血球计数板的使用
血球计数板的计数方法
血球计数板的计数方法血球计数板是一种常见的实验室设备，用于进行血液细胞计数。
本文将详细介绍血球计数板的计数方法，包括准备工作、样本处理、装载计数板、显微镜观察和计算结果等方面。
一、准备工作1.清洁：将血球计数板从存放位置取出，用酒精或去离子水擦拭干净，确保无灰尘和污垢。
2.检查：检查血球计数板是否完好无损，如有破损或变形应及时更换。
3.校准：使用前应进行校准，确保读数准确可靠。
二、样本处理1.采集样本：从受试者的静脉或指尖采集适量的血液样本，并将其加入到已经预先混合好的抗凝剂中。
2.混匀：轻轻摇动管子使其充分混匀，避免产生气泡。
3.稀释：将适量的稀释液加入到混合好的样本中。
通常情况下，白细胞需要进行稀释，而红细胞不需要稀释。
具体稀释倍数应根据实际情况而定。
三、装载计数板1.取出计数板：将血球计数板取出，放在干净的台面上，注意不要碰到玻璃面。
2.装载样本：使用移液器或吸管将稀释好的样本加入到计数板的样本槽中。
注意不要加过多，以免溢出。
3.震荡：轻轻震动计数板，使其充分混合。
四、显微镜观察1.调节显微镜：将显微镜调整到适当的倍率，并调节焦距，以便观察细胞。
2.观察细胞：在计数板上找到一个适当的视野，并开始观察细胞。
对于白细胞和红细胞，应分别选择不同的区域进行观察。
3.计数细胞：使用目镜和标尺，在每个小方格内逐一计数细胞。
对于白细胞和红细胞，应分别进行计数，并记录下来。
五、计算结果1.白细胞计算：根据已经记录下来的白细胞数量和稀释倍数，按照公式进行计算得出白细胞计数结果。
2.红细胞计算：根据已经记录下来的红细胞数量和稀释倍数，按照公式进行计算得出红细胞计数结果。
3.血红蛋白计算：根据已经记录下来的红细胞数量和血红蛋白浓度，按照公式进行计算得出血红蛋白计数结果。
4.其他指标计算：根据实验需要，可以进一步计算其他指标，如平均红细胞体积、平均血红蛋白含量等。
六、注意事项1.避免使用过期或损坏的血球计数板。
2.样本必须充分混匀，以确保稀释均匀。
血球计数板的使用方法
血球计数板的使用方法血球计数板是临床检验中常用的一种实验工具，用于进行血液细胞计数。
它能够帮助医生了解患者的血液状况，对于疾病的诊断和治疗起着重要的作用。
在使用血球计数板时，我们需要按照一定的步骤和方法进行操作，下面将详细介绍血球计数板的使用方法。
首先，准备工作。
在进行血球计数板的使用前，需要准备好所需的仪器和试剂，包括血球计数板、显微镜、计数用液等。
同时，要确保仪器的清洁和完好，避免因为仪器问题导致实验结果的不准确。
第二步，取样。
在进行血球计数前，需要从患者的静脉血中抽取一定量的血液样本。
在抽取血样时，要注意使用无菌注射器和采血针，避免引入外部细菌或其他污染物质。
第三步，稀释。
将取得的血液样本进行稀释处理，使其浓度适合于在血球计数板上进行观察和计数。
通常情况下，我们会采用一定比例的稀释液将血液样本稀释，以便于在显微镜下观察到合适数量的血细胞。
第四步，填充血球计数板。
将稀释后的血液样本填充到血球计数板的计数室中。
填充时要注意不要使得计数室过满或者过少，以免影响后续的观察和计数。
第五步，观察计数。
将填充好的血球计数板放置在显微镜下，以适当的放大倍数观察血细胞的数量和形态。
在观察过程中，要仔细观察每一个计数室，并记录下其中的红细胞、白细胞和血小板的数量。
第六步，计数。
根据观察到的血细胞数量，进行相应的计数。
通常情况下，我们会选择几个计数室进行计数，并取其平均值作为最终的计数结果。
在计数过程中，要注意避免重复计数或者漏计，保证结果的准确性。
最后，记录结果。
将观察和计数的结果记录在实验记录表中，并进行相应的数据处理和分析。
