血球计数板的使用

血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上 由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽 隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每 个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数 室，微生物的计数就在计数室中进行。
计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个 大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25 个小方格，共400小格；另一种是一个大方格分 成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格， 总共也是400小格。所以无论是哪种规格的计数 板，每一个大方格中的小方格数都是相同的。 每一个大方格边长为1㎜，则每一大方格的面积 为1㎜2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的 高度为0.1㎜，所以计数室的容积为0.1㎜3。
显微镜直接计数法
江苏省丹阳高级中学高三备课组
一、实验目的 1、明确显微镜计数的原理。 2．学习使用血球计数板进行微生物计数 的方法。 二、实验材料 酵母菌悬液，血球计数板，显微镜，盖 玻片，无菌毛细管、吸水纸等。
三、Байду номын сангаас验原理
利用血球计数板在显微镜下直接计数， 是一种常用的微生物计数方法。此法的优点 是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液 （或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖 玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。 由于计数室的容积是一定的（0.1㎜3），所以 可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来 换算成单位体积内的微生物总数目。由于此 法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称 为总菌计数法。
5.对每个样品计数三次，取其平均值， 计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。
各中格中菌数 A 1 第一室 第二室 2 3 4 5 B 二室平均值 菌数/ml
A-五个中方格的总菌数 B-稀释倍数
6．清洗血球计数板 血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切 勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹 干，或用95％的乙醇、无水乙醇、丙酮等有 机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格 内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净， 则必须重复清洗直到干净为止。
四、操作过程 1．稀释 将酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓， 可不必稀释。 2．镜检计数室 在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。 若有污物，则需清洗后才能进行计数。
3．加样品 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片， 再用无菌的细口滴管将稀释的酵母菌 液由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过 多），使菌液沿缝隙靠毛细渗透作用 自行进入计数室，一般计数室均能充 满菌液。注意不可有气泡产生。静置 5—10分钟即可计数。
7.注意事项
（1）实验过程中发现，如何稀释？ 如果发现每小格中酵母菌的个数多于10个，可按以下处理： 取1ml酵母菌培养液加入到盛有9ml蒸馏水的试管中，摇匀， 再计数；如发现酵母菌的个数仍然过大，则同样再稀释一次， 直至每小格中酵母菌的个数介于5-10，并作记录。 （2）调节显微镜光线的强弱适当，对于用反光镜采光的显 微镜还要注意光线不要偏向一边，否则视野中不易看清楚计 数室方格线，或只见竖线或只见横线。 （3）因菌液在血球计数板处于不同空间，要在不同焦距下才 能看全，所以，观察时必须不断调细螺旋（调焦距长短）， 方可找全。 （4）每个样品重复2—3次，若两次差别太大应重测。
其计算方法如下： 1．25×16的计数板计算公式
细胞数/ ml=(80小格内的细胞数 /80)×400×10000×稀释倍数 =A/5 ×25 ×104 ×B
2．16×25的计数板计算公式
细胞数/ ml=(100小格内的细胞数 /100)×400×10000×稀释倍数 =A/4 ×16 ×104 ×B
4．显微镜计数 将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计 数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。在计数前若 发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。一 般样品稀释度要求每小格内约有5—10个菌体为宜。若 选用25×16规格的计数板则每个计数室选5个中方格， 可选4个角和中央的中格（即80个小格），若选用 16×25规格的计数板，则数四个角：左上、右上、左下、 右下的四个中方格，（即100小格）中的菌体进行计数。 位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。如遇酵 母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作两个菌体 计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算 样品的含菌量。