最新氯化胆碱基础知识
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- 研制一种能消除当前常见掺假物的影响准确测定氯化胆碱含量， 同时又适用于基层简易实验室的常规方法；
- 研制一种更为科学严谨的可以防范可能出现的其他掺假行为的仲 裁方法。
方法选择及需解决的关键技术
- 常规法：拟选雷氏盐法，雷氏盐反应被认为是氯化胆碱的特异反 应，干扰少，美国饲料工业协会（NFIA）即用此法测定植物载 体粉剂和预混料中的氯化胆碱，但并非全无干扰，有些有机胺 （如三甲胺等）有类似的反应，必须在沉淀前予以消除，同时要 寻找适当途径克服比色法的缺点。
• 沉淀剂用量：我们以操作条件下可能出现的最大 氯化胆碱量（0.06g）为前提,分别加入不同体积 的2%(m/v)的雷氏盐溶液观察沉淀量结果见图1。
图1 沉淀剂的用量
3 雷氏盐沉淀
沉淀的热稳定性：
我们考察了装有反应沉淀物坩埚滤器在 105℃、不同烘干时间的质量变化，发现 烘干2h后即可从沉淀量计算得到化学计量 的氯化胆碱含量。而且烘干16h和2h后， 沉淀的质量差异均在0.0005g以内, 说明在 该温度下, 氯化胆碱的雷氏盐沉淀物有很 好的热稳定性, 为雷氏盐重量法测定氯化 胆碱建立了重要理论支持。
方法确定的操作程序
称取经105℃干燥至衡重的试样1g（精确0.0002 g）置于100mL容量瓶中+水约70mL→70℃水浴 中加热15min→震荡10min→用水定容→过滤→ 吸取10.00mL至150mL高脚烧杯中+40%的NaOH 溶液3mL,摇匀,盖一倒置的漏斗→电炉上加热,并 煮沸5min→冷却、加酸调节溶液pH5~6→移入 冰水浴冷却至5℃以下+2%雷氏盐甲醇溶液 15mL→不时搅拌,反应30min→静置陈化1h→将 沉淀定量转移到已在105℃烘至衡重并称量过的 G4砂芯漏斗中→减压抽滤→用水洗涤烧杯和沉 淀3~4次→105℃烘干2h，称重。
c. 煮沸时间：用同样的方法测定加碱5mL，煮沸3、 5、7min 的效果，证明去胺效果与测得的氯化 胆碱回收率也无差异。
为留有一定的保险系数我们将条件定为：
加40%NaOH溶液3mL，煮沸5min。
3 雷氏盐沉淀
条件
• pH: 我们分别用上述水溶液和以玉米芯为载体的、 含有对应量氯化胆碱和三甲胺的样品提取液加碱 3mL、煮沸5min，然后分别将溶液pH调至3~4、 5~6、6~7和8~9，证明溶液调至pH8~9易产生絮 状沉淀，雷氏盐沉淀后结果偏高，而调至3~4结 果又有偏低的倾向，故认为将pH调至6左右较合 适。
2-2 可能干扰物的排除条件
b. 加碱量：从含有0.3000g氯化胆碱和约0.20三甲 胺的100mL水溶液中，吸取10.00mL于150mL高 脚烧杯中，分别加40% NaOH溶液2、3、4、 5mL，边煮沸，边用pH试纸测定，直至无NH3 溢出, 然后以雷氏盐法测定氯化胆碱的回收率, 证明2~5mL回收率无差异。
与现行国标比较，方法的优越性 与HG标准的比较--掺假样品的鉴别见表7 与GB/T 雷氏盐比色法比较—好的精密度见表8
方法的适用性 不同剂型、不同赋形剂与不同添加量氯化胆碱的添加回 收率及测定的变异系数，见表4、5 实验室间比对,见表6 不同烘干温度测定结果比较，烘干变黑仍可准确测定， 见表9
表2 雷氏盐重量法的线性检验
氯化胆碱加量 三甲胺加量 测得氯化胆碱含量
％
％
％
0
50
0
10
40
9.93
20
30
21.12
30
20
30.14
40
10
41.77
50
0
51.29
y= -0.077+1.0314x r = 0.9996
表3 回收率、精密度测定Байду номын сангаас果-1
剂型 添加量 测定值 相对偏差 回收率
(载体） %
%
%
%
——————————————————————————
结果的计算
m2-m1 氯化胆碱（%）= ———×10×0. 33045
m0 式中: m0: 试样质量, g m1: 空砂芯漏斗质量,g m2: 沉淀+砂芯漏斗的质量, g 10: 稀释倍数 0.33045: 换算系数 ( 139.63/422.55)
方法的性能检验
方法的准确度与精密度 线性检验结果见表２； 添加回收率结果与变异系数见表３；
粉剂产品氯化胆碱的提取
• 提取剂：氯化胆碱属离子型化合物→ 水
• 提取温度
表1 不同温度的提取效果
—————————————————————