在记录结果时，要注意标明样本的来源和处理方法，以便于后续的结果验证和分析。
总之，血球计数板的使用方法包括准备工作、取样、稀释、填充、观察计数、计数和记录结果等步骤。
在进行实验时，要严格按照操作规程进行，确保实验结果的准确性和可靠性。
希望以上介绍能够帮助大家正确使用血球计数板，提高实验效率和结果质量。
血球计数板的计数方法
血球计数板的计数方法血球计数板是临床实验室中常用的一种计数工具，用于进行血细胞计数。
正确的计数方法对于获得准确的结果至关重要。
下面将介绍血球计数板的计数方法。
首先，准备工作。
在进行血球计数之前，需要准备好所需的实验器材和试剂。
包括血球计数板、显微镜、计数用盖玻片、血细胞计数液等。
确保实验器材的清洁和完整，以免影响计数结果。
其次，取样。
取适量的血液样品，使用吸管或注射器将血液滴在计数板的计数室中。
注意避免气泡的产生，以确保计数的准确性。
然后，计数。
将计数板放置在显微镜上，调节镜头至适当倍数。
在计数室的九个小方格中，选择几个进行计数。
根据所选小方格的面积和深度，计算出所选小方格的体积。
然后在显微镜下观察所选小方格中的血细胞数量，并进行计数。
接着，计算。
根据所选小方格的体积和计数结果，计算出每升血液中的血细胞数量。
通常情况下，计数板上的每个小方格代表的体积是已知的，根据这一体积和计数结果，可以得出血细胞的浓度。
最后，记录。
将计数结果准确记录下来，包括所选小方格的数量、计数板的倍数、计数室的体积等信息。
这些记录对于结果的准确性和可复现性具有重要意义。
在进行血球计数板的计数方法时，需要注意以下几点，首先，要保持耐心和细心，避免因匆忙而导致计数错误。
其次，要进行多次计数，并取平均值，以提高结果的准确性。
最后，要严格按照操作规程进行，避免操作失误。
总之，血球计数板的计数方法是临床实验室中常用的一种技术。
正确的计数方法能够确保结果的准确性，对于临床诊断和治疗具有重要意义。
希望本文介绍的计数方法能够对相关人员有所帮助，提高血球计数的准确性和可靠性。
《血球计数板使用》课件
01
02
03
04
计数结果应及时记录并核对， 确保数据的准确性和完整性。
对于异常数据应进行复核或重 新取样，避免误差的积累。
在数据解读时应结合实际情况 进行分析，避免片面或主观的
判断。
对于误差的控制应采取有效的 措施，如采用合适的取样方法
、提高操作技能等。
04
血球计数板应用实例
临床应用实例
诊断疾病
《血球计数板使用》PPT课件
目录
• 血球计数板简介 • 血球计数板操作步骤 • 血球计数板使用注意事项 • 血球计数板应用实例 • 血球计数板的发展趋势与展望
01
血球计数板简介
血球计数板的结构
血球计数板由一块载玻片和两个 盖玻片组成，载玻片上刻有方格 ，每个方格分为9个中格，共计
162个小格。
04
稀释样本
将待测样本进行适当稀释，以 便于计数。
染色处理
根据实验要求，对稀释后的样 本进行染色处理。
滴加样本
使用吸管或移液器将染色后的 样本滴加到血球计数板的凹槽
中。
覆盖盖玻片
轻轻覆盖盖玻片，确保没有气 泡产生，然后进行显微镜检查
。
数据分析阶段
显微镜检查
使用显微镜观察血球计 数板，记录各种血细胞
提高医疗效率
降低医疗成本
血球计数板的智能化和自动化将大大 提高医疗效率，减轻医护人员的工作 负担。
血球计数板的优化和普及将降低医疗 成本，减轻患者经济负担，促进医疗 服务的普及和公平。
促进医疗技术创新
血球计数板的发展将推动医疗技术的 不断创新和发展，提高医疗质量和安 全性。
THANK YOU
感谢各位观看
药物研发
血球计数板的使用
•
• 样品中的菌数/ml= •
A1+A2+A3+A4+A5
80
X
?
