弗氏完全佐剂(complete
灭活剂保护剂和免疫佐剂
A12(SO4)3·18H2O+6NaOH→2Al(OH)3+2Na2SO4+18H2O
取氢氧化铝干粉50～55kg, 加 入6万毫升沸水中, 搅拌均匀; 倒入硫酸100kg, 爆沸至棕褐 色, 经30～60min后, 加温水, 边加边搅拌约至总量为35万 毫升；用前加水稀释至100万 毫升, 温度约为80℃, 盛装在 一个缸内
并发挥免疫系统细胞间协同作用（巨噬细胞与T细胞, T细胞与B细胞）。
灭活剂保护剂和免疫佐剂
第18页
作用机理
① 抗原递呈（antigen presentation） ② 抗原寻（antigen targeting） ③ 免疫调整（immune modulation）
灭活剂保护剂和免疫佐剂
第19页
①抗原递呈: 指抗原分子递呈给T细胞方法。佐剂与疫苗联合使 用，有利于抗原性物质在胞内被加工，被MHC分子特异性结合、 保护、运输并递呈给效应细胞。
（2）用明矾加碳酸钠合成法
2 KAl(SO4)2+3 Na2CO3+3H2O→2Al(OH)3+3Na2SO4+3CO2↑
（3）用三氯化铝与氢氧化钠合成
A1C13+3NaOH→Al(OH)3↓+3NaCl
灭活剂保护剂和免疫佐剂
第26页
用铝粉加烧碱合成法:
2Al(OH)3+12H2O+3H2SO4→Al2(SO4)3·18H2O
灭活剂保护剂和免疫佐剂
第24页
（二）非颗粒性佐剂
1．肽类佐剂（peptides）：胞壁酰二肽（MDP）及其 衍生物、
去胞壁酰多肽、脂肽和免疫调整多肽。
2．表面活性分子类佐剂：海藻糖合成衍生物（TDM）
弗氏完全佐剂制备
弗氏完全佐剂制备弗氏完全佐剂是一种特殊的辅助药物制剂，它通过将多种药物或药品结合在一起，形成一种配方，达到协同作用，提高药物疗效或减少药物副作用的效果。
下面将详细介绍弗氏完全佐剂的制备方法。
弗氏完全佐剂的制备包括以下几个步骤：物质准备、制剂配方、制剂制备、制剂封装和贮存。
首先，需要准备配方中所需的物质。
这些物质包括原料药、辅料和溶剂。
原料药是佐剂中起主要作用的药物成分，辅料用于提高药物的稳定性和流动性，溶剂用于制剂制备时的溶解。
接下来，需要进行制剂配方。
配方的制定需要根据弗氏完全佐剂的具体功能和要求来确定，一般需要根据临床实践和科学研究的结果进行调整和改进。
在配方中，需要考虑药物之间的相容性，以及药物与辅料之间的相互作用。
然后，进行制剂的制备。
制剂制备的方法有多种，常见的有干混法、湿混法、溶剂法等。
具体选择何种方法需要根据佐剂中所使用的药物和辅料的性质以及制剂的要求来决定。
在制剂制备的过程中，需要注意控制温度、湿度和加料的顺序，以确保最终制得的佐剂符合要求。
制剂制备完成后，需要进行封装。
封装的方式有很多种，常见的有胶囊、片剂、注射剂等。
封装时需要注意保持无菌环境，并按照规定的药物剂量将制剂分装入相应的包装中。
最后，将制备好的佐剂进行贮存。
贮存要求佐剂防潮、防光、防氧和保持在低温下。
在贮存过程中需要定期检查佐剂的质量，确保其有效期内保持稳定。
弗氏完全佐剂的制备是一个复杂而细致的过程，需要严格按照药典和相关规定进行操作。
在制备过程中，需要密切关注药物的稳定性和相容性，以及药物与辅料之间的相互作用。
只有正确地控制每个步骤，才能制得质量稳定、疗效显著的弗氏完全佐剂。
单抗制备小鼠免疫SOP
单抗制备免疫一、材料准备：弗式完全佐剂（complete Freunds adjuvant，CFA）弗氏不完全佐剂（incomplete Freunds adjuvant，IFA）实验动物：小鼠（Balb/c）雌性，8周以上,体重20g以上每种抗原蛋白免疫小鼠4只靶抗原：具有免疫原性的抗原或蛋白质、多肽，生理盐水抗原要求：抗原要尽量在无毒无刺激溶液中（PBS或生理盐水），纯度大于80%，浓度1mg/ml以上，总量大于2mg。
抗原尽量是可溶性抗原，溶液为PBS，如必需加入刺激物质，SDS浓度在0.5%以下，尿素在2M以下，不含咪唑，丙烯酰胺等变性剂，要求溶液澄清，无沉淀。
二、实验步骤1.抗原准备：每只小鼠按照100ug/100ul蛋白质或多肽置于生理盐水中制备成抗原。
2.抗原-佐剂的准备：将抗原液与佐剂混合制成乳状液，抗原与佐剂混合按照1：1比例进行，加入搅拌子后于4度搅拌过夜。
注射量为200ul 每只小鼠，抗原量为100ug。
第一次免疫使用弗氏完全佐剂，以后加强使用弗氏不完全佐剂，最后一次加强不加佐剂，免疫前采集阴性血做为对照，乳化因考虑损失，多计算两只小鼠的量。
乳化完全判断标准：挤出一滴乳状液滴于冷水表面以检测乳状液是否稳定，如果液滴散开则继续混合操作直至稳定的乳状液形成。
将乳状液移入1ml注射器。
3.小鼠免疫：将小鼠放在鼠笼上，拉住小鼠尾尖部，背部75%酒精消毒，针头15度角刺入小鼠皮下，挑起注射。
皮下注射共200ul，分5个点（背部皮下任意点）4.冲击免疫：如计划在免疫3d后进行细胞融合实验，则使用水相溶解的游离抗原进行直接脾脏免疫。
过程：将小鼠在固定架上固定，脾脏位置毛剪掉并消毒，快速分别剪开外皮和内皮，将脾脏拉出，吸取100ul/100ug抗原注入脾脏内，并快速用手术线分别缝合内皮和外皮。
