高效液相色谱法常见故障排除

高效液相色谱法常见故障排除

所长办公室文毅

日前，本人参加了高效液相色谱维修、维护及常见故障排除的培训班，现将培训内容总结如下，希望对大家的实际工作有所帮助！

一、检测器常见故障排除

1、基线噪声

·检测池窗口污染：用强溶剂冲洗检测池；卸下检测池，拆开清洗或更换池窗石英片。

·样品池中有气泡：突然加大流量赶出气泡；在检测池出口端加一反压（0.2-0.3MPa）连一个0.3mm×1～2m的不锈钢管，以增大池内压（增加压力不要过大，防止检测池石英片碎裂）。

·检测器或数据采集系统接地不良：拆去原来的接地线，重新连接。

·检测器光源故障：检查氘灯或钨灯设定状态；检查灯使用时间、灯能量、开启次数；更换氘灯或钨灯。

·液体泄露：拧紧或更换连接件。

·很小的气泡通过检测池：流动相要仔细脱气；加大检测池的背压；系统检漏；有微粒通过检测池，清洗检测池；检查色谱柱出口筛板。

2、基线漂移

·检测池窗口污染：同基线噪声描述。

·色谱柱污染或固定相流失：更换色谱柱或使用保护柱。

·检测器温度变化：系统恒温。

·光源故障：更换氘灯或钨灯。

·原先的流动相没有完全除去。

·溶剂储液瓶污染：清洗溶剂瓶，用新流动相平衡系统。

·强吸附组分从色谱柱中洗脱：在下一次分离之前用强洗脱能力的溶剂冲洗色谱柱；使用溶剂梯度。

3、工作站上出现大的尖峰

·检测池内有气泡通过：溶剂脱气并彻底冲洗系统；检查连接系统是否漏液。

·记录仪或检测器接地不良：消除噪声来源；确保良好接地。

·样品溶解不彻底。

4、负峰

·检测器输出信号的极性相反。

·样品的吸收小于流动相，流动相不纯。

·样品溶剂干扰。

·示差折光检测器中样品的折射率较低。

·进样中带入气泡。

5、鬼峰或假峰

·进样阀或注射器污染

·样品溶剂与流动相不同

·样品中有空气

·流动相中杂质引起

·在线过滤器或过滤沉子污染

·溶剂储液瓶污染

6、工作站不回零

⑴记录仪或工作站信号阶梯式上升

·检测器的输出范围设定不当：重新设定检测器的输出范围。

·记录仪或检测器接地不良：确保良好接地。

·吸收过大，平头峰

⑵记录仪、积分仪或色谱工作站在零点不平衡

·工作站故障。

·样品池中有空气：增大流量冲洗色谱系统除去气泡；在检测器出口处加一个背压；流动相脱气。

·从样品池出来的光能量严重减弱：检查光路，清除堵塞物；清洗检测池或更换池窗。

·光源故障：更换氘灯或钨灯。

·检测器与色谱工作站之间的电路接触不良。

·色谱柱固定相流失严重：更换色谱柱。

·原先的流动相污染：彻底冲洗系统流动相

·吸收太强：改变检测波长。

7、随泵运动出现噪声

⑴基线随着泵的往复出现噪音：仪器处于强空气中或流动相脉动改变

仪器放置位置：放在合适的环境中。

·用一调节阀或阻尼器以减少泵的脉动。

⑵随着泵的往复出现尖刺

·检测池中有气泡。

·卸下检测池的入口管与色谱柱的接头，用注射器将甲醇从出口管端推进，

以除去气泡。

二、色谱柱系统故障排除

1、色谱柱在使用过程中易出现的问题及解决的方法

⑴谱峰分叉：首先应判断柱头是否有柱头塌陷?

·柱头塌陷：流动相含盐时，冲洗系统要用20%的甲醇／水，不要用纯水冲柱，修补色谱柱。

·柱外死体积：检查进样阀→色谱柱→检测器的管路连接有无死体积，更换密封环(刃环)。

·柱头填料污染：严格过滤流动相和样品，修补色谱柱。

·进样阀密封问题：检修进样阀。

·样品分解

·色谱柱填充不实：重新填充固定相。

·色谱柱受到强烈振动：修复或更换。

⑵柱压过高：不要认为压力高就是色谱柱的问题，首先判断是否是色谱系统管路阻塞

判断方法：分段检查泵→在线过滤器→进样阀→色谱柱→检测器→排液管。 ·在线过滤器阻塞：溶剂过滤不好或密封圈磨损，用30%硝酸超声在线过滤器，再用水超声。

·进样阀定量管阻塞：样品过滤不好，更换定量管。

·管路阻塞：缓冲液中的盐遇到甲醇结晶，高压反冲，加热或更换管路。

·保护柱阻塞：缓冲液中的盐遇到甲醇结晶，系统用20%甲醇/水彻底置换后,接上色谱柱小流量反冲。

·压力传感器不准确。

·泵流量偏大。

·色谱柱的问题：主要有微粒堵塞；流动相改变造成粘度变化；柱床膨胀；样品在色谱柱上不可逆吸附；

细菌滋生。联系色谱柱生产厂家寻求帮助。

⑶重复性差

·色谱柱被污染。

·流动相pH值及组成不合适造成键合相流失，如通常的硅胶基质色谱柱在碱性条件下使用。

·样品溶剂不同或样品本身不稳定。

·进样技术问题。

⑷柱效降低

·官能团坍塌

·色谱柱内的死体积

①流动相pH值及组成不合适造成固定相流失。

②流速急剧变化造成固定相物理损坏。

③机械震动造成固定相产生裂缝。

④柱床收缩或干涸。

⑸选择性变化

·应用色谱柱是否正确?

·固定相表面是否有未洗脱样品?

·流动相pH、组成、温度等

·键合功能团流失?

·在评价条件下重新检测

⑹柱外效应

·用小于3mm内径的色谱柱。

·进样阀和色谱柱、色谱柱和检测器之间用短的细内径的连接管。

·用无死体积接头。

·用较小体积的检测池。

·进样体积减小。

⑺色谱峰分裂

·柱外死体积。

·柱头填料污染。

·部分阻塞。

·进样阀密封问题。

·化合物一起洗脱。

⑻色谱峰展宽

①所有的色谱峰展宽

·柱效降低。

·进样体积太大。

②部分色谱峰展宽

·上次进样洗脱的色谱峰。

·蛋白或聚合物等高分子量化合物。

⑼色谱峰拖尾

①所有色谱峰拖尾