【革兰染色和血浆凝固酶实验】血浆凝固酶可以
金黄色葡萄球菌的检查
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金黄色葡萄球菌的检查同学们,这一节我们一起来学习一下第四章微生物限度检查法中的金黄色葡萄球菌的检查。
金黄色葡萄球菌为葡萄球菌属中的一种。
本菌在自然界分布甚广,空气、土壤、水和日常用具,人的皮肤。
看,这就是金黄色葡萄球菌,它是一种革兰氏阳性球菌,呈葡萄状排列,无芽胞,无荚膜,能分解甘露醇,血浆凝固酶阳性。
该菌是葡萄球菌中致病力最强的一种,可经皮肤、粘膜侵入人体引起化脓性病变等局部及全身化脓性炎症,严重时可导致败血症。
所以,国家规定外用药品和一般滴眼剂、眼膏剂、软膏剂等规定不得检出金黄色葡萄球菌,检验金黄色葡萄球菌有重要意义。
金黄色葡萄球菌的操作流程如图所示,与之前讲述过的其他控制菌的检查一样:在完成培养基的配制和供试品的处理后,用营养肉汤于30~35℃增菌培养18~24小时,必要时可延至48小时。
增菌培养的目的使被检药物中的被检菌增殖,避免出现漏检。
接着,进行分离纯化,其目的是使被检菌从混合菌中分离出来。
以接种环沾取以接种环沾取1~2环培养液,划线接种于卵黄氯化钠琼脂平板或甘露醇氯化钠琼脂平板上,置30~35℃培养24~72小时。
当阳性对照平板呈典型菌落生长时,供试品分离平板无菌落生长,或有菌落生长但不同于表中所列特征,可判为未检出金黄色葡萄球菌。
若供试品分离平板生长的菌落与表中所列特征相似疑似时,应选取2~3个以上菌落,分别接种于营养琼脂斜面上,于30~35℃培养18~24小时,取其培养物做以下检查。
1. 革兰染色镜检革兰染色镜检观察显微镜下的细菌结构是否符合金黄色葡萄球菌的形态特征:金黄色葡萄球菌为革兰阳性球菌,无芽孢,无荚膜。
排列呈不规则的葡萄状,亦可呈单个、成双或短链状排列,菌体较小。
2. 血浆凝固酶试验金黄色葡萄球菌能产生血浆凝固酶,能将血浆里的纤维蛋白原转化为纤维蛋白,使血浆凝固。
检查时,轻轻将试管倾斜(动作勿大),仔细观察,阴性对照管血浆应流动自如,阳性对照管血浆应凝固状,若试验管液血浆凝固为血浆凝固酶试验阳性;否则为阴性。
本科微生物学
![本科微生物学](https://img.taocdn.com/s3/m/8e06f853804d2b160b4ec03e.png)
概述第十二章细菌的形态与结构一、单项选择题1.属于非细胞型微生物的是()A. 真菌B. 细菌C. 病毒D. 支原体E. 立克次体2. 有关原核细胞型微生物错误的是( )A. 无核质B.无核膜、核仁C.缺乏细胞器D.具有胞浆膜E.可具备细胞壁3.用来测量细菌大小的单位是()A. cmB. mmC. μmD. nmE. pm4.不属于细菌基本结构的()A. 细胞壁B. 细胞膜C. 中介体D. 核质E. 芽胞5.革兰阳性菌特有的成分是()A. 肽聚糖B. 磷壁酸C. 脂蛋白D. 脂多糖E. 外膜6.细菌细胞壁的主要成分是()A. 外膜B. 脂多糖C. 脂蛋白D. 磷壁酸E. 肽聚糖7.维持细菌固有形态的结构是()A. 细胞壁B. 细胞膜C. 细胞质D. 荚膜E. 鞭毛8.溶菌酶对G+菌的作用机制是通过( )A. 破坏磷壁酸B. 损伤细胞膜C. 抑制菌体蛋白合成D. 裂解肽聚糖的聚糖骨架E. 抑制肽聚糖四肽侧链与五肽桥的联结9.青霉素、头孢菌素导致细菌死亡的机制是()A. 破坏磷壁酸B. 损伤细胞膜C. 抑制菌体蛋白合成D. 裂解肽聚糖的聚糖骨架E. 抑制肽聚糖四肽侧链与五肽桥的联结10.有关质粒的特点,错误的是()A. 为细菌染色体以外的遗传物质B. 是细菌生命活动中不可缺少的C. 可自我复制并传代D. 可自行丢失E. 也可从一个细菌转移至另一细菌11.细菌的特殊结构不包括()A. 菌毛B. 鞭毛C. 芽胞D. 质粒E. 荚膜12.对外界抵抗力最强的细菌结构是()A. 荚膜B. 芽胞C. 鞭毛D. 核糖体E. 中介体13.与细菌致病力无关的是()A. 芽胞B. 荚膜C. 鞭毛D. 质粒E. 普通菌毛14.有关荚膜描述,错误的是()A. 具有抗吞噬作用B. 一般在机体内形成C. 可增强细菌对热的抵抗力D. 具有免疫原性,可用于鉴别细菌E. 化学成分或为多糖,或为多肽等15.有关菌毛描述,错误的是()A. 多见于G-菌B. 是细菌的运动器官C. 有普通菌毛和性菌毛之分D. 性菌毛能传递遗传物质E. 普通菌毛与细菌粘附有关16.缺乏下列何种结构细菌在一定条件下仍可存活()A. 核质B. 细胞质C. 细胞膜D. 细胞壁E. 以上均可二、名词解释1、微生物2、质粒3、芽胞三、填空题1.测量细菌大小的单位是___________。
临床微生物学检验模拟题含答案
![临床微生物学检验模拟题含答案](https://img.taocdn.com/s3/m/febf1bb348649b6648d7c1c708a1284ac85005cc.png)
临床微生物学检验模拟题含答案一、单选题(共100题,每题1分,共100分)1.不属于细菌合成代谢产物的是(2016 年中级师)A、细菌素B、热原质C、抗毒素D、抗生素E、色素正确答案:C2.某一脓标本,涂片革兰染色镜检:革兰阳性球菌,直径1μm 左右,呈单个、成对或短链排列;血琼脂平板分离培养:菌落表面光滑湿润,圆形,边缘整齐。
黄色,凸起,直径 1~1.5mm,菌落周围有完全透明的溶血环;菌落涂片革兰染色镜检:革兰阳性球菌,呈单个、双、短链和葡萄串状排列,以葡萄串状排列为主;生化试验:触酶阳性,血浆凝固酶(试管法)阳性,发酵葡萄糖产酸,发酵甘露醇产酸,对新生霉素敏感。
应报告(2019 年中级师)(2012 初级师)(2020初级士)A、家畜葡萄球菌生长B、表皮葡萄球菌生长C、腐生葡萄球菌生长D、中间型葡萄球菌生长E、金黄色葡萄球菌生长正确答案:E3.细菌通过分泌何种酶,将菌体外的多糖分解为单糖(2014 年初级士)A、胞外酶B、氧化酶C、过氧化物酶D、凝固酶E、胞内酶正确答案:A4.下列符合革兰阴性杆菌尿路感染的诊断标准是(2014 年中级师)A、106cfu/LB、105cfu/LC、108cfu/LD、107cfu/LE、104cfu/L正确答案:B5.为了破坏沙门菌属的表面 Vi 抗原,通常采用下列方法中的(2019 年中级师)A、加热56℃,5 分钟B、0.4%甲醛处理C、煮沸D、紫外灯照射 1 小时E、冷冻 1 小时正确答案:C6.革兰染色液中稀释复红的作用是(2011 年初级士)A、脱色B、媒染C、固定D、初染E、复染正确答案:E7.链球菌与葡萄球菌可用于属间初步鉴别的试验是(2012 年中级师)A、葡萄糖发酵试验B、触酶试验C、血浆凝固酶试验D、蔗糖氧化试验E、氧化酶试验正确答案:B8.对铜绿假单胞菌生化特征的描述,错误的是(2016 年初级师)A、不产生吲哚B、氧化酶阳性C、不利用枸橼酸盐D、氧化分解葡萄糖E、还原硝酸盐正确答案:C9.以神经毒素致病的细菌是(2018 年中级师)A、伤寒沙门菌B、肉毒杆菌C、霍乱弧菌D、脑膜炎奈瑟菌E、乙型溶血性链球菌正确答案:B10.关于结核分枝杆菌的特性,下列哪项是错误的(2019 年中级师)A、营养要求高B、专性需氧C、生长快,3~12h 能形成肉眼可见菌落D、CO2 可刺激生长E、菌落呈颗粒状正确答案:C11.甲基红试验阳性结果为(2015/2017 年初级士)A、蓝色B、黄色C、绿色D、红色E、黑色正确答案:D12.下列哪种嗜血杆菌生长时,既需要 X 因子,又需要 V 因子(2015 年初级士)A、副流感嗜血杆菌B、流感嗜血杆菌C、杜克嗜血杆菌D、埃及嗜血杆菌E、嗜沫嗜血杆菌正确答案:B13.患者女,70 岁,因急性支气管炎发作入院,抗生素治疗后症状缓解,7 天后出现腹泻,粪便革兰染色镜检发现大量革兰染色阳性球菌,其中含少量的革兰阴性杆菌,最可能的致病菌是(2020 年初级师)A、消化链球菌B、痢疾杆菌C、耐药性的金黄色葡萄球菌D、粪肠球菌E、霍乱弧菌正确答案:A14.下列不属于医院感染特点的是(2011 年中级师)A、医院感染加大患者、家庭、社会经济支出B、医院感染的发生与医院的建立相依并存C、医院感染造成患者住院日的延长D、医院感染的病原学诊断必须依据柯赫原则E、医院感染自身特点随医疗技术的发展而改变正确答案:D15.下列细菌中神奈川试验阳性的是(2014 年初级士)A、产单核李斯特菌B、副溶血性弧菌C、鼠疫耶尔森菌D、奇异变形杆菌E、铜绿假单胞菌正确答案:B16.患者男,36 岁。