5.小鼠阳性血清采集：尾部剪尾采血20ul，用生理盐水稀释10倍，离心收集上清。
6.效价检测：间接法检测小鼠多抗血清效价。
多克隆抗体的制备(1)(1)
免疫乳剂制备成功的判别标准
油包水状态 鉴定方法是将乳化剂滴入4℃左右冷水中， 若保持完整不分散，成滴状浮于水面，即 乳化完全，为合格的油包水剂。
免疫
将制成的乳剂吸入注射器，在兔子背部及 颈部皮下注射8-10点，每点约0.2ml
每隔14天用初次用量的2/5的抗原于不完全 抗原中，在皮下多点注射加强免疫,每点 0.2ml,共加强2次。
多克隆抗体
天然抗原分子中常含有多种不同抗原 特异性的抗原表位，以该抗原物质刺激 机体免疫系统，体内多个B细胞克隆被激 活，产生的抗体中含有针对多种不同抗 原表位的免疫球蛋白，称为多克隆抗体。
多克隆抗体制备的意义
免疫血清：将抗原注入机体所产生的抗体
是针对多种抗原决定簇的混合抗体，含有 这种特异性抗体的血清。
第一次免疫（基础免疫）
2-4周
第一次加强免疫
2-3周
第二次加强免疫
7天
效价测定
第一次免疫（基础免疫）
免疫乳剂的制备 ①研磨法:
取1.2ml佐剂加入到无菌的研钵中，缓慢加 入1ml抗原+0.2ml卡介苗混合液，每加一 滴研磨至小滴消失，边加边往同一个方向研 磨，抗原全部加入后继续研磨至乳白色粘稠 的油包水乳剂。
动物：健康家兔 抗原：生化大实验中制备的LDL 佐剂：弗氏佐剂 注射器、研钵 等
动物的选择
动物的选择常根据抗体的用途和量来决定，也与 抗原的性质有关
如要获得大剂量的抗体，则采用大动物； 如要获得直接标记诊断用的抗体，则直接采用本
动物； 如要获得间接的标记诊断用抗体，则必须用异源
动物制备抗体
佐剂
佐剂的条件作为一种良好的佐剂，必须具备下列条件： （1）增加抗原的表面积，并改变抗原的活性基团构 型，从而增强抗原的免疫原性； （2）佐剂与抗原混合能延长抗原在局部组织的存留 时间，减低抗原的分解速度，使抗原缓慢释放至淋巴 系统中，持续刺激机体产生高滴度的抗体； （3）佐剂可以直接或间接激活免疫活性细胞并使之 增生，从而增强了体液免疫、细胞免疫和非特异性免 疫功能； （4）良好的佐剂应具有无毒性或副作用低的特点。
新概念疫苗考试重点
新概念疫苗一、名词解释1.新概念疫苗：与传统疫苗成分,机制,作用不同,且能激发机体特异性免疫应答的新型疫苗。
(1.成分不同：传统疫苗多为死疫苗/减毒活疫苗或重组亚单位疫苗,新概念疫苗则为编码无毒力抗原蛋白的病毒核酸或能激发特异性机体免疫应答的细胞疫苗2.机制不同：传统疫苗主要靠病毒的抗原蛋白刺激机体产生中和性保护抗体,新型疫苗不仅刺激机体产生中和性保护抗体,而且能激发特异性细胞免疫应答 3.作用不同：传统疫苗只能起一定预防作用,新型疫苗不仅能预防疾病,且更能起到特异性治疗作用)2.核酸疫苗：把编码外源蛋白基因的质粒DNA直接导入到动物体内, 使外源基因在活体内表达,3.T细胞疫苗：将引起自身免疫性疾病的自身反应性T细胞或导致同种移植排斥反应的同种反应性T细胞活化并灭活后作为疫苗,可诱导机体产生针对致病性T细胞或同种反应性T细胞的免疫应答,从而消除或减轻这些细胞的致病作用.称为T细胞疫苗4.T细胞表位：抗原经过抗原递呈细胞(APC)加工后,由MHC分子递呈给T细胞受体(TCR)的短肽。
5.树突状细胞（DC）疫苗：荷载抗原的DC具有疫苗的功能，故称~6.抗原提呈细胞(APC)：能摄取、加工处理抗原，并将抗原递呈给T淋巴细胞的一类免疫细胞，在机体免疫应答中发挥重要作用，也称辅佐细胞7.专职APC：能组成性表达MHC-II类分子和T细胞活化的共刺激分子，抗原递呈能力强，包括巨噬细胞、树突状细胞和B细胞等8.内源性抗原：APC内合成的，如被病毒感染细胞合成的病毒蛋白9.外源性抗原：来源于细胞外的抗原,如被吞噬的细胞或细菌等10.交叉递呈：有些APC的MHC-I类分子具有提呈外源性抗原给CD8+细胞的能力。
11.Th1：特征性分泌IL-2、IFN-γ、LT等细胞因子，主要介导迟发型超敏反应（DTH）和巨噬细胞活化等细胞免疫反应。
12.Th2：特征分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13等细胞因子，主要促成B细胞增殖并分化成浆细胞，分泌特异性抗体，介导体液免疫和过敏反应。
sigma弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂说明书
sigma弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂说明书生物商城 / 2011-02-08一、定义：弗氏佐剂（Freundadjuvant）,这是目前最常用于动物实验的佐剂，它是将抗原水溶液与油剂（石蜡油或植物油）等量混合，再加乳化剂（羊毛脂或叶吐温80）制成油包水抗原乳剂，称之为不完全弗氏佐剂。
如在不完全佐剂中加入分枝杆菌（如死卡苗）则称为完全弗氏佐剂。
二、制备方法：弗氏佐剂是现在动物实验中最常用的佐剂，分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。
不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂混合而成，组分比为1～5：1，可根据需要而定，通常为2：1。