提取方式
温度（℃） 提取效率%
振荡
室温
98.5
加热振荡
50
99.2
加热振荡
70~80
100
___________________________________________ 考虑粉剂载体中均含有一定量的淀粉，其在80℃糊化， 影响以后的过滤和测定，故温度定为70±3℃。
- 仲裁法：拟选色谱法，根据氯化胆碱的结构特点，选择适宜的色 谱类型（柱）、色谱条件和检测方式。
雷氏盐重量法的研究
测定条件确定 1 粉剂产品氯化胆碱的提取
提取剂和不同温度下的提取效率 2 可能干扰物(有机胺)的排除
a. 加碱煮沸效果 b. 加碱量 c. 煮沸时间 3 雷氏盐沉淀
a. pH b.沉淀剂用量:见图1 c.雷氏盐沉淀的热稳定性
2-1可能干扰物的排除
a. 加碱煮沸的效果
• 雷氏盐与一般的一价阳离子不反应，但可能与 有机胺，特别是三甲胺反应生成类似的红色沉 淀。
• 我们翻阅了有关资料发现氯化胆碱作为四级胺 它与伯、仲、叔胺的重要区别在于加碱煮沸后， 不能变为氨气溢出。
• 我们在实验室找了三甲胺、三乙胺、乙醇胺、 盐酸羟胺、苯胺等一些可能与雷氏盐生成沉淀 的有机胺，作了实际验证，即加碱煮沸一定时 间后，用离子色谱和雷氏盐试剂检测，证明再 无有机胺存在。
50
50.26
0.16
100.5
粉剂
50
50.23
0.19
100.5
（玉
50
51. 09
0.67
102.2
米
50
50.29
氯化胆碱基础知识
饲料添加剂氯化胆碱中 氯化胆碱的测定
氯化胆碱的作用及其在饲料工业中的应用 掺假向含量测定方法提出挑战 新方法的宗旨、目标、方法的选择和必需解
决的关键技术 研究与测定条件、实验参数的确定 方法的性能检验 结论
新方法的宗旨、目标和必需解决的
关键技术
宗旨、目标
- 研制一种更为科学严谨的可以防范可能出现的其他掺假行为的仲 裁方法。
方法选择及需解决的关键技术
- 常规法：拟选雷氏盐法，雷氏盐反应被认为是氯化胆碱的特异反 应，干扰少，美国饲料工业协会（NFIA）即用此法测定植物载 体粉剂和预混料中的氯化胆碱，但并非全无干扰，有些有机胺 （如三甲胺等）有类似的反应，必须在沉淀前予以消除，同时要 寻找适当途径克服比色法的缺点。
• 沉淀剂用量：我们以操作条件下可能出现的最大 氯化胆碱量（0.06g）为前提,分别加入不同体积 的2%(m/v)的雷氏盐溶液观察沉淀量结果见图1。
图1 沉淀剂的用量
3 雷氏盐沉淀
沉淀的热稳定性：
我们考察了装有反应沉淀物坩埚滤器在 105℃、不同烘干时间的质量变化，发现 烘干2h后即可从沉淀量计算得到化学计量 的氯化胆碱含量。而且烘干16h和2h后， 沉淀的质量差异均在0.0005g以内, 说明在 该温度下, 氯化胆碱的雷氏盐沉淀物有很 好的热稳定性, 为雷氏盐重量法测定氯化 胆碱建立了重要理论支持。
方法确定的操作程序
称取经105℃干燥至衡重的试样1g（精确0.0002 g）置于100mL容量瓶中+水约70mL→70℃水浴 中加热15min→震荡10min→用水定容→过滤→ 吸取10.00mL至150mL高脚烧杯中+40%的NaOH 溶液3mL,摇匀,盖一倒置的漏斗→电炉上加热,并 煮沸5min→冷却、加酸调节溶液pH5~6→移入 冰水浴冷却至5℃以下+2%雷氏盐甲醇溶液 15mL→不时搅拌,反应30min→静置陈化1h→将 沉淀定量转移到已在105℃烘至衡重并称量过的 G4砂芯漏斗中→减压抽滤→用水洗涤烧杯和沉 淀3~4次→105℃烘干2h，称重。
c. 煮沸时间：用同样的方法测定加碱5mL，煮沸3、 5、7min 的效果，证明去胺效果与测得的氯化 胆碱回收率也无差异。
为留有一定的保险系数我们将条件定为：
加40%NaOH溶液3mL，煮沸5min。
3 雷氏盐沉淀
条件
• pH: 我们分别用上述水溶液和以玉米芯为载体的、 含有对应量氯化胆碱和三甲胺的样品提取液加碱 3mL、煮沸5min，然后分别将溶液pH调至3~4、 5~6、6~7和8~9，证明溶液调至pH8~9易产生絮 状沉淀，雷氏盐沉淀后结果偏高，而调至3~4结 果又有偏低的倾向，故认为将pH调至6左右较合 适。
2-2 可能干扰物的排除条件
b. 加碱量：从含有0.3000g氯化胆碱和约0.20三甲 胺的100mL水溶液中，吸取10.00mL于150mL高 脚烧杯中，分别加40% NaOH溶液2、3、4、 5mL，边煮沸，边用pH试纸测定，直至无NH3 溢出, 然后以雷氏盐法测定氯化胆碱的回收率, 证明2~5mL回收率无差异。