X 稀释倍数
注意事项:
• 1、测定时，酵母菌液要摇匀，防止酵母 凝聚沉淀。 • 2、活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细 胞大小的一半时，即可作为两个菌体计 数，若芽体小于母细胞一半时为1个酵母 细胞。 • 3、位于格线上的酵母菌一般只计此格的 上方线及左方线上的菌体。
•计数室刻度有2种 •一种是 25中格X16小格 另一种为 16中格X25小格 •它们都是由400个 小格组成。
• 血球计数板的分区与分格
* * # #
# * *
#
#
• 例一 • 1大格=16中格 • =16 X 25小格 • =400小格
ห้องสมุดไป่ตู้
例二 1大格=25中格 =25 X 16小格 =400小格
结果记录：
• 微生物名称 总菌数 个/ml
第一个 第二个 第三个 第四个 第五个 中格 第一次 中格 中格 中格 中格
第二次 第三次
平均
血球计数板的构造（25×16）
放大后的网格
放大后的计数室
• 4、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方 线及左方线上的菌体。 • 5、计算方法： • 样品中菌数/ml=? • 若本实验采用25 x 16规格，要计数的全部小 格即?个小格。 • 设：每个中方格的菌数为A，则 • 每小格平均菌数=（A1+A2+A3+A4+A5)/80 • 计数室的容积？
微生物血球计数板直接计数法
此法是利用血球计数板在显微镜下直接进行 测定。它观察在一定的容积中的微生物的个 体数目，然后推算出含菌数，包括死活细胞 均被计算在内，还有微小杂物也被计算在内。 这样得出结果往往偏高。这种方法常用于形 态个体较大的菌体或孢子。
血球计数板的使用方法
血球计数板的使用方法
一、注意事项
1. 血球计数板只能用于血液检查，不能用于测量其他物质；
2. 将血球计数板放置于平面上，确保平稳，防止晃动和碰撞；
3. 在开始测定之前，要根据靶点的电极安装完整；
4. 滴血时要涂抹几种抗凝剂，防止血液沉淀。
如果血液较深，可在计数前用刨子将血液挖出。
二、步骤
1. 将血液精确滴在血球计数板上；
2. 连接血球计数板上的接头，打开电源；
3. 根据靶点调整电位器；
4. 将光学镜头的焦距调节到节点最佳状态；
5. 通过镜头观察血液样本，一次性计数红细胞、白细胞和血小板的数量；
6. 通过刀片移动的方式，进行血球的细致观察和计数；
7. 计数结束后，关闭电源，清理血球计数板上的血液，清洗各个部分，涂抹上抗菌剂。
血球计数板的使用方法
血球计数板的使用方法血球计数板是临床实验室中常用的一种设备，用于进行血细胞计数和形态观察。
正确的使用方法对于获得准确的结果至关重要。
下面将详细介绍血球计数板的使用方法。
首先，准备工作。
在进行血球计数之前，需要准备好所需的工具和试剂，包括血球计数板、显微镜、横纹管、生理盐水、乙醇等。
确保这些工具和试剂都是清洁的，并且没有污染。
接下来，进行样本制备。
首先，将一滴血液加入到横纹管中，然后用生理盐水进行稀释，直到样本达到合适的稀释倍数。
将稀释后的样本加入到血球计数板的计数室中，确保填满计数室的每一个小格。
然后，进行计数和观察。
将血球计数板放置在显微镜上，调整倍数和焦距，观察计数室中的血细胞。
使用显微镜的目镜和物镜进行细胞计数和形态观察，记录所观察到的细胞数量和形态特征。
最后，进行数据分析和结果记录。
根据观察到的细胞数量和形态特征，进行数据分析，计算出各种血细胞的数量比例。
将结果记录在实验记录表中，并进行结果的验证和复核。
在使用血球计数板的过程中，需要注意以下几点。
首先，确保血球计数板和显微镜的清洁和干燥，避免污染和误差。
其次，稀释样本时要注意控制稀释倍数，以确保观察到合适数量的细胞。
最后，进行计数和观察时，要认真细致，避免遗漏或重复计数。
血球计数板的使用方法并不复杂，但需要严格按照操作规程进行，以确保结果的准确性和可靠性。
正确的使用方法不仅可以提高实验效率，还可以避免误差和污染，保证实验结果的科学性和可信度。
希望以上介绍对于血球计数板的正确使用有所帮助。
血球计数板的使用方法
血球计数板的使用方法
血球计数板是一种用于测量血液中各种血球数量的实验室工具。
下面是使用血球计数板的一般步骤：
1. 准备工作：
- 清洁血球计数板：使用酒精或其他适当的清洁剂将血球计
数板彻底清洁，并确保完全干燥。
- 准备血液样本：采集血液样本，并将其置于抽血管中。
2. 充填血液样本：
- 将橡胶管连接至抽血管的一端，并将另一端放入含有适当
稀释液（例如乙醇，盐水等）的试管中。
- 轻轻压抽血管，让血液与稀释液混合，确保样本适当稀释。
3. 填充计数室：
- 将计数室的一角放入混合好的血液样本液中。
- 逐渐放松手指，使液体自然充满整个计数室。
4. 观察计数室：
- 使用显微镜，在10倍或40倍放大倍数下观察计数室的血
球图像。
- 记录计数室内的血球数量。
5. 计算血球数量：
- 将计数室中各种血球的数量进行计算和统计。
- 根据计数室内的面积和深度，计算总血球数量。
- 可以使用计数室所覆盖的血球数量与已知的面积，以得出
总血球数量的近似值。
6. 清洗和储存：
- 使用适当的清洁剂彻底清洗计数室，确保无血液残留。
- 将计数室储存在干燥，洁净的地方，以防止污染和损坏。
请注意，使用血球计数板可能需要一定的实验室训练和技巧，以确保准确性和可靠性。
在进行血液分析时，应遵循实验室的操作指南和安全规定。
血球计数板的计数方法
血球计数板的计数方法
血球计数板是一种常用的实验仪器，用于计算血球数量。
具体的计数方法如下：
1. 准备工作：首先，确保血球计数板干净，无污染。
可用洗涤剂和双蒸水进行清洗和冲洗，然后用无纹纸巾擦干。
2. 取血样：使用无菌针头采集一定量的血液样本，通常使用的样本量为0.02毫升。
3. 加样：将血液样本滴入血球计数板的计数区。
滴落的血液应均匀地分布在计数区的每个小方格内。