不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为2～20mg/ml)或死的结核分枝杆菌，即为完全弗氏佐剂（FCA）。
一般首次注射时用1／2体积FCA 加上1／2体积的抗原进行乳化，第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。
如不加佐剂，则抗原量增大10-20倍。
配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。
在免疫动物前，先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合，佐剂和抗原体积比一般为1：1，制备成"油包水"乳状液。
因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化复合物，注射入动物体内时一定要保持乳化状态。
抗原用量视抗原分子量不同及免疫原性及免疫动物不同而有一定差异，无统一标准和固定模式。
一般是每兔（约2kg重）或每羊（约20kg重）第1次注射抗原1mg，以后逐次增加抗原量，最多每次不超过3mg。
佐剂与抗原乳化可按如下方法进行：（1）研磨法：先将佐剂加热并取适量放入无菌的玻璃研钵内，待冷却后再缓缓滴入等体积的抗原溶液，边滴边按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。
待抗原全部加入后，继续研磨一段时间，使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。
本法适于制备大量的佐剂抗原，缺点是研钵壁上粘附大量乳剂，抗原损失较大。
（2）注射器混合法：将等量的弗氏佐剂和抗原溶液分别吸入两个注射器内，两注射器之间以一细胶管相连，注意排净空气，然后交替推动针管，直至形成粘稠的乳剂为止。
完全和不完全福氏佐剂的作用
完全和不完全福氏佐剂的作用以抗原免疫动物获得抗血清是制备抗体的经典方法。
为了提高免疫效果，在免疫的时候，常辅以佐剂以改变抗原的物理状态而延长其在体内的滞留时间，使抗原缓慢释放，同时非特异性的促进局部吞噬细胞反应来增强动物的免疫效果。
佐剂的类型较多，目前常用的还是福氏佐剂(Freund’s Adjuvant，FA)。
它是一种对大多数抗原都有效的佐剂，但由于它的一些副作用限制了它在实验动物上的使用。
因此，福氏佐剂只能在确实需要的情况下(如使用的抗原为小分子可溶性抗原或半抗原)和强佐剂活性时使用。
FA是用矿物油(石蜡油)、乳化剂(羊毛脂)和灭活的分枝杆菌(结核分枝杆菌或卡介苗)组成的油包水乳化佐剂。
这三种成分俱全的佐剂称为福氏完全佐剂(Freund’s ComD】ele Adjuvant，FCA)，不含分枝杆菌的佐剂为福氏不完全佐剂(Freund’s InconrpleteAdjuvant，FIA)。
石蜡油因不能代谢而存留在注射的部位，这就阻碍了抗原降解或快速反应，起到抗原储存作用，使抗原缓慢持续的释放，不断刺激机体的免疫系统而产生免疫反应。
乳化剂对于水溶性抗原与油稳定地乳化是必要的。
分枝杆菌具有很强的免疫刺激作用，可以非特异性的激活免疫系统。
FCA用于基础注射，而FIA用于辅助注射以避免分枝杆菌蛋白引起的过敏反应。
FA皮下注射或肌内注射可导致多种副作用，例如肉芽肿和无菌性脓肿的形成。
腹腔注射引起腹膜炎。
由于这些严重的副作用，FA不允许用于人或动物的疫苗接种免疫。
传统的免疫方案，包括使用福氏佐剂和某些免疫程序，已不再被一些国家的权威机构所接受。
据调查，在荷兰有64％的研究人员使用FCA，而且，用于多克隆抗体的生产方案差异很大。
因此，在1993年，荷兰发布了利用动物免疫技术制备多克隆抗体的生产指南。
主要规定了加强免疫注射的次数、免疫途径、注射量和佐剂的使用，并且支持使用替代佐剂来替换FCA。
由于FCA给实验动物带来的严重的副反应，对它的使用提出了特别的限制，规定了(小鼠和大鼠sc：0．1nd；i．d：家兔0．o5 rI1l；i．P：小鼠0．2nd)推荐使用量和注射途径。
弗氏佐剂的成分
弗氏佐剂的成分
弗氏佐剂，也称沙努尔霉素佐剂或者啊水间毒素佐剂，是一种用于驱除口腔疾病的联合药
物体系。
弗氏佐剂由三种组分组成：氨酚羟亚胺、异丙酚和马来酰亚胺链霉素，它们都是
有效的抗菌成分，而它们的合成可以帮助人们更好地祛病去疾，让病人由口腔病痛中解脱
出来。
首先，氨酚羟亚胺是一种传统的抗菌药，它具有抗真菌和抗细菌的作用，可以有效地抑制
细菌的生长，产生一定的抗菌活性。
在使用氨酚羟亚胺的弗氏佐剂中，它的作用是有效抑
制细菌生长，针对病菌进行杀伤，同时也可以减少炎症以减轻牙痛，并使牙齿更易于清洁、保养。
其次，异丙酚是一种常用的抗菌剂，它可以阻断细菌的新陈代谢，从而有效地达到抗菌的
目的，也有助于消除口腔炎症。
在弗氏佐剂中，异丙酚可以起抑制细菌生长，抑制皮肤及
口腔疾病发展的作用，进一步增强口腔疾病的治疗效果。
最后，马来酰胺链霉素是一种新型的抗生素，它可以有效地抑制细菌的生长，达到杀伤细
菌的效果。
弗氏佐剂中使用的马来酰胺链霉素可以抑制放线菌科、链球菌科和变形菌科的