与现行国标比较，方法的优越性 与HG标准的比较--掺假样品的鉴别见表7 与GB/T 雷氏盐比色法比较—好的精密度见表8
方法的适用性 不同剂型、不同赋形剂与不同添加量氯化胆碱的添加回 收率及测定的变异系数，见表4、5 实验室间比对,见表6 不同烘干温度测定结果比较，烘干变黑仍可准确测定， 见表9
表2 雷氏盐重量法的线性检验
氯化胆碱加量 三甲胺加量 测得氯化胆碱含量
％
％
％
0
50
0
10
40
9.93
20
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21.12
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40
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41.77
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y= -0.077+1.0314x r = 0.9996
表3 回收率、精密度测定Байду номын сангаас果-1
剂型 添加量 测定值 相对偏差 回收率
(载体） %
%
%
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——————————————————————————
结果的计算
m2-m1 氯化胆碱（%）= ———×10×0. 33045
m0 式中: m0: 试样质量, g m1: 空砂芯漏斗质量,g m2: 沉淀+砂芯漏斗的质量, g 10: 稀释倍数 0.33045: 换算系数 ( 139.63/422.55)
方法的性能检验
方法的准确度与精密度 线性检验结果见表２； 添加回收率结果与变异系数见表３；
粉剂产品氯化胆碱的提取
• 提取剂：氯化胆碱属离子型化合物→ 水
• 提取温度
表1 不同温度的提取效果
—————————————————————
提取方式
温度（℃） 提取效率%
振荡
室温
98.5
加热振荡
50
99.2
加热振荡
70~80
100
___________________________________________ 考虑粉剂载体中均含有一定量的淀粉，其在80℃糊化， 影响以后的过滤和测定，故温度定为70±3℃。
- 仲裁法：拟选色谱法，根据氯化胆碱的结构特点，选择适宜的色 谱类型（柱）、色谱条件和检测方式。
雷氏盐重量法的研究
测定条件确定 1 粉剂产品氯化胆碱的提取
提取剂和不同温度下的提取效率 2 可能干扰物(有机胺)的排除
a. 加碱煮沸效果 b. 加碱量 c. 煮沸时间 3 雷氏盐沉淀
a. pH b.沉淀剂用量:见图1 c.雷氏盐沉淀的热稳定性
2-1可能干扰物的排除
a. 加碱煮沸的效果
• 雷氏盐与一般的一价阳离子不反应，但可能与 有机胺，特别是三甲胺反应生成类似的红色沉 淀。
• 我们翻阅了有关资料发现氯化胆碱作为四级胺 它与伯、仲、叔胺的重要区别在于加碱煮沸后， 不能变为氨气溢出。
• 我们在实验室找了三甲胺、三乙胺、乙醇胺、 盐酸羟胺、苯胺等一些可能与雷氏盐生成沉淀 的有机胺，作了实际验证，即加碱煮沸一定时 间后，用离子色谱和雷氏盐试剂检测，证明再 无有机胺存在。
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0.16
100.5
粉剂
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0.19
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（玉
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51. 09
0.67
102.2
米
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氯化胆碱基础知识
饲料添加剂氯化胆碱中 氯化胆碱的测定
氯化胆碱的作用及其在饲料工业中的应用 掺假向含量测定方法提出挑战 新方法的宗旨、目标、方法的选择和必需解
决的关键技术 研究与测定条件、实验参数的确定 方法的性能检验 结论
新方法的宗旨、目标和必需解决的
关键技术
宗旨、目标