血浆凝固酶实验实验报告
![血浆凝固酶实验实验报告](https://img.taocdn.com/s3/m/b8f656e864ce0508763231126edb6f1aff0071bf.png)
一、实验目的了解血浆凝固酶的基本原理,掌握血浆凝固酶的检测方法,通过实验验证葡萄球菌是否产生凝固酶,为临床诊断提供依据。
二、实验原理血浆凝固酶是一种能使含有枸橼酸钠或肝素等抗凝剂的入或兔血浆发生凝固的酶类物质。
多数致病性葡萄球菌能产生凝固酶,而非致病菌一般不产生。
凝固酶有结合凝固酶和游离凝固酶两种,其中结合凝固酶直接作用于血浆纤维蛋白原,使之变成纤维蛋白,将细菌凝聚在一起;游离凝固酶则需被血浆中的致活剂激活后,才能使纤维蛋白原变成固态纤维蛋白,从而使血浆凝固。
三、实验材料1. 菌株:金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌2. 试剂:生理盐水、兔新鲜血浆、氯化钠、试管、接种环、显微镜、玻片、无菌棉签等四、实验方法1. 玻片法(1)取两张洁净玻片,分别滴加生理盐水。
(2)用接种环取金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌少许,分别与玻片上的生理盐水制成均匀的细菌悬液。
(3)观察有无自凝现象,若出现颗粒状凝集现象即为阳性。
2. 试管法(1)取两支试管,分别加入生理盐水和兔新鲜血浆4倍稀释。
(2)用接种环取金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌少许,分别与试管中的生理盐水制成均匀的细菌悬液。
(3)观察有无凝固现象,若出现凝固即为阳性。
五、实验结果1. 玻片法:金黄色葡萄球菌出现颗粒状凝集现象,表皮葡萄球菌无凝集现象。
2. 试管法:金黄色葡萄球菌出现凝固现象,表皮葡萄球菌无凝固现象。
六、实验讨论通过本次实验,我们掌握了血浆凝固酶的检测方法,并验证了金黄色葡萄球菌具有致病性。
实验结果表明,金黄色葡萄球菌产生凝固酶,而表皮葡萄球菌不产生凝固酶。
凝固酶试验对于鉴别葡萄球菌有无致病性具有重要意义,有助于临床诊断和治疗。
七、实验结论1. 金黄色葡萄球菌具有致病性,能产生凝固酶。
2. 表皮葡萄球菌不具有致病性,不产生凝固酶。
3. 血浆凝固酶试验对于鉴别葡萄球菌有无致病性具有重要意义。
八、实验心得通过本次实验,我深刻认识到实验操作的重要性,以及理论知识与实践相结合的必要性。
金黄色葡萄球菌检测实验报告
![金黄色葡萄球菌检测实验报告](https://img.taocdn.com/s3/m/a938970ca88271fe910ef12d2af90242a895abc6.png)
金黄色葡萄球菌检测实验报告一、实验目的金黄色葡萄球菌是一种常见的病原菌,能够引起多种感染性疾病。
本次实验的目的是通过一系列的检测方法,准确检测出样本中是否存在金黄色葡萄球菌,并确定其数量和特性,为食品安全、临床诊断和环境卫生等领域提供可靠的检测依据。
二、实验原理金黄色葡萄球菌具有一些独特的生物学特性和生化反应,可通过以下几种方法进行检测:1、血浆凝固酶试验:金黄色葡萄球菌能够产生血浆凝固酶,使血浆发生凝固。
2、甘露醇发酵试验:金黄色葡萄球菌可发酵甘露醇产酸。
3、革兰氏染色:金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌,呈葡萄串状排列。
三、实验材料1、样本:食品样本(如乳制品、肉类)、临床样本(如脓液、血液)等。
2、培养基和试剂:血琼脂平板甘露醇氯化钠琼脂培养基兔血浆革兰氏染色液生理盐水3、仪器设备:恒温培养箱显微镜无菌接种环、移液管等四、实验步骤1、样本处理食品样本:称取一定量的样品,加入适量生理盐水进行均质处理,制成稀释液。
临床样本:直接进行涂片或适当稀释。
2、增菌培养将处理后的样本接种于 75%氯化钠肉汤中,置于 36±1℃恒温培养箱中培养 18 24 小时。
3、分离培养从增菌培养物中分别划线接种于血琼脂平板和甘露醇氯化钠琼脂培养基上,于 36±1℃培养 18 24 小时。
4、形态观察观察血琼脂平板上的菌落形态,金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色,周围有明显的透明溶血圈。
观察甘露醇氯化钠琼脂培养基上的菌落,金黄色葡萄球菌能使培养基变黄。
5、革兰氏染色挑取可疑菌落进行革兰氏染色,在显微镜下观察,金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌,呈葡萄串状排列。
6、血浆凝固酶试验取兔血浆与可疑菌落混合,置于 36±1℃培养箱中观察,若血浆发生凝固,则为阳性。
7、甘露醇发酵试验接种可疑菌落于甘露醇氯化钠琼脂培养基中,观察是否产酸。
五、实验结果1、形态观察在血琼脂平板上观察到金黄色、周围有透明溶血圈的菌落。
在甘露醇氯化钠琼脂培养基上观察到变黄的菌落。
微生物学实验设计_案例导入_皮肤化脓性病原菌的分离和鉴定
![微生物学实验设计_案例导入_皮肤化脓性病原菌的分离和鉴定](https://img.taocdn.com/s3/m/52259809ce2f0066f53322fd.png)
化脓性球菌的防治原则
注意个人卫生,要及时用消毒药物处理皮肤创伤(如碘酊)等 预防交叉感染,减少同带菌者或有相似症状的人有皮肤接触,
可疑体现在: (1)菌落周围出现溶血环 (2)菌落颜色为金黄色
生物化学反应鉴定: 甘露醇分解试验(+) 血浆凝固酶试验(+) 耐热核酸酶试验(+)
血清学检测SPA:协同凝集 试验(+)
引起皮肤化脓 性感染的细菌 为金黄色葡萄
球菌
致病性葡萄球菌的鉴定—血浆凝固酶实验
实验原理:许多病原性的葡萄球菌菌株在代谢过程中能产 生一种血浆凝固酶样物质,可使含有枸橼酸钠或肝素抗凝 剂的兔或人血清发生凝固,而非致病病株一般不产生此酶, 故凝固酶可作为鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标之一。
勤洗手,勤洗澡,对于脸部的化脓,不要将其抓破或挤出,因 脸部的化脓位于危险三角区及其附近,极易引起颅内感染引起 严重后果 由于金黄色葡萄球菌易产生耐药性,治疗因根据药敏实验结果 针对性的选用窄谱抗生素,防止耐药性菌株扩散 对于反复发作的顽固性疖疮,宜采用自身菌苗进行人工自动免 疫,有一定疗效(原理是重建皮肤微生态平衡,粪菌移植也是 运用这个原理) 少熬夜,养成正常的作息习惯,多吃蔬菜水果,帮助机体恢复