4. 观察：视觉放大镜或显微镜的帮助下，通过目镜观察计数区的血球数量。
5. 计数：随机选择若干个小方格，计算这些方格中血球的数量。
一般使用的计数面积为3个或4个方格。
6. 计算：将所选方格中的血球数量相加，然后乘以血球计数板的稀释倍数和倒干涉系数。
根据计算公式，可得出血球的浓度，常用单位为每立方毫米的血液中血球的数量。
7. 结果：将最终计算出的血球浓度记录下来，并报告给相关的医务人员或研究人员。
使用血球计数板进行血球计数时，需要严格按照操作规程进行，
避免出现污染或操作错误。
在完成计数后，要及时清洗血球计数板，以备下次使用。
血球计数板使用说明
而由于仪器（计数板、盖片、吸管等）不够准确与精密带来的误差称仪器误差；
由于细胞分布不均匀等因素带来的细胞计数误差属于分布误差或计数域误差（filed error）。
仪器误差和分布误差统称为固有误差或系统误差。技术误差和仪器误差可通过规范操作、提高熟练程度和校正仪器而避免或纠正，但细胞分布误差却难于彻底消除。质量控制一般需采用以下措施。
n为测定例数，∑d2为双样之差的平方和。
3．人员质量评价一般用两差比值法或双样试验标准差评价法进行质量评价或工作人员自我考核；变异百分数法通常用于评价细胞计数的结果。
（1）两差比值法用于考核实验结果的精密度。采用同一稀释样间隔2h后进行重复计数，求出两次镜下计数值之差（取绝对值）与两次计数值标准差的比值，即两差比值（r）。
评分：score=100-20.1×r，20.1为失分系数（40/1.99）。评级：90-100为优秀，80-89为良好，70-79为中等，60-69为及格，<60时为不及格。
（2）细胞稀释液应等渗、新鲜、无杂质微粒，同时应该保证细胞没有明显的团块。
（3）严格操作，从取样、重悬、稀释、充池到计数都应规范，尤其应注意的是样品稀释及充池时既要作到充分混匀，又要防止剧烈震荡为破坏红细胞。必须一次性充满计数室，防止产生气泡，充入细胞悬液的量以不超过计数室台面与血盖片之间的矩形边缘为宜。
25格×16格的血球计数板使用方法介绍
25格×16格的⾎球计数板使⽤⽅法介绍25格×16格的⾎球计数板使⽤⽅法介绍⾎球计数板介绍⽤优质厚玻璃制成。
每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数池。
计数池两侧各有⼀⽀持柱，将特制的专⽤盖玻⽚覆盖其上，形成⾼0.10mm的计数池。
计数池画有长、宽各3.0mm的⽅格，分为9个⼤⽅格，每个⼤格⾯积为 1.0mm。
容积为0.1mm（ul），其中，中央⼤⽅格⽤双线分成25个中⽅格，位于正中及四⾓5个中⽅格是红细胞计数区域，⽤单线划分为16个⼩⽅格。
四⾓的4个⼤⽅格是⽩细胞计数区域，⽤单线划分为16个中⽅格。
根椐国际标准局（NBS）规定，⼤⽅格每边长度允许误差为±1%。
使⽤⽅法：1.视待测菌悬液浓度，加⽆菌⽔适当稀释（斜⾯⼀般稀释100倍），以每⼩格的菌数可数为度。
2.取洁净的⾎球计数板⼀块，在计数区上盖上⼀块盖玻⽚。
3.将菌悬液摇匀，⽤滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻⽚的下边缘摘⼊⼀⼩滴（不宜过多），让菌悬液利⽤液体的表⾯张⼒充满计数区，勿使⽓泡产⽣，并⽤吸⽔纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。
也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻⽚后，造成计数区深度的升⾼），然后加盖盖玻⽚（勿使产⽣⽓泡）。
4.静置⽚刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。
将⾎球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换⾼倍镜观察并计数。
由于细胞的折光率和⽔的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。
5.25个⼤⽅格组成的计数区，除数上述四个⼤⽅格外，还需数中央1个⼤⽅格的菌数（即80个⼩格）。
为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统⼀的规定。
如菌体位于⼤⽅格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。
即位于本格上线和左线上的细胞计⼊本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计⼊相应的格中。
血球计数板的使用
血球计数板生物实验用具血球计数板是显微镜上的外挂物件,可用来测量细胞,细菌等一些微小物体的长度,还有就是测量数量,如单位体积细胞的数量.血球计数板的构造和使用血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3.计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成,见图.血球计数板的使用以计数酵母菌为例(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数.(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.(3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.(4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内.(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数.(6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞).(7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数.3.计算公式(1)16格×25格的血球计数板计算公式:酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数(2)25格x16格的血球计数板计算公式:酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数4.血球计数板的清洁血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物.若不干净,则必须重复清洗直到干净为止.实验六微生物的显微直接计数法一、实验目的了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下直接计数的技能。