细菌，有效抑制口腔疾病菌的繁殖，从而帮助患者更快恢复健康。
弗氏佐剂的三种组分，可以有效地降低细菌对口腔疾病的侵害，减轻病情，使口腔疾病得
到有效的治疗。
它们的有效组合和使用，可以使病人的口腔更快恢复，保持个人口腔卫生，让你的口腔洁净健康，使你湛然如新！。
豚鼠最大值实验原理或机制
豚鼠最大值实验原理或机制
豚鼠最大值试验（GPMT）是一种用于评估化学品皮肤致敏性的实验方法。
该测试的原理基于以下机制：豚鼠被选作实验动物，因为它们对某些化学物质的反应与人类相似。
在GPMT 中，豚鼠的背部皮肤先被涂上一定量的待测化学物质，然后在同一部位注射弗氏完全佐剂（Freund's Complete Adjuvant, FCA），这是一种常用的免疫增强剂。
FCA可以增强机体对化学物质的免疫反应，从而促进致敏过程。
经过一定时间的诱导期后，豚鼠体内会形成针对待测化学物质的特异性抗体。
在随后的激发阶段，豚鼠再次接触相同的化学物质，但这次不与FCA混合。
如果豚鼠已经对该化学物质致敏，它的免疫系统会识别出化学物质并启动免疫应答，导致皮肤炎症反应。
GPMT的结果通常通过皮肤反应的严重程度来评估，包括红肿、水肿、水泡、结痂等症状。
这些症状的严重性可以量化评分，以确定化学物质的致敏潜能。
阳性对照样品（如已知的皮肤致敏剂）的反应应达到或超过特定阈值（例如，阳性对照样品的反应强度应≥3.0），以确保实验的有效性。
通过比较待测物质与阳性对照样品的反应强度，可以判断待测物质是否具有皮肤致敏性。
完全和不完全福氏佐剂的作用
完全和不完全福氏佐剂的作用以抗原免疫动物获得抗血清是制备抗体的经典方法。
为了提高免疫效果，在免疫的时候，常辅以佐剂以改变抗原的物理状态而延长其在体内的滞留时间，使抗原缓慢释放，同时非特异性的促进局部吞噬细胞反应来增强动物的免疫效果。
佐剂的类型较多，目前常用的还是福氏佐剂(Freund’s Adjuvant，FA)。
它是一种对大多数抗原都有效的佐剂，但由于它的一些副作用限制了它在实验动物上的使用。
因此，福氏佐剂只能在确实需要的情况下(如使用的抗原为小分子可溶性抗原或半抗原)和强佐剂活性时使用。
FA是用矿物油(石蜡油)、乳化剂(羊毛脂)和灭活的分枝杆菌(结核分枝杆菌或卡介苗)组成的油包水乳化佐剂。
这三种成分俱全的佐剂称为福氏完全佐剂(Freund’s ComD】ele Adjuvant，FCA)，不含分枝杆菌的佐剂为福氏不完全佐剂(Freund’s InconrpleteAdjuvant，FIA)。
石蜡油因不能代谢而存留在注射的部位，这就阻碍了抗原降解或快速反应，起到抗原储存作用，使抗原缓慢持续的释放，不断刺激机体的免疫系统而产生免疫反应。
乳化剂对于水溶性抗原与油稳定地乳化是必要的。
分枝杆菌具有很强的免疫刺激作用，可以非特异性的激活免疫系统。
FCA用于基础注射，而FIA用于辅助注射以避免分枝杆菌蛋白引起的过敏反应。
FA皮下注射或肌内注射可导致多种副作用，例如肉芽肿和无菌性脓肿的形成。
腹腔注射引起腹膜炎。
由于这些严重的副作用，FA不允许用于人或动物的疫苗接种免疫。
传统的免疫方案，包括使用福氏佐剂和某些免疫程序，已不再被一些国家的权威机构所接受。
据调查，在荷兰有64％的研究人员使用FCA，而且，用于多克隆抗体的生产方案差异很大。
因此，在1993年，荷兰发布了利用动物免疫技术制备多克隆抗体的生产指南。
主要规定了加强免疫注射的次数、免疫途径、注射量和佐剂的使用，并且支持使用替代佐剂来替换FCA。
由于FCA给实验动物带来的严重的副反应，对它的使用提出了特别的限制，规定了(小鼠和大鼠sc：0．1nd；i．d：家兔0．o5 rI1l；i．P：小鼠0．2nd)推荐使用量和注射途径。
兽用疫苗保护剂和佐剂讲解
②抗原寻的（antigen targeting）
指抗原传递给免疫系统中适当效应细胞的效率。包括 吸引巨噬细胞到达组织部位、活化吞噬细胞、促进抗原 与细胞受体的结合等有重要作用。
③免疫调节（immune modulation） 是指任何可以修饰的免疫效应细
（二）病毒的保护剂 ① 5%蔗糖 脱脂乳； ② 马立克814活细胞疫苗:保存液氮.稳定剂为10%二 甲基亚砜和50%犊牛血清的199液。 注意: 微生物保护剂缓冲液的组成比例，不同厂家有 不同的配方。
兽医生物制品常用的保护剂
1．5%蔗糖（乳糖）脱脂乳保护剂
蔗糖（或乳糖）5g，加脱脂乳至100ml，充分溶解后，110~116℃高压灭菌 30~40 min。
一些常用的冷冻干燥保护剂
分类
保护剂
复合物 糖类 盐类 醇类 酸类 聚合物
脱脂乳、明胶、蛋白质、蛋白胨、糊精、血清、甲基纤维素等 蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖等 乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵、硫代硫酸钠等 山梨醇、甘油、甘露醇、肌醇、木糖醇等 柠檬酸、酒石酸、氨基酸等 葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等
• 注意:佐剂和免疫增强剂的关系?
•
有时佐剂也是免疫增强剂.