皮肤化脓性病原菌的分离与鉴定
案例导入
机械学院王斌同学皮肤表面有一化脓感染病灶, 经久不愈。请设计一个方案:从脓汁中分离、鉴定 化脓性病原菌,并提出防治原则。
分析原因
皮肤表面的正常细菌群:皮肤表面常见的细菌有类白喉杆菌、凝固酶 阴性葡萄球菌、丙酸杆菌、假单孢菌、分枝杆菌、变形杆菌、大肠埃 希菌、不动杆菌、克雷伯菌等
血浆凝固酶试验详解课件
![血浆凝固酶试验详解课件](https://img.taocdn.com/s3/m/d6aad50032687e21af45b307e87101f69f31fb7d.png)
需要注意的是,正常参考值只是一个大致的范围,个体差异和生理状态也可能影响 检测结果。
结果解读
结果解读需要结合患者的临床表 现和其他检查结果进行综合分析 ,不能仅凭单一检测结果做出诊
断。
如果血浆凝固酶试验结果异常, 可能提示患者存在血栓形成、血 管炎、肿瘤等疾病,需要进一步
目的
通过血浆凝固酶试验,可以判断 患者是否感染了具有致病性的凝 固酶阳性的葡萄球菌,为临床诊 断和治疗提供依据。
试验原理
原理概述
血浆凝固酶试验基于凝固酶的作用机制,通过观察血浆是否发生凝固来判断微 生物是否产生凝固酶。
具体过程
当葡萄球菌感染人体后,会释放出凝固酶,该酶能够使血浆中的纤维蛋白原转 变为纤维蛋白,从而使血浆发生凝固。通过观察血浆是否凝固,可以判断是否 存在葡萄球菌感染。
试验后处理
清洗器材
废弃物处理
使用清水和洗涤剂清洗所有使用过的 器材,确保无残留物。
按照实验室规定处理废弃物,确保安 全无害。
记录结果并分析
根据观察到的结果,记录试验数据并 进行相关分析,得出结论。
03
血浆凝固酶试验结果解读
正常参考值
正常参考值因实验室和检测方法的不同而有所差异,通常参考值范围在20-40秒之 间。
清洁工作台
使用消毒剂清洁工作台, 确保无菌环境。
准备样本
采集适量血液样本,分离 出血浆并妥善保存。
试验步骤
混合试剂和样本
将血浆和凝固酶试剂按照 规定的比例混合,确保充 分搅拌均匀。
开始计时
在混合物中插入搅拌器, 同时启动计时器。
观察并记录结果
观察混合物在规定时间内 的变化,记录是否出现凝 固现象。
血浆凝固酶试验
![血浆凝固酶试验](https://img.taocdn.com/s3/m/d328a0642e60ddccda38376baf1ffc4ffe47e290.png)
血浆凝固酶试验-实验操作同学们好,今天我们来学习《微生物检验技术》中的血浆凝固酶实验。
通过本次学习,我们要知道血浆凝固酶试验的基本原理,了解其临床意义,最重要的是学会血浆凝固酶试验的操作。
首先,血浆凝固酶是指能使含有枸橼酸钠或肝素抗凝剂的人或兔的血浆发生凝固的酶类物质。
致病性葡萄球菌大多能产生凝固酶,非致病性葡萄球菌不产生此酶。
实验原理,致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶,附着于细菌菌体表面,促使血浆中纤维蛋白原降解为纤维蛋白,从而使血浆凝固。
实验材料,血浆、菌种、灭菌器、玻片、接种环。
实验操作:取一张洁净的载波片。
用记号笔在玻片上做两个圆形标记区域,并标记待检菌菌名。
点燃酒精灯或用灭菌器对接种环进行灭菌。
用灭菌的接种环取血浆置于标记的圈内。
接种环再次灭菌。
用灭菌的接种环取金黄色葡萄球菌置于左侧标记的圈内血浆并进行混匀。
接种环灭菌。
用灭菌的接种环取白色葡萄球菌,置于右侧标记的圈内血浆并进行混匀。
接种环灭菌。
判断实验结果。
如出现颗粒状凝集现象,即为血浆凝固酶试验阳性。
若没有立即发生凝集,可轻摇玻片加速反应,仍无凝集现象发生则判断为阴性。
注意事项,试验前可用生理盐水检测两种细菌有无自凝现象,以防假阳性结果出现。
取兔血浆和两种细菌时,都要将接种环进行灭菌并待其冷却。
试验结果应立即判读,放置时间过久会造成假阳性结果出现。
临床意义,致病性葡萄球菌可引起疖、痈、蜂窝组织炎等局部化脓性感染,也可引起骨髓炎、心内膜炎、关节炎、肺炎等全身化脓性感染。
致病性葡萄球菌还可产生毒素,引发食物中毒、肠炎、烫伤样皮肤综合症等。
在临床上,部分血浆凝固酶试验阴性的葡萄球菌也可引起社区和临床的广泛感染,如女性尿路感染、人工瓣膜心内膜病变。
腹膜透析的腹膜炎、血管移植物感染、人工关节感染等。
通过此试验,我们要掌握血浆凝固酶试验是判断葡萄球菌有无致病性的一个重要鉴别试验。
好,这节课就讲到这里,同学们下节课再见。
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葡萄球菌属检验方法及临床意义
![葡萄球菌属检验方法及临床意义](https://img.taocdn.com/s3/m/97a7bac9f12d2af90342e624.png)
葡萄球菌属检验方法及临床意义摘要】目的:探讨葡萄球菌属检验方法及临床意义。
方法:选取2014年2月至2016年1月期间,我所检查的葡萄球菌属感染患者31例,对其检验方法及临床意义进行回顾性的分析。
结果:经过实验室检验后,所有患者的样本中均存在葡萄球菌属,葡萄球菌属的实验室检验对病因的确定具有较高的指导意义。
结论:同人类疾病相关的葡萄球菌属主要有表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌及头状葡萄球菌,其会导致化脓性感染及病毒性休克等。
【关键词】葡萄球菌属;检验方法;临床意义【中图分类号】R378.1 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231(2018)08-0088-02葡萄球菌属细菌为一类革兰氏阳性球菌,因其常堆集排列呈葡萄串状而取名葡萄球菌属[1]。
葡萄球菌自然界与人体中广泛的存在,其大多数是非致病菌,少数于人与动物皮肤黏膜内存在的菌株会致使多种化脓性的感染,例如菌血症、痈、疖、脓肿等,其还可导致烫伤样的皮肤综合征与毒性的休克综合征等[2]。
葡萄球菌为较为常见的化脓性球菌,同时也是医源性感染中较为常见的细菌。
1.资料与方法1.1 一般资料选取2014年2月至2016年1月期间,我所检查的葡萄球菌属感染患者31例,其中男性患者16例,女性患者15例,患者年龄15至75岁,平均(43.9±15.1)岁。
31例患者中皮肤软组织感染11例,内脏器官感染10例,全身感染8例,尿路感染2例。
1.2 标本采集根据患者发生感染的疾病的不同,可采集其伤口分泌物、脓汁、渗出液、血液、痰液、粪便及脑脊液等[3]。
因葡萄球菌广泛的分布在人体皮肤及黏膜上,因此在采集时需注意避免患者病灶周围的正常菌群的污染。
2.检验2.1 标本的直接检查取患者的痰、渗出物、脓汁及脑脊液在进行离心后取其沉渣进行涂片,经过革兰染色后进行镜检,若在检查后发现革兰阳性菌,即可初步报告为疑为葡萄球菌[4]。
因在正常情况下,关节穿刺液、脑脊液等为无菌的,当检查时发现细菌则具有重要的价值,其他的体液标本中在检查时发现炎性细胞同样具有参考价值。
医学微生物学 实验考试
![医学微生物学 实验考试](https://img.taocdn.com/s3/m/e77e8be4a300a6c30d229f0a.png)
单染色1、涂片:用接种环沾取细菌培养液,在玻片上涂成直径约为1.0cm 的菌膜。
(Tip:菌量不宜过多,以免标本过厚,影响染色结果)2、干燥:最好在室温中自然干燥,也可在远离火焰上方微微烘干,但切勿靠近火焰以免烤焦标本。
