影响微生物检测结果的注意事项分析

一培养基质控的注意事项

1.4培养基的配置 是否能正确计算需要培养基的量，提供足 量的培养基；天平是否校准并记录；每种 培养基所用勺是否更换；分装试管后灭菌 的培养基是否完全溶解后分装；高温高压 灭菌前是否先溶解培养基；灭菌温度、时 间是否正确；是否需要放冷气；培养基是 否标注标识；带有小导管的试管是否需要 急速冷却；开锅时压力是否回零；未用完 时的培养基保存是否正确（不要过度重复 加热）。
五细菌培养的注意事项

培养皿是否倒置；培养箱温度（例如：霉 菌培养箱需要有制冷功能）、培养环境是 否正确（湿度、厌氧）；培养时间是否正 确。
六接种的注意事项

6.1酒精灯是否点燃（注意：生物安全柜不 能使用酒精灯，可用紫外灭菌器）；接种 培养基是否准备好；接种工具是否准备好； 接样量是否正确；典型、典型/可疑菌落是 否会分辨；接种环/接种针是否灼烧后凉透； 划线方法是否正确；接样试管是否浸泡消 毒液24小时再灭菌；培养温度、环境是否正 确；培养物是否灭菌；接种完毕是否对操 作台进行消毒；接种后手是否清洗消毒。


数据。 7.2大肠菌群：计数是否选15-150之间的数；大肠菌群 是否计数所有典型菌落（紫红色、圆形、0.5mm、沉 淀环）和可疑菌落（粉红色、圆形、有时粘稠）；挑 取数量是否正确；是否会革兰氏染色；是否会查 MPN表；是否会计算；是否会出具报告数据。 7.3 出报告后，样品才能处理，检出致病菌无害化处 理 7.4 检验结果报告后，剩下的或同批样品不得复检。
四检验过程的注意事项


4.1测试手和台面是否用75%酒精消毒；点燃 酒精灯是否在30cm范围内；检测方法是否 正确；标识方法是否正确；倒稀释液时瓶 口是否灼烧；移液管或枪头污染是否更换； 稀释度是否合适；是否做空白； 4.2培养基灭菌方法是否正确；倒培养基时 温度是否太烫或太低；倒、盖培养基时瓶 口是否灼烧、快速；培养基不能太薄（15ml 左右）；倒完后培养皿是否摇匀；培养基 是否不沾于皿盖和边缘上；培养基摇匀后 冷凝前是否不移动；覆层方法是否正确。
影响微生物检测结果 的注意事项
一培养基质控的注意事项 二灭菌器具的注意事项 三样品制作的注意事项 四检验过程的注意事项 五细菌培养的注意事项 六接种的注意事项 七出结果的注意事项 八实验室内部人员比对、实验室间比对 及能力验证注意事项
一培养基质控的注意事项
1.1培养基的分类 各成分培养基、即用型培养基、脱水商业培养基 1.2培养基的验收 生产企业提供资料（性能评价、测试菌株）、外观 检查（名称、批号有效期、外观包装等） 1.3培养基的质量控制 外观、色泽的均一性；PH值；琼脂凝胶的硬度、微 生物污染（即用培养基）、生长特性（可采用划线 法，目标均生长良好，非目标均不生长或微弱生 长）、生长率（非选择性被测试/参考大于70%，测 试平板应大于100cfu，参考培养基是已知质量良好的 培养基）。 备注：GB4789.28-2013培养基好试剂的质量要求
七出结果的注意事项

7.1菌落总数：计数是否选30-300之间的数；菌落数多 时且均匀分布时是否选取几分之一进行计数再算出全 部菌落数；细菌总数是否计数全部可见菌落；是否会 根据公式计算；菌落是否与残渣区分（TTC，红四
氮唑的使用，浓度0.5%，加入量1ml/100ml培 养基)；是否会出具报告数据；是否会出具报告
八实验室内部人员比对、实验室间 比对及能力验证注意事项


8.1实验室内部人员比对 要同一个样品、要同一时间、要同样的培养基、同一批灭 菌器皿，然后观察每个人的检测结果（一定要有一个比较 熟练的人员参与），一般用平板法。 8.2实验室间比对，包括能力验证 拿到样品要记录样品的外观特征；拿到之后如果条件允许 最好当天检测（如果不能检测放到冷藏冰箱或根据指导 书）；提前准备好所有的实验用品，包括灭菌器具、无菌 室灭菌、配置培养基等（也就是说所有的器具都是新做的， 不用以前剩余的）；提前准备标准菌株；检测要比较熟练 的多人、多种方法（传统培养基法、3M片法）、多个稀 释度检测；不要忘记空白；15分钟内完成；严格按照标准 方法检测，不要用感觉是或不是；测试后的均质液最好封 口暂时留在冰箱（以免出现什么差错备用）。
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八实验室内部人员比对、实验室间 比对及能力验证注意事项

8.3 需要能力验证要及时查看CNAS网站， 上面发布能力验证计划；能力验证的原始 记录一定要完整、全面，便于追溯。 关注CNAS-CL-09文件
二灭菌器具的注意事项





2.1 灭菌方法：干热灭菌、湿热灭菌 灭菌温度、时间：湿热灭菌按培养基的使用说明；干热灭菌 时间、温度。 2.2消毒设备的使用及质量控制 编制操作规程并安全使用，注意湿热灭菌使凉气完全排出， 注意温度没降下来不要打开； 2.3质控：压力灭菌锅。物理法，化学指示胶带3M（核查灭菌 温度），生物法：生物指示剂（核查灭菌效果），例如，非 致病性的嗜热脂肪芽孢杆菌 (3M), 溴甲酚紫胨水培养基（灭菌 后大的芽孢杆菌纸片放入溴甲酚紫胨水培养，观察颜色是变 黄还是不变）；干燥箱，物理法：化学指示卡，生物法：非 致病性的枯草芽孢杆菌芽孢。按使用说明。原理就是查看芽 孢菌及芽孢的灭活来检查灭菌效果。 2.4灭菌后的标识及使用时间 标识已灭菌、未灭菌及有效期。包括灭菌枪、移液管、枪头 的灭菌。 注意：移液管、枪头只要碰到其他地方就要消毒或更换。
三样品制作时注意事项

3.1收到样品后，最好立即检测，如果不能放在原 则不能改变样品中微生物的变化，那就需要了解 这个目标菌的特性，嗜冷、嗜热等不适合它生长 的环境。（GB4789.1-2010，冷冻样品在2-5℃不超过18小
时，在45 ℃不超过15分钟）

3.2样品检测前手和台面要用75%酒精消毒；电子 天平/电子秤的准确度；样品检测是否先测低风险 再测高风险（即比较干净熟食食品、未加工的生 鲜食品）；样品（特别是开口处）要用75%的酒 精擦拭，然后用灭菌的剪刀开口以免污染样品； 剪样离酒精灯30cm之内检测；样品要做到均匀取 样；稀释液的PH值是否正确；制完的样品要均质； 样品检测尽快完成。