作用特点：
① 明显增强抗原性微弱的物质诱导机体产生 特异性免疫应答。
② 用最少的抗原和最少的接种次数，产生足 够的免疫应答。
免疫佐剂作用机理
作用方式
① 改变正常免疫机能，吸引大量巨噬细胞以吞噬抗原； ② 改变抗原的构型，使抗原物质降解，并加强其免疫原性； ③ 延长抗原在组织内的贮存时间，使抗原缓慢降解和缓释，
弗氏不完全佐剂,弗氏完全佐剂
弗氏不完全佐剂和弗氏完全佐剂一、定义：弗氏佐剂（Freundadjuvant）,这是目前最常用于动物实验的佐剂，它是将抗原水溶液与油剂（石蜡油或植物油）等量混合，再加乳化剂（羊毛脂或叶吐温80）制成油包水抗原乳剂，称之为不完全弗氏佐剂。
如在不完全佐剂中加入分枝杆菌（如死卡苗）则称为完全弗氏佐剂。
二、区别：弗氏不完全佐剂产品简介：弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，含结核分枝杆菌的细胞壁成分。
佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。
弗氏不完全佐剂用于初次免疫刺激。
为了减少副作用，不含结核分枝杆菌成分的弗氏不完全佐剂用于加强免疫。
弗氏完全佐剂产品简介：弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，能够非常有效的诱导产生高滴度的抗体。
弗氏完全佐剂含结核分枝杆菌的细胞壁成分，可以加强对抗原的抗体反应。
佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。
三、制备方法：弗氏佐剂是现在动物实验中最常用的佐剂，分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。
不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂混合而成，组分比为1～5：1，可根据需要而定，通常为2：1。
不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为2～20mg/ml)或死的结核分枝杆菌，即为完全弗氏佐剂（FCA）。
一般首次注射时用1／2体积FCA加上1／2体积的抗原进行乳化，第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。
如不加佐剂，则抗原量增大10-20倍。
配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。
在免疫动物前，先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合，佐剂和抗原体积比一般为1：1，制备成"油包水"乳状液。
因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化复合物，注射入动物体内时一定要保持乳化状态。
抗原用量视抗原分子量不同及免疫原性及免疫动物不同而有一定差异，无统一标准和固定模式。
一般是每兔（约2kg重）或每羊（约20kg重）第1次注射抗原1mg，以后逐次增加抗原量，最多每次不超过3mg。
完全弗氏佐剂的成分
完全弗氏佐剂的成分
完全弗氏佐剂是一种用于预防和治疗动物疾病的佐剂，它由多种
成分组成。
以下是完全弗氏佐剂的成分以及其作用。
1. 矿物质与微量元素：矿物质和微量元素在动物体内发挥着重
要的生理作用，例如在体内协调传递神经信息、维持酸碱平衡。
此外，还参与多种代谢过程和酶反应，帮助机体增强免疫力。
2. 维生素：动物体内需要多种维生素，如A、C、D、E、K和B
族维生素。
维生素A有助于提高免疫功能和增强视力，维生素D有利
于钙和磷的吸收和利用，维生素B族则是合成和酵解蛋白质和糖类重
要的辅酶。
3. 氨基酸：氨基酸是蛋白质合成的主要原料，同时还能促进生
长和增强免疫力，对于动物的生长和健康至关重要。
4. 植物提取物：植物提取物是从各种植物中提取的天然化合物，具有多种生化活性，例如抗氧化、抗炎和抑菌作用等。
5. 生物活性成分：这些成分能够直接参与机体生化代谢反应，
提高机体免疫功能，促进生长发育，减轻疲劳和改善身体健康。
最后，完全弗氏佐剂除了以上基本成分外，还可能添加其他成分，以适应不同种类动物和不同的生长期需求。
这些成分可以发挥协同作用，提高佐剂的治疗效果，对于保障动物健康至关重要。
2016年度精品--sigma弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂说明书
sigma弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂说明书生物商城 / 2011-02-08一、定义：弗氏佐剂（Freundadjuvant）,这是目前最常用于动物实验的佐剂，它是将抗原水溶液与油剂（石蜡油或植物油）等量混合，再加乳化剂（羊毛脂或叶吐温80）制成油包水抗原乳剂，称之为不完全弗氏佐剂。
如在不完全佐剂中加入分枝杆菌（如死卡苗）则称为完全弗氏佐剂。
二、制备方法：弗氏佐剂是现在动物实验中最常用的佐剂，分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。
不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂混合而成，组分比为1～5：1，可根据需要而定，通常为2：1。
