DNA的提取(34张)

2.下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的
是（
D ）
A．氯化钠的浓度越低，对DNA的溶解度越大 B．人血也可代替鸡血进行实验 C．柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂 D．DNA不能溶于酒精
3．在破碎鸡血细胞时，要先加入20ml的蒸馏
水，其作用是（ B ）
A． DNA溶解于水 B．血细胞破裂，DNA释放 C．稀释血液，防止凝固 D．有利于搅拌
NaCl溶液5mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻
璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加 入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水 中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜 色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。
1.以血液为实验材料，每100ml加入3g柠檬酸钠， 作为抗凝剂。 2.加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以 免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮 状沉淀。 3.二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。
2
实验设计
（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液
1、动物细胞的破碎：以鸡血为例，在鸡血细胞液
中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过
滤后收集滤液即可。
2、植物细胞的破碎：提取洋葱DNA时，在切碎的
洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅
拌和研磨，过滤后收集研磨液。
旁 栏
思
考
• 加入洗涤剂和食盐的作用分别是？
为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再调节NaCl
溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA，过滤去除溶 液中的杂质，再用2mol/L的NaCl溶解DNA。
方案二：直接在滤液中加入嫩肉 粉，反应10-15min，嫩肉粉中木 瓜蛋白酶能够分解蛋白质。 方案三：将滤液放在60-75℃的恒温水浴中 保温10-15℃，注意严格控制温度范围。
而DNA在80℃以上才会变性
五、洗涤剂可以溶解 细胞的细胞膜，去除 脂质和蛋白质,但对
DNA没有影响
六、DNA的鉴定
①DNA与二苯胺（沸水浴加 热）会被染成蓝色，因此，
二苯胺可以作为鉴定DNA的
试剂。
②甲基绿（绿色）
（一）实验材料的选取
1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的 红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中 培养的大肠杆菌。（从中选取2～3种实验材料） 2 、原则：凡是含有 DNA 的生物材料都可以考虑，但选 用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大
DNA粗提取
选择适宜材料 DNA的纯化
破碎细胞
DNA的溶解和析出
鉴定DNA
与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应
1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加
入蒸馏水的作用是( B )。 A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出 C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA
洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利
于DNA释放；食盐有利于DNA溶解 • 如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？
会使细胞核内DNA释放不完全，提取DNA量变少，
影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二 苯胺鉴定不显示蓝色等
（三）去除滤液中的杂质
方案一：在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度
课题1
DNA的粗提取与鉴定
一、DNA的溶解性 溶解度
2mol/L浓度可使 DNA溶解； 0.14mol/L浓度可
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基础知识
0
NaCl 0.14mol/L 2mol/L 浓度
使DNA析出。
二、酒精是一种常用有机溶剂，但DNA却不能溶 于酒精；
三、蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响
四、大多数蛋白质不能忍受60－80℃的高温，
退 出
⑥ ⑦ ⑧
⑨
①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固 ②加速血细胞破裂 ③溶解DNA ④使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA 最大限度地释出 ⑤使含DNA的黏稠物被留在纱布上 ⑥使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中 ⑦除去含DNA的滤液中的杂质 ⑧提取DNA
⑨ A出现蓝色 B无变化
鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图
2mol/L
⑤过滤→取纱布上的滤物
⑥再次溶解DNA 2mol/LNaCl溶液
纱布过滤
取滤物
滤液
⑦加冷酒精使DNA析出（纯化）
冷酒精
⑧DNA的鉴定
实验原理 DNA
的 粗 提 取 与 鉴 定
DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同 DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同 DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同 DNA与二苯胺呈现蓝色反应
3
操作提示
方法步骤 1. 制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液
加入物质
目的 ① ② ③ ④ ⑤
提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1 蒸馏水 2. 溶解细胞核内的 DNA 3. 析出含 DNA 的黏稠物 4. 滤取含 DNA 的黏稠物 5. 将 DNA的黏稠物再溶解 6. 过滤含 DNA的 NaCl 溶液 7. 提取含有杂质较少的DNA 冷却的 95％的酒精50 mL A : (1) 向试管中加入0. 015 mol／L 的 NaCl溶液 5mL (2) 加入 DNA 8. DNA 的鉴定 (3)4 mL 二苯胺试剂 B: (1) 向试管中加入0. 015mol ／L 的 NaCl溶液 5mL (2)4 m L 二苯胺试剂 2 mol ／L 的 NaCl溶液 20 mL 2 m1／L 的 NaCI 溶液40 mL 蒸馏水
（四） DNA的析出与鉴定
1、DNA的析出： 将处理后的溶液过滤，加入
与滤液体积相等的、冷却的
酒精溶液（体积分数为95%），
静置2～3min，溶液中会出现
白色丝状物，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个 方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分。
2、DNA的鉴定： 取两支20mL的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的
4．若选择的实验材料为植物细胞，破碎细
胞时要加入一定量的洗涤剂和食盐，加入食
盐的目的是（ A ）
A．利于DNA的溶解 B．分离DNA和蛋白质 C．溶解细胞膜 D．溶解蛋白质
5．在DNA粗提取实验中，向在溶解DNA的NaCl
溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（ C ）
A．有利于溶解DNA B．有利于溶解杂质 C．减少DNA的溶解度 D．减少杂质的溶解度