光合细菌培养基

红螺菌培养基：

1、富集培养基：

经典的紫色非硫细菌（红螺菌）的富集培养基的配方为：NH4Cl：0.1g；NaHCO3：0.1g；K2HPO4：0.02g；CH3COONa：0.1~0.5g；MgSO4·7H2O：0.02g；NaCl：0.05～0.2g；生长因子1ml，蒸馏水97ml，微量元素溶液

1ml，pH为7.0。

其中，①5％NaHCO

3

水溶液，过滤除菌取2m1加入无菌培养基中。②生长因子：维生素B10.001mg、乙尼克丁酸0.1mg、对氨基苯甲酸0.1mg、生物素0.001mg，以上药品溶于蒸馏水中，定容至10ml，然后过滤除菌。③

微量元素溶液：FeCl

3·6H

2

O ：5mg；CuS0

4

·5H

2

O：0.05mg；H

3

BO

4

lmg；

MnCl

2·4H

2

O：0.05mg；ZnSO

4

·7H

2

O：1mg；Co(NO

3

)

2

·6H

2

O： 0.5mg。以上药

品分别溶于蒸馏水中，并定容至1000m1。

除①、②、③外，各成分溶解后100 Pa灭菌20min。然后分别加入①、

②、③，如加入0.1％～0.3％的蛋白胨则能促进该菌生长。

2、分离培养基：

传统的红螺科分离培养基的配方为：NH

4Cl：0.1g； MgCl

2

：0.02g；酵

母膏：0.01g； K

2HPO

4

：0.05g； NaCl： 0.2g；琼脂2g，蒸馏水90ml。

100Pa灭菌20min。

灭菌后，无菌操作加入经过滤除菌的0.5g/5mlNaHCO

3

，再无菌加入过

滤除菌的0.1g或0.1mlNa

2S·9H

2

O（降低培养基的氧化还原值），最后再加

入5ml经过滤除菌的乙醇、戊醇或4％丙氨酸。用过滤灭菌的0.1mol/H

3PO

3

调pH至7.0。

摘自百度知道。

筛选富集培养基为: NH4Cl 1g/L, NaHCO3 1g/L, CH3COONa 3g/L, KH2PO4 0.3g/L, MgSO4 0.1g/L, 酵母膏0.5g/L, 微量元素母液1g, 自然pH值。扩大培养培养基以海水代替微量元素母液。1000~4000lx光照, (30±2)℃恒温培养。

参考文献：固定化海洋光合细菌处理生活污水的研究* 黄宝兴,李兰生,赵亮,张微,唐迎迎海洋湖沼通报

基础培养基:NH4Cl:1g; Na2HPO4: 0.5g; MgSO4: 0.2g; NaCl: 2g; NaHCO3: 5g; 酵母膏:2g ; 乙醇2ml，用0.1N H3PO4调至pH7.0。

划线培养基:采用固体琼脂培养基，即在基础培养基的基础上添加1.0%的琼脂。

以上培养基初始pH值均用H3PO4调至7.0，经121℃灭菌30分钟，NaHCO3过滤除

菌后加入。培养条件:光照培养箱温度控制在30℃、光照强度控制在3000uE.m-2s-1培养。光合细菌是一种兼性嫌气细菌，需要深层培养或在真空干燥器内达到嫌气或半嫌气状态，一般将混合菌放入培养液中先富集再分离。具体方法:将混合菌装入10ml试管中，加入培养

液充满至刻度，盖上胶塞，在光照条件下保持在30℃左右培养。待培养液出现红色后，取培养液加1.5%的琼脂，制成固体培养基，取菌液分别用无菌水以10-100000000倍稀释，分别取lml样本涂在平皿上，光照、30℃培养2d左右在平板上长出菌落。移至平板采用划线法进行分离，将划好线的平板倒置，在相同条件下培养，反复分离纯化，挑取不同特征的菌落，用斜面保存，纯化分离后的菌种置于冰箱保存备用。