不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为2～20mg/ml)或死的结核分枝杆菌，即为完全弗氏佐剂（FCA）。
一般首次注射时用1／2体积FCA 加上1／2体积的抗原进行乳化，第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。
如不加佐剂，则抗原量增大10-20倍。
配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。
在免疫动物前，先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合，佐剂和抗原体积比一般为1：1，制备成"油包水"乳状液。
因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化复合物，注射入动物体内时一定要保持乳化状态。
抗原用量视抗原分子量不同及免疫原性及免疫动物不同而有一定差异，无统一标准和固定模式。
一般是每兔（约2kg重）或每羊（约20kg重）第1次注射抗原1mg，以后逐次增加抗原量，最多每次不超过3mg。
佐剂与抗原乳化可按如下方法进行：（1）研磨法：先将佐剂加热并取适量放入无菌的玻璃研钵内，待冷却后再缓缓滴入等体积的抗原溶液，边滴边按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。
待抗原全部加入后，继续研磨一段时间，使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。
本法适于制备大量的佐剂抗原，缺点是研钵壁上粘附大量乳剂，抗原损失较大。
（2）注射器混合法：将等量的弗氏佐剂和抗原溶液分别吸入两个注射器内，两注射器之间以一细胶管相连，注意排净空气，然后交替推动针管，直至形成粘稠的乳剂为止。
弗氏完全佐剂制备
弗氏完全佐剂制备【一、弗氏完全佐剂的概述】弗氏完全佐剂（FCA，Freund"s Complete Adjuvant）是一种广泛应用于疫苗研究和动物实验的佐剂。
它可以增强疫苗的免疫原性，诱导机体产生更强的免疫应答，从而提高疫苗的保护效果。
弗氏完全佐剂由抗原、免疫剂和辅助剂组成，其制备方法相对简单，但在操作过程中需要注意一些细节。
【二、弗氏完全佐剂的制备方法】1.原材料：弗氏完全佐剂的主要原材料包括抗原、免疫剂和辅助剂。
抗原可以是蛋白质、多糖或核酸等，免疫剂通常为氢氧化铝（Al(OH)3），辅助剂主要有油酸、石蜡油等。
2.操作步骤：（1）将抗原与氢氧化铝混合，充分搅拌，使其形成均匀的悬浊液；（2）将石蜡油与水混合，加热至充分溶解，然后与氢氧化铝抗原混合物混合，再次搅拌均匀；（3）将混合物冷却至室温，缓慢加入油酸，持续搅拌，直至形成稳定的乳状液；（4）用滤纸过滤，除去杂质，得到弗氏完全佐剂。
3.注意事项：（1）抗原与氢氧化铝的比例要适当，过低免疫原性不足，过高则会导致佐剂性能不稳定；（2）在搅拌过程中，速度不宜过快，以免产生气泡，影响最终产品的质量；（3）加入油酸时，要缓慢均匀地加入，以免出现油水分离现象；（4）制备过程中需严格无菌操作，避免细菌污染。
【三、弗氏完全佐剂的应用领域】弗氏完全佐剂广泛应用于疫苗研究、免疫学实验和生物制品研发等领域。
通过加入弗氏完全佐剂，可以提高疫苗的免疫原性，增强机体对病原体的抵抗力，从而预防和控制多种疾病。
【四、弗氏完全佐剂的优点与局限性】优点：1.免疫原性强，能有效提高疫苗的保护效果；2.制备方法简单，易于操作；3.适用范围广泛，几乎可用于所有抗原的免疫实验。
局限性：1.有一定的副作用，可能导致注射部位疼痛、红肿等；2.对于某些抗原，可能出现过敏反应；3.储存和运输条件要求较高，不耐高温，易受微生物污染。
【五、总结】弗氏完全佐剂作为一种重要的疫苗佐剂，在疫苗研究和动物实验中具有广泛的应用。
最新小鼠类风湿关节炎动物模型的建立1-药学医学精品资料
对象与材料
动物：8周龄雄性小鼠，体重18-20g。 试剂：1)牛Ⅱ型胶原。
2)完全佐剂和不完全小鼠关节炎模型建立 1）将牛Ⅱ型胶原溶于0.1M冰乙酸溶液中， 浓度2mg/ml，4℃过夜。 2）弗氏完全佐剂补加已灭活的结核杆菌， 使其浓度达5mg/ml。
佐剂型关节炎aa模型型胶原诱导的关节炎cia模型弗氏佐剂完全佐剂cfa不完全佐剂ifa佐剂型关节炎adjuvantarthritisaa的发病机制主要是分子模拟理论结核杆菌的一个蛋白分子与关节滑膜上的一个糖蛋白分子结构相似可以被同一株克隆t细胞所识别从而诱发产生关节的免疫反应
小鼠类风湿关节炎动 物模型的建立
各组小鼠实验前测量后肢体积，二次免疫后，每隔三天再次 测量后肢体积，比较注射前及注射后第12天的后肢体积。测 量结果显示体积大小与关节红肿程度成正比。
病理改变
病理观察结果显示，小鼠肢体关节主要有滑膜增生，炎细胞 浸润，血管变性，软骨层破坏等病理改变。出现上诉1-2种 病理改变者为轻度病理改变，3种以上者为中度，4种以上者 为重度。
讨论
RA动物模型只是在一定条件下侧重于某
些因素而建立起来的，故其并不能完全 反应RA的所有特点。
其次，RA患者所表现的关节肿痛晨僵发
热等不适都可以通过患者的主诉反映出 来，但在RA动物模型中这些指标却不能 被体现出来。
理想的RA动物模型的条件
1、在病原学和发病机制方面与人类相似； 2、临床表现与组织病理改变与人类相似； 3、模型容易获得，施加相同实验条件获得的 结果相同； 4、模型建立后，效果稳定并可以长期维持。