血球计数板的使用-图文
对每个样品计数三次，再取其平均值。
N1=(n1-1+n1-2)/2 N2=(n2-1+n2-2)/2 N3=(n3-1+n3-2)/2
N=(N1+N2+N3) /3
N1=(n1-1+n1-2)/2
计数一个样品要从两个计数室中计得的平 均数值来计算。
n1-1
n1-2
N1=(n1-1+n1-2)/2
x个 = N/(5×16) ×16×25个
1cm3
(1mm × 1mm × 0.1mm÷1000)cm3
x = N/(5×16) ×16×25个× 1cm3 × 1000÷ (1mm × 1mm × 0.1mm)
=50000 N
②用血球计数板对藻细胞进行计数 的方法与步骤：
ⅰ检查计数室 先用显微镜对计数板的计数室进行镜检是否干净
如果规格为25格×16格的计数板统计计数池中央 大方格内四角及中央中格内(即80个小方格)的单 胞藻数，并记录。
计数时，小心移动载物台，从上到下，由左及右 又由右及左依次计数各小格内的细胞数。一般可 采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则 处理。凡压方格的上线和左线的细胞，统一算此 方格内的细胞，而压方格的下线和右线的细胞， 统一不算此方格内的细胞。
。若有污物，则需用清水清洗，吹干，用擦镜纸 擦拭干净。
盖玻片使用前浸在75%的酒精溶液中，使用时用 眼科镊取出，放在滤纸上吸水，用擦镜纸擦拭干 净。
将盖有盖玻片的计数板放在显微镜的载物台上， 调焦，用低倍镜找到计数区检查是否干净。
从试管中吸出培养液进行计数之前，要将 试管轻轻震荡几下，这样使单胞藻分布均 匀，防止单胞藻凝聚沉淀，提高计数的代 表性和准确性，求得的培养液中的单胞藻 数量误差小。
血球计数板的使用
血球计数板的使用姓名原理血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。
玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用。
这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0。
1mm，其体积为0。
1mm3。
计数室通常有两种规格。
一种是大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。
但是不管计数室是哪一种构造,它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。
每一个大方格边长为1 mm，则每一个大方格的面积为1 mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1 mm3血球计数板的使用方法（以计数酵母菌为例)：1 样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每小方格内含有4—5个酵母细胞为宜，一般稀释10倍即可。
2 将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.3 将稀释后的酵母菌悬液用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入.多余的菌液用吸水纸吸取。
稍待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内。
4 计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要按对角线位,取左上、右上、左下、右下4个中格(即100个小格）的酵母菌数；如果规格为25格×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格（即80个小方格)的酵母菌数.5 当遇到位于大格线上的酵母菌，一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞）.6 对每个样品计数三次,取其平均值，按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。
计算公式：（1） 16格×25格的血球计数板计算公式：酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数（2) 25格x16格的血球计数板计算公式：酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数7血球计数板的清洁：血球汁数板使用后,用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷。
25格×16格的血球计数板使用方法介绍
25格×16格的血球计数板使用方法介绍血球计数板介绍用优质厚玻璃制成。
每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数池。
计数池两侧各有一支持柱，将特制的专用盖玻片覆盖其上，形成高0.10mm的计数池。
计数池画有长、宽各3.0mm的方格，分为9个大方格，每个大格面积为 1.0mm。