(注意:如烘干,以玻片不烫手为宜。
)3、固定:火焰固定。
将标本涂片在火焰外层内来回通过3次。
固定的作用一是杀死细菌,同时可改变对染料的通透性(因为活的细菌一般不让各种染料进入细胞内)。
再者使细菌与玻片粘附牢固,三是使细菌蛋白凝固后保持其固有的外形。
4、染色:滴加结晶紫、稀释复红或碱性美兰液1~2滴,使染液盖满涂膜,1~2分钟后,用细小流水洗去多余的染液,在空气中自然干燥或用吸水纸轻轻吸干(切忌拖、拉)。
5、镜检结果:用结晶紫染色的细菌葡萄球菌、大肠杆菌呈紫色;用复红染色者均为红色;用碱性美兰染色者均为蔚蓝色。
复染革兰染色法过程:初染:结晶紫1分钟媒染:碘液1分钟脱色:95%酒精半分钟复染:稀释复红半分钟每步染色完后均需水洗。
葡萄球菌的革兰染色变形杆菌的革兰染色链球菌的革兰染色紫碘酒红一一半半球阳杆阴阳紫阴红注:脑淋卡白抗孢除外过程1、涂片:用棉签或接种环沾取细菌培养液,在玻片上涂成直径约为1.0cm 的菌膜。
2、干燥:最好在室温中自然干燥,也可在远离火焰上方微微烘干。
但切勿靠近火焰以免烤焦标本。
3、固定:火焰固定。
4、革兰染色过程:初染:结晶紫1分钟媒染:碘液1分钟脱色:95%酒精半分钟复染:稀释复红半分钟5、镜检:球阳杆阴阳紫阴红化脓性球菌分离鉴定化脓性球菌主要有葡萄球菌、链球菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等。
触酶实验原理:产生过氧化氢酶的细菌,能催化过氧化氢生成水和氧分子-出现气泡。
操作步骤:在洁净玻片上滴一滴生理盐水,用接种环取少许细菌培养物与生理盐水中乳磨均匀,然后加3%过氧化氢数滴;或直接滴加3%过氧化氢于不含血液的细菌培养物中,立即观察结果。
结果观察:有大量气泡产生者为阳性。
血浆凝固酶试验
![血浆凝固酶试验](https://img.taocdn.com/s3/m/5510ebe26f1aff00bed51e3e.png)
肺炎链球菌 +(黄色) +(澄清)
血浆凝固酶试验
凝固酶(coagulase) 游离凝固酶(试管法)示教 结合凝固酶(玻片法)
• 致病性的金黄色葡萄球菌产生凝固酶,所以血 浆凝固酶实验是鉴别葡萄球菌有无致病性的重 要指标
血浆凝固酶试验
1
生理盐水
生理盐水
2
金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌
3
血浆
实验报告 • 凝固酶试验(玻片法) • 咽部细菌培养与鉴定
葡萄球菌鉴别
金黄血素
+
血浆凝固酶试验 +
耐热DNA酶试验 +
甘露醇发酵试验 +
致病力
强
表皮葡萄球菌 白色 弱或无
• 菌落小、半透明 、表面 光滑、边缘整齐
• G+ 、链状
完全溶血 乙型链球菌
不溶血
丙型链球菌
草绿色不完全溶血环
菊糖发酵试验 胆汁溶菌试验
甲型链球菌 -(紫色) -(混浊)
化脓性球菌 革兰阳性菌:葡萄球菌,链球菌,肺炎链球菌 革兰阴性菌:脑膜炎奈瑟菌, 淋病奈瑟菌
staphylococcus
Streptococcus
S. pneumoniae
NN..mmeenniinnggitiitdidisis N. gonorrhoeae
1.化脓性球菌培养特性
• 菌落形态
葡萄球菌:中等大小,圆形,表面光滑湿润,不 透明,产各种色素
链球菌:针尖大小的微小菌落,圆形,表面光滑 湿润,半透明
• 溶血现象 葡萄球菌:致病性葡萄球菌多数是-溶血
链球菌: 产生不同的溶血现象
• 示教1 溶血现象平板
2.化脓性球菌的分离鉴定
血液标本的细菌学检验微生物学实验
![血液标本的细菌学检验微生物学实验](https://img.taocdn.com/s3/m/420b439ded3a87c24028915f804d2b160b4e864e.png)
实验十、血液标本的细菌学检验【器材】发已增菌血液标本1套/桌(1#、2#、3#、4#),发血琼脂平板1个/人【分离培养】(仅做有氧培养)标本→分区划线血平板,35℃18—24h观察结果。
【形态学检查】(每人做)(1#尿标本)涂片,革兰染色镜检。
【鉴定】1.观察菌落形态:2.涂片、革兰染色镜检:3.生化试验1)G+C→触酶:①触酶阳性,为葡萄C→血浆凝固酶试验:阳性为金葡,阴性为表葡②触酶阴性,为链C2)G-b→氧化酶①氧化酶阳性,为非发酵菌,O-F,铜绿水溶性色素→绿脓b②氧化酶阴性,肠道杆菌→KIA、MIU→初步鉴定→血清学试验最终鉴定结合凝固酶试验、胆汁溶菌试验、氧化酶试验鉴定。
【实验结果】(1#尿标本)1.观察菌落形态:在血平板上完全透明的溶血环(β溶血)2.直接镜检,G+葡萄状球菌葡萄状球菌3.生化试验1)触酶试验(+)2)血浆凝固酶试验(+)鉴定结果:1#血液标本直接涂片革兰染色观察:G+球菌,单个或呈葡萄状排列;再经过血平板分离培养,观察菌落特征,革兰染色,生化鉴定(触酶+、血浆凝固酶+)鉴定1#血液标本中的细菌为金黄色葡萄球菌。
【实验讨论】1.血液标本的采集:①采血时间和次数:血标本一般应在病人发热初期或根据不同的发热情况在未用抗生素前采集作细菌培养,为提高阳性率常需连续三次采血进行血培养。
②血部位及抽血量:一般抽取肘静脉血做血培养。
采血量为成人一次5ml~10ml,儿童为3-5ml。
抽取的血液立即以无菌要求注入血培养瓶中,迅速送检。
③采集血标本和接种时要严格无菌操作,避免杂菌污染。
④根据菌血症和脓毒症所引起的疾病,还可采集不同部位的分泌物(痰液和脓液等)标本做涂片、染色和镜检或培养。
2.血液标本采集注意事项:血液标本的细菌学检验,一般不用抗凝剂(因为氟化钠、EDTA、枸橼酸钠可对细菌不利,肝素目前尚未报导有影响)近年来认为在培养中加入0.03-0.05%聚茴香脑磺酸钠有抑制血清中的杀菌物质作用,效果较好。
细菌常用的几种试验
![细菌常用的几种试验](https://img.taocdn.com/s3/m/1a4ddf0d05087632301212b8.png)
CAMP试验
1.原理:B群链球菌在血平板上能产生CAMP因子, 可促使金黄色葡萄球菌β 溶血素的活性,故在血 平板上两种细菌交界处溶血能力增强,形成箭头 状透明状溶血区。其他链球菌一般不产生CAMP 因子,故此试验可作为B群链球菌的鉴定指标之 一。
2.方法:在血平板上,用金黄色葡萄球菌划一条 横线,再于该直线相距5mm左右用被检菌接种一 或两条垂直短线,35℃24小时观察结果。
抗酸染色
1、初染:石炭酸复红加热染色3-5分钟,水 洗,甩干;
2、脱色:3%盐酸酒精脱色30~60秒,水 洗,甩干;
3、复染:碱性美兰60秒,水洗,干后镜检。 4、结果判定:抗酸菌呈红色 ,非抗酸菌呈
兰色 5、意义:用于鉴别抗酸菌与非抗酸菌
抗酸染色---抗酸菌
氧化酶试验
原理:具有氧化酶的细菌,首先使细胞色素C氧 化,再由氧化型细胞色素C使对苯二胺氧化,生 成有色的醌类化合物。
2.方法:将待检菌接种硝酸盐培养基中,35℃24小时, 加入硝酸盐还原试剂甲液(对氨基苯磺酸和醋酸)和乙液 ( a-萘胺和醋酸)各一滴后观察结果。
3.判断结果:呈现红色为阳性。若不出现红色,则加入少 许锌粉,仍不出现红色者为阳性,出现红色为阴性。
4.意义:肠杆菌科细菌,硝酸盐还原试验阳性
3.在杆菌肽周围出现明显抑菌环 〉10mm 为阳性,则被推断为A群链球菌,〈10mm 为阴性,为其他群的链球菌。
硝酸盐还原试验