病理检查
取实验组和对照组小鼠肢体，去外皮，4%甲 醛固定48小时以上，5%硝酸脱钙2小时，二甲 苯浸润，石蜡包埋。制成6mm切片，HE染色。 常规光学显微镜观察，制定评分标准，进行 病理学诊断。
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弗氏完全佐剂（complete freund’s adjuvant, CFA）弗氏不完全佐剂（incomplete freund’s adjuvant, IFA）佐剂的作用：1．形成抗原储存库。
2．形成局部肉芽肿。
3．刺激淋巴细胞增殖和分化。
二、抗体特异性体液免疫是由抗体介导的免疫。
是人和动物的B细胞在抗原刺激下转化成浆细胞，并由浆细胞产生的具有与抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白（Ig）。
存在于血液、淋巴液和组织液中。
（一）抗体的种类与结构抗体的种类多，血清中可有千百种不同的抗体，分为五种，已统一命名为IgG、IgM、IgA、IgD相IgE。
五种免疫球蛋白的分子结构基本相似（P257图9—9）说明。
(1)每个单体由两条长链又称重链(H链)及两条短链又称轻链(L链)构成。
各链之间以二硫键(S—S)相连接，两条L链位于两条H链所形成的Y形结构的两侧。
(2) 重链：每条H链分子量为55000，由420--460个氨基酸组成，重链共分四段，各段约含110个氨基酸。
靠近氨基(N—端)的第一段为重链可变区(V区)，简称VH，其余三段为恒定区(简称CH)，以CH1、CH2、CH3表示。
重链有γ、α、μ、δ、ε五种类型，每种抗体只能有一种类型的重链。
(3)轻链：分子量为22000，由2l3—216个氨基酸组成。
每条轻链分为两段：轻链可变区(简称v L)和轻链恒定区(简称C L)。
V L区有109个左右的氨基酸，CL区有l04个左右氨基酸。
轻链有两种类型，κ链和λ链。
一种抗体只能有同一种轻链。
(4)可变区：重链与轻链的可变区共同构成抗体结合价(即抗原结合簇部位)，与抗原呈特异性结合。
一个单体抗体分子具有两个结合抗原的部位，故为二价。
(5)用木瓜蛋白酶消化抗体，可得到三个片段：两个抗原结合片段，称为Fab，一个可结晶片段Fc；用胃蛋白酶消化，得到一个二价抗体活性部分，称F(ab’)2和两个剩余的小分子片段Fc’,不具任何生物活性。
(6) 轻链有κ和λ链两种类型。
一种抗体只能有同一种轻链。
重链有γ、α、μ、δ、ε五种类型，每种抗体只能有一种类型的重链。
〔7〕抗体的Fc片段在CH1和CH2交接处有补体结合点。
在抗原与抗体未结合时，抗体分子呈“T”形，补体结合点被遮住，补体不能与抗体结合，抗体与抗原结合后，抗体分于呈“Y”形，补体结合位点暴露出来，故补体能与抗原抗体复合物结合(图9--l0)。
（8）五种球蛋白基本结构 IgG、IgD和IgE为单体结构。
IgM：为五聚休，分子最大，故又称巨球蛋白，有l0个抗原结合点，为“十价”抗体，实际上只能与5个抗原结合原因。
IgA: 血清中主要是单体，称为血清型I 8A或7S IgA，少数是双体或三体，分泌液中双体占优势，称为分泌型IgA或llS IBA。
双体小有一称为分泌片的糖蛋白，分子量约60000。
J链：IgM和IgA的单体通过J链连接，J链是一种轻糖蛋白，分于量约15000。
五种免疫球蛋白的结构见(图9—11)。
（9）五种免疫球蛋白：V区的氨基酸组成和排列顺序各不相同，构成抗体的多样性与特异性。
五类免疫球蛋白区别：在于H链（重）的C（恒）区的aa组成和抗原不同,分别用γ、α、μ、δ、ε代表IgG、IgA、IgM、IgD和IgE的两条重链。
IgG的重链(γ)组成不同，分为四个亚类；IgG1，IgG2、1gG3、IgG4。
IgA：有两个亚类，即1gA1、1gA2。
IgM：有两个亚类，即IgM1和IgM2。
免疫球蛋白的轻链，也按抗原性的不同分为κ链和λ链。
（二）抗体的功能区重链：每条H链分子量为55000，由420--460个氨基酸组成，重链共分四段，各段约含110个氨基酸。
靠近氨基(N—端)的第一段为重链可变区(V区)，简称VH，其余三段为恒定区(简称CH)，以CH1、CH2、CH3表示。
重链有γ、α、μ、δ、ε五种类型，每种抗体只能有一种类型的重链。
轻链：分子量为22000，由2l3—216个氨基酸组成。
每条轻链分为两段：轻链可变区(简称v L)和轻链恒定区(简称C L)。
V L区有109个左右的氨基酸，CL区有l04个左右氨基酸。
轻链有两种类型，κ链和λ链。
一种抗体只能有同一种轻链。
可变区：重链与轻链的可变区共同构成抗体结合价(即抗原结合簇部位)，与抗原呈特异性结合。
一个单体抗体分子具有两个结合抗原的部位，故为二价。
（三）抗体的生物学作用(1)IgG：40—50％存在于血清中，占血清中免疫球蛋白总量80％左右。
出生后3个月开始形成，2-3岁同成人，40岁下降。
作用：主要的抗传染抗体，大多数抗细菌、抗病毒和抗毒素的抗体均属于1gG类抗体；唯一能通过胎盘的抗体。
丙种球蛋白和抗毒素血清等主要含IgG。
(2)IgA：血清免疫球蛋白总量的13％左右，仅次于1gG。
作用：分泌型：外分泌液(如唾液、眼泪、初乳等)中的分泌型1gA主要在机体粘膜局部发挥抗传染免疫作用。
IgG通过C3途径激活补体。
不能通过胎盘，婴儿可从初乳中获得。
(3)IgM：分子量大，只限于血管内，占人血清免疫球蛋白总量6％。
