验、补体结合试验、血凝抑制
试验等 分离的新病毒，必须进行系统的鉴定
编现
（1）细胞代谢作用改变（培养液颜色变化） 正常细胞代谢： 培养液由红变黄 病毒增殖，抑制细胞代谢：培养液颜色不变或更红
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（2）细胞病变效应（cytopathic effect ，CPE）
（1）组织块培养
（2）器官培养 人胚气管－呼吸道病毒；人胚肠－肠道病 毒
（3）细胞培养 最常用
– 原代和次代细胞培养 – 二倍体细胞培养 – 传代细胞培养
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原代和次代培养细胞
动物新鲜组织（人胚肾等）→胰酶消化→营养液培养→ 单层细胞（原代细胞）
原代细胞→胰酶消化→转种培养（次代培养细胞） 对病毒敏感，但制备费时费力，只能传2～3代。
• 病毒在细胞内增殖后，使宿主的形态发 生不同程度改变，这种由病毒增殖引起 的细胞形态变化，称为细胞病变效应。
• 细胞变圆、融合、肿胀、细胞空泡、核 浓缩、形成嗜酸性或嗜碱性包涵体等。
• 某些病毒感染细胞后不出现CPE
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15
（3）空斑现象
• 空斑（plaque）是指在单层细胞中，由活细胞包围的由
• 二倍体细胞株 原代细胞反复传代（50～70代）仍保持二
倍体染色体特性。病毒分离和疫苗制备的首选细胞株。
• 传代细胞系 来源于肿瘤细胞或突变的二倍体细胞，能在
体外无限增殖。增殖快，不易衰老，易于传代保存。常用 于病毒的分离鉴定，但不能用于制备疫苗。
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2. 鸡胚培养
常用于粘病毒、疱疹病毒和痘类病毒的分离培养
病毒感染的实验室诊断
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1
病毒感染的实验诊断方法
➢病原学诊断
➢病毒分离培养 ➢显微镜检查 ➢抗原检测 ➢核酸检测
➢血清学诊断
➢ 抗体检测 IgM、IgG
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2
一、标本采集与运送
（一）标本采集 ➢采集时间：尽早采集（越早越好） ➢标本种类：根据感染的部位、可能感染的病毒类型选择
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病毒的理化性质测定
主要用于新发现病毒的鉴定 （1）病毒的大小及形态 电镜直接观察 （2）核酸类型
5-溴-2-脱氧尿苷（BUDR）能抑制DNA复制，而不抑 制RNA病毒。 （3）乙醚敏感试验
有包膜病毒对乙醚敏感，经乙醚作用后，失去感染性 （4）耐酸试验
肠道病毒耐酸，在pH3的环境下稳定，鼻病毒不耐酸， 在pH3的环境下被灭活
3
（二）标本的运送与保存
1.低温送检
• 4℃可保存数小时 •-70℃可长期保存 • -10 ～ -20℃下病毒易灭活，不可用于保存病毒标本 • 对冷冻标本应避免反复冻融
2.保湿送检
• 50%甘油盐水保存送检 • 病毒转运培养基（virus transport medium ，VTM）含0.5%明
胶或牛血清白蛋白的Hank’s液
接种途径及方法
38～39℃
新鲜受精卵
7～13d
卵黄囊接种 羊膜腔接种 接种病毒 尿囊腔接种 绒毛尿囊膜接种
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9
绒毛尿囊膜表现有痘病毒的特异性损伤
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3. 动物接种
常用动物 小鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、猴等。不同病对 动物的敏感性不同，根据病毒种类加以选择。
接种途径 按病毒侵袭部位选择相应的接种途径：
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病毒的血清学鉴定
• 中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验等
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21
三、病毒的血清学诊断
单份血清IgM测定 早期诊断 双份血清IgG测定 4倍以上增长，有诊断意义
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病毒血清学试验常用方法
（一）中和试验
原理 抗体与相应病毒结合后，能够使病毒失去感染性。 V.＋Ab → 失去感染易感细胞的能力 一定量抗体可中和一定量病毒。 中和试验的必要条件：
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（二）补体结合试验
• 检测IgM，常用于早期诊断。 • 不需活细胞，比中和试验简单，省时。
3.无菌送检
• 抑制细菌生长 100U/ml青霉素＋100μg/ml链霉素 • 抑制真菌生长 2.5μg/ml二性霉素B 或40 μg/ml制霉菌素
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二、病毒的分离与鉴定
（一）病毒分离和鉴定的一般程序
标本采集
标本处理后接种
动物接种
观察发病
抗原检测 抗体检测 病理检查
组织培养
鸡胚接种
CPE EM
• 乙型脑炎病毒及狂犬病毒 小鼠脑内接种 • 柯萨奇病毒 乳鼠腹腔接种 • 乙肝病毒 黑猩猩静脉注射 • 流感病毒 鼻腔滴种
用途
• 分离鉴定病毒，制备疫苗，制备抗血清
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（三）病毒的鉴定
病毒的初步鉴定
• 动物感染范围及潜伏期 • 对鸡胚的敏感性 • 在细胞培养中的表现 • 理化性质的测定
1. 活病毒 2. 敏感细胞、鸡胚或动物
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中和试验的常用方法：
•固定V.，稀释血清，测定抗体效价 （常用） • 固定血清，稀释V.，求中和指数
中和试验的优缺点
• 特异，敏感，既可检测抗体，也可测定抗原（定属、定型）。 • 既可用细胞培养做，也可用动物或鸡胚接种，以细胞最常用。 • 检测IgG，不能用于早期诊断，常用用于流行病学调查。
病毒感染引起的死细胞的区域。一个空斑由一个病毒颗粒 感染 所致，利用空斑可纯化病毒。
• 不同种类病毒形成 的空斑大小和形状不同，可用于鉴定
病毒。
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（4） 干扰现象
当两种不同的病毒同时或先后感染同一细胞时，其中一种 病毒可抑制另一种病毒的增殖，称为病毒的干扰现象。
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（5）红细胞吸附及吸附抑制试验
包涵体
空斑试验
红细胞吸附
中和试验
卵黄囊膜 尿囊液 羊膜腔液 绒毛尿囊膜
观察囊膜病变
血凝试验
血凝抑制试验
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（二）病毒的分离
• 组织培养 • 鸡胚培养 • 动物接种
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1.组织培养
将人或动物离体的活组织或分散的活细胞在体外人工控制的 条件下使其生长繁殖的一种技术。
组织培养的类型
受感染的宿主细胞膜含 病毒抗原（血凝素），可吸附 鸡、豚鼠或猴红细胞
如果在培养瓶中加入相应 的血凝素抗血清，则不出现红 细胞吸附现象，即红细胞吸附 抑制试验阳性
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（6）血凝及血凝抑制试验
含有血凝素的病毒能吸附一定种类的哺乳动物或禽类的 红细胞，使红细胞凝集。该现象可被相应的血凝素抗体抑制， 称为血凝抑制试验，可用于分型。