1.原理:某些细菌能还原培养基中的硝酸盐生成亚硝酸盐、 氨和氮等。亚硝酸盐与醋酸作用生成亚硝酸,亚硝酸再与 对氨基苯磺酸作用形成重氮苯磺酸,它可与a-萘胺结合成 红色的N-a-奈氨苯磺酸。
方法:取一洁净的滤纸一小块,涂抹菌苔少许, 加一滴氧化酶试剂(对苯二胺溶液)于菌上,观 察颜色变化。
细菌检验技术考试题+参考答案
![细菌检验技术考试题+参考答案](https://img.taocdn.com/s3/m/aad7007f68eae009581b6bd97f1922791788be45.png)
细菌检验技术考试题+参考答案1、革兰染色法可用于:A、鉴别细菌B、协助临床选择用药C、细菌的分类D、解释发病机制E、以上均可答案:E2、普通斜面培养保藏菌种一般多久传代一次:A、1~2个月B、2年C、1~2周D、1年E、3~6个月答案:E3、含有细菌所需要最基本的营养成分,可供大多数细菌生长的培养基是A、选择培养基B、鉴别培养基C、营养培养基D、特殊培养基E、基础培养基答案:E4、ONPG试验主要是利用迟缓发酵乳糖的菌株缺乏:A、β-半乳糖苷酶B、β-半乳糖苷渗透酶C、乳酸脱氧酶D、半乳糖酶E、半乳糖渗透酶答案:B5、不染色标本直接镜检,可观察到细菌的:A、大小B、菌毛C、颜色D、结构E、动力6、哪一组实验方法常用于细菌动力检测:A、斜面培养法,墨汁负染法B、相差显微镜观察法,鞭毛染色法C、悬滴法,革兰染色D、半固体培养法,芽胞染色法E、斜面培养法,抗酸染色法答案:B7、血培养时成人一般每次采集3-10ml,最佳采血量是:A、8-10mlB、3-5mlC、5-10mlD、3-6mlE、5-8ml答案:A8、观察细菌内部的超微结构需要采用:A、透射电镜B、荧光显微镜C、偏光显微镜D、暗视野显微镜E、显微镜油镜答案:A9、下列不是细菌生长所需营养物质的是:A、蛋白质B、血液C、肉浸液D、琼脂E、牛肉膏答案:D10、列哪种细菌荚膜肿胀试验为阳性:A、脑膜炎奈瑟菌B、金黄色葡萄球菌C、大肠埃希菌D、肺炎链球菌E、结核分枝杆菌11、革兰染色中结晶紫溶液起什么作用:A、脱色剂B、固定剂C、复染剂D、媒染剂E、初染剂答案:E12、枸椽酸盐试验阳性结果颜色是:A、紫色B、孔雀蓝色C、红色D、黄色E、黑色答案:B13、荚膜染色方法较多,但都属于什么方法染色:A、革兰氏染色B、复红染色法C、特殊染色法D、抗酸染色法E、单染法答案:C14、H2S试验中细菌分解的是 :A、色氨酸B、赖氨酸C、胱氨酸D、组氨酸E、丝氨酸答案:C15、哪一种显微镜主要用于未染色的活菌的检查:A、荧光显微镜B、倒置显微镜C、暗视野显微镜D、电子显微镜E、普通光学显微镜16、API20E用于鉴定哪类细菌:A、肠杆菌科B、其他革兰阴性杆菌C、葡萄球菌D、厌氧菌E、奈瑟菌属答案:A17、显微镜油镜镜头的放大倍数是:A、1000B、40C、50D、100E、10答案:D18、靛基质试验主要是测定细菌分解蛋白胨中的:A、苯丙氨酸B、色氨酸C、鸟氨酸D、胱氨酸E、赖氨酸答案:B19、巧克力琼脂平板属于:A、特殊培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、选择培养基E、基础培养基答案:B20、Optochin试验不正确的是;A、用于肺炎链球菌与其他链球菌的鉴别B、是一种药物敏感试验C、一般用于指导临床用药D、与胆汁溶菌试验意义相同E、肺炎链球菌对Optochin敏感21、临床对血培养阳性结果的处理采用分级报告制度的是:A、五级报告制度B、四级报告制度C、三级报告制度D、一级报告制度E、二级报告制度答案:C22、通过革兰染色革兰阴性菌(G-)被染为什么颜色:( )A、红色B、黄色C、蓝色D、绿色E、紫色答案:A23、培养肠道致病菌常用的选择性培养基是:A、普通平板B、糖发酵管C、巧克力平板D、血平板E、SS培养基答案:E24、 SS中的鉴别用糖为:A、葡萄糖B、麦芽糖C、乳糖D、蔗糖E、以上均不是答案:C25、微生物自动培养系统通过连续监测细菌或真菌代谢引起的哪项指标的变化,来判断标本是否存在微生物:A、二氧化碳浓度B、PHC、吸光度D、气压变化E、氧气浓度答案:A26、血浆凝固酶用于下列哪种细菌的鉴定:A、金黄色葡萄球菌B、甲型溶血性链球菌C、腐生葡萄球菌D、表皮葡萄球菌E、乙型溶血性链球菌答案:A27、有关细菌培养基的说法,哪项是错误的:A、观察细菌的动力用半固体培养基B、固体培养基中的琼脂具有重要的营养价值C、葡萄糖蛋白胨水为常用的鉴别培养基D、固体培养基中的琼含量为2%~3%E、半固体培养基中的琼脂含量为0.2%~0.5% 答案:B28、鞭毛染色是属于什么染色法:A、抗酸染色法B、革兰氏染色C、复红染色法D、单染法E、特殊染色法答案:E29、与细菌动力无关的是:A、半固体穿刺接种B、鞭毛染色C、革兰染色D、悬滴标本镜检E、H抗原检测答案:C30、关于CAMP试验错误的是:A、使用羊血或马血平板B、使用产β-溶血素的金黄色葡萄球菌C、两划线交界处出现圆形溶血区为阳性D、B群链球菌该试验阳性E、试验中应使用新鲜培养菌答案:C31、进行细菌的分群常用:A、小牛血清B、多价血清C、单价血清D、因子血清E、人血浆答案:B32、观察细菌物形态和动力一般常用悬滴法或压滴法,而这种方法需要如何染色:A、姬姆萨染色B、复染法C、不染色D、革兰氏染色E、单染法答案:C33、细菌在半固体培养基培养时可看到细菌只沿穿刺线生长,请问此细菌可能是:A、周毛菌B、双毛菌C、无鞭毛的细菌D、单毛菌E、丛毛菌答案:C34、血培养时采血量一般为血培养瓶中肉汤培养基量的:A、1/4-1/3B、1/6-1/5C、1/4-1/6D、1/3-1/2E、1/5-1/4答案:E35、革兰染色的关键步骤是:A、涂片、固定B、酸性复红复杂C、卢戈氏碘液复染D、95%酒精脱色E、结晶紫初染答案:D36、自动化微生物药敏系统进行药敏检测的实质是:A、K-B纸片扩散法B、琼脂稀释法C、E-test法D、联合药敏试验E、微量肉汤稀释法答案:E37、用于快速鉴定迟缓发酵乳糖菌株的试验是:A、MR试验B、Optochin试验C、ONPG试验D、V-P试验E、O-F试答案:C38、采用悬滴法检查不染色标本时在显微镜下若看见细菌在液体中能定向地从一处泳到另一处,这称为:A、分子运动与布朗运动B、分子运动C、布朗运动D、分子运动或布朗运动E、真正运动答案:E39、糖分解代谢试验不包括:A、甲基红试验B、V-P试验C、吲哚试验D、七叶苷试验E、ONPG试验答案:C40、检查菌体不同结构成分及抗原与特异性抗体结合形成复合物时须用何种显微镜:A、荧光显微镜B、暗视野显微镜C、倒置显微镜D、普通显微镜E、照像显微镜答案:A41、氧化酶试验阳性对照菌常选用:A、铜绿假单胞菌B、大肠埃希菌C、变形杆菌D、伤寒沙门菌E、福氏志贺菌答案:A42、实验室短期保藏菌种可用哪种方法?A、冷冻干燥保藏法B、液氮超低温保藏法C、液状石蜡保藏法D、干燥保藏法E、定期移植保藏法答案:E43、证明细菌具有鞭毛结构的常用方法是:A、半固体培养法B、普通琼脂培养法C、抗酸染色法D、液体培养法E、革兰染色法答案:A44、进行半固体培养基的细菌接种,不需要:A、接种环B、菌种C、接种针D、培养基E、酒精灯答案:A45、细菌染色过程中固定的目的有:A、使细菌蛋白质变性B、使涂片不易脱落C、更易结合染料D、以上都是E、以上都不是答案:D46、保藏的菌种每移种几代需作一次鉴定?A、4代B、5代C、2代D、3代E、1代答案:D47、芽胞、鞭毛、荚膜及异染颗粒等的染色需用什么染色法:A、美兰染色B、革兰氏染色C、复红染色D、特殊染色E、抗酸染色答案:D48、细菌学形态学检查中最常用最重要的染色方法是:A、暗视野墨汁染色法B、革兰染色法C、抗酸性染色法D、美兰单染色法E、特殊染色法答案:B49、麦康凯琼脂属于:A、选择培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、特殊培养基E、基础培养基答案:A50、疱肉培养基属于:A、鉴别培养基B、营养培养基C、基础培养基D、特殊培养基E、选择培养基答案:D51、细菌生长繁殖中所需营养物质,其中葡萄糖、淀粉、甘露醇等属于哪一类物质 :A、维生素类B、生长因素类C、无机盐类D、碳源E、氮源答案:D52、甲基红试验和VP试验阳性表明被检菌具有以下哪一特性A、分解乳酸产酸产气B、分解葡萄糖生成丙酮酸C、生成甲醇、甲醛D、苯丙酮酸E、以上全部答案:B53、靛基质试验的主要试剂为:A、二甲基对苯二胺B、对重氨基苯磺酸C、氨基苯甲醛D、四甲基对苯二胺E、对二甲氨基甲醛答案:E54、染色标本时第一步是涂片,一般方法是 :A、在载玻上直接将菌胎涂上B、在载玻片上加一滴生理盐水将菌苔在盐水中均匀涂布C、在载玻片上加一滴蒸镏水,涂布D、在载玻片上加一滴酒精,涂布E、在载玻片上加一滴菌苔就在火焰上烤干答案:B55、下列不属于细菌生化反应试验的是:A、甲基红试验B、V—P试验C、糖发酵试验D、外斐反应E、靛基质试验答案:D56、触酶试验阴性对照菌常选用:A、微球菌B、铜绿假单胞菌C、葡萄球菌D、链球菌E、大肠埃希菌答案:D57、克氏双糖铁中的指示剂为:A、酚红B、中国蓝C、中性红D、酸性复红E、溴麝香草酚兰答案:A58、克氏双糖铁(KIA)属于:A、基础培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、选择培养基E、特殊培养基答案:C59、细菌培养基中最常用的凝固物质为:A、聚乙二醇B、明胶C、.琼脂D、血清E、卵白蛋白答案:C60、全自动微量稀释法试验系统检测细菌生长采用:A、压力变化B、浊度变化C、颜色变化D、PH值变化E、释放的二氧化碳答案:B61、氧化酶试验的主要试剂为:A、盐酸四甲基对苯二胺B、对二甲氨基苯甲醛C、氨基苯甲醛D、3%H2O2E、苯丙酮酸答案:A62、苯丙氨酸脱氨酶试验出现以下哪种颜色为阳性:A、蓝色B、黄色C、红色D、黑色E、绿色答案:E63、一般检查细菌形态最常用的是 :A、普通光学显微镜B、相差显微镜C、电子显微镜D、荧光显微镜E、暗视野显微镜答案:A64、甲基红试验用的培养基应是:A、碱性蛋白胨水B、半固体C、肉汤D、葡萄糖蛋白胨水E、蛋白胨水答案:D65、细菌的革兰染色性不同主要是因为:A、致病性不同B、形态不同C、营养需要不同D、细菌细胞壁结构不同E、生理功能不同答案:D66、检测靛基质的实验又称 :A、尿素酶试验B、甲基红试验C、糖发酵试验D、枸橼酸盐利用试验E、吲哚试验答案:E67、平板划线分离细菌成功的标志在于:A、1区与末区不相连B、不能划破琼脂C、有明显的分区划线D、培养后有足够的单个菌落E、绝对不能有污染菌生长答案:D68、在观察有折光力的微生物或细胞时,应用何种显微镜:A、倒置显微镜B、暗视野显微镜C、荧光显微镜D、普通显微镜E、照像显微镜答案:B69、通过革兰染色革兰阳性菌(G+)被染为什么颜色:( )A、红色B、黄色C、蓝色D、绿色E、紫色答案:E70、下列哪种试验是以金黄色葡萄球菌为载体:A、直接凝集试验B、间接血凝试验C、胶乳凝集试验D、协同凝集试验E、环状沉淀试验答案:D71、糖发酵管属于:A、鉴别培养基B、特殊培养基C、选择培养基D、营养培养基E、基础培养基答案:A72、下列微生物染色方法中,正确的是:A、新生隐球菌查荚膜——革兰染色B、钩端螺旋体——镀银染色C、沙眼衣原体——抗酸染色D、结核分枝杆菌——Giemsa 染色E、立克次体——碘液染色答案:B73、血琼脂平板属于:A、选择培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、特殊培养基E、基础培养基答案:B74、玻片凝集试验常用于下列哪种细菌的分型鉴定:A、伤寒沙门菌B、霍乱弧菌C、脑膜炎奈瑟菌D、肺炎链球菌E、以上均可答案:E75、关于标本直接涂片的意义错误的是:A、能指导临床医师选择合适抗菌药物B、及时发现标本中存在的病原微生物C、能排除不合格的待检临床标本D、能指导选择合适的培养基E、快速地鉴定细菌答案:E76、“菌落”是指:A、由一个细菌在培养基上生长繁殖而形成的细菌集团B、多种细菌在培养基上混合生长形成的团块C、在细胞培养基中形成的空斑D、从培养基上脱落的细菌E、一个细菌细胞答案:A77、枸橼酸盐利用试验中,提供氮源的物质为:A、铵盐B、多肽C、肌酐D、氨基酸E、蛋白胨答案:A78、用显微镜油镜观察标本最合适的亮度是:A、缩小光圈亮度B、减弱C、稍强D、很强E、稍弱答案:D79、氨基酸和蛋白质代谢试验不包括:A、氨基酸脱羧酶试验B、苯丙氨酸脱氨酶试验C、七叶苷试验D、硫化氢试验E、吲哚试验答案:C80、革兰染色的操作步骤是:A、结晶紫→复红→乙醇→碘液B、结晶紫→乙醇→复红→碘液C、复红→碘液→乙醇→复红D、复红→乙醇→碘液→结晶紫E、结晶紫→碘液→乙醇→复红答案:E。
实验三_球菌的培养和鉴定_I
![实验三_球菌的培养和鉴定_I](https://img.taocdn.com/s3/m/c70d8321f01dc281e43af040.png)
表面
葡萄球菌 葡萄球菌
乙型 链球菌
甲型 肺炎 链球菌 链球菌
β溶血环 无溶血环 β 溶血环 α溶血环 α溶血环
血浆凝固酶试验和甘露醇发酵试验可区分致病性 和非致病性葡萄球菌
临床微生物学教研室
实验内容一 生化反应结果观察
2.菊糖发酵试验 【操作】观察第二次课接种的菊糖发酵试验生化管的颜色
变化,大多数肺炎双球菌可以分解菊糖,菊糖发酵产酸, 指示剂呈酸性反应,发酵管由黄色变为紫红色为阳性。
【结果】用以区分肺炎链球菌和甲型链球菌,肺炎链球菌 为阳性,甲型链球菌为阴性。
鉴定试验
次
小白鼠毒力试验
生化结果观察 荚膜染色
结果讨论与分析
第三次
临床微生物学教研室
教学目标与要求
了解:
脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的形态和染色特性
理解:
葡萄球菌属和链球菌属的主要生化反应原理
掌握:
1.葡萄球菌属、链球菌属的检验程序 2.葡萄球菌属、链球菌属的分离培养与鉴定方法
临床微生物学教研室
涂片
接种环
固定
自然干燥
干干燥燥 镜镜检检
复红
复染 30s
95%
脱色30s 乙醇
结晶紫
初染 1min
媒染
碘液
1min
二、将五个标本分别接种至血平板 (分区划线法)
临床微生物学教研室
小结
五株待测菌的主要鉴定结果
性状 革兰染色 菌落、溶血环
1
+,球状, 不规则
2
3
+,球状, +,成双 不规则 或呈链状
4
临床微生物学和微生物检验
实验三 球菌的培养和鉴定Ⅰ
教 员: 顾 江 单 位: 临床微生物学教研室 E-mail: jianggu2012@
血浆凝固酶实验的操作说明
![血浆凝固酶实验的操作说明](https://img.taocdn.com/s3/m/d8f26e63af1ffc4ffe47acd7.png)
血浆凝固酶实验的操作说明
核心提示:CM304 冻干血浆用于金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验的操作说明