容积为0.1mm（ul），其中，中央大方格用双线分成25个中方格，位于正中及四角5个中方格是红细胞计数区域，用单线划分为16个小方格。
四角的4个大方格是白细胞计数区域，用单线划分为16个中方格。
根椐国际标准局（NBS）规定，大方格每边长度允许误差为±1%。
使用方法：1.视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。
2.取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。
3.将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。
也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。
4.静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。
将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。
由于细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。
5.25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央1个大方格的菌数（即80个小格）。
为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。
如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。
即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。
6.对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。
血球计数板的使用(3-4)
血球计数板的使用——清洗血球计数板
流水冲洗计数板，切勿用硬物洗刷，洗完 后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察 每小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。 若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。
血球计数板的适用范围
这种方法适用于个体较大细胞或颗粒，除霉菌孢子外，还比如酵母细胞，血 细胞等。不适用于细菌等个体较小的细胞，因为细菌细胞太小，不易沉降； 在油镜下看不清网格线，超出油镜工作距离。 这种方法能快速，准确计数，对酵母菌可同时测定出芽率，或在菌悬液中加 入展
• 样品计数还有哪些方法可以完成？
血球计数板的使用注意事项
1. 血球计数板的清洗方法 2.计数规则计数时若遇位于中格线上的菌体遵循计上不计下，计左不计右原则，
防止重复计数。 3.对同一样品重复计数两次，取其平均值；若两次数据相差太大，则需重复计数。 4.加样时不能产生气泡，如有菌液粘在计数区内的盖玻片上表面，则应弃去盖玻
片，洗净计数板后重新加样。
中格（可选4个角和中央的中格）中的菌体进行计数。计数一个样品要从两个 计数室中计得的值求平均。
光强调节
显微镜10倍物镜下观察的25个中方格 显微镜40倍物镜下观察到的16个小方格
血球计数板的使用——计算
各中格中菌数
A
1
2
3
4
5
第一室
B
菌数/mL 二室平均数
第二室
1毫升菌液中的总菌数=A/5×25×10000×B=50000A·B（个） 五个中方格的总菌数为A,菌液稀释倍数为B
血球计数板的使用——加样
将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细管将菌悬液由 盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入并充满计数室。
实验—血球计数板的使用
一、血球计数板的使用原理显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数，然后推算出含菌数的一种方法。
血球计数板是常用的计菌器之一。
血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。
方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。
这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的计数板；大方格的长和宽各2mm，深度为0.1mm，其容积为0.4mm3，即2mm×2mm×0.1mm方格的计数板。
在血球计数板上，刻有一些符号和数字，其含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格；0.1mm 为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2，分400个小格，每小格面积是1/400 mm2。
计数室通常也有两种规格：一种是16×25型，即大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是25×16型，即大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。
但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。
1．16×25型的计数板将计数室放大，可见它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数。
将每一中格放大，可见25个小格。
计数重复3次，取其平均值。