作用：IgM出现早，促进颗粒性抗原被吞噬细胞吞噬而起调理作用；IgM的调理作用和凝集作用最强；在补体参与下溶解细胞的能力最强。
(4)1gD：主要存在血清中，占血清中免疫球蛋白总量的1％。
功能尚不清楚。
(5)IgE：是血清中含量最少的一种免疫球蛋白，约占血清中免疫球蛋白总量的0.002％。
能与组织中的肥大细胞和嗜碱性粒细胞结合，与I型变态反应有关。
三、免疫应答特异性免疫是通过免疫应答实现的．免疫应答：是抗原进入机体后，免疫活性细胞对抗原分子识别后而活化、增殖、分化以及最终通过产生抗体和致敏淋巴细胞及淋巴因子发生免疫效应的生物学反应过程。
体液免疫：通过产生抗体而进行的免疫。
细胞免疫：通过产生致敏淋巴细胞及淋巴因子进行的免疫。
（一）免疫应答的阶段(1)感应阶段:在二级淋巴器官内非胸腺依赖抗原(TI)：可溶性抗原，少数抗原不需要巨噬细胞和T细胞的辅助，为非胸腺依赖抗原(TI)，直接作用淋巴细胞，刺激B细胞。
胸腺依赖抗原(TD)：大多数抗原，经过摄取与处理，由组织相容性复合体(MHC)，把抗原多肽片段运送到细胞表面。
特异性抗原刺激T细胞引起细胞免疫，要经巨噬细胞传递信息。
体液免疫的抗原，多为胸腺依赖抗原(TD)，也需经巨噬细胞处理，并将抗原信息传递给辅助性T细胞(TH)，再传递给B细胞．先产生IgM，转换为IgG，并有免疫记忆。
2．反应阶段外周淋巴器官中进行。
表现为淋巴细胞的增殖分化。
T细胞被激活后转化为淋巴母细胞，迅速增殖、分化，最后成为致敏淋巴细胞。
B细胞受抗原刺激后，增殖、分化，部分转化为浆母细胞，分泌抗体。
记忆细胞：一部分淋巴细胞受抗原刺激后，在增殖、化分过程中，停顿下来，不分化，而成为记忆细胞。
在体内长期存在。
数月至数年。
3．效应阶段抗体和致敏淋巴细胞与抗原结合产生特异性免疫反应。
过程：（1）T细胞分泌可溶性因子，发挥辅助、协同、抑制及其他效应；（2）还有补体及辅助细胞如单核细胞、巨噬细胞、粒细胞及NK细胞等的参与。
（1）膜蛋白和细胞因子又对免疫反应的各个阶段有调节作用．以此维持机体的生理平衡和内环境的稳定。
（2）免疫总过程见P248图10—11。
(二)体液免疫B细胞----浆细胞----抗体。
存在于血浆、淋巴和组织液等体液中的抗体与相应的抗原特异性结合，在补体参均下发挥免疫效应，称为体液免疫。
根据抗原的性质．B细胞的应答分为依赖T细胞和不依赖T细胞两类。
1．T非依赖性体液免疫应答非胸腺依赖抗原(T1)遇到B细胞时，与B细胞表面多个特异膜表面免疫球蛋白(smlg)结合，并激活B细胞，B细胞迅速增殖、分化为具有分泌抗体能力的浆细胞，分泌大量IgM型抗体，其特异性和该B细胞mIg的特异性相同，分泌的IgM可与相应抗原结合。
通过中和、调理吞噬及激活补体等途径发挥免疫作用。
2．依赖于T细胞的体液免疫抗原传递细胞（APC）如巨噬细胞、B细胞等能够以非特异性方式加工处理胸腺依赖抗原(TD)，加工后产生的肽段与[组织相容性复合体(MHC)]MHC II类蛋白分子结合在一起，送到细胞的表面。
APC将抗原-MHC复合物通过TH细胞受体(TCR)CD4呈递给TH。
被激活的TH细胞开始产生白细胞介素IL-2，IL-2作用于其他TH细胞，并使前Tc细胞成为有活性的Tc细胞。
TH细胞分泌的IL-2和其他细胞因子如IL-4，刺激B细胞增殖产生浆细胞。
一些接触抗原后的B细胞停止细胞分裂，形成记忆细胞。
巨噬细胞在加工抗原过程中分泌白细胞介素IL-1，作用于不同类型的细胞，这是免疫应答的关键分子。
IL-1通过TH细胞上的IL-1受体而激活TH细胞。
3．抗体形成的一般规律及应用:(1)初次反应:抗原初次进入机体后，经过一段潜伏期，产生抗体，浓度低，保持的时间也短。
2周左右达到高峰，以后迅速下降。
(2)再次反应：再次遇到相应抗原时，抗体产生快，维持时间长，浓度高，可达初次水平的10--100倍。
(3)回忆应答：当初次注射后所产生的抗体在体内完全消失时，如再接触抗原时，该抗体突然上升，称为回忆应答。
即：第二次或二次后接触抗原引起的此第—次较大的和较快的应答。
特异性回忆反应：若再接触的抗原与初次接触的抗原相同。
非特异性问亿反应：再接触的抗原是与初次接触的抗原不相同的另一种抗原，引起与初次抗原相对应的抗体的产生。
(4)抗体产生的顺序:最先出现IgM，IgG。
注入机体的抗原必须有一定的量，才能产生抗体，通常随抗原量的增加，抗体的量也增加。
免疫麻痹:注射的抗原量过大，机体失去产生抗体的能力。
意义：①预防接种中一般都采用二次或多次接种法，且第一次和第二次抗原刺激之间有时间上的间隔，使出现二次应答，从而产生大量抗体且维持时间长。
②制备抗体中，通常采用多次注射抗原的方法；③疾病诊断中，根据几类抗体出现的先后规律，可作出早期快速诊断。
(三)细胞免疫是T细胞介导的免疫应答。
由活化的T细胞产生的特异性杀伤或免疫炎症称细胞免疫(CMI)。
1．机体如何识别“自己”与“非自己”人体免疫系统能识别外界物质，是‘非自己’的物质，如病毒、细菌、癌细胞甚至更小的蛋白质等，都会被免疫系统识别出来并排除出去。
免疫系统主要由T细胞和B细胞起作用。
T细胞介导细胞免疫。
T细胞受抗原刺激激活后，①—部分变成致敏淋巴细胞，通过释放淋巴因子产生效应。
③④⑤②一部分细胞生成杀伤性T细胞(Tc细胞)。
Tc细胞有杀死其他细胞的能力，在组织相容性抗原复合体(MHC)的作用下，有选择地进行杀伤。
杀伤性T细胞杀死被病毒感染的靶细胞时，必须同时识别病毒抗原和自身主要组织相容性抗原分子(图11—L3)。
获得了1996年诺贝尔生理学奖。
P250T10-132．组织相容性抗原又称移植抗原。