北京陆桥CM304冻干血浆,用于金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验,操作说明如下:
①在Baird-Parker平板上挑取可疑待测单菌落,或将可疑菌接种营养琼脂平板上纯化,转接至含5mlBHI液体培养基的试管中,36±1℃培养18-24h;
②吸取0.5ml无菌水到CM304冻干血浆西林瓶中,摇匀使之溶解均匀,再加入上述新鲜BHI 培养物0.2-0.3ml,混合均匀后放置36±1℃培养。
③间隔每0.5h观察一次结果,直至6h结束,若出现凝固(凝固体积大于原体积一半)即待测菌血浆凝固酶为阳性,否则为阴性。
注意:测试时须同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的新鲜肉汤培养物作为对照(建议阳性菌株可选择金黄色葡萄球菌标准菌A TCC6538,阴性菌株可选择表皮葡萄球菌或白色葡萄球菌标准菌)。
临床医学检验技术(士):革兰阳性球菌必看考点三
![临床医学检验技术(士):革兰阳性球菌必看考点三](https://img.taocdn.com/s3/m/0b7dbd7a66ec102de2bd960590c69ec3d5bbdb20.png)
临床医学检验技术(士):革兰阳性球菌必看考点三1、单选A群链球菌的主要致病物质不包括()A.肠毒素B.M蛋白C.致热外毒素D.链激酶E.透明质酸酶正确答案:A参考解析:A群链球菌的主要致病物质透明质酸酶、链激酶(江南博哥)、链道酶、M蛋白、黏附素、荚膜、致热外毒素、链球菌溶素等。
2、单选下列哪项不是肺炎链球菌的特性()A.革兰阳性B.具有荚膜C.胆汁溶菌试验阳性D.完全溶血E.可引起大叶性肺炎正确答案:D参考解析:肺炎链球菌为革兰阳性双球菌,是人类鼻咽部的正常菌群,多数不致病或致病力弱,仅少数有致病力。
在机体抵抗力降低时,主要引起大叶性肺炎。
在体内或在含血清的培养基中能形成荚膜。
肺炎链球菌主要应与甲型溶血性链球菌鉴别。
常用胆汁溶菌试验、菊糖发酵和奥普托辛试验,必要时可做小鼠毒力试验。
3、单选下列哪种细菌是医院感染最常见的致病菌()A.肺炎链球菌B.腐生葡萄球菌C.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌D.乙型溶血性链球菌E.脑膜炎奈瑟菌正确答案:C参考解析:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是医院感染最常见的致病菌。
4、单选镜检为革兰阳性球菌,呈葡萄串状排列的是()A.葡萄球菌B.乙型溶血性链球菌C.肺炎链球菌D.脑膜炎奈瑟菌E.甲型溶血性链球菌正确答案:A参考解析:1.葡萄球菌属属革兰染色阳性,呈圆球形,直径0.5~1.5μm,不规则成堆排列,形似葡萄串状,在脓汁、肉浸液培养物中,可见单个、成对或短链排列。
2.肺炎链球菌为革兰阳性球菌。
呈矛尖状,成双排列,有时呈短链状。
3.脑膜炎奈瑟菌为革兰阴性双球菌,菌体呈肾形,成对排列,坦面相对,菌体直径0.6~1.5μm,在患者的脑脊液中位于中性粒细胞内。
5、单选Optochin试验阳性的细菌是()A.金黄色葡萄球菌B.草绿色链球菌C.肺炎链球菌D.脑膜炎奈瑟菌E.淋病奈瑟菌正确答案:C参考解析:Optochin试验是肺炎链球菌和草绿色链球菌的鉴别试验,肺炎链球菌的Optochin敏感试验阳性。
血浆凝固酶可以革兰染色和血浆凝固酶实验
![血浆凝固酶可以革兰染色和血浆凝固酶实验](https://img.taocdn.com/s3/m/4eb37b362cc58bd63086bdcb.png)
血浆凝固酶可以革兰染色和血浆凝固酶实验革兰染色和血浆凝固酶实验实验目的:掌握革兰染色法的原理以及实验步骤;理解血浆凝固酶试验的原理;掌握血浆凝固酶试验的操作方法以及结果判断。
试验仪器及试剂:仪器:载玻片、特种铅笔、试管夹、酒精灯、打火机、接种环、染色盘、显微镜试剂:龙胆紫溶液、碘溶液、脱色液、沙黄溶液、生理盐水、蒸馏水、菌种、金黄色葡萄球菌培养物、EDTA抗凝兔血浆等实验原理:革兰染色:细菌的不同显色反应是由于细胞壁对乙醇的通透性和抗脱色能力的差异,主要是肽聚糖层厚度和结构决定的。
经结晶紫染色的细胞用碘液处理后形成不溶性复合物,乙醇能使它溶解,所以染色的前二步结果是一样的,但在G+细胞中,乙醇还能使厚的肽聚糖层脱水,导致孔隙变小,由于结晶紫和碘的复合物分子太大,不能通过细胞壁,保持着紫色。
在G-细胞中,乙醇处理不但破坏了胞壁外膜,还可能损伤肽聚糖层和细胞质膜,于是被乙醇溶解的结晶紫和碘的复合物从细胞中渗漏出来,当再用衬托的染色液复染时,显现红色。
红色染料虽然也能进入已染成紫色的G+细胞,但被紫色盖没,红色显示不出来。
血浆凝固酶试验:致病的葡萄球菌可分泌游离型凝固酶到菌体外,游离型凝固酶能被血浆中的协同因子激活为凝酶样物质,将液态的纤维蛋白原转变为固态的纤维蛋白而使血浆凝固。
实验步骤:革兰染色:1.标记:用特种铅笔在载玻片上画一个小圈,用来大致确定菌液滴的位置。
2.涂片:滴加一小滴无菌生理盐水与洁净载玻片上,用打火机点燃酒精灯灼烧接种环,待接种环冷却后在培养基中取细菌,然后将菌落或菌苔轻轻涂布散开(菌液标本可直接涂在载玻片上),涂片完成消毒接种环,熄灭酒精灯。
3.干燥:涂片后在室温下自然干燥,也可在酒精灯上略加温,使之迅速干燥,但勿靠近火焰(火焰上方15cm左右,可用手背试温,要求以玻片背面触及手背皮肤热而不烫为宜)4.固定:用高温进行固定,即用夹子夹取载玻片一端,标本面朝上,在酒精的外焰快速来回移动3~4次,共约3~4秒,放置待冷却后染色5.染色:(1)初染:龙胆紫溶液染色10s后用蒸馏水冲洗,沥去水分(2)煤染:碘液染色10s后用蒸馏水冲洗,沥去水分(3)脱色:脱色剂脱色10-20s后用蒸馏水冲洗,沥去水分(4)复染与水洗:沙黄溶液染色10s后用蒸馏水冲洗,自然干燥后镜检6.显微镜观察血浆凝固酶试验:1.取一张载玻片做好标记,一侧滴加生理盐水作为对照,一侧滴加兔血浆2.接种环灼烧消毒,待冷却后用接种环挑取金黄色葡萄球菌在生理盐水侧涂匀;接种环灼烧消毒,待接种环冷却后再跳去金黄色葡萄球菌在兔血浆侧涂匀,5-10秒内观察结果实验结果:实验分析:革兰染色:1、涂片时动作要轻柔,使其薄而均匀,动作过大会改变细菌的排列形式2、固定这一步骤能杀死细菌,固定细菌结构,保证菌体能牢固地黏附在载玻片上,以免水洗时被水冲掉,并且能改变菌体对染料的通透性。
项目四金黄色葡萄球菌检测-革兰氏染色
![项目四金黄色葡萄球菌检测-革兰氏染色](https://img.taocdn.com/s3/m/08a2c20143323968011c9281.png)
检样25g(ml)+225ml7.5%氯化钠肉汤
பைடு நூலகம்
外膜
-
脂蛋白 -
脂多糖 -
革兰阴 性菌
11%22% + + +
1、G+细菌的细胞壁。厚而致密,由肽聚糖 和磷壁酸组成,以金黄色葡萄球菌为代表 。
2、 G-细菌的细胞壁。分两层,外层为脂蛋 白和脂多糖层,内层为肽聚糖层,以大肠 杆菌为代表。
三、常用的染色方法
1、染色的基本原理 主要是通过细胞及细胞物质对燃料的毛细现象、渗 透、吸附等物理因素,以及各种化学反应进行的。
灰色到黑玉色,圆 形,光滑突起,湿润, 边缘常为淡色(米黄色 或灰色),周围为一混 浊带,在其外缘常有一 透明圈。
Why?