计数完毕后，依下列公式计算：酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/100 ×400×10000×稀释倍数2．25×16型的计数板中央大方格以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格，供细胞计数用。
血球计数板使用说明
血球计数板使用说明血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽3各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm.取样:1、样品应该保证充分的均匀的情况下才有意义;2、样品应该尽量减少结团情况，如有结团应该吹散(或者用胰酶消化)后再计数;3、样品的体积大概250ul(大概5-7滴);4、如果体积大于100ml，取样应该保证在两个以上;5、如果是生产的技术应该取三个样，并每次都要充分混匀后取样;6、样品的体积只有进口的离心管和吸管的数据可以取信，但是离心管会有一定的波动误差，应该计算有15ml(-100ul)50ul(-300ul);稀释:1、稀释液应该是等渗的，不能带有颗粒(如果有应该先用滤纸过滤);2、稀释的时候样品的体积至少要用50ul，同时取样前应该用200ul的枪吹打10次，并马上取样;稀释后的样品也要用200ul枪吹打10次再取样计数;3、稀释后的样品四个中格的细胞数应该保证50-150个/中格;四个的总数应该大于200个;4、细胞应该计数应该尽量使用原样，如果有离心操作，应该保证样品在500ul以上，并用250g 离心5min;加样:1、计数板要用酒精清洗干净后，晾干，表面不能有污垢和纤维;2、盖玻片应该也保持洁净，并防在血球技术板的中间位置，血球计数板要放在平面上，再每边加样，每边的加样量为8.5ul;3、平稳放置30sec后放到显微镜上面，用100倍镜每次计数一个中方格; 计数:1、每个样品应该计数至少三次(否则会有很大偏离);2、每个方格的数应该在50-150间，计数的标准应该统一，如果是团就记为一个，但是可以明确分出是几个细胞的可以据实计数;3、遵守记上不记下，记左不记右;细胞压线超过50%在线内才有效; 人员:1、人员应该做同一个样品测试，同一个样品的细胞数总量应该在10个以内(或者是5%波动);同一个样品稀释后计数的数据波动应该在5%以内;2、不同人员的测试同一个样品的波动误差应该在5%以内;3、达到上诉的操作的要求的人员的操作数据才能取信;结果记录表4次数 A B C D 稀释倍数细胞数×10 1 2 3.其他人对这个问题的分析【质量控制】血细胞计数的误差分别来源于技术误差和固有误差。
关于血球计数板的使用及相关问题
个小方格细胞总数 ×400×10000×稀释倍数血球计数板的构造（三）（25×16） 二、血球计数板的使用方法步骤 1．镜检计数室。
在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。
若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数； 2．加样品。
将清洁干燥的血球计数板的计数室上加盖专用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗入，一次性充满计数室，防止产生气泡，多余培养液可用滤纸吸去； 3．计数。
稍待片刻（约5min），待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部后，先在低倍镜下找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察、计数并记录。
三、血球计数板的使用注意事项 《培养液中酵母菌种群数量的动态变化》实验是一个历时较长（7天左右）的实验，事前一定要做好周密的计划，定程序、定时间、定人员。
每天采用抽样检测法使用血球计数板对酵母菌进行计数，在计数时应从以下几方面注意。
1．每天同一时间，各组取出本组的试管，用血球计数板计数酵母菌个数，并作记录，连续观察7天。
2．从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几下，这样使酵母菌分布均匀，防止酵母凝聚沉淀，提高计数的代表性和准确性，求得的培养液中的酵母菌数量误差小。
3．如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当对培养液进行稀释以便于酵母菌的计数。
具体方法是：摇匀试管，取1mL 酵母菌培养液，加入成倍的无菌水稀释，稀释n 倍后，再用血球计数板计数，所得数值乘以稀释倍数。
以每小方格内含有4—5个酵母细胞为宜。
特别是在培养后期的样液需要稀释后计数。
4．活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1个酵母细胞。
5．对于压在方格界线上的酵母菌应当计数同侧相邻两边上的菌体数，一般可采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则处理，另两边不计数。
计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数；如果规格为25格×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。
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四、操作过程 1．稀释 将酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓， 可不必稀释。 2．镜检计数室 在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。 若有污物，则需清洗后才能进行计数。