PSB 培养中除碳、氮、磷等主要营养元素外，还需要一定量的镁、钙、钠和有关的微量元素，将所需的营养元素按一定的比例配成适于菌体生长繁殖的培养基。本实验室采用酵母膏、蛋白胨培养基，基本配方为:CaCl2 0.3g，MgSO4·7H2O 0.5g，酵母膏3g，蛋白胨3g，蒸馏水1000ml，pH: 6.8. 如需制固体培养基再加2%琼脂。培养温度：25℃～30℃最佳，光照强度：2000LX～5000LX，PH：7.5～8.5最佳。

把菌种接种到灭好菌的培养基中，在三角瓶中进行二级培养，每天摇晃几次。把40L 的反应器中加满自来水，放入通气管，盖上保鲜膜一起用次氯酸杀菌消毒24小时，用硫代硫酸钠（1L次氯酸需要150g硫代硫酸钠）来中和。以15%的接种量接入反应器中，用泵通气培养，用分光光度计跟踪测量菌液的密度，得到菌液的密度较高，而且反应器还可以进一步放大。

参考文献：光合细菌的培养及应用魏玉利

参考文献：

2.5.1.1 灭菌条件

（1）高压蒸汽灭菌小件玻璃器皿、培养基等采用湿式高压蒸汽灭菌。这种灭菌方式可以达到彻底的灭菌。灭菌条件：0.103 MPa，120 ℃，20min。

（2）紫外灭菌无菌操作台采用紫外灭菌方式，用紫外灯灭菌30min。该种方式对空气进行灭菌。

2.5.1.2 光合细菌的纯培养

本课题研究所用光合细菌为Z08，除特殊说明外，皆是由纯培养获得。将50 mL HCH 培养基灌装于250 mL 三角瓶，用封口膜将瓶口密封，以防止灰尘和杂菌进入。灌装好的培养基采用高压蒸汽灭菌20 min。待冷却以后，在无菌操作台中接种OD660=1.0（干重840 mg/L）的Z08 15 mL。接种后将菌液放置在140 rpm 的恒温摇床中培养，控制温度30 ℃，24 h 照明，照度500—1000 lx，培养48 h 达到稳定期。培养后的光合细菌保存在4

℃条件下备用。

红色非硫光合细菌富集培养基的配制: NaHCO3 1.0 g; NH4Cl 1 g; K2HPO4 0.2 g;

CH3COONa 1.0~5.0 g;MgSO4·7H2O 0.2 g; NaCl 0.5~2.0 g;酵母浸汁0.1 g;微量元素10 mL。

将上述成分溶于蒸馏水中,调节pH至7.0,定容1000 mL。在115℃下灭菌20 min。

参考文献：光合细菌菌体分离回收以及实现啤酒废水资源化的研究戴晓

光合细菌的分离与培养

①液体富集培养基：CH3COONa 3.0 g ，CH3CH2COONa 0.3 g，NaCl 1.0 g，(NH4)2SO4 0.3 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，K2HPO4 0.7 g，CaCl2 0.05 g，MnSO4 0.0025 g，FeSO4 0.005 g，酵母膏

0.1 g，谷氨酸1.0 g，蒸馏水定容至1 L，调pH 至7.4。

②固体分离培养基：CH3COONa 3.0 g·L-1，酵母膏3.0 g·L-1，CaCl2 0.3 g·L-1，MgSO4·7H2O

0.5g·L-1，琼脂20 g·L-1，调pH7.4。

培养条件：取少量活性污泥样品于装有120 mL 富集培养基的125 mL 血清瓶中富集，置于光照培养箱中30 ℃培养，照度为2000 1x。6~9 d 后，液体培养基变为红色，经摇床振荡稀释处理后，涂布和划线于平板固体培养基上，置于恒温培养箱中黑暗好氧培养，7 d 后获得单菌落。在平板固体培养基中重复划线3 次以上，直到在显微镜下观察为纯菌。

参考文献：一株光合细菌的分离鉴定及污水处理能力研究周洪波，刘飞飞，邱冠周