鉴定-革兰氏染色镜检
革兰氏阳性菌,球形,组成葡萄状,无芽胞, 无荚膜,直径约为0.5 μm~1 μm
鉴定-血浆凝固酶试验 试管法
血浆凝固酶试验:挑取、Baird-Parker 平板或血 平板上可疑菌落1 个或以上,分别接种到5 mL BHI和营养琼脂小斜面,36 ℃±1 ℃培养18 h~ 24 h。吸取1:4兔血浆0.5ml放入灭菌试管中,再 加入培养后的的BHI肉汤0.5ml,振荡均匀,放在 36℃±1 ℃水浴锅,每半小时观察一次,至少观察6小时。
2、染料种类 • 染料按其组成成分可以分为天然染料和人工染
料 • 染料按其电离后染料离子所带电荷的性质分为
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【革兰染色和血浆凝固酶实验】血浆凝固酶
可以
革兰染色和血浆凝固酶实验实验目的:
掌握革兰染色法的原理以及实验步骤;
理解血浆凝固酶试验的原理;
掌握血浆凝固酶试验的操作方法以及结果判断。
试验仪器及试剂:
仪器:载玻片、特种铅笔、试管夹、酒精灯、打火机、接种环、染色盘、显微镜试剂:龙胆紫溶液、碘溶液、脱色液、沙黄溶液、生理盐水、蒸馏水、菌种、金黄色葡萄球菌培养物、EDTA抗凝兔血浆等实验原理:
革兰染色:细菌的不同显色反应是由于细胞壁对乙醇的通透性和抗脱色能力的差异,主要是肽聚糖层厚度和结构决定的。
经结晶紫染色的细胞用碘液处理后形成不溶性复合物,乙醇能使它溶解,所以染色的前二步结果是一样的,但在G+细胞中,乙醇还能使厚的肽聚糖层脱水,导致孔隙变小,由于结晶紫和碘的复合物分子太大,不能通过细胞壁,保持着紫色。
在G-细胞中,乙醇处理不但破坏了胞壁外膜,还可能损伤肽聚糖层和细胞质膜,于是被乙醇溶解的结晶紫和碘的复合物从细胞中渗漏出来,当再用衬托的染色液复染时,显现红色。
红
色染料虽然也能进入已染成紫色的G+细胞,但被紫色盖没,红色显示不出来。
血浆凝固酶试验:致病的葡萄球菌可分泌游离型凝固酶到菌体外,游离型凝固酶能被血浆中的协同因子激活为凝酶样物质,将液态的纤维蛋白原转变为固态的纤维蛋白而使血浆凝固。
实验步骤:
革兰染色:1. 标记:用特种铅笔在载玻片上画一个小圈,用来大致确定菌液滴的位置。
2. 涂片:滴加一小滴无菌生理盐水与洁净载玻片上,用打火机点燃酒精灯灼烧接种环,待接种环冷却后在培养基中取细菌,然后将菌落或菌苔轻轻涂布散开(菌液标本可直接涂在载玻片上),涂片完成消毒接种环,熄灭酒精灯。
3. 干燥:涂片后在室温下自然干燥,也可在酒精灯上略加温,使之迅速干燥,但勿靠近火焰(火焰上方15cm左右,可用手背试温,要求以玻片背面触及手背皮肤热而不烫为宜)
4. 固定:用高温进行固定,即用夹子夹取载玻片一端,标本面朝上,在酒精的外焰快速来回移动3~4次,共约3~4秒,放置待冷却后染色
5. 染色:(1)初染:龙胆紫溶液染色10 s 后用蒸馏水冲洗,沥去水分(2)煤染:碘液染色10 s 后用蒸馏水冲洗,沥去水分(3)脱色:脱色剂脱色10-20 s 后用蒸馏水冲洗,沥去水分(4)复染与水洗:沙黄溶液染色10 s 后用蒸馏水冲洗,自然干燥后镜检
6.显微镜观察血浆凝固酶试验:1. 取一张载玻片做好标记,一侧滴加生理盐水作
为对照,一侧滴加兔血浆 2. 接种环灼烧消毒,待冷却后用接种环挑取金黄色葡萄球菌在生理盐水侧涂匀;
接种环灼烧消毒,待接种环冷却后再跳去金黄色葡萄球菌在兔血浆侧涂匀,5-10秒内观察结果实验结果:
实验分析:
革兰染色:1、涂片时动作要轻柔,使其薄而均匀,动作过大会改变细菌的排列形式 2、固定这一步骤能杀死细菌,固定细菌结构,保证菌体能牢固地黏附在载玻片上,以免水洗时被水冲掉,并且能改变菌体对染料的通透性。
3、龙胆紫是碱性染料可与细菌的DNA 结合使细菌呈紫色
4、媒染剂的作用使增强染料与细菌的亲和力更好地加强染料与细菌的结合
5、脱色是革兰染色的关键步骤,目的是帮助染料从被染色的细菌中脱色,利用细菌对染料脱色的难易程度不同而将细菌加以区分;
革兰阳性细菌不易被脱色剂脱色,而革兰阴性菌则易被脱色 6、复染的目的是使脱色的细菌重新染上另一种颜色,以便与未脱色菌进行比较 7、革兰阳性菌经染色后呈紫色而革兰阴性菌呈红色,另外要注意,在实验中经常会出现假阳性和假阴性的结果,假阳性主要是由于脱色不完全,可能是由于涂片过厚,或者是结晶紫染色过度,导致脱色不完全。
假阴性可能是因为细胞固定过度,造成细胞壁通透性的改变,而出现假阴性结果;另外,细胞培养时间太长,可能已经有部分细胞发生死亡或者自溶,也导致细胞壁通透性的改变而出现假阴性结
果。
血浆凝固酶试验:1、血浆凝固酶是鉴定致病性葡萄球菌的重要指标。
2、运用玻片法血浆凝固酶试验可检测游离型凝固酶,使用EDTA 抗凝兔血浆试验效果最佳。
3、血浆凝固酶试验结果的判断:出现明显的凝聚颗粒为阳性、无凝集颗粒为阴性。