3．加样品 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片， 再用无菌的细口滴管将稀释的酵母菌 液由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过 多），使菌液沿缝隙靠毛细渗透作用 自行进入计数室，一般计数室均能充 满菌液。注意不可有气泡产生。静置 5—10分钟即可计数。
其计算方法如下： 1．25×16的计数板计算公式
细胞数/ ml=(80小格内的细胞数 /80)×400×10000×稀释倍数 =A/5 ×25 ×104 ×B
2．16×25的计数板计算公式
细胞数/ ml=(100小格内的细胞数 /100)×400×10000×稀释倍数 =A/4 ×16 ×104 ×B
4．显微镜计数 将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计 数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。在计数前若 发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。一 般样品稀释度要求每小格内约有5—10个菌体为宜。若 选用25×16规格的计数板则每个计数室选5个中方格， 可选4个角和中央的中格（即80个小格），若选用 16×25规格的计数板，则数四个角：左上、右上、左下、 右下的四个中方格，（即100小格）中的菌体进行计数。 位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。如遇酵 母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作两个菌体 计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算 样品的含菌量。
5.对每个样品计数三次，取其平均值， 计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。
各中格中菌数 A 1 第一室 第二室 2 3 4 5 B 二室平均值 菌数/ml
A-五个中方格的总菌数 B-稀释倍数
6．清洗血球计数板 血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切 勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹 干，或用95％的乙醇、无水乙醇、丙酮等有 机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格 内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净， 则必须重复清洗直到干净为止。
7.注意事项
（1）实验过程中发现，如何稀释？ 如果发现每小格中酵母菌的个数多于10个，可按以下处理： 取1ml酵母菌培养液加入到盛有9ml蒸馏水的试管中，摇匀， 再计数；如发现酵母菌的个数仍然过大，则同样再稀释一次， 直至每小格中酵母菌的个数介于5-10，并作记录。 （2）调节显微镜光线的强弱适当，对于用反光镜采光的显 微镜还要注意光线不要偏向一边，否则视野中不易看清楚计 数室方格线，或只见竖线或只见横线。 （3）因菌液在血球计数板处于不同空间，要在不同焦距下才 能看全，所以，观察时必须不断调细螺旋（调焦距长短）， 方可找全。 （4）每个样品重复2—3次，若两次差别太大应重测。
显微镜直接计数法
江苏省丹阳高级中学高三备课组
一、实验目的 1、明确显微镜计数的原理。 2．学习使用血球计数板进行微生物计数 的方法。 二、实验材料 酵母菌悬液，血球计数板，显微镜，盖 玻片，无菌毛细管、吸直接计数， 是一种常用的微生物计数方法。此法的优点 是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液 （或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖 玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。 由于计数室的容积是一定的（0.1㎜3），所以 可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来 换算成单位体积内的微生物总数目。由于此 法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称 为总菌计数法。
血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上 由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽 隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每 个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数 室，微生物的计数就在计数室中进行。
计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个 大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25 个小方格，共400小格；另一种是一个大方格分 成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格， 总共也是400小格。所以无论是哪种规格的计数 板，每一个大方格中的小方格数都是相同的。 每一个大方格边长为1㎜，则每一大方格的面积 为1㎜2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的 高度为0.1㎜，所以计数室的容积为0.1㎜3。